Name: isolation of macrophage subsets and stromal cells from human and mouse myocardial specimens
Uploaded: 2019-12-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Macrophage Subsets and Stromal Cells from Human and Mouse Myocardial Specimens at JoVE.com

Dit project werd mogelijk gemaakt door financiering van het Children's Discovery Institute van Washington University en St. Louis Children's Hospital (CH-II-2015-462, CH-II-2017-628), Stichting van het Barnes-Jewish Hospital (8038-88) en de NHLBI (R01 HL138466, R01 HL139714). K.J.L. wordt ondersteund door NIH K08 HL123519 en Burroughs Welcome Fund (1014782).

Het gepresenteerde protocol is goedgekeurd door de Washington University in de St. Louis institutioneel Review Board (#201305086). Alle proefpersonen bieden geïnformeerde toestemming vóór de monsterverzameling en de experimenten worden uitgevoerd in overeenstemming met het goedgekeurde studie protocol. Het gepresenteerde protocol wordt uitgevoerd met de goedkeuring van het institutioneel Dierenzorg-en gebruiks Comité aan de Washington University School of Medicine en volgt de richtlijnen die zijn beschreven in de NIH...

<ol>
	<li>Pinto, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+abundant+tissue+macrophage+population+in+the+adult+murine+heart+with+a+distinct+alternatively-activated+macrophage+profile.">An abundant tissue macrophage population in the adult murine heart with a distinct alternatively-activated macrophage profile.</a> PLoS One. 7 (5), e36814 (2012).</li><li>Hulsmans, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+facilitate+electrical+conduction+in+the+heart.">Macrophages facilitate electrical conduction in the heart.</a> Cell. 169 (3), 510-522 (2017).</li><li>Hulsmans, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+macrophages+promote+diastolic+dysfunction.">Cardiac macrophages promote diastolic dysfunction.</a> Journal of Experimental Medicine. 215 (2), 423-440 (2018).</li><li>Aurora, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+are+required+for+neonatal+heart+regeneration.">Macrophages are required for neonatal heart regeneration.</a> Journal of Clinical Investigation. 124 (3), 1382-1392 (2014).</li><li>Lavine, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+macrophage+lineages+contribute+to+disparate+patterns+of+cardiac+recovery+and+remodeling+in+the+neonatal+and+adult+heart.">Distinct macrophage lineages contribute to disparate patterns of cardiac recovery and remodeling in the neonatal and adult heart.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (45), 16029-16034 (2014).</li><li>Epelman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+and+adult-derived+resident+cardiac+macrophages+are+maintained+through+distinct+mechanisms+at+steady+state+and+during+inflammation.">Embryonic and adult-derived resident cardiac macrophages are maintained through distinct mechanisms at steady state and during inflammation.</a> Immunity. 40 (1), 91-104 (2014).</li><li>Leid, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primitive+embryonic+macrophages+are+required+for+coronary+development+and+maturation.">Primitive embryonic macrophages are required for coronary development and maturation.</a> Circulation Research. 118 (10), 1498-1511 (2016).</li><li>Bajpai, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+heart+contains+distinct+macrophage+subsets+with+divergent+origins+and+functions.">The human heart contains distinct macrophage subsets with divergent origins and functions.</a> Nature Medicine. 24 (8), 1234-1245 (2018).</li><li>Dick, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-renewing+resident+cardiac+macrophages+limit+adverse+remodeling+following+myocardial+infarction.">Self-renewing resident cardiac macrophages limit adverse remodeling following myocardial infarction.</a> Nature Immunology. 20, 29-39 (2019).</li><li>Nahrendorf, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+healing+myocardium+sequentially+mobilizes+two+monocyte+subsets+with+divergent+and+complementary+functions.">The healing myocardium sequentially mobilizes two monocyte subsets with divergent and complementary functions.</a> Journal of Experimental Medicine. 204 (12), 3037-3047 (2007).</li></ol>

Het protocol maakt de extractie mogelijk van verschillende macrofaag subgroepen van humaan myocardium. Het protocol is eenvoudig en duurt 3 tot 4 uur om de eencellige suspensie klaar te maken voor FACS-analyse. Hoewel het protocol relatief eenvoudig is uit te voeren, zijn er bepaalde technische aspecten die moeten worden overwogen, waardoor de variabiliteit wordt beperkt. Ten eerste, werken in tijdige mode met menselijk weefsel is noodzakelijk voor een optimale levensvatbaarheid van de cel. Het is belangrijk om te houden...

Macrofagen vertegenwoordigen het meest overvloedige immuunceltype in het hart, en ze spelen een belangrijke rol bij het genereren van robuuste inflammatoire en reparatieve reacties na hart letsel1,2,3,4. Voorheen identificeerde onze groep twee belangrijke deelverzamelingen van macrofagen in het muriene hart, afgeleid van de verschillende ontwikkelings oorsprong5,6. In het algemeen kunnen verschillende populaties van weefsel Resident cardiale macrofaag subgroepen worden geïdentificeerd op basis van de expressie van het celoppervlak van CCR2 (C-C motief Chemokine receptor 2). CCR2- macrofagen (celoppervlak expressie: CCR2-mhciilaag en CCR2-mhciihoog) zijn van embryonale oorsprong (primitieve en erytromyeloïde lijnen), in staat om zichzelf te verlengen, en vertegenwoordigen een dominante populatie onder homeostatische voorwaarden. Resident CCR2+ macrofagen zijn van definitieve hematopoietische oorsprong, worden onderhouden door werving van circulerende monocyten, en vertegenwoordigen een kleine populatie onder homeostatische voorwaarden. Functioneel, CCR2- macrofagen genereren minimale ontsteking en zijn van cruciaal belang voor coronaire ontwikkeling neonatale hart regeneratie5,7. Daarentegen, CCR2+ macrofagen initiëren robuuste inflammatoire reacties na cardiale beledigingen en bijdragen tot onderpand hartspier letsel, nadelige renovatie van de linker ventrikel, en hartfalen progressie8,9.
Onlangs hebben we aangetoond dat het menselijk myocardium ook twee afzonderlijke subsets van macrofagen bevat die op dezelfde manier worden geïdentificeerd als CCR2- of CCR2+8. Genexpressie en functionele analyses toonden aan dat humane CCR2- en CCR2+ macrofagen functioneel uiteenlopende deelverzamelingen vertegenwoordigen en FUNCTIONEEL analoog zijn aan CCR2- en CCR2+ macrofagen die in het hart van de muis worden aangetroffen. Human CCR2- macrofagen Express robuuste niveaus van groeifactoren, waaronder IGF1, Pdgf, CYR61 en HB-EGF. CCR2+ macrofagen zijn verrijkt in chemokines en cytokinen die ontstekingen bevorderen, zoals Il-1B, Il-6, CCL-2, CCL-7 en TNF-a. Gestimuleerd CCR2+ macrofagen afscheiden duidelijk hogere niveaus van de inflammatoire cytokine Interleukine-1β (Il-1β) in cultuur. Hoe deze subsets differentieel bijdragen aan weefselherstel en linker ventriculaire (LV) remodellering in het kader van hart letsel blijft een gebied van actief onderzoek.
Flow-cytometrie gebaseerde analyse van macrofaag heterogeniteit in de muis en menselijk hart vereist het verteren van het hartweefsel en het genereren van een enkelvoudige celsuspensie gevolgd door flowcytometrische analyse of celsortering voor verdere downstream processen zoals bulk RNA sequencing/single cell RNA sequencing of kweek de cellen voor functionele assays. Het oorspronkelijke protocol voor het maken van een eencellige suspensie van Murine Hearts werd voor het eerst gerapporteerd door Nahrendorf Group in Nahrendorf et al. 200710. Ons lab heeft het protocol aangepast en aangepast om macrofagen uit het menselijk myocardium te halen. Met behulp van hetzelfde protocol, maar met een kleine wijziging in kleuring en gating schema, kunnen CD45- stromale cellen uit het menselijk myocardium ook worden geoogst. Hier gepresenteerd, in tekst en video, is een protocol dat routinematig wordt uitgevoerd voor de extractie van macrofagen of stromale uit het menselijk myocardium.
Monsters van het hartweefsel worden verkregen van volwassen patiënten met gedilateerde cardiomyopathie (DCM: idiopathische of familiaire) of ischemische cardiomyopathie (ICM) die een linker ventriculaire hulpinrichting (LVAD) implantatie of harttransplantatie ondergaan. Explanted Hearts of LVAD cores zijn intravasculair geperfundeerd met koude zoutoplossing voorafgaand aan het starten van de spijsvertering procedure. Het is belangrijk op te merken dat "kwaliteit" van weefsel specimen bepaald in termen van de mate van littekenvorming of vetweefsel infiltratie kan grote invloed hebben op de opbrengst van macrofagen. Hart specimens met grote gebieden van littekens zullen veel lagere celopbrengst hebben en kunnen ernstige technische beperkingen inhouden wanneer gewenst downstream analysemethoden in vitro celculturing vereisen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 mL Conocal Tubes</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>14-959-53A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#181;m Cell Strainers</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>50-828-736</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical Tubes</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysis Buffer</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A10492-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase 1</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C0130-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM 1x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse 1</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4527-20KU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DRAQ5</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>62251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA 0.5M pH 8</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46-034-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme Deactivating Buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>490 mL HBSS, 10 mL FBS, 1 g BSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>976 mL PBS, 20 mL FBS, 4mL EDTA (0.5M)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A3840201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS 1x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14175-079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostats</td>
			<td>VWR</td>
			<td>63042-052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase type 1-s</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3506-500MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS 1x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petridishes</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>172931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor Blade</td>
			<td>VWR</td>
			<td>55411-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-578</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of macrophage subsets and stromal cells from human and mouse myocardial specimens

Macrofagen vertegenwoordigen de meest heterogene en overvloedige immuuncelpopulaties in het hart en zijn centraal in het aansturen van ontstekingen en reparatieve reacties na hart letsel. Hoe verschillende subgroepen van macrofagen de immuunresponsen na hart letsel indelen is een actief gebied van onderzoek. Hier gepresenteerd is een eenvoudig protocol dat ons lab routinematig uitvoert, voor de extractie van macrofagen uit muizen en menselijke myocardium specimens verkregen uit gezonde en zieke individuen. Kort, dit protocol omvat enzymatische vertering van hartweefsel voor het genereren van een enkelvoudige cel suspensie, gevolgd door antilichaam kleuring, en flow cytometrie. Deze techniek is geschikt voor functionele assays uitgevoerd op gesorteerde cellen, evenals bulk en single cell RNA sequencing. Een groot voordeel van dit protocol is de eenvoud, de minimale variatie van de dag tot de dag en de brede toepasbaarheid, waardoor macrofaag heterogeniteit kan worden onderzocht in verschillende Muismodellen en menselijke ziekte-entiteiten.

Het beschreven protocol maakt isolatie van macrofagen van muis en humaan myocardium mogelijk. Met behulp van hetzelfde protocol, maar met een andere kleuring en gating strategie, kunnen stromale cellen ook worden geoogst uit het menselijk myocardium. FACS resultaten gepresenteerd hier werden verkregen ofwel op BD LSRII of BD FACS ARIA III platform. Compensatie controles werden gegenereerd uit enkele kleur controlemonsters van gekleurd splenocyten. Afbeelding 1</strong...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Macrophage Subsets and Stromal Cells from Human and Mouse Myocardial Specimens at JoVE.com

Isolation of Macrophage Subsets and Stromal Cells from Human and Mouse Myocardial Specimens

Hier gepresenteerd is een protocol om verschillende subgroepen van macrofagen en andere niet-immuuncellen van mens en muis myocardium te isoleren door het voorbereiden van een enkelvoudige celsuspensie door enzymatische spijsvertering. Gating schema's voor flow cytometrie gebaseerde identificatie en karakterisering van geïsoleerde macrofagen worden ook gepresenteerd.

Isolatie van macrofaag subsets en stromale cellen van myocardiale monsters van mens en muis

Macrophages represent the most heterogeneous and abundant immune cell populations in the heart and are central in driving inflammation and reparative ...

Hart bevat heterogene populatie van immuuncellen die een cruciale rol spelen bij hartontsteking en reparatie. Om de heterogeniteit van immuuncellen te begrijpen en meer inzicht te krijgen in hun functie, is het belangrijk om een methode te hebben die het herstel van deze cellen uit het hart mogelijk maakt. Deze techniek kan helpen bij het ontdekken van de immuun-en niet-immuuncel diversiteit die zich in het gezonde of een zieke hart.Er zijn drie belangrijke voordelen aan deze techniek. Ten eerste is het een eenvoudige enkele workflow die leidt tot het genereren van eencellige suspensie van verschillende celtypen binnen drie uur. Ten tweede leidt het tot een hoog herstel van levensvatbare immuun- en niet-immuuncelpopulaties.Ten derde is het een zeer veelzijdige methode en kan het ook worden toegepast op hartweefsels in andere soorten. Aandacht besteden aan de hoeveelheid weefsel die wordt gebruikt voor een enkele spijsvertering reactie is belangrijk. Gebruik steriele schaar, ontleden weefsel monster van de apicale of laterale wand van de linker ventrikel in koude zoutoplossing of HBSS.Zorgvuldig ontleden epicardial vet en chordae tendineae uit het monster. Met behulp van een steriel mes of schaar ontleed je de weefselbrokken in stukken van ongeveer 200 milligram. Na het euthanaseren van de muis, open de borstholte met behulp van een scherpe schaar.Gebruik stompe hemostats om het hart omhoog te tillen. Doorspeil het hart met koude PBS met behulp van een 25-meter naald bevestigd aan een vijf milliliter spuit. Doorsnauw tot het hart geblancheerd in kleur lijkt.Verwijder het hart en plaats het in een steriel petrischaaltje op ijs. Plaats 200 milligram menselijk hartweefsel brokken of murine hart in een steriele petrischaal. Maak het weefsel fijn met een steriel mes of schaar.Voor het opzetten van digesties, in een 15 milliliter conische buis, bereiden een laatste spijsvertering volume van drie milliliter voor elke menselijke cardiale weefsel brok of een murine hart met enzymen collagenase I, DNase I, en hyaluronidase bij concentraties van 450, 60, en 60 eenheden per milliliter. Voeg 2,5 milliliter DMEM toe aan de buis. Plaats met behulp van schone tangen het fijngehakte weefsel in elke reactiebuis.Meng goed door zachte vortexing. Verteren voor een uur op 37 graden Celsius in een schudden incubator ingesteld op een lage tot gemiddelde agitatie snelheid. Na een uur van de spijsvertering, neem de buizen uit de incubator en plaats op ijs.Zet 50 milliliter conische buizen met een 40 micron cel zeef op de top. Maak de filters nat met twee milliliters enzymdeactiveren buffer. Schakel vervolgens de spijsverteringsenzymen uit door acht milliliter enzymdeactiverende buffer toe te voegen aan elke spijsverteringsbuis.Giet vervolgens de resulterende 13 milliliter van het totale mengsel door de 40 micron cel zeef in de 50 milliliter conische buizen. Breng de gefilterde monsters terug in verse 15 milliliter conische buizen. Draai de monsters op 400 keer g gedurende zes minuten op vier graden Celsius.Gooi de supernatant verlaten 0,5 milliliter media. Resuspend de cel pellet door zachte pipetting en voeg een milliliter van ACK lyse buffer. Voorzichtig wervelen de buis en uitbroeden bij kamertemperatuur gedurende vijf minuten om rode bloedcel lyse uit te voeren.Voeg na vijf minuten in de ACK-buffer negen milliliter DMEM toe aan het monster. Doe het deksel terug op de buizen en draai de buizen voorzichtig om om te mengen. Filtreer door een 40 micron celzeef en verzamel het filtraat in 15 milliliter conische buizen.Centrifuge de buizen op 400 keer g gedurende zes minuten en gooi de supernatant. Voeg een milliliter FACS buffer toe en versuspen de pellet. Breng het vervolgens over op een microcentrifugebuis van 1,5 milliliter.Centrifuge opnieuw op 400 keer g gedurende vijf minuten. Gooi de supernatant weg en verleg de pellet in 100 microliter facs-buffer. Een enkele cel suspensie is nu klaar voor antilichaam vlekken.Voeg een typisch menselijk antilichaam paneel aan het hart monsters op een tot 50 verdunning. Gebruik verschillende antilichamen voor stromale cellen en murine hart macrofagen. Incubeer gedurende 30 tot 40 minuten bij vier graden Celsius in het donker.Voeg een milliliter FACS buffer, voorzichtig vortex en centrifuge op 400 keer g gedurende vijf minuten. Herhaal deze wasstap een tweede keer. Vervolgens resuspend het monster in 350 microliters van FACS buffer en voeg DAPI om een definitieve concentratie van een micromolar te bereiken.De monsters zijn nu klaar voor FACS analyse. In dit protocol werd isolatie van macrofagen van muis en menselijk myocardium bereikt. Deze figuur toont onbewerkte en verwerkte menselijke LVAD kern.De gating regeling voor de stroom sorteren van CCR2 negatieve en CCR2 positieve menselijke macrofagen van menselijke myocardium evenals voor CD45 negatieve stromal cellen uit menselijke ischemische cardiomyopathie werden gepresenteerd. De beelden van Wright gekleurd FACS gesorteerd CD45 positieve en CD45 negatieve cellen tonen intact celmembraan aangeeft levensvatbaarheid. Het gatingschema om macrofagen uit een muizenhart te sorteren was ook succesvol.Gewicht van het weefsel dat wordt gebruikt voor enzymatische reactie is van cruciaal belang voor een efficiënte spijsvertering. Gebruik niet meer dan 200 milligram weefsel voor de enzymconcentraties die in het protocol zijn aangegeven. Volgens deze methode kunnen cellen worden gekweekt voor in vitro stimulatietesten.Cellen kunnen worden gesorteerd op bulkRNA-sequencing of single cell sequencing. Deze methode heeft gediend als een onschatbare techniek bij het ontdekken van de niet eerder erkende macrofaag heterogeniteit die aanwezig is in de gezonde of zieke menselijke hart. Met behulp van deze methode gevolgd door eencellige sequencing, studies zijn aan de gang om te ontdekken hoe verschillende immuun-en niet-immuuncellen variëren van zieke hart versus het gezonde hart.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

Isolatie van Mouse buikholte Cellen

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal ...

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

Isolatie van Mouse Lung dendritische cellen

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

Isolatie en karakterisering van dendritische cellen en macrofagen van de muis Darm

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Isolation of Precursor B-cell Subsets from Umbilical Cord Blood

Isolatie van Precursor B-cel subsets van navelstrengbloed

Umbilical cord blood is highly enriched for hematopoietic progenitor cells at different lineage commitment stages. We have developed a protocol for ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

Isolatie van myeloïde dendritische cellen en epitheelcellen van Human Thymus

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

Isolatie van muizen lymfkliertest stromale cellen

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Muis Naïve CD4<sup&gt; +</sup&gt; T Cell Isolatie en<em&gt; In vitro</em&gt; Differentiatie in T cel subsets

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

Isolation of Leukocytes from the Human Maternal-fetal Interface

Isolatie van leukocyten uit de Human Maternal-foetale Interface

Pregnancy is characterized by the infiltration of leukocytes in the reproductive tissues and at the maternal-fetal interface (decidua basalis and decidua ...

Isolation of Viral Replication Compartment-enriched Sub-nuclear Fractions from Adenovirus-infected Normal Human Cells

Isolatie van virale replicatie compartiment verrijkt Sub-nucleaire fracties uit adenovirus-geïnfecteerde normale menselijke cellen

During infection of human cells by adenovirus (Ad), the host cell nucleus is dramatically reorganized, leading to formation of nuclear microenvironments ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

Isolatie en Flow cytometrische analyse van de immuuncellen van de ischemische hersenen van muizen

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...