Name: isolation of macrophage subsets and stromal cells from human and mouse myocardial specimens
Uploaded: 2019-12-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Macrophage Subsets and Stromal Cells from Human and Mouse Myocardial Specimens at JoVE.com

Ce projet a été rendu possible grâce à un financement du Children's Discovery Institute de l'Université de Washington et de l'Hôpital pour enfants st. Louis (CH-II-2015-462, CH-II-2017-628), de la Fondation de l'Hôpital juif Barnes (8038-88) et de l'NHLBI (R01) HL138466, R01 HL139714). K.J.L. est soutenu par NIH K08 HL123519 et Burroughs Welcome Fund (1014782).

Le protocole présenté a été approuvé par l'Université de Washington à St. Louis Institutional Review Board (#201305086). Tous les sujets donnent un consentement éclairé avant la collecte de l'échantillon et les expériences sont effectuées conformément au protocole d'étude approuvé. Le protocole présenté est exécuté avec l'approbation du Comité institutionnel de soins et d'utilisation des animaux de la Washington University School of Medicine et suit les lignes directrices décrites dans le Guide des N...

<ol>
	<li>Pinto, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+abundant+tissue+macrophage+population+in+the+adult+murine+heart+with+a+distinct+alternatively-activated+macrophage+profile.">An abundant tissue macrophage population in the adult murine heart with a distinct alternatively-activated macrophage profile.</a> PLoS One. 7 (5), e36814 (2012).</li><li>Hulsmans, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+facilitate+electrical+conduction+in+the+heart.">Macrophages facilitate electrical conduction in the heart.</a> Cell. 169 (3), 510-522 (2017).</li><li>Hulsmans, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+macrophages+promote+diastolic+dysfunction.">Cardiac macrophages promote diastolic dysfunction.</a> Journal of Experimental Medicine. 215 (2), 423-440 (2018).</li><li>Aurora, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+are+required+for+neonatal+heart+regeneration.">Macrophages are required for neonatal heart regeneration.</a> Journal of Clinical Investigation. 124 (3), 1382-1392 (2014).</li><li>Lavine, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+macrophage+lineages+contribute+to+disparate+patterns+of+cardiac+recovery+and+remodeling+in+the+neonatal+and+adult+heart.">Distinct macrophage lineages contribute to disparate patterns of cardiac recovery and remodeling in the neonatal and adult heart.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (45), 16029-16034 (2014).</li><li>Epelman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+and+adult-derived+resident+cardiac+macrophages+are+maintained+through+distinct+mechanisms+at+steady+state+and+during+inflammation.">Embryonic and adult-derived resident cardiac macrophages are maintained through distinct mechanisms at steady state and during inflammation.</a> Immunity. 40 (1), 91-104 (2014).</li><li>Leid, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primitive+embryonic+macrophages+are+required+for+coronary+development+and+maturation.">Primitive embryonic macrophages are required for coronary development and maturation.</a> Circulation Research. 118 (10), 1498-1511 (2016).</li><li>Bajpai, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+heart+contains+distinct+macrophage+subsets+with+divergent+origins+and+functions.">The human heart contains distinct macrophage subsets with divergent origins and functions.</a> Nature Medicine. 24 (8), 1234-1245 (2018).</li><li>Dick, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-renewing+resident+cardiac+macrophages+limit+adverse+remodeling+following+myocardial+infarction.">Self-renewing resident cardiac macrophages limit adverse remodeling following myocardial infarction.</a> Nature Immunology. 20, 29-39 (2019).</li><li>Nahrendorf, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+healing+myocardium+sequentially+mobilizes+two+monocyte+subsets+with+divergent+and+complementary+functions.">The healing myocardium sequentially mobilizes two monocyte subsets with divergent and complementary functions.</a> Journal of Experimental Medicine. 204 (12), 3037-3047 (2007).</li></ol>

Le protocole permet l'extraction de divers sous-ensembles de macrophages à partir du myocarde humain. Le protocole est simple et prend de 3 à 4 heures pour préparer une suspension à cellule unique prête pour l'analyse FACS. Bien que le protocole soit relativement simple à exécuter, il y a certains aspects techniques qui doivent être considérés qui minimiseront la variabilité. Tout d'abord, travailler en temps opportun avec les tissus humains est nécessaire pour une viabilité cellulaire optimale. Il est impor...

Les macrophages représentent le type de cellules immunitaires le plus abondant dans le cœur, et ils jouent un rôle significatif dans la génération de réponses inflammatoires et réparatrices robustes à la suite d'une blessure cardiaque1,2,3,4. Auparavant, notre groupe a identifié deux sous-ensembles principaux de macrophages dans le coeur murine dérivé des origines développementales distinctes5,6. De façon générale, des populations distinctes de sous-ensembles de macrophage cardiaque résident dans les tissus peuvent être identifiées en fonction de l'expression de surface cellulaire de CCR2 (récepteur c-C motif c. chimiokine 2). CCR2- macrophages (expression de surface cellulaire: CCR2-MHCIIfaible et CCR2-MHCIIélevé) sont d'origine embryonnaire (lignées primitives et érythro-éloïdes), capable de se renouveler, et représentent une population dominante dans des conditions homéostatiques. Les macrophages cCR2résidents sont d'origine hématopoïétique définitive, sont maintenus par le recrutement de monocytes circulants, et représentent une population mineure dans des conditions homéostatiques. Fonctionnellement, CCR2- macrophages génèrent une inflammation minimale et sont critiques pour le développement coronaire régénération cardiaque néonatale5,7. En revanche, les macrophages CCR2initient des réponses inflammatoires robustes à la suite d'insultes cardiaques et contribuent à des lésions cardiomyocytes collatérales, à un remodelage défavorable du ventricule gauche et à une progression de l'insuffisance cardiaque8,9.
Récemment, nous avons montré que le myocarde humain contient également deux sous-ensembles distincts de macrophages identifiés de la même façon que soit CCR2- ou CCR28. L'expression génique et les analyses fonctionnelles ont révélé que les macrophages CCR2- et CCR2- humains représentent des sous-ensembles fonctionnellement divergents et sont fonctionnellement analogues auxmacrophages CCR2et CCR2 - trouvés dans le cœur de souris. CCR2 humain- les macrophages expriment des niveaux robustes de facteurs de croissance, y compris IGF1, PDGF, Cyr61, et HB-EGF. Les macrophages CCR2sont enrichis en chimiokines et cytokines qui favorisent l'inflammation, comme il-1b, IL-6, CCL-2, CCL-7 et TNF-a. Les macrophages stimulés cCR2et sécrétifs sécrètent des niveaux nettement plus élevés de l'interleukine-1 inflammatoire de cytokine -1 (IL-1) dans la culture. La façon dont ces sous-ensembles contribuent différemment à la réparation des tissus et à la remodelage ventriculaire gauche (VL) dans le contexte des lésions cardiaques demeure un domaine de recherche active.
L'analyse basée sur la cytométrie de flux de l'hétérogénéité macrophage dans la souris et le coeur humain exige digérer le tissu cardiaque et produire une suspension de cellules simples suivie d'analyse cytométrique de flux ou de tri de cellules pour d'autres processus en aval tels que le séquençage en vrac d'ARN/séquençage d'ARN de cellules simples ou la culture des cellules pour des essais fonctionnels. Le protocole original pour faire une suspension de cellule simple des coeurs murineont ont été d'abord rapportés par le groupe de Nahrendorf dans Nahrendorf et autres 200710. Notre laboratoire a adapté et modifié le protocole pour extraire les macrophages du myocarde humain. En utilisant le même protocole, mais avec une légère modification dans la coloration et le schéma de gating, CD45- cellules stromales du myocarde humain peut également être récolté. Présenté ici, en texte et en vidéo, est un protocole qui est effectué régulièrement pour l'extraction de macrophages ou stromal à partir du myocarde humain.
Des spécimens de tissu cardiaque sont obtenus des patients adultes présentant la cardiomyopathie dilatée (DCM : idiopathique ou familiale) ou la cardiomyopathie ischémique (ICM) subissant l'implantation gauche d'appareil ventriculaire (LVAD) ou la transplantation cardiaque. Les cœurs explantés ou les noyaux de LVAD sont perfusés intravasculairement avec la saline froide avant de commencer la procédure de digestion. Il est important de noter que la « qualité » des échantillons de tissus déterminés en termes de degré de cicatrisation ou d'infiltration de tissu adipeux peut grandement affecter le rendement des macrophages. Les spécimens de coeur avec de grandes zones de cicatrice scarring auront le rendement beaucoup plus bas de cellules et peuvent poser la limitation technique sérieuse quand les méthodes désirées d'analyse en aval exigent la culture in vitro de cellules.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 mL Conocal Tubes</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>14-959-53A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#181;m Cell Strainers</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>50-828-736</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical Tubes</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysis Buffer</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A10492-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase 1</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C0130-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM 1x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse 1</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4527-20KU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DRAQ5</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>62251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA 0.5M pH 8</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46-034-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme Deactivating Buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>490 mL HBSS, 10 mL FBS, 1 g BSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>976 mL PBS, 20 mL FBS, 4mL EDTA (0.5M)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A3840201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS 1x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14175-079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostats</td>
			<td>VWR</td>
			<td>63042-052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase type 1-s</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3506-500MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS 1x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petridishes</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>172931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor Blade</td>
			<td>VWR</td>
			<td>55411-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-578</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of macrophage subsets and stromal cells from human and mouse myocardial specimens

Les macrophages représentent les populations de cellules immunitaires les plus hétérogènes et abondantes dans le cœur et sont au cœur de l'inflammation et des réponses réparatrices après une blessure cardiaque. La façon dont divers sous-ensembles de macrophages orchestrent les réponses immunitaires après une lésion cardiaque est un domaine de recherche actif. Présenté ici est un protocole simple que notre laboratoire effectue régulièrement, pour l'extraction des macrophages à partir de spécimens de myocarde de souris et de myocardes humains obtenus à partir d'individus sains et malades. En bref, ce protocole implique la digestion enzymatique du tissu cardiaque pour générer une suspension de cellules simples, suivie de la coloration d'anticorps, et de la cytométrie de flux. Cette technique convient aux essais fonctionnels effectués sur les cellules triées ainsi qu'au séquençage de l'ARN en vrac et à cellule unique. Un avantage majeur de ce protocole est sa simplicité, la variation minimale au jour le jour et la grande applicabilité permettant l'étude de l'hétérogénéité macrophage à travers divers modèles de souris et entités de maladie humaine.

Le protocole décrit permet l'isolement des macrophages de la souris et du myocarde humain. En utilisant le même protocole, mais avec une stratégie différente de coloration et de gating, les cellules stromales peuvent également être récoltées à partir du myocarde humain. Les résultats de FACS présentés ici ont été acquis soit sur la plate-forme BD LSRII ou BD FACS ARIA III. Des contrôles de compensation ont été produits à partir d'échantillons de contrôle de couleur uni...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Macrophage Subsets and Stromal Cells from Human and Mouse Myocardial Specimens at JoVE.com

Isolation of Macrophage Subsets and Stromal Cells from Human and Mouse Myocardial Specimens

Présenté ici est un protocole pour isoler divers sous-ensembles de macrophages et d'autres cellules non immunisées du myocarde humain et de souris en préparant une suspension de cellules simples par la digestion enzymatique. Des schémas de gating pour l'identification et la caractérisation basées sur la cytométrie de flux sont également présentés.

Isolement des sous-ensembles macrophages et des cellules stromales des spécimens myocardiques humains et de souris

Macrophages represent the most heterogeneous and abundant immune cell populations in the heart and are central in driving inflammation and reparative ...

Le cœur contient une population hétérogène de cellules immunitaires qui jouent un rôle crucial dans l’inflammation cardiaque ainsi que la réparation. Afin de comprendre l’hétérogénéité des cellules immunitaires et d’obtenir un meilleur aperçu de leur fonction, il est important d’avoir une méthode qui permettra la récupération de ces cellules du cœur. Cette technique peut aider à découvrir la diversité cellulaire immunitaire ainsi que non immunisée qui réside dans le cœur sain ou maladie.Cette technique présente trois avantages majeurs. Tout d’abord, il s’agit d’un flux de travail simple qui conduit à la génération de suspension cellulaire unique de différents types de cellules dans les trois heures suivant. Deuxièmement, il conduit à un rétablissement élevé des populations viables de cellules immunitaires et non immunes.Et troisièmement, c’est une méthode très polyvalente et peut être appliquée sur les tissus cardiaques chez d’autres espèces ainsi. Il est important de prêter attention à la quantité de tissu utilisée pour une seule réaction de digestion. Utilisez des ciseaux stériles, disséquez le spécimen de tissu de la paroi apical ou latérale du ventricule gauche dans la solution saline froide ou HBSS.Disséquer soigneusement la graisse épicurienne et chordae tendineae du spécimen. À l’aide d’une lame stérile ou de ciseaux, disséquer les morceaux de tissu en morceaux pesant environ 200 milligrammes. Après avoir euthanasié la souris, ouvrez la cavité thoracique à l’aide de ciseaux pointus.Utilisez des hémostats contondants pour soulever le cœur vers le haut. Imprènuez le cœur avec du PBS froid à l’aide d’une aiguille de calibre 25 fixée à une seringue de cinq millilitres. Perfuser jusqu’à ce que le cœur semble blanchi en couleur.Retirer le cœur et le placer dans une boîte de Pétri stérile sur la glace. Placer 200 milligrammes de tissus cardiaques humains ou de cœur murin dans une boîte de Pétri stérile. Hacher finement le tissu à l’aide d’une lame stérile ou de ciseaux.Pour mettre en place des digestions, dans un tube conique de 15 millilitres, préparer un volume de digestion final de trois millilitres pour chaque morceau de tissu cardiaque humain ou un cœur murin avec des enzymes collagène I, DNase I, et hyaluronidase à des concentrations de 450, 60 et 60 unités par millilitre. Ajouter 2,5 millilitres de DMEM dans le tube. À l’aide de forceps propres, placez le tissu finement haché dans chaque tube de réaction.Bien mélanger par vortex doux. Digérer pendant une heure à 37 degrés Celsius dans un incubateur secouant réglé à une vitesse d’agitation faible à moyenne. Après une heure de digestion, sortir les tubes de l’incubateur et les placer sur la glace.Installez des tubes coniques de 50 millilitres avec une passoire cellulaire de 40 microns sur le dessus. Mouiller les filtres avec deux millilitres d’enzyme désactivant tampon. Ensuite, désactivez les enzymes de digestion en ajoutant huit millilitres d’enzyme désactivant tampon à chaque tube de digestion.Versez ensuite les 13 millilitres de mélange total résultant à travers la passoire cellulaire de 40 microns dans les tubes coniques de 50 millilitres. Transférez les échantillons filtrés dans des tubes coniques frais de 15 millilitres. Faites tourner les échantillons à 400 fois g pendant six minutes à quatre degrés Celsius.Jetez le supernatant en laissant 0,5 millilitres de médias. Resuspendez la pastille cellulaire par pipetting doux et ajoutez un millilitre de tampon de lyse d’ACK. Faites tourbillonner doucement le tube et incubez à température ambiante pendant cinq minutes pour effectuer la lyse des globules rouges.Après cinq minutes dans le tampon ACK, ajouter neuf millilitres de DMEM à l’échantillon. Remettre le couvercle sur les tubes et inverser délicatement les tubes pour mélanger. Filtrer à travers une passoire cellulaire de 40 microns et recueillir le filtrate dans des tubes coniques de 15 millilitres.Centrifuger les tubes à 400 fois g pendant six minutes et jeter le supernatant. Ajouter un millilitre de tampon FACS et resuspendre la pastille. Ensuite, transférez-le dans un tube de microcentrifugeuse de 1,5 millilitre.Centrifugeuse à nouveau à 400 fois g pendant cinq minutes. Jetez le supernatant et resuspendez la pastille dans 100 microlitres de tampon FACS. Une suspension à cellule unique est maintenant prête pour la coloration des anticorps.Ajouter un panneau d’anticorps humain typique aux échantillons de cœur à une à 50 dilution. Utilisez différents anticorps pour les cellules stromales et les macrophages cardiaques murins. Incuber de 30 à 40 minutes à quatre degrés Celsius dans l’obscurité.Ajouter un millilitre de tampon FACS, doucement vortex et centrifugeuse à 400 fois g pendant cinq minutes. Répétez cette étape de lavage une deuxième fois. Puis résuspendez l’échantillon en 350 microlitres de tampon FACS et ajoutez dapi pour atteindre une concentration finale d’un micromolaire.Les échantillons sont maintenant prêts pour l’analyse facs. Dans ce protocole, l’isolement des macrophages de la souris et du myocarde humain a été réalisé. Ce chiffre montre le noyau humain non traité et traité de LVAD.Le schéma de gating pour le tri de flux des macrophages humains négatifs et CCR2 positifs de CCR2 du myocarde humain aussi bien que pour des cellules stromal négatives de CD45 de la cardiomyopathie ischémique humaine ont été présentés. Les images de Wright taché FACS triés CD45 positif et CD45 cellules négatives montrent membrane cellulaire intacte indiquant la viabilité. Le schéma de gating pour trier les macrophages à partir d’un cœur de souris a également été un succès.Le poids du tissu utilisé pour la réaction enzymatique est essentiel pour une digestion efficace. N’utilisez pas plus de 200 milligrammes de tissu pour les concentrations enzymatiques indiquées dans le protocole. Suivant cette méthode, les cellules peuvent être cultivés pour des analyses de stimulation in vitro.Les cellules peuvent être triées pour le séquençage en vrac de l’ARN ou le séquençage à cellule unique. Cette méthode a servi de technique inestimable pour découvrir l’hétérogénéité macrophage précédemment non reconnue qui est présente dans le cœur humain sain ou maladie. En utilisant cette méthode suivie d’un séquençage à cellule unique, des études sont en cours pour découvrir comment diverses cellules immunitaires et non immunisées varient du cœur maladie au cœur sain.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

L&#39;isolement des cellules de souris cavité péritonéale

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal ...

Recherche

Immunologie et infection

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

L&#39;isolement des cellules de souris poumon dendritiques

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

L&#39;isolement et la caractérisation des cellules dendritiques et les macrophages de l&#39;intestin de souris

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Isolation of Precursor B-cell Subsets from Umbilical Cord Blood

Isolement des précurseurs des cellules B des sous-ensembles à partir de sang de cordon ombilical

Umbilical cord blood is highly enriched for hematopoietic progenitor cells at different lineage commitment stages. We have developed a protocol for ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

Isolement des cellules dendritiques myéloïdes et les cellules épithéliales du thymus humain

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

Isolement de cellules murines ganglions lymphatiques stromales

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Souris Naïf CD4<sup&gt; +</sup&gt; Isolement des cellules T et<em&gt; In vitro</em&gt; Différenciation en sous-ensembles de cellules T

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

Isolation of Leukocytes from the Human Maternal-fetal Interface

Isolement des leucocytes à partir de l&#39;interface humaine materno-fœtale

Pregnancy is characterized by the infiltration of leukocytes in the reproductive tissues and at the maternal-fetal interface (decidua basalis and decidua ...

Isolation of Viral Replication Compartment-enriched Sub-nuclear Fractions from Adenovirus-infected Normal Human Cells

Isolation des fractions de sous-nucléaire réplication virale Compartiment enrichies d&#39;adénovirus-infectés cellules humaines normales

During infection of human cells by adenovirus (Ad), the host cell nucleus is dramatically reorganized, leading to formation of nuclear microenvironments ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

Isolement et analyse par cytométrie en flux des cellules immunitaires du cerveau ischémique souris

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...