Name: isolation of macrophage subsets and stromal cells from human and mouse myocardial specimens
Uploaded: 2019-12-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Macrophage Subsets and Stromal Cells from Human and Mouse Myocardial Specimens at JoVE.com

Möglich wurde dieses Projekt durch Fördermittel des Children es Discovery Institute der Washington University und des St. Louis Children es Hospital (CH-II-2015-462, CH-II-2017-628), der Foundation of Barnes-Jewish Hospital (8038-88) und des NHLBI (R01 HL138466, R01 HL139714). K.J.L. wird von NIH K08 HL123519 und Burroughs Welcome Fund (1014782) unterstützt.

Das vorgelegte Protokoll wurde von der Washington University in St. Louis Institutional Review Board (#201305086) genehmigt. Alle Probanden geben vor der Probenentnahme eine informierte Einwilligung ab, und die Experimente werden in Übereinstimmung mit dem genehmigten Studienprotokoll durchgeführt. Das vorgestellte Protokoll wird mit Zustimmung des Institutional Animal Care and Use Committee an der Washington University School of Medicine durchgeführt und folgt den Richtlinien, die im NIH-Leitfaden für die Pflege und...

<ol>
	<li>Pinto, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+abundant+tissue+macrophage+population+in+the+adult+murine+heart+with+a+distinct+alternatively-activated+macrophage+profile.">An abundant tissue macrophage population in the adult murine heart with a distinct alternatively-activated macrophage profile.</a> PLoS One. 7 (5), e36814 (2012).</li><li>Hulsmans, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+facilitate+electrical+conduction+in+the+heart.">Macrophages facilitate electrical conduction in the heart.</a> Cell. 169 (3), 510-522 (2017).</li><li>Hulsmans, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+macrophages+promote+diastolic+dysfunction.">Cardiac macrophages promote diastolic dysfunction.</a> Journal of Experimental Medicine. 215 (2), 423-440 (2018).</li><li>Aurora, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+are+required+for+neonatal+heart+regeneration.">Macrophages are required for neonatal heart regeneration.</a> Journal of Clinical Investigation. 124 (3), 1382-1392 (2014).</li><li>Lavine, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+macrophage+lineages+contribute+to+disparate+patterns+of+cardiac+recovery+and+remodeling+in+the+neonatal+and+adult+heart.">Distinct macrophage lineages contribute to disparate patterns of cardiac recovery and remodeling in the neonatal and adult heart.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (45), 16029-16034 (2014).</li><li>Epelman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+and+adult-derived+resident+cardiac+macrophages+are+maintained+through+distinct+mechanisms+at+steady+state+and+during+inflammation.">Embryonic and adult-derived resident cardiac macrophages are maintained through distinct mechanisms at steady state and during inflammation.</a> Immunity. 40 (1), 91-104 (2014).</li><li>Leid, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primitive+embryonic+macrophages+are+required+for+coronary+development+and+maturation.">Primitive embryonic macrophages are required for coronary development and maturation.</a> Circulation Research. 118 (10), 1498-1511 (2016).</li><li>Bajpai, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+heart+contains+distinct+macrophage+subsets+with+divergent+origins+and+functions.">The human heart contains distinct macrophage subsets with divergent origins and functions.</a> Nature Medicine. 24 (8), 1234-1245 (2018).</li><li>Dick, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-renewing+resident+cardiac+macrophages+limit+adverse+remodeling+following+myocardial+infarction.">Self-renewing resident cardiac macrophages limit adverse remodeling following myocardial infarction.</a> Nature Immunology. 20, 29-39 (2019).</li><li>Nahrendorf, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+healing+myocardium+sequentially+mobilizes+two+monocyte+subsets+with+divergent+and+complementary+functions.">The healing myocardium sequentially mobilizes two monocyte subsets with divergent and complementary functions.</a> Journal of Experimental Medicine. 204 (12), 3037-3047 (2007).</li></ol>

Das Protokoll ermöglicht die Extraktion verschiedener Makrophagen-Teilmengen aus humanem Myokard. Das Protokoll ist einfach und dauert 3 bis 4 Stunden, um einzellige Suspension bereit für FACS-Analyse vorzubereiten. Obwohl das Protokoll relativ einfach durchzuführen ist, gibt es einige technische Aspekte, die berücksichtigt werden müssen, die die Variabilität minimieren. Erstens ist eine zeitnahe Arbeit mit menschlichem Gewebe für eine optimale Zelllebensfähigkeit notwendig. Es ist wichtig, das Gewebe in kalter S...

Makrophagen stellen den häufigsten Immunzelltyp im Herzen dar und spielen eine wichtige Rolle bei der Erzeugung robuster entzündlicher und reparativer Reaktionen nach Einer Herzerkrankung1,2,3,4. Zuvor identifizierte unsere Gruppe zwei Hauptteile von Makrophagen im murinen Herz, die von unterschiedlichen Entwicklungsursprungsherden abgeleitet wurden5,6. Auf der Grundlage der Zelloberflächenexpression von CCR2 (C-C-Motiv Chemokinrezeptor 2) können im Großen und Ganzen unterschiedliche Populationen von geweberesidenten Kardialmakrophagen-Untergruppen identifiziert werden. CCR2- Makrophagen (Zelloberflächenexpression: CCR2-MHCIIniedrig und CCR2-MHCIIhoch) sind embryonalen Ursprungs (primitive und erythromyeloidale Linien), die sich selbst erneuern können und eine dominante Population unter omöostatischen Bedingungen darstellen. Resident CCR2+ Makrophagen sind definitiv hämatopoetischen Ursprungs, werden durch Rekrutierung aus zirkulierenden Monozyten aufrechterhalten und stellen eine kleine Population unter omöostatischen Bedingungen dar. Funktionell, CCR2- Makrophagen erzeugen minimale Entzündungen und sind entscheidend für die koronare Entwicklung neonatale Herzregeneration5,7. Im Gegensatz dazu initiieren CCR2+ Makrophagen robuste Entzündungsreaktionen nach Herzbeleidigungen und tragen zu Kollateralkardiomyozytenverletzungen, einer negativen Umgestaltung des linken Ventrikels und der Herzinsuffizienzprogression8,9bei.
Kürzlich haben wir gezeigt, dass das humane Myokard auch zwei verschiedene Teilmengen von Makrophagen enthält, die entweder als CCR2- oder CCR2+8identifiziert wurden. Genexpression und funktionelle Analysen ergaben, dass menschliche CCR2- und CCR2+ Makrophagen funktionell divergierende Teilmengen darstellen und funktional analog zu CCR2sind - und CCR2+ Makrophagen im Mausherz. Human CCR2- Makrophagen drücken robuste Wachstumsfaktoren aus, einschließlich IGF1, PDGF, Cyr61 und HB-EGF. CCR2+ Makrophagen sind in Chemokine und Zytokine angereichert, die Entzündungen fördern, wie IL-1b, IL-6, CCL-2, CCL-7 und TNF-a. Stimulierte CCR2+ Makrophagen sekrese deutlich höhere Konzentrationen des entzündlichen Zytokininterleukin-1s (IL-1) in der Kultur ab. Wie diese Teilmengen differenziell zur Gewebereparatur und zur linksventrikulären (LV) Umgestaltung im Zusammenhang mit Herzverletzungen beitragen, bleibt ein Bereich aktiver Forschung.
Die strömungszytometriebasierte Analyse der Makrophagenheterogenität in der Maus und im menschlichen Herzen erfordert die Verdauung des Herzgewebes und die Erzeugung einer einzelzelligen Suspension, gefolgt von einer zytometrischen Durchflussanalyse oder Zellsortierung für weitere nachgelagerte Prozesse wie Massen-RNA-Sequenzierung/Einzelzell-RNA-Sequenzierung oder Kultivierung der Zellen für funktionelle Assays. Das ursprüngliche Protokoll zur Herstellung einer Einzelzellsuspension aus murinen Herzen wurde zuerst von der Nahrendorf-Gruppe in Nahrendorf et al. 200710berichtet. Unser Labor hat das Protokoll angepasst und modifiziert, um Makrophagen aus dem menschlichen Myokard zu extrahieren. Mit dem gleichen Protokoll, aber mit leichten Modifikationen im Färbe- und Gatingschema, können auch CD45- Stromalzellen aus dem menschlichen Myokard geerntet werden. Hier, in Text und Video, wird ein Protokoll vorgestellt, das routinemäßig für die Extraktion von Makrophagen oder Stromal aus dem menschlichen Myokard durchgeführt wird.
Herzgewebeproben werden von erwachsenen Patienten mit erweiterter Kardiomyopathie (DCM: idiopathisch oder familiär) oder ischämischer Kardiomyopathie (ICM) gewonnen, die sich einer linksventrikulären Assist-Einrichtung (LVAD) implantation oder einer Herztransplantation unterziehen. Explantierte Herzen oder LVAD-Kerne werden vor Beginn des Verdauungsverfahrens intravaskulär mit kalter Saline durchdrungen. Es ist wichtig zu beachten, dass die "Qualität" der Gewebeprobe, die in Bezug auf den Grad der Narbenbildung oder der Infiltration von Fettgewebe bestimmt wird, die Ausbeute von Makrophagen stark beeinflussen kann. Herzproben mit großen Narbenflächen haben eine viel geringere Zellausbeute und können schwerwiegende technische Einschränkungen darstellen, wenn gewünschte nachgelagerte Analysemethoden eine In-vitro-Zellkultivierung erfordern.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 mL Conocal Tubes</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>14-959-53A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#181;m Cell Strainers</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>50-828-736</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical Tubes</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysis Buffer</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A10492-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase 1</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C0130-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM 1x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse 1</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4527-20KU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DRAQ5</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>62251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA 0.5M pH 8</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46-034-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme Deactivating Buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>490 mL HBSS, 10 mL FBS, 1 g BSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>976 mL PBS, 20 mL FBS, 4mL EDTA (0.5M)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A3840201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS 1x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14175-079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostats</td>
			<td>VWR</td>
			<td>63042-052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase type 1-s</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3506-500MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS 1x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petridishes</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>172931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor Blade</td>
			<td>VWR</td>
			<td>55411-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-578</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of macrophage subsets and stromal cells from human and mouse myocardial specimens

Makrophagen stellen die heterogensten und reichlichsten Immunzellpopulationen im Herzen dar und sind von zentraler Bedeutung bei der Förderung von Entzündungen und reparativen Reaktionen nach Herzverletzungen. Wie verschiedene Teilmengen von Makrophagen die Immunantworten nach einer Herzverletzung orchestrieren, ist ein aktives Forschungsgebiet. Präsentiert hier ist ein einfaches Protokoll, das unser Labor routinemäßig durchführt, für die Extraktion von Makrophagen von Maus und menschlichen Myokardproben von gesunden und kranken Personen erhalten. Kurz gesagt beinhaltet dieses Protokoll die enzymatische Verdauung von Herzgewebe, um eine Einzelzellsuspension zu erzeugen, gefolgt von Antikörperfärbung und Durchflusszytometrie. Diese Technik eignet sich für funktionelle Assays, die an sortierten Zellen durchgeführt werden, sowie für die Massen- und Einzelzell-RNA-Sequenzierung. Ein großer Vorteil dieses Protokolls ist seine Einfachheit, minimale tägliche Variation und breite Anwendbarkeit, die die Untersuchung der Makrophagenheterogenität über verschiedene Mausmodelle und menschliche Krankheitsentitäten ermöglicht.

Das beschriebene Protokoll ermöglicht die Isolierung von Makrophagen von Maus und menschlichem Myokard. Mit dem gleichen Protokoll, aber mit einer anderen Färbe- und Gating-Strategie, können Stromalzellen auch aus dem menschlichen Myokard geerntet werden. Die hier vorgestellten FACS-Ergebnisse wurden entweder auf der Plattform BD LSRII oder BD FACS ARIA III erworben. Kompensationskontrollen wurden aus einzelnen Farbkontrollproben von gebeizten Splenozyten generiert. <strong class="xfig...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Macrophage Subsets and Stromal Cells from Human and Mouse Myocardial Specimens at JoVE.com

Isolation of Macrophage Subsets and Stromal Cells from Human and Mouse Myocardial Specimens

Hier wird ein Protokoll vorgestellt, um verschiedene Teilmengen von Makrophagen und anderen nicht-immunen Zellen aus menschlichem und Mausmyokard zu isolieren, indem eine einzelzellige Suspension durch enzymatische Verdauung vorbereitet wird. Gating-Schemata für die Strömungszytometrie basierende Identifizierung und Charakterisierung isolierter Makrophagen werden ebenfalls vorgestellt.

Isolierung von Makrophagen-Teilmengen und Stromalzellen von Menschlichen und Maus-Myokardproben

Macrophages represent the most heterogeneous and abundant immune cell populations in the heart and are central in driving inflammation and reparative ...

Das Herz enthält eine heterogene Population von Immunzellen, die eine entscheidende Rolle bei Herzentzündungen und Reparaturen spielen. Um die Heterogenität von Immunzellen zu verstehen und weitere Einblicke in ihre Funktion zu gewinnen, ist es wichtig, eine Methode zu haben, die die Rückgewinnung dieser Zellen aus dem Herzen ermöglicht. Diese Technik kann helfen, die Immun- und Nichtimmunzellvielfalt aufzudecken, die im gesunden oder kranken Herzen liegt.Diese Technik hat drei Hauptvorteile. Erstens ist es ein einfacher einfacher einfacher Workflow, der innerhalb von drei Stunden zur Erzeugung einer Einzelzellsuspension verschiedener Zelltypen führt. Zweitens führt es zu einer hohen Wiederherstellung lebensfähiger Immun- und Nichtimmunzellenpopulationen.Und drittens ist es eine sehr vielseitige Methode und kann auch auf Herzgewebe in anderen Arten angewendet werden. Es ist wichtig, auf die Menge an Gewebe zu achten, die für eine einzige Verdauungsreaktion verwendet wird. Verwenden Sie sterile Schere, sezieren Gewebe Probe von der apikalen oder seitlichen Wand der linken Herzkammer in kalter Saline oder HBSS.Sezieren Sie sorgfältig Epikardialfett und Chordaetendineae aus der Probe. Mit Hilfe einer sterilen Klinge oder Schere, sezieren Sie die Gewebestücke in Stücke mit einem Gewicht von etwa 200 Milligramm. Nach dem Einschläfern der Maus, öffnen Sie die Brusthöhle mit Hilfe einer scharfen Schere.Verwenden Sie stumpfe Hämostate, um das Herz nach oben zu heben. Durchnässen Sie das Herz mit kaltem PBS mit einer 25-Meter-Nadel, die an einer Fünf-Milliliter-Spritze befestigt ist. Durchdringen, bis das Herz in Farbe blanchiert erscheint.Entfernen Sie das Herz und legen Sie es in eine sterile Petrischale auf Eis. Legen Sie 200 Milligramm menschliche Herzgewebebrocken oder murines Herz in eine sterile Petrischale. Das Gewebe mit einer sterilen Klinge oder Schere fein zerkleinern.Um Verdauungen einzurichten, in einem 15 Milliliter konischen Röhrchen, bereiten Sie ein endgültiges Verdauungsvolumen von drei Millilitern für jeden menschlichen Herzgewebebrocken oder ein murines Herz mit den Enzymen Kollagenase I, DNase I und Hyaluronidase in Konzentrationen von 450, 60 und 60 Einheiten pro Milliliter vor. Fügen Sie 2,5 Milliliter DMEM in die Röhre. Mit Hilfe sauberer Zangen das fein gehackte Gewebe in jedes Reaktionsrohr legen.Durch sanftes Wirbeln gut mischen. Verdauen Sie für eine Stunde bei 37 Grad Celsius in einem schüttelarmen Inkubator auf eine niedrige bis mittlere Rührgeschwindigkeit eingestellt. Nach einer Stunde Verdauung die Schläuche aus dem Brutkasten nehmen und auf Eis legen.Richten Sie 50 Milliliter konische Röhren mit einem 40 Mikron Zellsieb auf der Oberseite ein. Befeuchten Sie die Filter mit zwei Millilitern Enzymdeaktivierungspuffer. Als nächstes deaktivieren Sie die Verdauungsenzyme, indem Sie jedem Verdauungsröhrchen acht Milliliter Enzymdeaktivierungspuffer hinzufügen.Dann gießen Sie die resultierenden 13 Milliliter Gesamtmischung durch das 40 Mikron Zellsieb in die 50 Milliliter konischen Röhren. Übertragen Sie die gefilterten Proben in frische 15 Milliliter Konusröhren. Drehen Sie die Proben bei 400 mal g für sechs Minuten bei vier Grad Celsius.Entsorgen Sie den Überstand und hinterlassen 0,5 Milliliter Medien. Setzen Sie das Zellpellet durch sanftes Pipettieren wieder auf und fügen Sie einen Milliliter ACK-Lysepuffer hinzu. Sanft wirbeln die Röhre und inkubieren bei Raumtemperatur für fünf Minuten, um rote Blutkörperchen Lyse durchzuführen.Fügen Sie nach fünf Minuten im ACK-Puffer der Probe neun Milliliter DMEM hinzu. Legen Sie den Deckel wieder auf die Rohre und kehren Sie die Rohre vorsichtig um, um sie zu mischen. Filtern Sie durch ein 40 Mikron Zellsieb und sammeln Sie das Filtrat in 15 Milliliter konischen Röhren.Zentrifugieren Sie die Rohre bei 400 mal g für sechs Minuten und entsorgen Sie den Überstand. Fügen Sie einen Milliliter FACS-Puffer hinzu und setzen Sie das Pellet wieder auf. Dann in ein 1,5 Milliliter Mikrozentrifugenrohr übertragen.Zentrifugieren Sie wieder bei 400 mal g für fünf Minuten. Entsorgen Sie den Überstand und setzen Sie das Pellet in 100 Mikroliter FACS-Puffer wieder auf. Eine Einzelzellsuspension ist nun bereit für die Antikörperfärbung.Fügen Sie den Herzproben ein typisches menschliches Antikörperpanel bei einer bis 50 Verdünnung hinzu. Verwenden Sie verschiedene Antikörper für Stromalzellen und murine Herzmakrophagen. 30 bis 40 Minuten bei vier Grad Celsius im Dunkeln inkubieren.Fügen Sie einen Milliliter FACS-Puffer, sanft Wirbel und Zentrifuge bei 400 mal g für fünf Minuten. Wiederholen Sie diesen Waschschritt ein zweites Mal. Setzen Sie dann die Probe in 350 Mikroliter FACS-Puffer wieder aus und fügen Sie DAPI hinzu, um eine endgültige Konzentration von einem Mikromolaren zu erreichen.Die Proben sind nun für die FACS-Analyse bereit. In diesem Protokoll wurde die Isolierung von Makrophagen von Maus und menschlichem Myokard erreicht. Diese Abbildung zeigt unverarbeiteten und verarbeiteten menschlichen LVAD-Kern.Das Gatingschema für die Strömungssortierung von CCR2-negativen und CCR2-positiven menschlichen Makrophagen aus humanem Myokard sowie für CD45-negative Stromalzellen aus humaner ischämischer Kardiomyopathie wurde vorgestellt. Die Bilder von Wright gefärbt FACS sortiert CD45 positive und CD45 negative Zellen zeigen intakte Zellmembran, die Lebensfähigkeit. Das Gating-Schema zum Sortieren von Makrophagen aus einem Mausherz war ebenfalls erfolgreich.Das Gewicht des Gewebes, das für die enzymatische Reaktion verwendet wird, ist entscheidend für eine effiziente Verdauung. Verwenden Sie nicht mehr als 200 Milligramm Gewebe für die im Protokoll angegebenen Enzymkonzentrationen. Nach dieser Methode können Zellen für In-vitro-Stimulationstests kultiviert werden.Zellen können für die Massen-RNA-Sequenzierung oder die Einzelzellsequenzierung sortiert werden. Diese Methode diente als unschätzbare Technik bei der Entdeckung der bisher unbekannten Makrophagenheterogenität, die im gesunden oder kranken menschlichen Herzen vorhanden ist. Mit dieser Methode gefolgt von Einzelzell-Sequenzierung, Studien sind im Gange, um aufzudecken, wie verschiedene Immun- und Nichtimmunzellen von krankem Herzen im Vergleich zum gesunden Herzen variieren.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

Isolierung von Maus Bauchhöhle Cells

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

Isolierung von Maus Lung Dendritischen Zellen

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

Isolierung und Charakterisierung von dendritischen Zellen und Makrophagen aus dem Mausdarm

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Isolation of Precursor B-cell Subsets from Umbilical Cord Blood

Isolierung von Precursor B-Zell-Subsets aus Nabelschnurblut

Umbilical cord blood is highly enriched for hematopoietic progenitor cells at different lineage commitment stages. We have developed a protocol for ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

Isolierung von myeloider dendritischer Zellen und Epithelzellen Menschliche Thymus

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

Isolierung von murinen Lymphknoten Stromazellen

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Maus Naive CD4<sup&gt; +</sup&gt; T-Zell-Isolierung und<em&gt; In-vitro-</em&gt; Differenzierung in T-Zell-Populationen

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

Isolation of Leukocytes from the Human Maternal-fetal Interface

Isolation von Leukozyten aus dem menschlichen Mutter und Fötus-Schnittstelle

Pregnancy is characterized by the infiltration of leukocytes in the reproductive tissues and at the maternal-fetal interface (decidua basalis and decidua ...

Isolation of Viral Replication Compartment-enriched Sub-nuclear Fractions from Adenovirus-infected Normal Human Cells

Isolierung der viralen Replikation Compartment angereicherte Teil nuklearen Fraktionen von Adenovirus-infizierten normalen menschlichen Zellen

During infection of human cells by adenovirus (Ad), the host cell nucleus is dramatically reorganized, leading to formation of nuclear microenvironments ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

Isolation und Analyse über Durchflusszytometrie von Immunzellen aus dem ischämischen Gehirn der Maus

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...