Name: isolation of macrophage subsets and stromal cells from human and mouse myocardial specimens
Uploaded: 2019-12-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Macrophage Subsets and Stromal Cells from Human and Mouse Myocardial Specimens at JoVE.com

Detta projekt möjliggjordes genom finansiering från Children ' s Discovery Institute of Washington University och St. Louis Children ' s Hospital (CH-II-2015-462, CH-II-2017-628), Foundation of Barnes-Jewish Hospital (8038-88), och NHLBI (R01 HL138466, R01 HL139714). K.J.L. stöds av NIH K08 HL123519 och Burroughs välkomst fond (1014782).

Det protokoll som presenteras har godkänts av Washington University i St Louis institutions Review Board (#201305086). Alla ämnen ger informerat samtycke innan prov insamlingen och experimenten utförs i enlighet med det godkända studieprotokollet. Det presenterade protokollet utförs med godkännande av den institutionella djuromsorg och användning kommittén vid Washington University School of Medicine och följer de riktlinjer som beskrivs i NIH guide för vård och användning av försöksdjur.
<p class="jove...

<ol>
	<li>Pinto, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+abundant+tissue+macrophage+population+in+the+adult+murine+heart+with+a+distinct+alternatively-activated+macrophage+profile.">An abundant tissue macrophage population in the adult murine heart with a distinct alternatively-activated macrophage profile.</a> PLoS One. 7 (5), e36814 (2012).</li><li>Hulsmans, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+facilitate+electrical+conduction+in+the+heart.">Macrophages facilitate electrical conduction in the heart.</a> Cell. 169 (3), 510-522 (2017).</li><li>Hulsmans, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+macrophages+promote+diastolic+dysfunction.">Cardiac macrophages promote diastolic dysfunction.</a> Journal of Experimental Medicine. 215 (2), 423-440 (2018).</li><li>Aurora, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+are+required+for+neonatal+heart+regeneration.">Macrophages are required for neonatal heart regeneration.</a> Journal of Clinical Investigation. 124 (3), 1382-1392 (2014).</li><li>Lavine, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+macrophage+lineages+contribute+to+disparate+patterns+of+cardiac+recovery+and+remodeling+in+the+neonatal+and+adult+heart.">Distinct macrophage lineages contribute to disparate patterns of cardiac recovery and remodeling in the neonatal and adult heart.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (45), 16029-16034 (2014).</li><li>Epelman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+and+adult-derived+resident+cardiac+macrophages+are+maintained+through+distinct+mechanisms+at+steady+state+and+during+inflammation.">Embryonic and adult-derived resident cardiac macrophages are maintained through distinct mechanisms at steady state and during inflammation.</a> Immunity. 40 (1), 91-104 (2014).</li><li>Leid, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primitive+embryonic+macrophages+are+required+for+coronary+development+and+maturation.">Primitive embryonic macrophages are required for coronary development and maturation.</a> Circulation Research. 118 (10), 1498-1511 (2016).</li><li>Bajpai, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+heart+contains+distinct+macrophage+subsets+with+divergent+origins+and+functions.">The human heart contains distinct macrophage subsets with divergent origins and functions.</a> Nature Medicine. 24 (8), 1234-1245 (2018).</li><li>Dick, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-renewing+resident+cardiac+macrophages+limit+adverse+remodeling+following+myocardial+infarction.">Self-renewing resident cardiac macrophages limit adverse remodeling following myocardial infarction.</a> Nature Immunology. 20, 29-39 (2019).</li><li>Nahrendorf, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+healing+myocardium+sequentially+mobilizes+two+monocyte+subsets+with+divergent+and+complementary+functions.">The healing myocardium sequentially mobilizes two monocyte subsets with divergent and complementary functions.</a> Journal of Experimental Medicine. 204 (12), 3037-3047 (2007).</li></ol>

Protokollet tillåter utvinning av olika makrofage undergrupper från humant hjärtmuskeln. Protokollet är enkelt och tar 3 till 4 timmar att förbereda Single cellsuspension redo för FACS analys. Även om protokollet är relativt enkelt att utföra, det finns vissa tekniska aspekter som måste övervägas som kommer att minimera variationer. För det första är det nödvändigt att arbeta i tid med mänsklig vävnad för optimal cellernas lönsamhet. Det är viktigt att hålla vävnaden i kallt saltlösning/HBSS för...

Makrofager representerar den vanligast förekommande immun cells typen i hjärtat, och de spelar betydande roller i att generera robusta inflammatoriska och reparativa svar efter hjärtskada1,2,3,4. Tidigare identifierade vår grupp två stora undergrupper av makrofager i det murina hjärtat som härstammar från distinkta utvecklings ursprung5,6. I stort sett, distinkta populationer av vävnad bosatt hjärt makrofage undergrupper kan identifieras baserat på cellens yta uttrycket av CCR2 (C-C motiv Chemokine receptor 2). CCR2- makrofager (cellytan uttryck: CCR2-mhciilåg och CCR2-mhciihög) är av embryonala ursprung (primitiva och erythromyeloid linjer), kan själv förnya, och utgör en dominerande population under homeostatiska förhållanden. Resident CCR2+ makrofager är av slutgiltigt hematopoietiska ursprung, upprätthålls genom rekrytering från cirkulerande monocyter, och representerar en mindre population under homeostatiska förhållanden. Funktionellt, CCR2- makrofager generera minimal inflammation och är kritiska för koronar utveckling neonatal hjärta förnyelse5,7. Däremot CCR2+ makrofager initiera robusta inflammatoriska reaktioner efter hjärt förolämpningar och bidra till säkerheter kardiomyocyte skada, negativ ombyggnad av vänster kammare, och hjärtsvikt progression8,9.
Nyligen har vi visat att den mänskliga hjärtmuskeln innehåller också två distinkta undergrupper av makrofager identifierats på samma sätt som antingen CCR2- eller CCR2+8. Genuttryck och funktionella analyser avslöjade att Human CCR2- och CCR2+ makrofager representerar funktionellt skilda delmängder och är funktionellt analoga med CCR2- och CCR2+ makrofager som finns i musens hjärta. Human CCR2- makrofager uttrycker robusta nivåer av tillväxtfaktorer, inklusive IGF1, PDGF, CYR61 och HB-EGF. CCR2+ makrofager är berikade i chemokines och cytokiner som främjar inflammation, såsom Il-1b, IL-6, CCL-2, CCL-7, och TNF-a. Stimulerade CCR2+ makrofager utsöndrar markant högre nivåer av den inflammatoriska cytokin interleukinen-1 β (Il-1 β) i kulturen. Hur dessa delmängder bidrar Differentiellt till vävnad reparation och vänsterkammari (LV) remodeling i samband med hjärtskada förblir ett område av aktiv forskning.
Flödescytometri baserad analys av makrofagheterogenitet i mus och mänskligt hjärta kräver att smälta hjärt vävnaden och generera en enda cellsuspension följt av flödescytometrisk analys eller cell sortering för ytterligare nedströms processer såsom bulk RNA sekvensering/Single cell RNA sekvensering eller odling av cellerna för funktionella analyser. Det ursprungliga protokollet för att göra en enda cellsuspension från murina Hearts rapporterades först av Nahrendorf Group i Nahrendorf et al. 200710. Vårt labb har anpassat och modifierat protokollet för att extrahera makrofager från humant hjärtmuskeln. Med hjälp av samma protokoll men med smärre modifiering i färgning och gating system, CD45- stromaceller från humant hjärtmuskeln kan också skördas. Presenteras här, i text och video, är ett protokoll som utförs rutinmässigt för utvinning av makrofager eller stromacellstumörer från den mänskliga myocardium.
Prover från hjärtvävnad erhålls från vuxna patienter med dilaterad kardiomyopati (DCM: idiopatisk eller familjär) eller ischemisk kardiomyopati (ICM) som genomgår implantation av vänster kammar assistans (LVAD) eller hjärttransplantation. Explanted hjärtan eller LVAD kärnar ur intravaskulärt perfunderade med kall saltlösning, innan du påbörjar digestionstillvägagångsslagen. Det är viktigt att notera att "kvalitet" av vävnadsprov bestäms i form av ärrbildning eller fettvävnad infiltration kan i hög grad påverka avkastningen av makrofager. Hjärt prov med stora områden av ärrbildning kommer att ha mycket lägre cell avkastning och kan innebära allvarliga tekniska begränsningar när önskade nedströms analysmetoder kräver in vitro-cellodling.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 mL Conocal Tubes</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>14-959-53A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#181;m Cell Strainers</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>50-828-736</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical Tubes</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysis Buffer</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A10492-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase 1</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C0130-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM 1x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse 1</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4527-20KU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DRAQ5</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>62251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA 0.5M pH 8</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46-034-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme Deactivating Buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>490 mL HBSS, 10 mL FBS, 1 g BSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>976 mL PBS, 20 mL FBS, 4mL EDTA (0.5M)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A3840201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS 1x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14175-079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostats</td>
			<td>VWR</td>
			<td>63042-052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase type 1-s</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3506-500MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS 1x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petridishes</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>172931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor Blade</td>
			<td>VWR</td>
			<td>55411-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-578</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of macrophage subsets and stromal cells from human and mouse myocardial specimens

Makrofager representerar de mest heterogena och rikliga immunceller populationer i hjärtat och är centrala i att köra inflammation och reparativ svar efter hjärtskada. Hur olika undergrupper av makrofager iscensätta immunsvaret efter hjärtskada är ett aktivt forskningsområde. Presenteras här är ett enkelt protokoll som vårt labb utför rutinmässigt, för utvinning av makrofager från mus och mänskliga hjärtmuskeln prover som erhållits från friska och sjuka individer. Kortfattat, detta protokoll innebär enzymatisk nedbrytning av hjärtvävnad för att generera en enda cellsuspension, följt av antikropp färgning, och flödescytometri. Denna teknik är lämplig för funktionella analyser utförs på sorterade celler samt bulk och Single cell RNA sekvensering. En stor fördel med detta protokoll är dess enkelhet, minimal dag till dag variation och bred tillämplighet möjliggör utredning av makrofag heterogenitet över olika musmodeller och mänskliga sjukdomsentiteter.

Det protokoll som beskrivs tillåter isolering av makrofager från mus och humant myocardium. Med hjälp av samma protokoll, men med en annan färgning och gating strategi, stromaceller kan också skördas från den mänskliga myocardium. FACS resultat presenteras här förvärvades antingen på BD LSRII eller BD FACS ARIA III plattform. Kompensationskontroller genererades från enstaka färgkontroll prover från färgade splenocyter. Figur 1 visar obearbetad...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Macrophage Subsets and Stromal Cells from Human and Mouse Myocardial Specimens at JoVE.com

Isolation of Macrophage Subsets and Stromal Cells from Human and Mouse Myocardial Specimens

Presenteras här är ett protokoll för att isolera olika undergrupper av makrofager och andra icke-immuna celler från mänskliga och mus hjärtmuskeln genom att förbereda en enda cellsuspension genom enzymatisk matsmältning. Gating system för flödescytometri baserad identifiering och karakterisering av isolerade makrofager presenteras också.

Isolering av makrofager subsets och stromaceller från Human-och mus-Myokarprover

Macrophages represent the most heterogeneous and abundant immune cell populations in the heart and are central in driving inflammation and reparative ...

Hjärtat innehåller heterogena populationen av immunceller som spelar avgörande roller i hjärtinflammation samt reparation. För att förstå heterogeniteten hos immunceller och få ytterligare insikt i deras funktion är det viktigt att ha en metod som gör det möjligt för återhämtning av dessa celler från hjärtat. Denna teknik kan hjälpa avslöja immun samt nonimmune cell mångfald som finns i friska eller ett sjuka hjärta.Det finns tre huvudsakliga fördelar med denna teknik. Först är det ett enkelt enda arbetsflöde som leder till generering av encellsupphängning av olika celltyper inom tre timmar efter tid. För det andra leder det till hög återhämtning av livskraftiga immun- och nonimmune-cellpopulationer.Och för det tredje, det är en mycket mångsidig metod och kan tillämpas på hjärtvävnader i andra arter också. Att uppmärksamma mängden vävnad som används för en enda matsmältningsreaktion är viktigt. Använd steril sax, dissekera vävnadsprov från den apikala eller laterala väggen i den vänstra ventrikeln i kall saltlösning eller HBSS.Dissekera försiktigt ut epissiellt fett och chordae tendineae från exemplaret. Med hjälp av ett sterilt blad eller sax, dissekera vävnaden bitar i bitar som väger cirka 200 milligram. Efter att du har avlivat musen öppnar du brösthålan med hjälp av vassa saxar.Använd trubbig hemostats för att lyfta hjärtat uppåt. Genomsyra hjärtat med kall PBS med hjälp av en 25 gauge nål fäst på en fem milliliter spruta. Genomsyra tills hjärtat verkar blancherat i färg.Ta bort hjärtat och placera det i en steril Petriskål på is. Placera 200 milligram av mänskliga hjärtvävnad bitar eller murine hjärta i en steril Petriskål. Finhacka vävnaden med hjälp av ett sterilt blad eller en sax.För att ställa in matsmältningar, i en 15 milliliter koniska rör, förbereda en slutlig matsmältningsvolym på tre milliliter för varje mänsklig hjärtvävnad bit eller en murine hjärta med enzymer kollagenas I, DNase I, och hyaluronidase i koncentrationer av 450, 60 och 60 enheter per milliliter. Tillsätt 2,5 milliliter DMEM i röret. Med hjälp av rena tlycper placerar du den finhackade vävnaden i varje reaktionsrör.Blanda väl genom mild virvelning. Smält i en timme vid 37 grader Celsius i en skakande inkubator inställd på en låg till medelhög agitation hastighet. Efter en timmes matsmältning, ta rören ut från inkubatorn och placera på is.Ställ in 50 milliliter koniska rör med en 40 mikron cell sil på toppen. Blöt filtren med två milliliter enzymavaktiverande buffert. Därefter inaktiverar du digestionsenzymerna genom att lägga till åtta milliliter enzym som avaktiverar buffert till varje matsmältningsrör.Häll sedan de resulterande 13 milliliter av total blandning genom 40 mikron cell sil i 50 milliliter koniska rör. Överför de filtrerade proverna tillbaka i färska 15 milliliter koniska rör. Snurra proverna på 400 gånger g i sex minuter vid fyra grader Celsius.Kassera supernatanten som lämnar 0,5 milliliter media. Resuspend cell pelleten genom skonsam pipettering och tillsätt en milliliter av ACK lysbuffert. Försiktigt virvla röret och inkubera i rumstemperatur i fem minuter för att utföra röda blodkroppar lys.Efter fem minuter i ACK-buffert lägger du till nio milliliter DMEM i provet. Sätt tillbaka locket på rören och försiktigt invertera rören för att blanda. Filtrera genom en 40 mikron cell sil och samla filtratet i 15 milliliter koniska rör.Centrifugera rören vid 400 gånger g i sex minuter och kassera supernatanten. Tillsätt en milliliter FACS-buffert och återanvänd pelleten. Överför sedan den till ett 1,5 milliliter mikrocentrifugrör.Centrifugera igen vid 400 gånger g i fem minuter. Kassera supernatanten och resuspend pelleten i 100 mikroliter av FACS-buffert. En enda cell suspension är nu redo för antikropp färgning.Lägg till en typisk human antikroppspanel till hjärtproverna vid en till 50 utspädning. Använd olika antikroppar för stromal celler och murin hjärta makrofager. Inkubera i 30 till 40 minuter vid fyra grader Celsius i mörkret.Tillsätt en milliliter FACS buffert, försiktigt virvel och centrifug vid 400 gånger g i fem minuter. Upprepa detta tvättsteg en andra gång. Sedan resuspend provet i 350 mikroliter av FACS buffert och tillsätt DAPI att nå en slutlig koncentration av en mikromolar.Proverna är nu klara för FACS-analys. I detta protokoll uppnåddes isolering av makrofager från mus och humant myokardium. Denna figur visar obearbetade och bearbetade mänskliga LVAD kärna.Gating systemet för flödet sortering av CCR2 negativa och CCR2 positiva mänskliga makrofager från mänskliga hjärtmuskeln samt för CD45 negativa stromal celler från mänskliga skandinaviska kardiomyopati presenterades. Bilderna av Wright färgade FACS sorterade CD45 positiva och CD45 negativa celler visar intakt cellmembranet indikerar lönsamhet. Den gating system för att sortera makrofager från en mus hjärta var också framgångsrik.Vikt av vävnaden som används för enzymatisk reaktion är avgörande för effektiv matsmältning. Använd inte mer än 200 milligram vävnad för de enzymkoncentrationer som anges i protokollet. Efter denna metod kan celler odlas för in vitro-stimuleringsanalyser.Celler kan sorteras för bulk RNA-sekvensering eller enkelcellssekvensering. Denna metod har fungerat som en ovärderlig teknik för att upptäcka den tidigare okända makrofagheterogenitet som finns i friska eller sjuka mänskliga hjärtat. Med denna metod följt av single cell sekvensering, studier pågår för att avslöja hur olika immun och nonimmune celler varierar från sjuka hjärtat kontra det friska hjärtat.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

Isolering av Mouse bukhålan celler

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal ...

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

Isolering av Dendritiska Mouse lungceller

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

Isolering och karakterisering av dendritiska celler och makrofager från mus tarm

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Isolation of Precursor B-cell Subsets from Umbilical Cord Blood

Isolering av prekursor B-cell-underuppsättningar från navelsträngsblod

Umbilical cord blood is highly enriched for hematopoietic progenitor cells at different lineage commitment stages. We have developed a protocol for ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

Isolering av myeloida dendritiska celler och epitelceller från Human Thymus

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

Isolering av murint Lymph Node stromaceller

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mus Naiv CD4<sup&gt; +</sup&gt; T Cell Isolering och<em&gt; In vitro</em&gt; Differentiering i T cellundergrupper

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

Isolation of Leukocytes from the Human Maternal-fetal Interface

Isolering av leukocyter från Human Maternal-foster Interface

Pregnancy is characterized by the infiltration of leukocytes in the reproductive tissues and at the maternal-fetal interface (decidua basalis and decidua ...

Isolation of Viral Replication Compartment-enriched Sub-nuclear Fractions from Adenovirus-infected Normal Human Cells

Isolering av Viral Replication Fack-berikade underkärn Fraktioner från adenovirus-infekterade Normal humana celler

During infection of human cells by adenovirus (Ad), the host cell nucleus is dramatically reorganized, leading to formation of nuclear microenvironments ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

Isolering och flödescytometrisk analys av immunceller från ischemisk Mouse Brain

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...