Name: isolation of macrophage subsets and stromal cells from human and mouse myocardial specimens
Uploaded: 2019-12-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Macrophage Subsets and Stromal Cells from Human and Mouse Myocardial Specimens at JoVE.com

Bu proje, Washington Üniversitesi Çocuk Keşif Enstitüsü ve St. Louis Çocuk Hastanesi (CH-II-2015-462, CH-II-2017-628), Barnes-Jewish Hastanesi Vakfı (8038-88) ve NHLBI (R01) tarafından sağlanan finansmanla mümkün olmuştur. HL138466, R01 HL139714). K.J.L. NIH K08 HL123519 ve Burroughs Karşılama Fonu (1014782) tarafından desteklenir.

Sunulan protokol Washington Üniversitesi tarafından St. Louis Kurumsal İnceleme Kurulu (#201305086) tarafından onaylanmıştır. Tüm denekler numune toplamadan önce bilgilendirilmiş onay sağlar ve deneyler onaylı çalışma protokolüne uygun olarak gerçekleştirilir. Sunulan protokol, Washington Üniversitesi Tıp Fakültesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi'nin onayı ile gerçekleştirilir ve NIH Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'nda açıklanan yönergelere uyar.
<...

<ol>
	<li>Pinto, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+abundant+tissue+macrophage+population+in+the+adult+murine+heart+with+a+distinct+alternatively-activated+macrophage+profile.">An abundant tissue macrophage population in the adult murine heart with a distinct alternatively-activated macrophage profile.</a> PLoS One. 7 (5), e36814 (2012).</li><li>Hulsmans, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+facilitate+electrical+conduction+in+the+heart.">Macrophages facilitate electrical conduction in the heart.</a> Cell. 169 (3), 510-522 (2017).</li><li>Hulsmans, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+macrophages+promote+diastolic+dysfunction.">Cardiac macrophages promote diastolic dysfunction.</a> Journal of Experimental Medicine. 215 (2), 423-440 (2018).</li><li>Aurora, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+are+required+for+neonatal+heart+regeneration.">Macrophages are required for neonatal heart regeneration.</a> Journal of Clinical Investigation. 124 (3), 1382-1392 (2014).</li><li>Lavine, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+macrophage+lineages+contribute+to+disparate+patterns+of+cardiac+recovery+and+remodeling+in+the+neonatal+and+adult+heart.">Distinct macrophage lineages contribute to disparate patterns of cardiac recovery and remodeling in the neonatal and adult heart.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (45), 16029-16034 (2014).</li><li>Epelman, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+and+adult-derived+resident+cardiac+macrophages+are+maintained+through+distinct+mechanisms+at+steady+state+and+during+inflammation.">Embryonic and adult-derived resident cardiac macrophages are maintained through distinct mechanisms at steady state and during inflammation.</a> Immunity. 40 (1), 91-104 (2014).</li><li>Leid, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primitive+embryonic+macrophages+are+required+for+coronary+development+and+maturation.">Primitive embryonic macrophages are required for coronary development and maturation.</a> Circulation Research. 118 (10), 1498-1511 (2016).</li><li>Bajpai, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+heart+contains+distinct+macrophage+subsets+with+divergent+origins+and+functions.">The human heart contains distinct macrophage subsets with divergent origins and functions.</a> Nature Medicine. 24 (8), 1234-1245 (2018).</li><li>Dick, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-renewing+resident+cardiac+macrophages+limit+adverse+remodeling+following+myocardial+infarction.">Self-renewing resident cardiac macrophages limit adverse remodeling following myocardial infarction.</a> Nature Immunology. 20, 29-39 (2019).</li><li>Nahrendorf, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+healing+myocardium+sequentially+mobilizes+two+monocyte+subsets+with+divergent+and+complementary+functions.">The healing myocardium sequentially mobilizes two monocyte subsets with divergent and complementary functions.</a> Journal of Experimental Medicine. 204 (12), 3037-3047 (2007).</li></ol>

Protokol insan miyokardinden çeşitli makrofaj alt kümelerinin çıkarılmasına izin verir. Protokol basittir ve TEK hücreli süspansiyonun FACS analizine hazır hazırlanması 3 ila 4 saat sürer. Protokolün gerçekleÅ tirilmesi nispeten basit olsa da, değişkenliÄ i en aza indirecek bazÄ± teknik yÃ1/4rÃ1/4tÃ1/4ler de vardÄ±r. Öncelikle, insan dokusu ile zamanında çalışma optimal hücre canlılığı için gereklidir. Hücre ölümünü en aza indirmek için dokuyu soğuk tuzlu/HBSS'de tutmak önemli...

Makrofajlar kalpte en bol bağışıklık hücre tipi temsil, ve onlarkardiyak yaralanma1,2,3,4aşağıdaki sağlam inflamatuar ve reparative yanıtlar üreten önemli rol oynamaktadır. Daha önce, grubumuz farklı gelişimsel kökenlerden elde edilen murin kalp makrofajlar iki büyük alt kümesi tespit5,6. Genel olarak, doku yerleşik kardiyak makrofaj alt kümelerinin farklı popülasyonları CCR2'nin hücre yüzey ekspresyonuna göre tanımlanabilir (C-C motifli kemokin reseptörü 2). CCR2- makrofajlar (hücre yüzey ekspresyonu: CCR2-MHCIIdüşük ve CCR2-MHCIIyüksek)embriyonik kökenlidir (ilkel ve eritromiyeloid soylar), kendini yenilemek mümkün, ve homeostatik koşullar altında baskın bir popülasyon temsil. Resident CCR2+ makrofajlar kesin hematopoetik kökenlidir, dolaşan monositlerden işe alım yoluyla korunur ve homeostatik koşullar altında küçük bir popülasyonu temsil eder. Fonksiyonel olarak, CCR2- makrofajlar minimal inflamasyon oluşturmak ve koroner gelişim neonatal kalp rejenerasyonu için kritikolan 5,7. Buna karşılık, CCR2+ makrofajlar kardiyak hakaret ler aşağıdaki sağlam inflamatuar yanıtlar başlatmak ve teminat kardiyomiyosit yaralanmasıkatkıda, sol ventrikül olumsuz remodeling, ve kalp yetmezliği ilerlemesi8,9.
Son zamanlarda, insan miyokardiyum da makrofajlar iki farklı alt kümesi ya CCR2olarak tanımlanan - ya da CCR2+8içerdiğini göstermiştir. Gen ekspresyonu ve fonksiyonel analizler, insan CCR2- ve CCR2+ makrofajlar fonksiyonel olarak farklı alt kümeleri temsil ve fonksiyonel CCR2 benzer olduğunu ortaya- ve CCR2+ makrofajlar fare kalp bulundu. İnsan CCR2- makrofajlar IGF1, PDGF, Cyr61 ve HB-EGF gibi güçlü büyüme faktörleri düzeylerini ifade eder. CCR2+ makrofajlar il-1b, IL-6, CCL-2, CCL-7 ve TNF-a gibi iltihabı teşvik kemokinler ve sitokinler zenginleştirilmiştir. Uyarılmış CCR2+ makrofajlar kültürde inflamatuar sitokin interlökin-1β (IL-1β) belirgin olarak daha yüksek seviyelerde salgılarlar. Bu alt kümelerin doku onarımına nasıl farklı katkıda bulunduğu ve kardiyak yaralanma bağlamında sol ventrikül (LV) remodeling'in aktif bir araştırma alanı olduğu durmaktadır.
Fare ve insan kalbinde makrofaj heterojenite akış-sitometri tabanlı analizi kardiyak doku sindirerek ve akış sitometrik analiz veya hücre sıralama gibi toplu RNA sıralama / tek hücreli RNA sıralama veya fonksiyonel tahliller için hücreleri kültüre gibi daha fazla aşağı süreçleri için takip tek bir hücre süspansiyon oluşturma gerektirir. Murine kalplerden tek bir hücre süspansiyon yapmak için orijinal protokol ilk Nahrendorf grup tarafından Nahrendorf ve ark 200710 bildirilmiştir. Laboratuarımız protokolü insan miyokardiyumundan makrofajları çıkarmak için uyarladı ve değiştirdi. Aynı protokolü kullanarak ancak boyama ve gating düzeni hafif değişiklik ile, CD45- insan miyokardinden stromal hücreleri de hasat edilebilir. Burada sunulan, metin ve video, insan miyokardinden makrofajveya stromal çıkarılması için rutin olarak yapılan bir protokoldür.
Kardiyak doku örnekleri dilate kardiyomiyopati (DCM: idiyopatik veya ailesel) veya iskemik kardiyomiyopati (ICM) sol ventrikül yardımcı cihaz (LVAD) implantasyonu veya kardiyak transplantasyon geçiren erişkin hastalardan elde edilir. Ekskedeki kalpler veya LVAD çekirdekleri sindirim işlemine başlamadan önce intravasküler olarak soğuk tuzlu ile perfüzyonlanır. Yara izi veya yağ dokusu infiltrasyonu derecesi açısından belirlenen doku örneğinin "kalitesi"nin makrofajların verimini büyük ölçüde etkileyebileceği unutulmaması gerekir. Büyük yara izi alanlarına sahip kalp örnekleri çok daha düşük hücre verime sahip olacak ve istenilen downstream analiz yöntemleri in vitro hücre culturing gerektirdiğinde ciddi teknik sınırlama lar oluşturabilir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15 mL Conocal Tubes</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>14-959-53A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 &#181;m Cell Strainers</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>50-828-736</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Conical Tubes</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>352098</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysis Buffer</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A10492-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase 1</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C0130-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>D1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM 1x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11965-084</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAse 1</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D4527-20KU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DRAQ5</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>62251</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA 0.5M pH 8</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46-034-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Enzyme Deactivating Buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>490 mL HBSS, 10 mL FBS, 1 g BSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>976 mL PBS, 20 mL FBS, 4mL EDTA (0.5M)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A3840201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBSS 1x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14175-079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostats</td>
			<td>VWR</td>
			<td>63042-052</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase type 1-s</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3506-500MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS 1x</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>14190-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petridishes</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>172931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor Blade</td>
			<td>VWR</td>
			<td>55411-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>VWR</td>
			<td>82027-578</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of macrophage subsets and stromal cells from human and mouse myocardial specimens

Makrofajlar kalpteki en heterojen ve bol immün hücre popülasyonlarını temsil eder ve kardiyak yaralanma sonrası inflamasyon ve reparative yanıtları yönlendirmede merkezi dir. Makrofajların çeşitli alt kümelerinin kardiyak yaralanma sonrası bağışıklık yanıtlarını nasıl düzenlediği aktif bir araştırma alanıdır. Burada sunulan basit bir protokol bizim laboratuvar rutin olarak gerçekleştirir, fare ve insan miyokard örnekleri sağlıklı ve hastalıklı bireylerden elde makrofajların çıkarılması için. Kısaca, bu protokol tek bir hücre süspansiyon oluşturmak için kardiyak doku enzimatik sindirim içerir, antikor boyama takip, ve akış sitometri. Bu teknik, sıralanmış hücrelerde yapılan fonksiyonel tahlillerin yanı sıra toplu ve tek hücreli RNA dizilimi için uygundur. Bu protokolün en büyük avantajı, sadeliği, günlük değişim ve çeşitli fare modelleri ve insan hastalığı varlıklar arasında makrofaj heterojenite sinin araştırılmasına olanak sağlayan geniş uygulanabilirliktir.

Açıklanan protokol, makrofajların fare ve insan miyokardyumundan izole edilmesine olanak sağlar. Aynı protokolü kullanarak, ancak farklı bir boyama ve gating stratejisi ile, stromal hücreleri de insan miyokardiyum dan hasat edilebilir. Burada sunulan FACS sonuçları BD LSRII veya BD FACS ARIA III platformunda elde edilmiş. Lekeli splenositlerden alınan tek renk kontrol örneklerinden kompansasyon kontrolleri oluşturuldu. Şekil 1 işlenmemiş ve i...

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Macrophage Subsets and Stromal Cells from Human and Mouse Myocardial Specimens at JoVE.com

Isolation of Macrophage Subsets and Stromal Cells from Human and Mouse Myocardial Specimens

Burada sunulan enzimatik sindirim yoluyla tek bir hücre süspansiyon hazırlayarak makrofajlar ve diğer bağışıklık dışı hücrelerin çeşitli alt kümeleri insan ve fare miyokardiyum izole etmek için bir protokoldür. Akış sitometrisine dayalı tanımlama ve izole makrofajların karakterizasyonu için gating şemaları da sunulmuştur.

Makrofaj Alt Kümelerinin ve Stromal Hücrelerinin İnsan ve Fare Miyokardiyal Örneklerden İzolasyon

Macrophages represent the most heterogeneous and abundant immune cell populations in the heart and are central in driving inflammation and reparative ...

Kalp, kardiyak inflamasyonda ve onarımda önemli rol oynayan bağışıklık hücrelerinin heterojen popülasyonunu içerir. Bağışıklık hücrelerinin heterojenliğini anlamak ve işlevleri hakkında daha fazla bilgi edinmek için, bu hücrelerin kalpten kurtarılmasına olanak sağlayacak bir yönteme sahip olmak önemlidir. Bu teknik, sağlıklı veya hastalıklı bir kalpte bulunan bağışıklık yanı sıra bağışıklık dışı hücre çeşitliliğini ortaya çıkarmak yardımcı olabilir.Bu tekniğin üç ana avantajı vardır. İlk olarak, üç saat içinde çeşitli hücre türlerinin tek hücreli süspansiyon nesil yol açan basit bir tek iş akışı. İkincisi, canlı bağışıklık ve immün olmayan hücre popülasyonlarının yüksek iyileşme yol açar.Ve üçüncü olarak, çok yönlü bir yöntemdir ve diğer türlerdeki kalp dokularına da uygulanabilir. Tek bir sindirim reaksiyonu için kullanılan doku miktarına dikkat önemlidir. Soğuk tuzlu veya HBSS sol ventrikül apikal veya lateral duvardan steril makas, diseksiyon doku örneği kullanın.Dikkatle epikardiyal yağ ve kordatenin tendineae örnekten dışarı incelemek. Steril bir bıçak veya makas yardımıyla, yaklaşık 200 miligram ağırlığında parçalar halinde doku parçaları incelemek. Fareyi ötenazi yaptıktan sonra, keskin makas yardımıyla göğüs boşluğunu açın.Kalbi yukarı kaldırmak için künt hemostatlar kullanın. Beş mililitrelik şırıngaya bağlı 25 kalibrelik bir iğne kullanarak kalbi soğuk PBS ile perfüzyon yapın. Kalp renkli görünene kadar perfuse.Kalbi çıkarın ve buz üzerinde steril bir Petri kabına yerleştirin. Steril petri kabına 200 miligram insan kardiyak doku parçaları veya murin kalbi yerleştirin. Steril bir bıçak veya makas kullanarak dokuyu ince ince doğrama.Sindirim kurmak için, bir 15 mililitre konik tüp, her insan kardiyak doku yığını veya enzimler kollajenaz I, DNase I ve hyaluronidaz ile üç mililitre son bir sindirim hacmi hazırlamak 450, 60, ve mililitre başına 60 birim konsantrasyonlarda. Tüpe 2,5 mililitre DMEM ekleyin. Temiz forceps yardımıyla, her reaksiyon tüpü içine ince kıyılmış doku yerleştirin.Nazik girdap ile iyice karıştırın. Bir saat boyunca 37 santigrat derece bir sallayarak inkübatör düşük ve orta ajitasyon hızı ayarlayın sindirin. Sindirim bir saat sonra, kuvöz tüpleri almak ve buz üzerinde yerleştirin.50 mililitrelik konik tüpler ilerler ve üzerinde 40 mikron hücreli süzgeç bulunur. Filtreleri iki mililitre enzim devre dışı tamponile ısla. Daha sonra, her sindirim tüpüne sekiz mililitre enzim devre dışı bırakarak sindirim enzimlerini etkisiz hale getirin.Daha sonra 50 mililitrekonik tüpler içine 40 mikron hücreli süzgeç ile toplam karışımın elde edilen 13 mililitre dökün. Filtrelenmiş numuneleri taze 15 mililitrelik konik tüplere aktarın. Örnekleri 400 kez g'de dört santigrat derecede altı dakika döndürün.0,5 mililitre ortam bırakarak supernatant atın. Hücre peletini nazik pipetleme ile yeniden askıya alın ve bir mililitre ACK lysis tamponu ekleyin. Nazik tüp girdap ve beş dakika boyunca oda sıcaklığında inkübate kırmızı kan hücre lisis gerçekleştirmek için.ACK arabelleğibeş dakika sonra, örnek için DMEM dokuz mililitre ekleyin. Tüplerin kapağını geri koyun ve tüpleri yavaşça karıştırın. Filtre 40 mikron hücreli süzgeç ile ve 15 mililitre konik tüpler filtrat toplamak.Tüpleri 400 kez g'de altı dakika santrifüj edin ve süpernatant'ı atın. Bir mililitre FACS arabelleği ekleyin ve peleti yeniden askıya alın. Sonra 1.5 mililitrelik mikrosantrifüj tüpüne aktarın.Santrifüj tekrar 400 kez g beş dakika için. Supernatant atın ve FACS tampon 100 mikrolitre pelet resuspend. Tek hücreli süspansiyon antikor boyama için hazır.Kalp örneklerine 1 ila 50 seyreltme de tipik bir insan antikor paneli ekleyin. Stromal hücreler ve murin kalp makrofajları için farklı antikorlar kullanın. Karanlıkta 4 santigrat derecede 30-40 dakika kuluçkaya yat.Beş dakika boyunca 400 kez g facs tampon, hafifçe girdap ve santrifüj bir mililitre ekleyin. Bu yıkama adımLarını ikinci kez tekrarlayın. Daha sonra FACS tampon 350 mikrolitre örnek resuspend ve bir mikromolar son konsantrasyonulaşmak için DAPI ekleyin.Numuneler artık FACS analizi için hazır. Bu protokolde makrofajların fare ve insan miyokardiyumundan izolasyonu sağlanmıştır. Bu rakam işlenmemiş ve işlenmiş insan LVAD çekirdeğini göstermektedir.Insan miyokardiyumundan CCR2 negatif ve CCR2 pozitif insan makrofajlarının yanı sıra insan iskemik kardiyomiyopatisinden CD45 negatif stromal hücrelerin inakış sıralaması için gating şeması sunuldu. Wright lekeli FACS görüntüleri CD45 pozitif ve CD45 negatif hücrelerin canlılık gösteren bozulmamış hücre zarı göstermektedir. Makrofajları fare kalbinden sıralamak için gating şeması da başarılı oldu.Enzimatik reaksiyon için kullanılan dokunun ağırlığı verimli sindirim için çok önemlidir. Protokolde belirtilen enzim konsantrasyonları için en fazla 200 miligram doku kullanın. Bu yöntemden sonra, hücreler in vitro stimülasyon tahlilleri için kültürlenebilir.Hücreler toplu RNA sıralaması veya tek hücre sıralaması için sıralanabilir. Bu yöntem, sağlıklı veya hastalıklı insan kalbinde mevcut olan daha önce tanınmayan makrofaj heterojenliğini keşfetmede paha biçilmez bir teknik olarak hizmet vermiştir. Bu yöntemi kullanarak tek hücre dizilimi takip, çalışmalar çeşitli bağışıklık ve immün olmayan hücrelerin hastalıklı kalp karşı sağlıklı kalp nasıl değiştiğini ortaya çıkarmak için devam etmektedir.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

Fare Periton Boşluk Hücreleri İzolasyon

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal ...

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

Fare Akciğer Dendritik Hücrelerinin İzolasyonu

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

Fare Barsak ayrı dendritik hücreler ve makrofajlar İzolasyonu ve Karakterizasyonu

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Isolation of Precursor B-cell Subsets from Umbilical Cord Blood

Kordon Kanı gelen Prekürsör B-hücreli altkümeleri İzolasyonu

Umbilical cord blood is highly enriched for hematopoietic progenitor cells at different lineage commitment stages. We have developed a protocol for ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

İnsan Thymus ile myeloid dendritik hücreleri ve epitel hücreleri İzolasyonu

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

Isolation of Murine Lymph Node Stromal Cells

Kemirgen Lenf Düğümü Stromal Hücrelerinin İzolasyonu

Secondary lymphoid organs including lymph nodes are composed of stromal cells that provide a structural environment for homeostasis, activation and ...

Mouse Na&#239;ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Mouse NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4+ T Cell Isolation and In vitro Differentiation into T Cell Subsets

Fare Naif CD4<sup&gt; +</sup&gt; T Hücre İzolasyonu ve<em&gt; In vitro</em&gt; T hücre alt içine Farklılaşma

Antigen inexperienced (na&#239;ve) CD4+ T cells undergo expansion and differentiation to effector subsets at the time of T cell receptor (TCR) recognition ...

Isolation of Leukocytes from the Human Maternal-fetal Interface

İnsan Maternal-Fetal Arabirimi lökosit İzolasyonu

Pregnancy is characterized by the infiltration of leukocytes in the reproductive tissues and at the maternal-fetal interface (decidua basalis and decidua ...

Isolation of Viral Replication Compartment-enriched Sub-nuclear Fractions from Adenovirus-infected Normal Human Cells

Adenovirüs ile enfekte Normal İnsan Hücreleri Viral Çoğaltma Bölme zenginleştirilmiş Alt nükleer Kesirler izolasyonu

During infection of human cells by adenovirus (Ad), the host cell nucleus is dramatically reorganized, leading to formation of nuclear microenvironments ...

Isolation and Flow Cytometric Analysis of Immune Cells from the Ischemic Mouse Brain

İskemik Fare Beyin gelen Bağışıklık Hücreleri İzolasyon ve Akım Sitometrisi Analizi

Ischemic stroke initiates a robust inflammatory response that starts in the intravascular compartment and involves rapid activation of brain resident ...