Name: a model of self-limited acute lung injury by unilateral intra-bronchial acid instillation
Uploaded: 2019-08-30T14:30:00
Duration: 7 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Model of Self-limited Acute Lung Injury by Unilateral Intra-bronchial Acid Instillation at JoVE.com

Yazarlar, seçici intra-bronşiyal yöntemin gelişimine yaptığı katkılar ve yararlı yorumları ve el yazmasının gözden geçirilmesi için Dr. Joseph Mizgerd'e teşekkür etmek isterler. Bu çalışma P01GM095467 (B.D.L.) ve K08HL130540 (R.E.A.) ulusal sağlık enstitüleri tarafından desteklenmiştir.

Aşağıdaki tüm hayvan prosedürleri Brigham ve Kadın Hastanesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (Protokol #2016N000356) tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır.
NOT: Tüm sağkalım işlemleri için steril teknik uygulandı. Her ameliyat için steril bir perde havlu kullanılarak steril bir alan kurulurken, cerrahlar steril cerrahi eldivenler, kapaklar, maskeler ve temiz laboratuvar paltoları giydiler. Tüm cerrahi aletler otoklav kullanılarak sterilize edildi ve boncuk sterilizatörü kullanılarak sterilite yapıldı.
1. 0,1 N HCl hazırlanması
<ol><li>Kehribar cam şişeye 11 mL ddH2O ekleyin. Yavaş yavaş 1 N HCl çalışma stoku oluşturmak için% 37 HCl (12 N) 1 mL ekleyin. DİkKAT: Suya HCl eklenmiştir emin olun. Bu bir güvenlik sorunudur, çünkü doğrudan aside su eklemek asitin kaynaya ve şişeden sıçramasına neden olabilir. Konsantre HCl'yi kullanırken, asitin havalandırmalı kimyasal başlıkta tutulduğundan ve laboratuvar önlüğü, eldivenler ve güvenlik gözlükleri de dahil olmak üzere uygun kişisel koruyucu ekipmanın takıldığından emin olun.</li>
	<li>Daha önce seyreltilmiş HCl çalışma stokunun 4 mL'sini 50 mL konik bir tüpte 35 mL ddH2O'ya ekleyerek 0,1 N HCl deneysel stok oluşturun.</li>
	<li>Düşük pH çözeltileri kullanarak iki noktalı kalibrasyondan sonra elektronik pH probu kullanarak deneysel stoğun pH'ını ölçün. Son hacmin 40 mL olması için gerektiğinde NaOH veya HCl stok çözeltilerini kullanarak pH 1.1'e titrat. NOT: Düşük pH değerlerini ölçmek zor olabilir. Doğru ölçüm sağlamak için, ölçümün aşırı ekstrapolasyonunu önlemek için pH probunun düşük pH standartları kullanılarak doğru şekilde kalibre edildiğinden emin olun.</li>
	<li>Deneyden hemen önce, deneysel HCl stokunun 1-2 mL'sini steril mikrosentrifüge tüpüne 0,22 m steril filtreden geçirin.</li>
</ol>2. HCl'nin Seçki İç-bronşiyal Instillasyonu
<ol><li>
Cerrahi alanın hazırlanması
	<ol>
<li>İntraperitoneal enjeksiyon ile ketamin (100 mg/kg) ve ksilazin (10 mg/kg) karışımı nı sağlayarak genel anesteziyi teşvik edin. Farenin, kuyruğun ucunu veya arka ayağını hafifçe sıkarak tamamen anestezi olduğundan emin olun. Bir deri kesi yapmadan önce yoksunluk yanıtı eksikliği gereklidir.  Gerekirse ek anestezi bolusları uygulayın.</li>
		<li>Boyun scruff altında deri altında buprenorfin 0.1 mg /kg teslim. Ameliyat öncesi analjezik anestezinin etkisini güçlendirecek ve işlemden kaynaklanan ameliyat öncesi ve sonrası ağrıları iyiletirecektir.</li>
		<li>Yavaş aşağı vuruş lar kullanarak farenin ventral yüzeyinde, boğazın servikal bölgesinde çenenin altında cerrahi alanı nazikçe tıraş etmek için elektrikli makasları kullanın. Altta yatan deriyi tamamen ortaya çıkarmak için gevşek kürkü çıkarın.</li>
		<li>% 10 povison-iyot çözeltisi ile tıraş site temizleyerek cerrahi alanı hazırlayın. Aseptik solüsyonu uyguladıktan sonra, %70 isopropil alkol bezi kullanarak bölgeyi temizleyin. Bu adımı 3x tekrarlayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Nefes borusunu izole etme
	<ol>
<li>Fareyi temiz bir cerrahi tahtaya supine yerleştirin ve cerrahi alanın maruz kalmasını sağlarken fareyi steril bir cerrahi perdeye kapatın. Perdeyi yerinde sabitle.</li>
		<li>Trakea ve tükürük bezleriüzerinde deride 0.5 cm boylamsal kesi yapın. Dikkatle deri geri çekin ve hafifçe trakeal kasları ortaya çıkarmak için tükürük bezleri nizvelemek için hafif kavisli tırtıklı forceps kullanın.</li>
		<li>Künt diseksiyon için tırtıklı forsepskullanarak, paratrakeal kasları hafifçe itin ve trakeanın kıkırdak halkaları tamamen açığa çıkana kadar trakeayı çevreleyen fasyayı uzaklaştırın.</li>
		<li>Trakeayı kaldırmak ve bağ dokusunu retro-trakea ile retro-fasya arasında ayırmak için tam kavisli tırtıklı forseps kullanın. Bağ dokusu ayrıldıktan sonra, çerkelerin ucu nefes borusuna tamamen kaymalıdır.</li>
		<li>Kavisli forceps trakea arkasında tutun ve 4-0 örgülü ipek dikiş 10-15 cm parça forceps uçları ile kavramak. Her iki tarafta eşit bir uzunluk olması için nefes borusu arkasında dikiş çekin.</li>
		<li>Dikiş yerleştirildikten sonra, sütürün kenarlarını farenin arka tarafına doğru yavaşça çekin ve kenarları yerinde tutun.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Seçici sol mainstem bronş cannulating ve HCl indap
	<ol>
<li>24 G x 3/4" anjiyokateter alın ve iğneyi trakeanın ön bölgesine birinci ve ikinci trakeal halkalar arasına takın. Doğru yerleştirme, trakeal lümende iğne ucunun doğrudan görüntülenmesi yle doğrulandıktan sonra, sütü bırakın ve kanülü iğnenin üzerine ve kaneonun içine doğru ilerleyin, direnç ulaşıncaya kadar, sonra iğneyi geri çekin. Sol akciğeriçine selektif aşılama için sol ana kök bronş doğru ekleme yönü Açı.</li>
		<li>Kanül yerleştirildikten sonra kateterin kaymasını önlemek için enjeksiyon bağlantı noktasını sıkıca tutarak.</li>
		<li>P200 pipet ve steril P200 pipet uçları kullanarak, katetere 0,1 N HCl filtre lenmiş steril 2,5 mL/kg (20 g fare için 50°L) aşılayarak aynı hava hacmini takip edin.</li>
		<li>Kateteri hızla geri çekin ve cerrahi tahtayı 30 s için 60° açıya kaldırın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Cerrahi alanın kapatılması
	<ol>
<li>Cerrahi tahtayı düz bir şekilde yatırın ve sütürü nefes borununun arkasından çıkarın.</li>
		<li>2-3 dikiş kullanarak cilt kesikapatmak için 4-0 balmumu kaplı örgülü ipek dikiş kullanın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Ameliyat Sonrası Bakım
<ol><li>Kesi kapatıldıktan sonra farenin sol tarafına, fare anesteziden iyileşene kadar Sıcak bir ısıtma yastığına yerleştirin. Normal gövdeye dönmeden önce fareyi ağrı ve aktivite düzeyi için izlemeye başlayın. NOT: Buprenorfin ilk 24 saat için her 6-12 saatte bir 0.1 mg/kg deri altı olarak uygulanmalıdır. Kalıcı atılım ağrı varsa, ağrı diner kadar analjezik rejimi uzatmak.</li>
</ol>4. Tüm Akciğer Bronkoalveolar Lavaj (BAL) ve Lökosit İmmünofenotipleme
<ol><li>
Adım 2.1.1 kullanılan ketamin / xylazine doz 3x uygulayarak fare ötenazi.
	<ol>
<li>Interstisyel ve intravasküler nötrofilleri ayırt etmek için, ötanaziden 5 dakika önce seçili florofor etiketli Ly6G antikorenjekte edin. Bu etiket, intravasküler nötrofillerin farklı bir florofor ile doku hazırlığı sırasında etiketlenecek olan akciğer interstisyel ve alveoler nötrofillerden ayırt etmek için akış sitometrisi ile saptanmaya uygun olmalıdır (aşağıya bakınız).</li>
	</ol>
</li>
	<li>Bir cerrahi tahta üzerinde fare yerleştirin ve 2-0 örgülü ipek dikiş bir döngü etrafında ön kesici dişleri kanca.</li>
	<li>2.2.2-2.2.6 adımlarını izleyin. kanülasyon için trakea hazırlamak için. NOT: Diyafram akciğer lavaj sırasında trans-alveoler şişirme basıncı nı en üst düzeye çıkarmak için delinmiş olmadığından emin olun; sol akciğer uyumu yaralanma dan sonra azalır, hangi akciğer lavaj için daha yüksek bir trans-alveoler basınç gereksinimi gerektirebilir.</li>
	<li>Adım 2.3.1'den sonra trakeayı kanüle, ancak kateteri karinanın altında ilerletmeyin; kateteri trakeaya paralel olarak yerleştirin.</li>
	<li>Kateter takılı takıldığında, kateteri yerinde tutmak için sütürü trakeanın etrafına bağlayın.</li>
	<li>1 cc şırınga kullanarak 0,6 mM EDTA ile art arda iki adet 1 mL buz gibi PBS -/- (magnezyum veya kalsiyum olmadan) aşılayıp geri çekin. Akış sitometrisi ile immünofenotiyoloji için, her aliquot çıkarın ve buz üzerinde 5 mL polistiren FACS tüp dönmek.</li>
	<li>Ötenaziyi sağlamak için cerrahi makas ve ardından kardiyak delinme kullanarak torakotomi yapın. Akciğerler daha fazla işlem için hasat edilebilir.</li>
	<li>Bal'ı 4 °C'de 800 g'da 10 dk santrifüj edin ve hücreleri peletleyin.</li>
	<li>Supernatant'ı 2 mL mikrosantrifüj tüpe ve aliquot'u 1,5 mL mikrosantrifüj tüpe dönüştürün. Sonraki analizler için -80 °C'de saklayın.</li>
	<li>Akış sitometrisi ile lökosit diferansiyel analizi için PBS hücre pelet -/- % 2 FBS ile resuspend.</li>
	<li>Interstisyel ve intravasküler nötrofilleri ayırt etmek için, sol ve sağ akciğeri ayrı ayrı çıkarın ve Abdülnour ve ark. 2014 6'da olduğu gibi akış sitometrisi için akciğerleri işletin.</li>
	<li>Seçilen FACS antikorları kullanarak ortaya çıkan hücre süspansiyonuna leke atın, adım 4.1.1'den itibaren Ly6G antikordan farklı bir florofor ile konjuge olan Ly6G için lekelenmeyi unutmayın.</li>
</ol>5. Evan'S Blue Boya (EBD) kullanarak Alveolar Bariyer Geçirgenliğinin Değerlendirilmesi
<ol><li>İntravenöz olarak evan'S Blue Boya enjekte (40 mg /kg) 30 dakika önce ötanazi.</li>
	<li>Ketamin/ksilazin aşırı doz (adım 4.1) kullanarak fare ötenazi.</li>
	<li>Alveoler bariyer bütünlüğünü ölçmek için BAL koleksiyonu için 4.2-4.9 adımlarını izleyin.</li>
	<li>100 μL BALF'ı 96 kuyulu net bir mikro plakaya ve 100 μL'lik yinelenen EBD standartlarına aktarın. PBS -/-'yi boş olarak kullanın.</li>
	<li>BALF'nin 620 nm ve 740 nm'deki emnesini ölçmek için bir mikroplaka okuyucu kullanın. 740 nm'deki emiciliği kullanarak numunelerde heme kontaminasyonunu düzeltin7.</li>
	<li>Vasküler bariyer bütünlüğünü ölçmek için, kalbin sağ ventrikülünden 5 mL buz gibi PBS -/- enjekte ederek akciğerleri perfüzyon. Sol akciğeri çıkar.</li>
	<li>Fazla suyu gidermek için sol akciğeri 58 °C'de 72 saat kurulayın.</li>
	<li>Radu ve Chernoff 2013 8'dekigibi kurutulmuş akciğer dokusunu işleyin ve 620 nm ve 740 nm'de absorbansları ölçün.</li>
</ol>6. Akciğer Histolojisi
<ol><li>4.1-4.5 adımlarını izleyerek nefes borusunu kanüle edin.</li>
	<li>Akciğerleri 20 cm H2O'da basınçla onarmak için, kapak kontrollü tüple donatılmış ve seçilmiş bir fiksatif çözeltiyle doldurulmuş 60 mL'lik bir şırıngayı (örn. çinko fiksatif) yükseltmek için bir halka standı ve kelepçe kullanın, böylece fiksatif çözeltinin menisküsü 20 cm yukarıda Akciğer.</li>
	<li>Tüpü katetere takın ve değeri açın. Yavaş yavaş onlar şişirme durdurmak kadar fiksatif ile akciğerleri doldurun.</li>
	<li>Kateteri nefes borusundan çıkarken 3/4 çıkarın. Fiksatif kaybını en aza indirmek için kateteri tamamen çıkarmadan önce trakeayı sütürle bağlayın.</li>
	<li>Akciğerleri ve kalbi kaldırın. NOT: Akciğerlerin kaldırma sırasında fiksatif basınç infüzyon korumak için delinmediğinden emin olun.</li>
	<li>Oda sıcaklığında fiksatif 25 mL 24 saat için akciğerleri düzeltin.</li>
	<li>PBS -/-, %30 etanol ve %50 etanol de sıralı 20 dk aralıklarla sabit akciğerleri yıkayın.</li>
	<li>Son yıkamadan sonra, Eickmeier ve ark 20139gibi histoloji işleme için% 70 etanol akciğerleri saklayın.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Baron, R. M., Levy, B. D., Jameson, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+Respiratory+Distress+Syndrome.">Acute Respiratory Distress Syndrome.</a> Harrison's Principles of Internal Medicine, 20e. , (2018).</li><li>Bellani, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology,+Patterns+of+Care,+and+Mortality+for+Patients+With+Acute+Respiratory+Distress+Syndrome+in+Intensive+Care+Units+in+50+Countries.">Epidemiology, Patterns of Care, and Mortality for Patients With Acute Respiratory Distress Syndrome in Intensive Care Units in 50 Countries.</a> The Journal of the American Medical Association. 315 (8), 788-800 (2016).</li><li>The ARDS Definition Task. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+Respiratory+Distress+Syndrome:+The+Berlin+DefinitionThe+Berlin+Definition+of+ARDS.">Acute Respiratory Distress Syndrome: The Berlin DefinitionThe Berlin Definition of ARDS.</a> The Journal of the American Medical Association. 307 (23), 2526-2533 (2012).</li><li>Thompson, B. T., Chambers, R. C., Liu, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+Respiratory+Distress+Syndrome.">Acute Respiratory Distress Syndrome.</a> New England Journal of Medicine. 377 (6), 562-572 (2017).</li><li>Krishnamoorthy, N., Levy, B. D., Walker, K. H., Abdulnour, R. -. E. E., Engstrom, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specialized+Proresolving+Mediators+in+Innate+and+Adaptive+Immune+Responses+in+Airway+Diseases.">Specialized Proresolving Mediators in Innate and Adaptive Immune Responses in Airway Diseases.</a> Physiological Reviews. 98 (3), 1335-1370 (2018).</li><li>Abdulnour, R. -. E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maresin+1+biosynthesis+during+platelet-neutrophil+interactions+is+organ-protective.">Maresin 1 biosynthesis during platelet-neutrophil interactions is organ-protective.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (46), 16526 (2014).</li><li>Chen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+permeability+assessed+by+fluorescent-labeled+dextran+instilled+intranasally+into+mice+with+LPS-induced+acute+lung+injury.">Pulmonary permeability assessed by fluorescent-labeled dextran instilled intranasally into mice with LPS-induced acute lung injury.</a> PLoS ONE. 9 (7), (2014).</li><li>Radu, M., Chernoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+in+vivo+assay+to+test+blood+vessel+permeability.">An in vivo assay to test blood vessel permeability.</a> Journal of Visualized Experiments. 73 (73), e50062 (2013).</li><li>Eickmeier, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspirin-triggered+resolvin+D1+reduces+mucosal+inflammation+and+promotes+resolution+in+a+murine+model+of+acute+lung+injury.">Aspirin-triggered resolvin D1 reduces mucosal inflammation and promotes resolution in a murine model of acute lung injury.</a> Mucosal Immunology. 6 (2), 256-266 (2013).</li><li>Abdulnour, R. -. E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phospholipase+D+isoforms+differentially+regulate+leukocyte+responses+to+acute+lung+injury.">Phospholipase D isoforms differentially regulate leukocyte responses to acute lung injury.</a> Journal of Leukocyte Biology. 103 (5), 919-932 (2018).</li><li>Fukunaga, K., Kohli, P., Bonnans, C., Fredenburgh, L. E., Levy, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cyclooxygenase+2+Plays+a+Pivotal+Role+in+the+Resolution+of+Acute+Lung+Injury.">Cyclooxygenase 2 Plays a Pivotal Role in the Resolution of Acute Lung Injury.</a> Journal of Immunology. 174 (8), 5033 (2005).</li><li>Colby, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolvin+D3+and+Aspirin-Triggered+Resolvin+D3+Are+Protective+for+Injured+Epithelia.">Resolvin D3 and Aspirin-Triggered Resolvin D3 Are Protective for Injured Epithelia.</a> American Journal of Pathology. 186 (7), 1801-1813 (2016).</li><li>Bonnans, C., Fukunaga, K., Keledjian, R., Petasis, N. A., Levy, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+phosphatidylinositol+3-kinase+by+polyisoprenyl+phosphates+in+neutrophil-mediated+tissue+injury.">Regulation of phosphatidylinositol 3-kinase by polyisoprenyl phosphates in neutrophil-mediated tissue injury.</a> The Journal of Experimental Medicine. 203 (4), 857-863 (2006).</li><li>Mandell, L. A., Niederman, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspiration+Pneumonia.">Aspiration Pneumonia.</a> New England Journal of Medicine. 380 (7), 651-663 (2019).</li><li>Seki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+anti-inflammatory+and+proresolving+mediator+resolvin+E1+protects+mice+from+bacterial+pneumonia+and+acute+lung+injury.">The anti-inflammatory and proresolving mediator resolvin E1 protects mice from bacterial pneumonia and acute lung injury.</a> Journal of Immunology. 184 (2), 836-843 (2010).</li><li>Abdulnour, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aspirin-triggered+resolvin+D1+is+produced+during+self-resolving+gram-negative+bacterial+pneumonia+and+regulates+host+immune+responses+for+the+resolution+of+lung+inflammation.">Aspirin-triggered resolvin D1 is produced during self-resolving gram-negative bacterial pneumonia and regulates host immune responses for the resolution of lung inflammation.</a> Mucosal Immunology. 9 (5), 1278-1287 (2016).</li><li>Traber, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloid-epithelial+cross+talk+coordinates+synthesis+of+the+tissue-protective+cytokine+leukemia+inhibitory+factor+during+pneumonia.">Myeloid-epithelial cross talk coordinates synthesis of the tissue-protective cytokine leukemia inhibitory factor during pneumonia.</a> American journal of physiology. Lung Cellular and Molecular Physiology. 313 (3), L548-L558 (2017).</li><li>Yamamoto, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+lung+epithelium+in+neutrophil+recruitment+during+pneumococcal+pneumonia.">Roles of lung epithelium in neutrophil recruitment during pneumococcal pneumonia.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 50 (2), 253-262 (2014).</li><li>Acute Respiratory Distress Syndrome Network. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventilation+with+Lower+Tidal+Volumes+as+Compared+with+Traditional+Tidal+Volumes+for+Acute+Lung+Injury+and+the+Acute+Respiratory+Distress+Syndrome.">Ventilation with Lower Tidal Volumes as Compared with Traditional Tidal Volumes for Acute Lung Injury and the Acute Respiratory Distress Syndrome.</a> New England Journal of Medicine. 342 (18), 1301-1308 (2000).</li><li>Peng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducible+nitric+oxide+synthase+contributes+to+ventilator-induced+lung+injury.">Inducible nitric oxide synthase contributes to ventilator-induced lung injury.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 172 (4), 470-479 (2005).</li><li>Abdulnour, R. -. E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+stress+activates+xanthine+oxidoreductase+through+MAP+kinase-dependent+pathways.">Mechanical stress activates xanthine oxidoreductase through MAP kinase-dependent pathways.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 291 (3), L345-L353 (2006).</li><li>Serhan, C. N., Levy, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolvins+in+inflammation:+emergence+of+the+pro-resolving+superfamily+of+mediators.">Resolvins in inflammation: emergence of the pro-resolving superfamily of mediators.</a> The Journal of Clinical Investigation. 128 (7), 2657-2669 (2018).</li></ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Burada açıklanan bronşiyal instillasyon yöntemi sol akciğeriçine HCl aşılamak için sol mainstem bronş seçici kanülasyonu kullanır, tek taraflı ve kendini sınırlı murine akut akciğer hasarı ile sonuçlanan. Bu minnet asit akciğer hasarı modeli yakından inflamatuar yanıtı temsil eder, histopatoloji, ve fizyolojik disfonksiyon insan ARDS görülen, mide asidi aspirasyon ortak bir çökelti veya faktör katkıda bulunan4. Düşük pH HCl'ye minör hava yolunun maruz kalma alveoler-kapiller bariyerin geçirgenliği, alveoler ödem ve yaralanma yerinde derin nötrofil infiltrasyonu ile sonuçlanır. Bu olaylar sağ akciğerde yaralanmaz. Buna ek olarak, bu model asit instillasyonu ndan sonra 24 saat içinde zirveye hızlı inflamatuar yanıtlar üretir ve fosfolipaz D izoformlarının diferansiyel ekspresyonu gibi insan ARDS ile gen ekspresyonundaki değişiklikleri paylaşır10.
Bu murine preklinik modeli ARDS'nin moleküler, hücresel ve doku düzeylerinde birçok özelliği yeniden üretmesine rağmen, insan ARDS'yi tam olarak özetlemez. ARDS tanımı bilateral akciğer tutulumu içerir3, burada açıklanan indatırma yöntemi tek taraflı akciğer hastalığında tasarım ile sonuçlanır. Ayrıca, hayvanların sürekli mekanik havalandırma, hareketsizlik veya parenteral sedasyon gerektirmez. Burada sunulan sonuçlar (vide supra) ve başka yerlerde6,9,11,12,13 tek taraflı asit kaynaklı akciğer hasarının patolojik özelliklerinin çoğunu ürettiğini göstermektedir. ARDS, sağ akciğeri iç kontrol olarak kullanma ve bu hastalığın çözüm evresini inceleme fırsatı sağlarken. Bu nedenle, burada tartışılan model ARDS patobiyoloji modelleri, ama aynı zamanda bu önemli hastalığın ele alınması için ilgili olabilir yaralanma ve çözünürlük mekanizmaları temel akciğer dokusu yanıtlarının mekanistik araştırma sağlar.
HCl instillasyonu doğrudan akut akciğer hasarı temsil eder, bu yüzden aspirasyon pnömonisi ile ilişkili patofizyoloji yönlerini modelleme olduğunu. Buna ek olarak, bu modelde ilk sol akciğer hakaret de pnömoni yol açabilir bazı insan aspirasyon olaylarda görülen bakteri yüklü mide içeriği yerine steril HCl kullanılarak oluşturulur14. İnsanlarda, patojenik bakterilerin aspirasyonu akut inflamatuar yanıtı şiddetlendirir sekonder bakteriyel pnömoni neden olabilir, ilk akciğer hasarı uzatır ve ARDS geliştirmek için hasta yatkınlığı artan14. Bu potansiyel sınırlama araştırmacılar tarafından kasıtlı patojenik bakteri Escherichia coli (E. coli)15 steril HCl sonra aşılayan ele alınmıştır. Ayrıca, bu yöntem patojen aracılı araştırmak için kullanılmıştır inflamasyon; tek taraflı bakteriyel pnömoni, E. coli16,17, Pseudomonas aeruginosa16ve Streptococcus pneumoniae18 gibi bakterilerin selektif sol akciğer instillasyonu ile indüklenebilir . Burada açıklanan kendi kendine sınırlı akut akciğer hasarı modeli de ventilatör kaynaklı akciğer hasarı (VILI), insan ARDS19 artan mortalite önemli bir nedeni çalışma için kullanılabilir. VILI'nin deneysel hayvan modelleri genellikle akciğer hasarına neden olmak için klinik olarak kullanılandan çok daha yüksek gelgit hacimli naif farelerde mekanik ventilasyon içerir (>15 mL/kg; önceki çalışmalara bakın20,21). VILI'nin klinik olarak daha uygun bir modeline doğru, burada açıklandığı gibi bronşiyal asit instillasyonu ilk olarak klinik aralıktaki gelgit hacimlerinde mekanik ventilasyon (6-12 mL/kg) olarak öldürücü olmayan akciğer hasarına neden olmak için kullanılabilir. Bu varsayımsal hayvan modeli, araştırmacıların VILI'yi klinik olarak uygun bir şekilde incelemelerine olanak sağlayabilir. Birlikte, bu murine modelleri yakından insan akciğer hastalıkları ile ilişkili patolojiler benzer tek taraflı akciğer hakaret oluşturmak için seçici intrabronşiyal instillasyon yönteminin çok yönlülük vurgulamak.
Sol akciğere çeşitli zararlı ajanların seçici aşılanmasına izin vermenin yanı sıra, trakeostomi sonrası bronşiyal instillasyon tekniği uzun süreli eğitim, uzun işlem süresi veya karmaşık ekipman gerektirmez ve deneyimli ellerde hayvanlar için en az sıkıntıya neden olur. Buna rağmen, deneysel sonuçları etkileyebilecek seçici HCl aşılama işlemi sırasında çeşitli sorunlar oluşabilir. Sol ana kök bronşların yanlış kanülasyonu, deneysel farelerin sağkalımını azaltan ve sağ akciğerin yaralanmamış bir iç kontrol olarak kullanımını rahatsız eden ikili akciğer hasarına neden olabilir. Direnç ulaşılıncaya kadar kanülasyon sırasında kateteri sol akciğere yeterince doğru tutarak önlenebilir. HCl enjeksiyonundan sonra bir hava bolus enjekte edilmelidir, kateter hızla çıkarılmalıdır ve cerrahi tahta 60 ° açı ya doğru dik getirilmiştir. Bu adımlar asit sol akciğer distal hava yollarına ulaşır ve sağ akciğer ve trakea içine asit reflü önler sağlamak için çok önemlidir, proksimal yaralanmaya neden olabilir. 24 saat içinde instillasyon, sol akciğer yaralanması geniş pulmoner ödem ile diffüz, distal ve proksimal sol akciğer hem etkileyen.
Erişkin 8-12 haftalık farelerde yöntem gelişimi sırasında, 2.5 mL/kg intrabronşiyal HCl önemli ama öldürücü akut akciğer hasarı üretti; HCl düşük dozlarda tekrarlanabilir ve homojen akciğer hasarına neden olmadı. Bu modeli daha genç (örneğin 3-6 haftalık) veya daha yaşlı farelerde (örn. 10-14 aylık) gerçekleştirmemiş olmamıza rağmen, HCl'nin ağırlık bazlı dosinginin 8-12 haftalık farelerde belirtilene benzer bir akciğer yaralanmasıfenotina yol açacağını öngörüyoruz. Araştırmacıların, aşırı ağırlıkta farelerle deneyler gerçekleştirmeden önce istenilen akciğer hasarı na ulaşmak için HCl dozlarını titreetmelerini öneririz.
Bu seçici asit aşılama prosedürü, mekanik ventilasyon gibi destekleyici bakım ihtiyacını azaltan öldürücü olmayan bir steril doku iltihabı modeli sunar. Yaralı farelerin uzun süre hayatta kalması yla, asit kaynaklı inflamasyon kendi kendini çözmek için yeterli zamana sahiptir. Bu modelin çözünürlük aşaması, lipoksin A4 (LXA4),maresin 1 (MaR1) ve resolvins 6 gibi zamansal olarak düzenlenmiş endojen biyoaktif lipid arabulucuları, yaygın pro-çözümlü mediatörler (SPM) olarak adlandırılmıştır. ,11,12,16. Yaralı farelere eksojen SPM'lerin uygulanması, inflamatuar mekanizmaları sönümleyerek ve yaralı akciğer dokusunun katabasisini teşvik ederek asit kaynaklı akciğer hasarının çözümünü hızlandırAr. Bu SPM'ler alveoler ödem in klirensini teşvik12,işe makrofajlar tarafından apoptotik nötrofillerin eferositoz artırmak16, ve solunum yolları ve alveollerin yeniden epitelizasyon hızlandırmak12 vasküler azaltmak için sızıntı ve doku hipoksisi. Patojen kaynaklı akciğer hasarı bir modelolarak, 15-epi-resolvin D1 de makrofajlar ve enfekte akciğer gelişmiş bakteriyel açıklık tarafından artan bakteriyel fagositoz yoluyla antimikrobiyal eylemler sergiledi16. Bu endojen çözüm mekanizmalarının araştırılması ARDS 5'lihastalar için potansiyel yeni tedavi stratejileri hakkında fikir verir.
Çözüm mekanizmalarının spatiotemporal regülasyonunun en iyi şekilde incelenmesi için in vivo deneysel modellere ihtiyaç vardır. Akut akciğer hasarı modelleri, moleküler ve hücresel süreçleri teşvik eden host çözünürlüğü ile ilgili akut inflamatuar yanıtları ve organ disfonksiyonu içermelidir. Bu mekanizmalar yerleşik çözünürlük endeksleri kullanılarak ölçülebilir22. Tek taraflı akut akciğer hasarı oluşturmak için selektif intra-bronşiyal instillasyon yöntemi prob endojen çözünürlük mediatörleri ve yolları için bu konuda yararlı olduğu kanıtlanmıştır. Bu aktif çözüm süreçlerini anlamamızı derinleştiren gelecekteki çalışmalar, endojen lipid mediatörlerinin biyoyaksiyonlarını taklit ederek iltihabın çözümünü geliştiren ve morbiditeyi azaltan terapötik agonistlere yol alma vaadinde bulunmaktadır. ve ARDS ve diğer önemli akciğer hastalıklarının mortalitesi.

Akut solunum sıkıntısı sendromu (ARDS) akut solunumyetmezliğinin önemli bir nedenidir 1. Dünya çapında yoğun bakım ünitelerine başvuran hastaların %10'unda görülen yaygın veöldürücü veya devre dışı bırakan bir hastalıktır 2. Berlin tanımına göre3, ARDS hipoksemik solunum yetmezliği akut başlangıcı ile tanımlanır (<1 hafta) ve kardiyak yetmezlik ile açıklanamayan göğüs radyografilerinde bilateral pulmoner infiltrasyonlar4. Altta yatan patobiyoloji aşırı inflamatuar yanıt ile karakterizedir. Akciğer doğrudan yaralı olabilir, pnömoni gibi veya mide asidi aspirasyonu ile, ya da dolaylı olarak, sepsis gibi veya birden fazla kan transfüzyonusonra 4. İlk hakaretin ardından ARDS patogenezi üç aşamada ilerler: eksüdatif,proliferatif ve fibrotik fazlar 1. Bu evreler ARDS hastalarının prognozunu belirleyen farklı moleküler ve hücresel immün ve onarım mekanizmaları ile karakterizedir. ARDS hastalarının dayanak noktası destekleyici bakım olmaya devam etmektedir; Şu anda, ARDS için etkili bir farmakolojik tedaviler vardır, bu yüzden bu yıkıcıdurum4 yeni araştırma için acil bir ihtiyaç vardır.
Eksüdatif evrede doğuştan gelen immün yanıtın disregülasyonu ARDS'ninakut başlangıcına ve ilişkili solunum yetmezliğine katkıda bulunur 1. Güçlü pro-inflamatuar arabulucu sinyal ilk bağışıklık yanıtları yönetir, alveoler-kılcal bariyer bozulmasına yol açan, diffüz alveoler ödem, ve akciğer dokusu yaralanması siteye nötrofil infiltrasyon4. ARDS'de, akut inflamasyon için etkisiz frenleme sinyalleri akciğer yetmezliğine yatkınlık ve yaralı akciğer dokusunun zamanında katabasis geciktirebilir5. Bu amaçla ARDS'nin endojen başlangıç ve pro-çözüm mekanizmalarının klinik öncesi araştırılması yeni tedavi stratejilerini ortaya çıkarabilebilir. Bu tür bir araştırma yakından insan ARDS özelliklerine benzeyen akut akciğer hasarı kendi kendine sınırlı deneysel in vivo modelleri gerektirir, doku hasarı nın başlangıç ve çözüm aşamaları altında yatan mekanizmaların sorgulama izin.
Burada sunulan mürin modeli, eksüdatif ARDS'nin kardinal patobiyolojik süreçlerini gösteren doğrudan akut akciğer hasarı, yani alveoler-kapiller bariyer bozulması ve nötrofil infiltrasyonu üretmektedir. Yöntem sol mainstem bronş kanülasyonu yoluyla HCl selektif intra-bronşiyal instillasyon dayanır, sol akciğer yaralanma ve inflamatuar yanıt lokalizasyonu; yaralanmamış sağ akciğer doku yaralanması ve inflamasyon belirli belirlemeleri için bir iç kontrol olarak kullanılabilir. Buna ek olarak, tek taraflı akciğer hasarı öldürücü değildir ve bir çözüm programı duyurdu. Bu, endojen pro-çözümlü arabulucuların ve hücresel mekanizmaların tanımlanması ve ARDS için çözünürlük fizyolojisini vurgulayan yeni tedavi yolları açmak için kullanılabilir akciğer iltihabı çözümü içine ayrı bir pencere sunuyor ve Farmakoloji.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>10x Zinc Fixative</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>552658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-0 Braided Silk Suture</td>
			<td>Surgical Specialties</td>
			<td>SP118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>24G x 3/4&#34; Disposable Safelet I.V. Catheter</td>
			<td>Excel</td>
			<td>26751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>33 mm, 0.22 &#181;m syringe filter unit</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>SLGP033RS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4&#34; Long Serrated Slight Curve Graefe Forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5135</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4&#34; Long Tip Serrated Full Curve Graefe Forceps</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4.5 &#34; Micro Dissecting Scissors</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-5912</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6&#34; Crile Wood Needle Holder</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mL syringe</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse FITC-Ly6G antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11-9668-82</td>
			<td>Preferred fluorophore can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse PE-Ly6G antibody</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12-9668-82</td>
			<td>Preferred fluorophore can be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bead sterilizer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine Solution Swabstick</td>
			<td>Betadine</td>
			<td>67618-153-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenex</td>
			<td>Reckitt Benckiser</td>
			<td></td>
			<td>NDC: 12496-0757-1, 12496-0757-5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear flat-bottomed 96-well microplate</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12565501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbeccos&#39;s Phosphate Buffered Saline (PBS) without Ca2+ or Mg+</td>
			<td>life technologies</td>
			<td>14190-144</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric clippers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>E6758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Evans Blue Dye</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>E-2129</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid, 37%</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>258148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Henry-Schein</td>
			<td>56344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate reader (640, 720 nm)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P200 Pipette</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P200 Pipette Tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH probe</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ring stand with extension clamp</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Alcohol Prep Pads</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>22-363-750</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Mouse Drape 8&#34; x 8&#34; with Oval Adhesive Fenestration</td>
			<td>Steris</td>
			<td>88VCSTF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Nitrile Gloves</td>
			<td>Kimberly-Clark</td>
			<td>56890</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Towl Drape</td>
			<td>Dynarex</td>
			<td>4410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wax Coated 4-0 Braided Silk Suture</td>
			<td>Covidien</td>
			<td>SS733</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>AKORN</td>
			<td></td>
			<td>NDC: 59399-111-50</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a model of self-limited acute lung injury by unilateral intra-bronchial acid instillation

Hidroklorik asitin (HCl) sol mainstem bronşlarına selektif intra-bronşiyal instillasyonu, insan akut solunum sıkıntısı sendromuna (ARDS) benzer histopatolojik bulgularla akut doku hasarına neden olur. Ortaya çıkan alveoler ödem, alveoler-kılcal bariyer hasarı ve lökosit infiltrasyonu ağırlıklı olarak sol akciğeri etkiler, sağ akciğerin yaralanmamış bir kontrol olarak korunması ve hayvanların hayatta kalmasına izin verir. Kendi kendine sınırlı akut akciğer hasarı bu model doku çözünürlüğü mekanizmalarının araştırılmasını sağlar, apoptotik nötrofillermakrofaj eferositoz ve alveoler-kapiller bariyer bütünlüğünün iadesi gibi. Bu model, ards hastaları için yeni terapötik yaklaşımların geliştirilmesi için bir temel sağlayan, uzman pro-çözüm arabulucuları (SPM) dahil olmak üzere çözüm agonistleri için önemli rollerin belirlenmesine yardımcı olmuştur.

Selektif intra-bronşiyal HCl instillasyonu tek taraflı akut akciğer hasarı ile sonuçlanır
HCl'nin sol mainstem bronşlarına selektif intrabronşiyal aşılama yöntemi Şekil 1A'dagösterilmiştir. Bunun sonucu akut akciğer hasarı tüm sol akciğer içerir, ve EBD ve akciğer perfüzyoninin intravenöz uygulama dan sonra, EBD sol akciğer sadece kaldı (Şekil1B). Sol akciğere EBD ekstravazasyonu sayısallaştırılmış ve sham selektif instillasyona göre anlamlı olarak artmış bulunmuştur (Şekil1C; Abdulnour ve ark. 2014 6'dan uyarlanmıştır). Akciğer hasarına yanıt olarak, iltihaplı doku içine lökositler diapedese dolaşan. Bu modelde vasküler nötrofiller yaralı akciğer interstitiumuna trans-endotel göçünden geçerler. HCl instilonundan sonra sol akciğerde 24 saat biriken interstisyel nötrofiller, az sayıda interstisyel nötrofilin görüldüğü sağ akciğerin aksine (Şekil1D). Bu sonuçlar, selektif sol mainstem intra-bronşiyal instillasyon yönteminin büyük ölçüde sol akciğere lokalize olan murine akut akciğer hasarına yol açtığını ve insan ARDS ile de görülen patolojik değişikliklere yol açtığını göstermektedir. alveolar-kapiller bariyer ihlali ve nötrofil infiltrasyonu.
Tek taraflı akut akciğer hasarı çözüm mekanizmalarının araştırılmasını sağlar
Asit kaynaklı akut akciğer hasarı nın çözüm aşamasını incelemek için farelerin ilk hakaretten sağ çıkabilmesi gerekir. İntratrakeal HCl farklı, sadece sol mainstem bronş içine aşılanması aksi takdirde sağlıklı farelerde üniforma sağkalım ile kendini sınırlı yaralanmaya yol açar. Akciğerler, Şekil 2A'daolduğu gibi farelerden erken veya geç zaman noktalarında nelde edilebilir. Akciğer histolojisi sol akciğerde belirgin alveoler ödem ve nötrofil infiltrasyonu ile karakterize yaralanma dan sonra 24 saat eksüdaif inflamasyon ile organ ve hücresel düzeyde doku hasarı ve iltihabı gösterir. Yaralanmamış kontrol sağ akciğerine önemli bir yaralanma veya lökosit akını olmadığını unutmayın (Şekil 2A). Yaralanmadan sonra 72 saat, ödem ve hücresel infiltrasyonlar önemli ölçüde azalır, bu da eksüdasatif bir evreyi temsil eder. Alveoler nötrofiller tüm akciğer lavajı ile elde edilen akış sitometrisi (CD45+/CD68-/F4/80-/Ly6G+/CD11b+ )ile izlenebilir. Nötrofiller ilk yaralanmadan sonra sol akciğerde 24 saat artarak 48 ve 72 h'de önemli ölçüde azalmaktadır (Şekil 2B). Daha sonraki zaman noktaları araştırılırsa, nötrofil sayıları temel eve geri döner ve katabasisin sonraki aşamalarındaki mekanizmalar, fibroproliferatif yanıtlar gibi, incelenebilir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60024/60024fig1v2.jpg"> Şekil 1: Selektif intra-bronşiyal HCl instillasyonu alveoler bariyer ihlali ve nötrofil infiltrasyonu ile tanımlanan tek taraflı akciğer hasarına neden olur. (A) Sol akciğere HCl'nin selektif indatması için murine sol anakök bronşlarının kanülasyonunun temsili. (B) Selektif asit instillasyonuna maruz kalan ve intravenöz Evan'ın mavi boyasını takiben perfüzyonlu sağ (RL) ve sol (LL) akciğerleri rezeke edilir. (C) Asit yaralanması veya sahte kontrolden sonra interstisyel Evan'ın mavi boyasının homojenleştirilmiş, perfüzyonlu akciğer24 saat den ölçülmesi; şekil Abdulnour ve ark. 20146uyarlanmıştır . Değerler± ± SEM'i temsil ediyor, n ≥ 5. *p < 0.05, Mann-Whitney U Test. (D) Intravasküler temsili akış sitometrisi (I.V.; florofor 1) ve interstisyel (I.S.; florofor 2) nötrofiller in total CD45 yüzdesi olarak+ işlenmiş akciğer hücrelerinin yüzdesi 24 saat asit yaralanması. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60024/60024fig1v2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60024/60024fig2.jpg"> Şekil 2: Tek taraflı akut akciğer hasarı kendi kendine çözülmektedir. (A) Temsili H&E histolojisi (10x) saf farelerden (0 saat) veya farelerden 24, 48, 72 h yaralanma sonrası elde edilen sol akciğerlerin yanı sıra aynı fareden sağ akciğerle birlikte (Ölçek çubuğu = 250 μm). (B) Alveoler nötrofillerin (Ly6G+ CD11b+) saf (0 saat) fare veya farelerde toplam CD45+ hücrelerin yüzdesi olarak tüm akciğer lavajından elde edilen temsili akış sitometrisi 24, 48 ve asit yaralanmasından sonra 72 saat. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60024/60024fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Watch this Scientific Journal Video about A Model of Self-limited Acute Lung Injury by Unilateral Intra-bronchial Acid Instillation at JoVE.com

A Model of Self-limited Acute Lung Injury by Unilateral Intra-bronchial Acid Instillation

Farelerde sol akciğere selektif bronşiyal asit instillasyonu, gastrik asit aspirasyonu ile indüklenen insan akut solunum sıkıntısı sendromunu (ARDS) modelleyen tek taraflı ve kendi kendine sınırlı akut akciğer hasarına yol açar.

Tek Taraflı Bronşiyal Asit İnstillasyonu ile Kendi Kendine Sınırlı Akut Akciğer Hasarı Modeli

Selective intra-bronchial instillation of hydrochloric acid (HCl) to the murine left mainstem bronchus causes acute tissue injury with histopathologic ...

Selektif intra-bronşiyal yöntem, araştırmacılara insanlarda akut solunum sıkıntısı sendromunun önemli bir nedeni olan akut akciğer hasarının incelenmesi için tekrarlanabilir ve öldürücü olmayan bir model sunduğu için önemlidir. Selektif bronşiyal tekniğin avantajı, sağ akciğeri yaralanmamış bir kontrol olarak sunan sol akciğere verilen inflamatuar yanıtın lokalizasyonu ve hayvan sıkıntısını en aza indirmesidir. Bu prosedürü gösteren Alexander Tavares, bir teknisyen ve bizim laboratuvarda ön lisans öğrencisi olacaktır.0.1 normal hidroklorik asit hazırlamak için, bir kehribar cam şişe ye 11 mililitre çift distile su ekleyin ve ardından %37 12 normal asit mililitresinin yavaş ilavesini ekleyin. Sonra, yavaş yavaş 50 mililitrelik konik tüp içinde 35 mililitre çift distile su içine normal bir asit çalışma stok dört mililitre ekleyin. Daha sonra, 40 mililitrelik son bir hacim için gerektiğinde sodyum hidroksit veya asit stok çözeltisi kullanarak 1,1 pH'a kadar titre eden 0,1 normal stok çözeltisinin pH'ını ölçmek için elektronik bir pH prob kullanın.İşleme başlamadan önce, steril bir mikrosentrifuge tüpüiçine steril 0,22 mikrolitre filtre ile asit çözeltisinin bir ila iki mililitre filtre ve anestezili bir fare ağrı refleks yanıt eksikliği onaylamak. Yavaş aşağı vuruşlarda elektrikli makasları kullanarak yavaşça boğazın servikal bölgesinde çene altında farenin ventral yüzeyinde cerrahi alanı tıraş. Herhangi bir gevşek saç çıkarın ve üç ardışık% 10 povison-iyot çözeltisi ve% 70 isopropil alkol bezleri ile maruz kalan cilt bezi.Deri hazırlandığında, fareyi temiz bir cerrahi tahtanın üzerine supine pozisyonuna yerleştirin ve hayvanı steril bir cerrahi perdeyle örtün. Trakea ve tükürük bezleriüzerinde deride boylamsal 0,5 santimetre lik bir açıklık yapın ve deriyi dikkatlice geri çekmek için hafif kavisli tırtıklı tırtıklı keçeler kullanın. Trakeal kasları ortaya çıkarmak için tükürük bezlerini yavaşça ayırın ve paratrakeal kasları hafifçe ayırmak için hafif kavisli tırtıklı terpler kullanın.Trakeanın kıkırdak halkaları tamamen açığa çıkana kadar trakeayı çevreleyen fasyayı uzaklaştırın ve retrotrakea ile retrofasya arasındaki bağ dokusunu uzaklaştırmak için tamamen kavisli tırtıklı kirişli çalgılar kullanın. Trakeanın arkasında tam kavisli tırtıklı forseps kaydırın ve nefes borusunu kaldırın. Bir kez çerkea ucu, 4-0 örgülü ipek dikiş bir 10-15 santimetre lik bir parça kavramak ve her iki tarafta eşit bir uzunluk var, böylece trakea arkasında dikiş çekin.Cerrahi tahta, bir sonraki adımlar için cerrahi alanı baskın ele yaklaştırmak için döndürülebilir. Daha sonra sütürün uçlarını farenin ön yerine doğru yavaşça çekin ve uçları yerinde tutun. Sol mainstem bronş kanülasyonu için, 3/4-inç anjiyokateter tarafından 24-gauge iğne maruz ve birinci ve ikinci trakeal halkalar arasında trakea iç bölgeye kadar iğne eğimli tarafı yerleştirin.İğne ucu trakeal lümen içinde görselleştirilebildiği zaman, sütü serbest bırakın ve farenin sol arka tarafına doğru nefes borusuna iğne üzerinde kanül ilerletin. Dirençlerle karşılaşıldığında iğneyi geri çekin. Kanül yerleştirildikten sonra, kateterin kaymasını önlemek için enjeksiyon bağlantı noktasını sıkıca tutarak bağlantı noktası içinde bir P-200 mikro pipet ucunu sabitleyin.Daha sonra katetere 50 mikrolitre süzülen normal asit çözeltisi aşılayın ve ardından eşit miktarda hava aşılayın. Bu adım kanül hassas manipülasyon gerektirir, hava yolu tıkanmış iken, ve hızlı ve sorunsuz uygun hava akışını geri yüklemek ve hava yolu hasarı en aza indirmek için tamamlanmalıdır. Kateteri hızla çekin ve cerrahi tahtayı 60 derecelik bir açıyla yatırın.30 saniye sonra, cerrahi tahta düz yatıyordu ve trakea arkasından dikiş çıkarın. Sonra 2-3 dikiş ile cilt kesi kapatmak için 4-0 balmumu kaplı örgülü ipek dikiş kullanın. Bronşiyal asit instillasyonundan kaynaklanan akut akciğer hasarı tüm sol akciğeri kapsamaktadır.Gerçekten de, Evans mavi boya ve akciğer perfüzyoninin intravenöz uygulamasından sonra, boya sadece sol akciğer içinde saptanır. Sol akciğeriçine boya ekstravazasyonu nun nicelleştirilmesi, sahte selektif aşılamaya göre önemli ölçüde artmıştır. İnterstif nötrofiller az sayıda interstisyel nötrofilin görüldüğü sağ akciğerin aksine asit instillasyonundan 24 saat sonra sol akciğerde birikir.Akciğer histolojisi, sol akciğerde belirgin alveoler ödem ve nötrofil infiltrasyonu ile karakterize olarak yaralanmadan 24 saat sonra eksüdaif inflamasyon ile organ ve hücresel düzeyde doku hasarı ve iltihabı ortaya çıkarır. Yaralanmamış kontrol sağ akciğer içine önemli yaralanma veya lökosit akını eksikliği unutmayın. Yaralanmadan 72 saat sonra ödem ve hücresel infiltrasyonlar önemli ölçüde azalır ve bu da eksüdaevre bir evreyi temsil eder.Akış sitometrisi tarafından değerlendirildiği gibi, alveoler nötrofiller ilk yaralanmadan 24 saat sonra sol akciğerde artar ve 48 ve 72 saat önemli ölçüde azalır. İlerlemeden önce kateteri trakeada görselleştirmek önemlidir. Ekleme sırasında sol mainstem bronşlarına doğru kanüle açı ve 50 mikrolitre hava ile asit indasını takip edin.Bronkoalveoler lavaj sıvı analizi, akciğer histolojisi, akış sitometrisi ile immün hücre fenotipmesi, canlı fare görüntüleme ve pulmoner fonksiyon testleri inflamasyon ve çözünürlüğü değerlendirmek için yapılabilir. Akut akciğer hasarı bu kendini sınırlı modelinin geliştirilmesi araştırmacılar çözünürlük biyoloji alanında önemli katkılarda bulunmak için izin verdi. Konsantre hidroklorik asit tehlikeli olduğunu ve uygun kişisel koruyucu ekipman giyen bir kimyasal başlık ele alınması gerektiğini unutmayın.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Non-surgical Intratracheal Instillation of Mice with Analysis of Lungs and Lung Draining Lymph Nodes by Flow Cytometry

Akış Sitometri Akciğerler ve Akciğer Boşaltma lenf düğümleri Analizi fareler cerrahi olmayan intratrakeal damlatma

Phagocytic cells such as alveolar macrophages and lung dendritic cells (LDCs) continuously sample antigens from the alveolar spaces in the 
lungs. LDCs, ...

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa Induced Lung Injury Model

Pseudomonas aeruginosa Kaynaklı Akciğer Hasarı Modeli

In order to study human acute lung injury and pneumonia, it is important to develop animal models to mimic various pathological features of this disease. ...

A 3D Human Lung Tissue Model for Functional Studies on Mycobacterium tuberculosis Infection

A 3D Human Lung Tissue Model for Functional Studies on Mycobacterium tuberculosis Infection

Fonksiyonel Araştırmaları 3D İnsan Akciğer Doku Modeli<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; Enfeksiyon

Tuberculosis (TB) still holds a major threat to the health of people worldwide, and there is a need for cost-efficient but reliable models to help us ...

The WinCF Model - An Inexpensive and Tractable Microcosm of a Mucus Plugged Bronchiole to Study the Microbiology of Lung Infections

WinCF Modeli - Bir Mukus bir Ucuz ve Çekilebilir Microcosm Akciğer İnfeksiyonları Mikrobiyoloji Eğitim için bronşiole Takıldı

Many chronic airway diseases result in mucus plugging of the airways. Lungs of an individual with cystic fibrosis are an exemplary case where their ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Felç ve görsel sistem yaralanma tarafından Nöromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4 T hücreleri belirli farelerde indüksiyon

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Transurethral Instillation Procedure in Adult Male Mouse

Yetişkin erkek fare yordamda transüretral korumak

Transurethral instillation can be used to deliver different solutions with active ingredients (e.g., drugs, chemicals, bacteria, and viruses) locally into ...

Measuring Deformability and Red Cell Heterogeneity in Blood by Ektacytometry

Deformasyon ve kan Ektacytometry tarafından kırmızı hücre heterojenite ölçme

Decreased red cell deformability is characteristic of several disorders. In some cases, the extent of defective deformability can predict severity of ...

Induction of Mouse Lung Injury by Endotracheal Injection of Bleomycin

Bleomisin endotrakeal enjeksiyon tarafından fare akciğer hasarı indüksiyon

Pulmonary fibrosis is a hallmark of several human lung diseases with a different etiology. Since current therapies are rather limited, mouse models ...

A Murine Model of Dengue Virus-induced Acute Viral Encephalitis-like Disease

Dang humması virüs kaynaklı akut viral Ensefalitis-benzeri hastalık bir Murine modeli

Dengue virus (DENV), an arthropod-borne virus transmitted by mosquitoes, may cause the severe disease known as dengue hemorrhagic fever, which is ...

Design of Cecal Ligation and Puncture and Intranasal Infection Dual Model of Sepsis-Induced Immunosuppression

Sepsis kaynaklı bağışıklık bastırma, çekal ligasyon ve delinme ve Intranasal enfeksiyon çift model tasarımı

Sepsis, a severe and complicated life-threatening infection, is characterized by an imbalance between pro- and anti-inflammatory responses in multiple ...