Name: stem cell-derived viral ag-specific t lymphocytes suppress hbv replication in mice
Uploaded: 2019-09-25T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Stem Cell-Derived Viral Ag-Specific T Lymphocytes Suppress HBV Replication in Mice at JoVE.com

저자는 HBs183-91 (s183)에 대한 cDNA를 제공하는 토론토 종합 병원 연구소에서 박사 아담 J Gehring 감사 (FLLTRILTI)- 특정 A2 제한 인간 - 뮤린 하이브리드 TCR 유전자, 및 제공에 대한 국립 대만 대학에서 박사 페이 - 저 첸 pAAV/HBV 1.2 구문. 이 작품은 J. S에 건강 보조금 R01AI12180, R01CA221867 및 R21AI109239의 국립 연구소에 의해 지원됩니다.

모든 동물 실험은 텍사스 A&M 대학 동물 관리 위원회(IACUC; #2018-0006)의 승인을 받았으며, 실험실 동물 관리 협회의 평가 및 인증 가이드라인에 따라 수행됩니다. 생쥐는 생후 6-9주 동안 사용된다.
1. iPSCs에서 바이러스 성 Ag 특이적 CD8+ T 세포의 생성 (iPSC-CD8+ T 세포)
<ol><li>레트로바이러스 구조의 창조 참고: TCR α 및 β 유전자는 2A 자가 절기 서열과 연결됩니다. ...

<ol>
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S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+effector+CD8++T+cells+derived+from+naive+rather+than+memory+subsets+possess+superior+traits+for+adoptive+immunotherapy.">Human effector CD8+ T cells derived from naive rather than memory subsets possess superior traits for adoptive immunotherapy.</a> Blood. 117 (3), 808-814 (2011).</li><li>Kerkar, S. 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B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oct4-induced+pluripotency+in+adult+neural+stem+cells.">Oct4-induced pluripotency in adult neural stem cells.</a> Cell. 136 (3), 411-419 (2009).</li><li>Lei, F., Haque, R., Xiong, X., Song, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+differentiation+of+induced+pluripotent+stem+cells+towards+T+lymphocytes.">Directed differentiation of induced pluripotent stem cells towards T lymphocytes.</a> Journal of Visualized Experiments. (63), e3986 (2012).</li><li>Lei, F., Haque, M., Sandhu, P., Ravi, S., Ni, Y., Zheng, S., Fang, D., Jia, H., Yang, J. 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V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+pathological+effects+of+synthesis+of+hepatitis+B+virus+large+envelope+polypeptide+in+transgenic+mice.">Structural and pathological effects of synthesis of hepatitis B virus large envelope polypeptide in transgenic mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 84 (19), 6909-6913 (1987).</li><li>Wirth, S., Guidotti, L. G., Ando, K., Schlicht, H. J., Chisari, F. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breaking+tolerance+leads+to+autoantibody+production+but+not+autoimmune+liver+disease+in+hepatitis+B+virus+envelope+transgenic+mice.">Breaking tolerance leads to autoantibody production but not autoimmune liver disease in hepatitis B virus envelope transgenic mice.</a> Journal of Immunology. 154 (5), 2504-2515 (1995).</li></ol>

이 프로토콜은 뮤린 모델에서 HBV 복제를 억제하기 위해 ACT로서 사용하기 위한 바이러스 성 Ag 특이적 iPSC-CTL을 생성하는 방법을 제시한다. 만성 HBV 감염에서, 바이러스 게놈은 간세포의 수명 내내 지속될 수 있는 안정적인 미니 염색체, 공유 폐쇄된 원형 DNA(cccDNA)를 형성한다. 바이러스성 미니 염색체의 정리를 표적으로 하는 것은 만성 HBV 감염의 치료 귀착될 수 있습니다. 현재 항바이러스 요법은 ?...

급성 감염 에 이어, 적응 면역 체계 (즉, 체액성 및 세포 면역)는 급성 HBV 관련 간염의 대부분을 제어합니다. 아직도, HBV 풍토성 지구에 있는 사람들의 수는 바이러스를 제거하고 그 후에 만성 개별로 변환할 수 없습니다. 전 세계 만성 환자(>2억 5천만 명)의 25% 이상이 진행성 간 질환을 일으켜 간경변 및/또는 간세포암종(HCC)을 초래합니다1. 그 결과, 고집이 세게 감염된 세포의 박멸은 유효한 백신2가 있고 수많은 항바이러스 약이 개발되고 있더라도 일반적인 건강 문제 남아 있습니다. HBV 감염을 위한 표준 처리는 IFN-α, 뉴클레오시드, 및 뉴클레오티드 유사체를 포함한다. 이 에이전트는 직접적인 항 바이러스 활성 및 면역 조절 용량. 그럼에도 불구하고, HBe 항원(Ag)+담체의 혈청 변환(Ab) 및 혈청 HBV 데옥시리보핵산(DNA)의 손실은 치료된 환자의 약 20%에서 개별적으로 나타나며, 바이러스의 전체 면역학 적 대조군 BBsAg의 박탈에 의해 확인은 더 이상 5 %3입니다. 또한 치료에 대한 반응은 종종 내구성이 없습니다. 재조합 HBs Ag를 가진 예방 백신 접종은 감염 예방에 매우 효과적이지만 치료적 HBs Ag 예방 접종은 효과적이지 않습니다. 명확 하 게, T 세포 매개 면역 반응 HBV 감염 및 간 손상 제어에 중요 한 역; 그러나, 만성 간염 환자에서, HBV 반응성 T 세포는 수시로 삭제됩니다, 역기능, 또는 소모된4,5,6. 따라서, 지속적인 HBV 감염을 가진 개인에서, 항 바이러스 요법, 면역 조절 사이토 카인, 또는 치료 예방 접종을 통해 HBV 특이적 면역 (즉, T 세포 기반 면역)을 회복하려는 시도는 성공하지 못했습니다.
HBV Ag 특이적 T 세포의 입양 세포 전달(ACT)은 결국 남은 간세포 wih HBV7,8을박멸하도록 지시된 효율적인 치료법이다. HBV 감염 마우스내의 HBV 특이적 CTLs의 ACT는 간세포에서 과도, 경증 간염 및 HBV 리보핵산(RNA) 전사체의 극적인 하락을 유발하는 것으로 나타났다. 이러한 연구에서 CTL은 HBV 유전자의 전사를 억제하지 는 않았지만 HBV 전사체9의분해를 향상시켰습니다. HBV 특이적 CTL은 바이러스 감염을 방지하고 HBV10,11의클리어런스를 중재하는 데 중요합니다. ACT 기반 요법의 경우, 생체 내 재정착을 위한 높은 반응성을 가진 HBV 특이적 T 세포의 시험관 내 확장은 이상적인 방법12,13,14; 그럼에도 불구하고, 현재의 접근법은 잠재적인 치료를 위해 환자에게서 HBV 특이적 T 세포의 적절한 수량 및 자질을 생성, 분리 및 성장시키는 능력에 관하여 제한됩니다.
임상 시험은 HBV 바이러스 감염 간세포에 특정엔지니어링 T 세포를 통해 세포 기반 치료의 안전성, 실용성 및 장래 치료 활성을 제시하지만, 불리한 효과에 대한 걱정이 있습니다. T 세포 수용체(TCR)15,16,비특이적 TCR17 및 키메라 Ag 수용체에 의한 오프-타겟 오프 독성에 의한 교차 반응성으로 인해 자가면역 반응에서 발생(CAR) 18세 , 건강한 조직19개. 현재, 생체 내에서 단기 지속성만을 가지는 유전자 변형 T 세포는 일반적으로 중간 또는 이후의 이펙터 T 세포이다. 현재까지 다능성 줄기세포(PSC)는 순진한 단일형 Ag-특이적T세포(20,21,22,23)의높은 숫자를 생성할 수 있는 유일한 공급원이다. 유도된 PSCs (iPSCs)는 몇몇 전사 인자의 유전자 전달의 사용을 통해 환자의 체세포에서 단순히 변환됩니다. 그 결과, iPSCs는 배아 줄기 세포(ESCs)24와유사한 특성을 갖는다. 자기 갱신하는 무한한 능력에 대한 유연성과 가능성으로 인해, 조직 교체 이외에, iPSC 기반 치료는 재생 의학에서 널리 적용될 수 있다. 게다가, 근본적인 iPSCs연대는 현재 세포 기지를 둔 치료를 실질적으로 향상할 수 있습니다.
이 방법의 전반적인 목표는 ACT 기반 면역 요법을 위한 iPSC(즉, iPSC-CTL)로부터 다량의 HBV 특이적 CTL을 생성하는 것이다. 대체 기술에 비해 장점은 HBV 특이적 iPSC-CTL이 단일 유형 TCR 및 순진한 표현형을 가지고 있다는 것입니다. HBV 특이적 iPSC-CTL의 ACT는 간에서 기능성CD8+ T 세포의 이동을 증가시키고 투여된 마우스의 간 및 혈액 모두에서 HBV 복제를 감소시킨다는 것이 입증되었다. 이 방법은 HBV 면역 요법을 위한 바이러스 Ag 특이적 iPSC-CTL의 잠재적사용을 밝히고 바이러스 면역요법을 위한 다른 바이러스 성 Ag 특이적 iPSC-T 세포를 생성하도록 적응될 수 있다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>HHD mice</td>
			<td>Institut Pasteur, Paris, France</td>
			<td></td>
			<td>H-2 class I knockout, HLA-A2.1-transgenic (HHD) mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iPS-MEF-Ng-20D-17</td>
			<td>RIKEN Cell Bank</td>
			<td>APS0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SNL76/7</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>SCRC-1049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OP9</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-2749</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pAAV/HBV1.2 plasmid</td>
			<td>Dr. Dr. Pei-Jer Chen (National Taiwan University Hospital, Taiwan)</td>
			<td></td>
			<td>HBV DNA construct</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HBs183-91(s183) (FLLTRILTI)-specific TCR genes</td>
			<td>Dr. Adam J Gehring (Toronto General Hospital Research Institute, Toronto, Canada)</td>
			<td></td>
			<td>FLLTRILTI-specific A2-restricted human-murine hybrid TCR genes (V&#945;34 and V&#946;28)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OVA257&#8211;264-specific TCR genes</td>
			<td>Dr. Dario A. Vignali (University of Pittsburgh, PA)</td>
			<td></td>
			<td>SIINFEKL-specific H-2Kb-restricted TCR genes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD3 (17A2) antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100236</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD44 (IM7) antibody</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>103012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD4 (GK1.5) antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100408</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD8 (53-6.7) antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>100732</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-IFN-&#947; (XMG1.2) antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>505810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-TNF-a (MP6-XT22) antibody</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>506306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-MEM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A10490-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-HBs antibody</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>MA5-13059</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysis buffer</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>10-548E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brefeldin A</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>B7651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>ABCD1234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH3007.01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSAria Fusion cell sorter</td>
			<td>BD</td>
			<td>656700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>G9391</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GeneJammer</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>204130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HLA-A201-HBs183-91-PE pentamer</td>
			<td>Proimmune</td>
			<td>F027-4A - 27</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HRP Anti-Mouse Secondary Antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A27025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mFlt-3L</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>250-31L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mIL-7</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>217-17</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease S7</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10107921001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>P6148-500G</td>
			<td>Caution: Allergenic, Carcenogenic, Toxic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permeabilization buffer</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>421002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polybrene</td>
			<td>MilliporeSigma</td>
			<td>107689</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ProLong&#8482; Gold Antifade Mountant with DAPI</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QIAamp MinElute Virus Spin Kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>57704</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stem cell-derived viral ag-specific t lymphocytes suppress hbv replication in mice

B형 간염 바이러스 (HBV) 감염은 글로벌 건강 문제입니다. 전 세계적으로 3억 5천만 명 이상이 영향을 받은 HBV 감염은 간암의 주요 원인으로 남아 있습니다. 이것은 특히 개발도상국에서 주요 관심사입니다. HBV에 대하여 효과적인 반응을 탑재하는 면역 계통의 실패는 만성 감염으로 이끌어 냅니다. HBV 백신이 존재하고 새로운 항 바이러스 의약품이 생성되고 있지만, 바이러스 저수지 세포의 박멸은 주요 건강 주제로 남아 있습니다. 여기서 기재된 바이러스 항원(Ag)-특이적CD8+세포독성 T 림프구(CTL)의 생성을 위한 방법은 유도된 만능 줄기 세포(iPSCs)(즉, iPSC-CTL)로부터 유래되며, 이는 HBV 복제를 억제하는 능력을 갖는다. HBV 복제는 HBV 발현 플라스미드, pAAV/HBV1.2의 유체역학적 주입을 통해 마우스에서 효율적으로 유도되며, 간으로 유도된다. 이어서, HBV 표면 Ag 특이적 마우스 iPSC-CTL은 입양적으로 전달되어 간 및 혈액에서의 HBV 복제를 크게 억제할 뿐만 아니라 간세포에서 HBV 표면 Ag 발현을 방지한다. 이 방법은 유체역학적 주입 후 마우스에서 HBV 복제를 입증하고 줄기 세포 유래 바이러스 Ag-특이적 CTLs가 HBV 복제를 억제할 수 있음을 보여준다. 이 프로토콜은 HBV 면역 요법에 유용한 방법을 제공한다.

여기에 도시된 바와 같이, HBV 바이러스 성 Ag 특이적 iPSC-CD8+ T 세포는 시험관 내 배양 시스템에 의해 생성된다. 이러한 바이러스 성 Ag 특이적 iPSC-CD8+ T 세포의 ACT 후 실질적으로 뮤린 모델에서 HBV 복제를 억제한다(보충파일 1). 마우스 iPSC는 인간 마우스 하이브리드 HBV TCR 유전자를 코딩하는 MIDR 레트로바이러스 구조체(HBs183-191-specific,s183)로 변환된 다음, 유전자 ?...

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Stem Cell-Derived Viral Ag-Specific T Lymphocytes Suppress HBV Replication in Mice

여기에 제시된 것은 줄기세포 유래 바이러스 항원(Ag)-특이적 T 림프구의 입양세포 전달(ACT)을 이용하여 마우스에서 B형 간염 바이러스(HBV) 복제의 효과적인 억제를 위한 프로토콜이다. 이 절차는 HBV 감염의 잠재적인 ACT 기지를 둔 면역 요법을 위해 적응될 수 있습니다.

줄기 세포 유래 바이러스 Ag 특이적 T 림프구는 마우스에서 HBV 복제를 억제

Hepatitis B virus (HBV) infection is a global health issue. With over 350 million people affected worldwide, HBV infection remains the leading cause of ...

이 방법은 마우스에서 HBV 복제의 효과적인 억제를 위해 iPSC 유래 바이러스 항원 특이적 T 세포의 입양 세포 전달에 있는 중요한 질문에 대답하는 것을 도울 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 iPSC 유래 바이러스 항원 특이적 T 세포가 단일 유형 T 세포 수용체 및 순진한 표현형을 갖는다는 것입니다. HBV 특이적 iPSC CD8 양성 T 세포의 분화를 위해, 플레이트 s183 T 세포 수용체 유전자-변환 된 iPSCs에 OP9-DL1/DL4 단층에서 알파 최소 배지에서 20%의 태아 소 혈청 및 뮤린 Flt3 리간드로 보충하여 쿠베이포어의 세포 배양에 대한 공동 배양에 대한 보충.세포 형태를 평가하기 위해 정기적으로 공동 배양을 모니터링합니다. 28일째에, 상피 및 부동 세포를 제거하고, 0.25%의 트립신으로 부착세포를 분리한다. 세포가 배양 용기 바닥에서 들어 올릴 때, iPSC 배지의 8밀리리터로 효소 반응을 멈추고 원심분리에 의해 세포를 수집한다.신선한 매체의 10 밀리리터에서 펠릿을 다시 중단합니다. 세포 배양배기에서 40시간 배양에 대해 4개의 s183 펩타이드 펄스 비백세포 비율로 하나의 iPSC 유래 CD8 양성 T 세포로 세포를 희석시켰다. 마지막 7시간 동안, 세포 활성화 중 운송 공정을 차단하기 위해 희석 된 brefeldin A의 4 마이크로 리터를 배양에 추가합니다.표준 프로토콜에 따라 관심있는 세포 내 사이토카인의 흐름 세포 측정 분석을 위한 세포를 얼룩지게 합니다. 테일 정맥을 통해 유체 역학 HBV 플라스미드 전달을 위해 PBS의 체질량의 8%에 해당하는 10마이크로그램의 HBV 플라스미드를 희석시킵니다. 플라스미드를 마우스 당 26 게이지, 1/2인치 바늘이 장착된 3밀리리터 주사기 1개에 적재합니다.HHD 마우스를 열램프 아래에서 5분간 가열하여 꼬리 정맥을 넓히고 마우스를 조심스럽게 플라스틱 제지제에 넣습니다. 꼬리의 중간 3분의 1에 팽창된 측면 꼬리 정맥을 찾아서, 3~5초 동안 꼬리 정맥을 통해 플라스미드의 전체 부피를 전달하기 위해 정맥에 평행하게 바늘을 삽입한다. 바이러스 항원 특이적 iPSC-유래 CD8 양성 T 세포 입양 세포 전달의 경우, 입증된 바와 같이 22일째에 iPSC CD8 양성 T 세포를 수집하고 세포를 새로운 10센티미터 세포 배양 접시에 시드한다.세포 배양 인큐베이터에서 30분 후, 70마이크로미터 나일론 스트레이너를 통해 부동 세포를 걸러내고 실행 가능한 세포를 계산한다. PBS 농도의 밀리리터 당 7개의 세포에 1.5배 10배까지 세포를 희석시. 개별 4-6 주 된 HHD 마우스에 세포의 200 마이크로 리터를 주입, 꼬리 정맥에 그냥 입증.세포 전달 후 14일째에, 입증된 바와 같이 유체역학적 HBV 플라스미드 전달을 수행한다. 적절한 실험적 종점에서 감염 후 각 감염된 동물로부터 간을 수확하고 간을 0.5-0.5-0.3센티미터 조직 샘플로 자릅니다. 샘플을 4~24시간 동안 10% 중성 완충파 포르말린에 넣고 6~24시간 동안 2.5-대구산에 탈화한다.다음으로, 3분 동안 자일렌으로 샘플을 헹구고, 100%에탄올, 95%에탄올, 탈이온화된 물로 2분 간 헹구는 것입니다. 마지막 물 세척 후, 90섭씨에서 1밀리알라드 EDTA로 조직을 탈칼시피한 다음 실온에서 30분 동안 배양합니다. 조직이 냉각되면 PBS에서 샘플을 4 분 동안 헹구고 자일렌과 에탄올을 사용하여 샘플을 분리하고 재수화하십시오.면역형광 라벨링을 위해, 75~100% 가습된 챔버에서 실온에서 2시간 동안 HBV 표면 항원 특이적 항체200 마이크로리터로 섹션을 얼룩지게 한다. 인큐베이션이 끝나면 매 세척시 신선한 PBS로 5분간 세척하여 샘플을 세척합니다. 형광 현미경 검사법에 의한 이미징을 위한 커버립으로 슬라이드를 장착하기 전에 표준 프로토콜에 따라 DAPI로 세포를 라벨로 지정합니다.면역조직화학적 분석을 위해, 표준 프로토콜에 따라 헤마톡시린과 에오신으로 단면을 얼룩지게 하고, 광 현미경검사법에 의해 간으로 염증세포의 침투를 평가한다. iPSC 유래 CD3 양성 CD8 양성 집단의 유동 세포 측정 분석은 HBV T 세포 수용체 전체 전체 전도가 바이러스 s183 특이적 CD8 양성 T 세포의 생성을 극적으로 증가시킨다는 것을 보여준다. s183 펩타이드로 펄스된 T 고갈된 고갈된 고갈된 비백세포를 자극한 후, CD4-음수 CD8 단일 양성 iPSC 유래 T 세포는 세포내 유동 세포 분석 및 ELISA에 의해 검출된 바와 같이 다량의 인터페론 감마를 생성한다.유체 역학 주입에 의한 HBV 감염 후, DNA 복제는 6일째에 정점에 달하고 실시간 PCR 분석에 의해 관찰된 바와 같이 점차적으로 감소합니다. 또한, 바이러스 복제는 대조군 세포를 수신하는 마우스에 비해 HBV 바이러스 성 항원 특이적 T 세포를 수신하는 마우스의 모든 시점에서 현저히 감소된다. HBV 표면 단백질은 또한 HBV 바이러스 항원 특이적 전iPSC 세포독성 림프구를 조절 세포로 치료한 마우스에 비해 실질적으로 감소하며, 바이러스 항원 특이적 iPSC CD8 양성 T 세포가 뮤린 모델에서 HBV 복제를 감소시키는 능력을 가지고 있음을 분명히 입증한다.이제 입양 면역 요법을 위해 iPSC에서 바이러스 성 항원 특이적 T 세포를 생성하는 방법에 대한 좋은 이해가 있어야합니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Methods to Assess Beta Cell Death Mediated by Cytotoxic T Lymphocytes

세포 독성 T Lymphocytes에 의해 베타 세포 죽음의 중재를 평가하는 방법

Type 1 diabetes (T1D) is a T cell mediated autoimmune disease.  During the pathogenesis, patients become progressively more insulinopenic as 
insulin ...

연구

면역학 및 감염병학

Generation of Multivirus-specific T Cells to Prevent/treat Viral Infections after Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplant

Multivirus 특정 T 세포 생성 Allogeneic 조혈 줄기 세포 이식 후 바이러스 감염을 예방 / 치료

Viral infections cause morbidity and mortality in allogeneic hematopoietic stem cell transplant (HSCT) recipients. We and others have successfully ...

Expanding Cytotoxic T Lymphocytes from Umbilical Cord Blood that Target Cytomegalovirus, Epstein-Barr Virus, and Adenovirus

탯줄 혈액에서 세포 독성 T 림프구 확장이 대상 사이토 메갈로 바이러스, 엡스타인 - 바 바이러스, 그리고 아데노 바이러스

Virus infections after stem cell transplantation are among the most common causes of death, especially after cord blood (CB) transplantation (CBT) where ...

Directed Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells towards T Lymphocytes

T Lymphocytes쪽으로 유도 Pluripotent 줄기 세포의 분화 감독

Adoptive cell transfer (ACT) of antigen-specific CD8+  cytotoxic T lymphocytes (CTLs) is a promising treatment for a variety of  malignancies 1. CTLs can  ...

Isolation and Th17 Differentiation of Na&iuml;ve CD4 T Lymphocytes

Isolation and Th17 Differentiation of NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4 T Lymphocytes

분리 및 나이브 CD4 T 림프구의 TH17 분화

Th17 cells are a distinct subset of T cells that have been found to produce interleukin 17 (IL-17), and differ in function from the other T cell subsets ...

Static Adhesion Assay for the Study of Integrin Activation in T Lymphocytes

T 림프구에있는 인테그린 활성화의 연구에 대한 정적 접착 분석

T lymphocyte adhesion is required for multiple T cell functions, including migration to sites of inflammation and formation of immunological synapses with ...

Isolation of Viral Replication Compartment-enriched Sub-nuclear Fractions from Adenovirus-infected Normal Human Cells

아데노 바이러스에 감염된 정상적인 인간의 세포에서 바이러스 복제 구획 풍부한 하위 핵 분수의 분리

During infection of human cells by adenovirus (Ad), the host cell nucleus is dramatically reorganized, leading to formation of nuclear microenvironments ...

Efficient Isolation Protocol for B and T Lymphocytes from Human Palatine Tonsils

인간 팔라티노 편도선에서 B와 T 림프구에 대한 효율적인 분리 프로토콜

Tonsils form a part of the immune system providing the first line of defense against inhaled pathogens. Usually the term &#8220;tonsils&#8221; refers to ...

Visualization of IL-22-expressing Lymphocytes Using Reporter Mice

기자 마우스를 사용하여 IL-22 발현 림프구의 시각화

Reporter mice have been widely used to observe the localization of expression of targeted genes. This protocol focuses on a strategy to establish a new ...