Name: stochastic noise application for the assessment of medial vestibular nucleus neuron sensitivity in vitro
Uploaded: 2019-08-28T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Stochastic Noise Application for the Assessment of Medial Vestibular Nucleus Neuron Sensitivity In Vitro at JoVE.com

وحظيت هذه الدراسة بدعم من جامعة سيدني للدراسات العليا في مجال الدراسات العليا.

تمت الموافقة على جميع البروتوكولات التجريبية الموصوفة من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان في جامعة سيدني (رقم البروتوكول المعتمد: 2018/1308).
1- الحيوانات
ملاحظة: تم الحصول على الفئران من المركز الأسترالي للقوارض (ARC; بيرث، أستراليا) وعقد في بناء المؤسسة الطبية م?...

<ol>
	<li>Amiridis, I. G., Hatzitaki, V., Arabatzi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-induced+modifications+of+static+postural+control+in+humans.">Age-induced modifications of static postural control in humans.</a> Neuroscience Letters. 350 (3), 137-140 (2003).</li><li>Iwasaki, S., Yamasoba, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dizziness+and+imbalance+in+the+elderly:+age-related+decline+in+the+vestibular+system.">Dizziness and imbalance in the elderly: age-related decline in the vestibular system.</a> Aging and disease. 6 (1), (2015).</li><li>Fujimoto, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noisy+galvanic+vestibular+stimulation+induces+a+sustained+improvement+in+body+balance+in+elderly+adults.">Noisy galvanic vestibular stimulation induces a sustained improvement in body balance in elderly adults.</a> Scientific Reports. 6, 37575 (2016).</li><li>Breen, P. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+tactile+sensory+perception+of+older+adults+improved+using+subsensory+electrical+noise+stimulation.">Peripheral tactile sensory perception of older adults improved using subsensory electrical noise stimulation.</a> Medical Engineering &amp; Physics. 38 (8), 822-825 (2016).</li><li>Yamamoto, Y., Struzik, Z. R., Soma, R., Ohashi, K., Kwak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noisy+vestibular+stimulation+improves+autonomic+and+motor+responsiveness+in+central+neurodegenerative+disorders.">Noisy vestibular stimulation improves autonomic and motor responsiveness in central neurodegenerative disorders.</a> Annals of Neurology. 58 (2), 175-181 (2005).</li><li>Soma, R., Nozaki, D., Kwak, S., Yamamoto, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=1/f+noise+outperforms+white+noise+in+sensitizing+baroreflex+function+in+the+human+brain.">1/f noise outperforms white noise in sensitizing baroreflex function in the human brain.</a> Physical Review Letters. 91 (7), 078101 (2003).</li><li>Wiesenfeld, K., Moss, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stochastic+resonance+and+the+benefits+of+noise:+from+ice+ages+to+crayfish+and+SQUIDs.">Stochastic resonance and the benefits of noise: from ice ages to crayfish and SQUIDs.</a> Nature. 373 (6509), 33-36 (1995).</li><li>Moss, F., Ward, L. M., Sannita, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stochastic+resonance+and+sensory+information+processing:+a+tutorial+and+review+of+application.">Stochastic resonance and sensory information processing: a tutorial and review of application.</a> Clinical Neurophysiology. 115 (2), 267-281 (2004).</li><li>Goel, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+low+levels+of+stochastic+vestibular+stimulation+to+improve+balance+function.">Using low levels of stochastic vestibular stimulation to improve balance function.</a> PloS one. 10 (8), e0136335 (2015).</li><li>Inukai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+noisy+galvanic+vestibular+stimulation+on+center+of+pressure+sway+of+static+standing+posture.">Effect of noisy galvanic vestibular stimulation on center of pressure sway of static standing posture.</a> Brain Stimulation: Basic, Translational, and Clinical Research in Neuromodulation. 11 (1), 85-93 (2018).</li><li>Mulavara, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+low+levels+of+stochastic+vestibular+stimulation+to+improve+locomotor+stability.">Using low levels of stochastic vestibular stimulation to improve locomotor stability.</a> Frontiers in Systems Neuroscience. 9, 117 (2015).</li><li>Iwasaki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noisy+vestibular+stimulation+increases+gait+speed+in+normals+and+in+bilateral+vestibulopathy.">Noisy vestibular stimulation increases gait speed in normals and in bilateral vestibulopathy.</a> Brain stimulation. 11 (4), 709-715 (2018).</li><li>Serrador, J. M., Deegan, B. M., Geraghty, M. C., Wood, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhancing+vestibular+function+in+the+elderly+with+imperceptible+electrical+stimulation.">Enhancing vestibular function in the elderly with imperceptible electrical stimulation.</a> Scientific Reports. 8 (1), 336 (2018).</li><li>Kim, J., Curthoys, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+of+primary+vestibular+neurons+to+galvanic+vestibular+stimulation+(GVS)+in+the+anaesthetised+guinea+pig.">Responses of primary vestibular neurons to galvanic vestibular stimulation (GVS) in the anaesthetised guinea pig.</a> Brain Research Bulletin. 64 (3), 265-271 (2004).</li><li>Flores, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stochastic+resonance+in+the+synaptic+transmission+between+hair+cells+and+vestibular+primary+afferents+in+development.">Stochastic resonance in the synaptic transmission between hair cells and vestibular primary afferents in development.</a> Neuroscience. 322, 416-429 (2016).</li><li>Huidobro, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brownian+Optogenetic-Noise-Photostimulation+on+the+Brain+Amplifies+Somatosensory-Evoked+Field+Potentials.">Brownian Optogenetic-Noise-Photostimulation on the Brain Amplifies Somatosensory-Evoked Field Potentials.</a> Frontiers in Neuroscience. 11, 464-464 (2017).</li><li>Goldberg, J., Ferna, C., Smith, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+of+vestibular-nerve+afferents+in+the+squirrel+monkey+to+externally+applied+galvanic+currents.">Responses of vestibular-nerve afferents in the squirrel monkey to externally applied galvanic currents.</a> Brain Research. 252 (1), 156-160 (1982).</li><li>Baird, R., Desmadryl, G., Fernandez, C., Goldberg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vestibular+nerve+of+the+chinchilla.+II.+Relation+between+afferent+response+properties+and+peripheral+innervation+patterns+in+the+semicircular+canals.">The vestibular nerve of the chinchilla. II. Relation between afferent response properties and peripheral innervation patterns in the semicircular canals.</a> Journal of Neurophysiology. 60 (1), 182-203 (1988).</li><li>Remedios, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Short-Term+Random+Noise+Electrical+Stimulation+on+Dissociated+Pyramidal+Neurons+from+the+Cerebral+Cortex.">Effects of Short-Term Random Noise Electrical Stimulation on Dissociated Pyramidal Neurons from the Cerebral Cortex.</a> Neuroscience. 404, 371-386 (2019).</li><li>Paxinos, G., Franklin, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The mouse brain in stereotaxic coordinates. , (2004).</li><li>Camp, A. J., Callister, R. J., Brichta, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitory+synaptic+transmission+differs+in+mouse+type+A+and+B+medial+vestibular+nucleus+neurons+in+vitro.">Inhibitory synaptic transmission differs in mouse type A and B medial vestibular nucleus neurons in vitro.</a> Journal of Neurophysiology. 95 (5), 3208-3218 (2006).</li><li>Camp, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Attenuated+glycine+receptor+function+reduces+excitability+of+mouse+medial+vestibular+nucleus+neurons.">Attenuated glycine receptor function reduces excitability of mouse medial vestibular nucleus neurons.</a> Neuroscience. 170 (1), 348-360 (2010).</li><li>Iwasaki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Noisy+Galvanic+Vestibular+Stimulation+on+Ocular+Vestibular-Evoked+Myogenic+Potentials+to+Bone-Conducted+Vibration.">Effect of Noisy Galvanic Vestibular Stimulation on Ocular Vestibular-Evoked Myogenic Potentials to Bone-Conducted Vibration.</a> Front in Neurology. 8, 26 (2017).</li><li>Goldberg, J., Smith, C. E., Fernandez, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relation+between+discharge+regularity+and+responses+to+externally+applied+galvanic+currents+in+vestibular+nerve+afferents+of+the+squirrel+monkey.">Relation between discharge regularity and responses to externally applied galvanic currents in vestibular nerve afferents of the squirrel monkey.</a> Journal of Neurophysiology. 51 (6), 1236-1256 (1984).</li></ol>

وقد تم تسليط الضوء على آثار التحفيز الدهليزي الكلفاني (GVS) على النظام الدهليزي في الجسم الحي في البشر3،13،23، خنازير غينيا14، القوارض18 والرئيسيات غير البشرية24. ومع ذلك، لم يتم تقييم أي من هذه الدراسات ا...

يتحكم النظام الدهليزي (أو التوازن) في إحساسنا بالتوازن من خلال دمج المعلومات السمعية، والحسية، والحسية الجسدية والبصرية. وقد ثبت أن تدهور النظام الدهليزي يحدث كدالة للعمر ويمكنأن يؤدي إلى عجز في التوازن 1،2. ومع ذلك، فإن العلاجات التي تستهدف أداء النظام الدهليزي نادرة.
وقد ثبت التحفيز الدهليزي الكلفاني (GVS) لتحسين مقاييس التوازن، والأداء اللاإرادي وغيرها من الطرائق الحسية داخل البشر3،4،5،6. ويقال أن هذه التحسينات تعود إلى ظاهرة الرنين العشوائي (SR)، وهي الزيادة في الكشف عن إشارات أضعف في الأنظمة غير الخطية عن طريق تطبيق الضوضاء تحت العتبة7،8. وقد أظهرت هذه الدراساتتحسينات في ثابت 9،10 ودينامية11،12 التوازن، واختبارات الإخراج الدهليزيمثل لفة عداد العين (OCR)13. ومع ذلك، استخدمت العديد من هذه الدراسات مجموعات مختلفة من المعلمات التحفيز مثل الضوضاء البيضاء9، الضوضاء الملونة13، نطاقات تردد التحفيز المختلفة وتقنيات العتبات. ولذلك، فإن بارامترات التحفيز المثلى لا تزال غير معروفة ويمكن أن يساعد هذا البروتوكول في تحديد البارامترات الأكثر فعالية. وإلى جانب معايير التحفيز، فإن نوع التحفيز مهم أيضاً في الفعالية العلاجية والتجريبية. تم تنفيذ العمل أعلاه في البشر باستخدام محفزات الضوضاء الكهربائية، في حين أن الكثير من العمل الحيواني في الجسم الحي قد استخدمت الميكانيكية14،15 أو البصريات16 محفزات الضوضاء. سيستخدم هذا البروتوكول الضوضاء الكهربائية لفحص الآثار على النوى الدهليزية.
في السابق، تم تنفيذ تطبيق GVS لتحفيز afferents الدهليزية الأولية في الجسم الحي في الخنازير السنجاب17، chinchillas18، أجنة الدجاج15 والخنازير غينيا14. ومع ذلك، درست اثنتان فقط من هذه الدراسات تأثير GVS على كسب afferents الدهليزية الأولية14،15. وقد أجريت هذه التجارب في الجسم الحي مما يعني أنه لا يمكن تحديد الأنماط الدقيقة للتحفيز المفروضة على النوى الدهليزية. على حد علمنا، وقد طبقت دراسة واحدة فقط الضوضاء العشوائية على الخلايا العصبية الفردية الأنزيمية المنفصلة في الجهاز العصبي المركزي19. ومع ذلك، لم يتم إجراء أي تجارب في النوى الدهليزية المركزية لتقييم المعلمات التحفيزية المناسبة وتقنيات العتبات، مما يجعل هذا البروتوكول أكثر دقة في تحديد آثار التحفيز على الخلايا العصبية الفردية داخل الدهليزية النوي.
هنا، ونحن نصف كيفية تطبيق الضوضاء الزعنفة والعشوائية (الكهربائية) مباشرة على الخلايا العصبية الفردية في النواة الدهليزية الوسيطة (MVN)، وتحديد عتبة الخلايا العصبية وقياس التغيرات في كسب / حساسية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>CaCl</td>
			<td>Scharlau</td>
			<td>CA01951000</td>
			<td>Used for ACSF and sACSF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8270</td>
			<td>Used for ACSF and sACSF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E0396-25G</td>
			<td>Used for K-based intracellular solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3375-25G</td>
			<td>Used for K-based intracellular solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Chem-supply</td>
			<td>PA054-500G</td>
			<td>Used for ACSF, sACSF and intracellular solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>K-gluconate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P1847-100G</td>
			<td>Used for K-based intracellular solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mg-ATP</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9187-500MG</td>
			<td>Used for K-based intracellular solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl</td>
			<td>Chem-supply</td>
			<td>MA00360500</td>
			<td>Used for ACSF and sACSF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na3-GTP</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8877-100MG</td>
			<td>Used for K-based intracellular solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Chem-supply</td>
			<td>SO02270500</td>
			<td>Use for ACSF and intracellular solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4.2H2O</td>
			<td>Ajax</td>
			<td>AJA471-500G</td>
			<td>Used for ACSF and sACSF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761-1KG</td>
			<td>Used for ACSF and sACSF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Chem-supply</td>
			<td>SA030-500G</td>
			<td>Used for sACSF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>1169567762</td>
			<td>Used for anaesthetising mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EQUIPMENT</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate glass capillaries</td>
			<td>Warner instruments</td>
			<td>GC150T-7.5</td>
			<td>1.5mm OD, 1.16mm ID, 7.5cm length</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data acquisition software</td>
			<td>Axograph</td>
			<td></td>
			<td>Used for electrophysiology and analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Friedmen-Pearson Rongeurs</td>
			<td>World precision instruments</td>
			<td>14089</td>
			<td>Used for dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micropipette puller</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>PP-830</td>
			<td>Used for micropipette</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multiclamp amplifier</td>
			<td>Axon instruments</td>
			<td>700B</td>
			<td>Used for electrophysiology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH meter</td>
			<td>Sper scientific</td>
			<td>860033</td>
			<td>Used for internal solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard pattern scissors</td>
			<td>FST</td>
			<td>14028-10</td>
			<td>Used for dissection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutter micromanipulator</td>
			<td>Sutter</td>
			<td>MP-225/M</td>
			<td>Used for electrophysiology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Upright microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX51WI</td>
			<td>Used for electrophysiology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibratome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>VT1200</td>
			<td>Used for slicing brain tissue</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

stochastic noise application for the assessment of medial vestibular nucleus neuron sensitivity in vitro

وقد ثبت التحفيز الدهليزي الكلفاني (GVS) لتحسين مقاييس التوازن في الأفراد الذين يعانون من التوازن أو العاهات الدهليزية. ويُقترح أن يعزى ذلك إلى ظاهرة الرنين العشوائي (SR)، التي تُعرَّف بأنها تطبيق حافز منخفض المستوى/دون عتبة على نظام غير خطي لزيادة الكشف عن الإشارات الأضعف. ومع ذلك، لا يزال من غير المعروف كيف يظهر SR آثاره الإيجابية على التوازن البشري. هذا هو واحد من المظاهرات الأولى لآثار الضوضاء الجيوب الأنفية والعشوائية على الخلايا العصبية الفردية. باستخدام كامل الخلية التصحيح المشبك الفيزيولوجيا الكهربائية، يمكن تطبيق الضوضاء الزعنفة والعشوائية مباشرة على الخلايا العصبية الفردية في النواة الدهليزية الوسيطة (MVN) من الفئران C57BL/6. هنا نبين كيفية تحديد عتبة الخلايا العصبية MVN من أجل ضمان المحفزات الزفية والعشوائية هي عتبة فرعية ومن هذا، تحديد الآثار التي كل نوع من الضوضاء على كسب الخلايا العصبية MVN. نبين أن الضوضاء السينوسية والعشوائية تحت العتبة يمكن أن تعدل حساسية الخلايا العصبية الفردية في MVN دون التأثير على معدلات إطلاق النار القاعدية.

التسجيلات الأولية يمكن أن توفر معلومات عن الآثار التي الضوضاء الزفية والعشوائية لها على معدلات إطلاق القاعدية من الخلايا العصبية MVN الفردية وكيف تؤثر المحفزات على كسب الخلايا العصبية. ويبين الشكل 2 أنه لا الضجيج السينوسي ولا العشوائي يغير معدلات إطلاق الخلايا ?...

Watch this Scientific Journal Video about Stochastic Noise Application for the Assessment of Medial Vestibular Nucleus Neuron Sensitivity In Vitro at JoVE.com

Stochastic Noise Application for the Assessment of Medial Vestibular Nucleus Neuron Sensitivity In Vitro

التحفيز الدهليزي الكلفاني في البشر يعرض تحسينات في وظيفة دهليزية. ومع ذلك، فمن غير المعروف كيف تحدث هذه التأثيرات. هنا، ونحن نصف كيفية تطبيق الضوضاء الكهربائية الجيوب الأنفية والعشوائية وتقييم السعة التحفيزية المناسبة في الخلايا العصبية الأساسية الأساسية الأساسية في الماوس C57BL/6.

تطبيق الضوضاء العشوائية لتقييم حساسية الخلايا العصبية النواة الدهليزية الوسيطة في المختبر

Galvanic vestibular stimulation (GVS) has been shown to improve balance measures in individuals with balance or vestibular impairments. This is proposed ...

هذا البروتوكول هو واحد من المظاهرات الأولى للتطبيق المباشر للضوضاء الكهربائية إلى الخلايا العصبية الفردية في شرائح الأنسجة. من أجل مراقبة استجابات الخلايا العصبية للمحفزات الكهربائية. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي، أننا قادرون على تقييم مجموعة محددة من المعلمات التحفيز على الخلايا العصبية الفردية.هذه التقنية تسمح لتحسين المعلمات التحفيز لاستهداف خاصة, أنواع الخلايا العصبية الوظيفية. وهذا له آثار على تطوير علاجات أفضل لتفكك التوازن. قبل البدء في استخراج جذع الدماغ، Equilibry s-ACSF مع CARPOGEN وتبريد الحل في ناقص 80 درجة مئوية لمدة 25 دقيقة حتى تم تشكيل الطين الجليد.بعد أن يكون الحل قد بردت، واستخدام عدد 22 شفرة حلاقة مدورة لجعل شق الجلد القوس في الجمجمة من ثلاثة إلى خمسة أسابيع من العمر C-57 أسود ستة ماوس واستخدام نهاية مدببة لزوج من مقص نمط القياسية لجعل شق صغير، بدءا من لامدا، على طول خياطة القوس. باستخدام زوج من الانحناء الضحلة بيرسون فونJours، تعكس بعناية بعيدا إصلاح الجدارية والعظام exoccipital، والاستحمام الدماغ في الجليد البارد s-ACSF. ثم، عزل الدماغ تنبع من forebrain وعظمية لها الرعايه باستخدام عدد 11 شفرة حلاقة مستقيمة لخفض sulcus الجداري exoccipital وفي negula caudal.قم بتركيب الجزء البطني من جذع الدماغ المعزول لأسفل على كتلة البوليسترين شبه المنحرفة بشكل perviously ، واستخدام قطعة من ورق الأنسجة لإزالة أي سائل زائد من جميع أنحاء الأنسجة التي تم تشريحها. استخدام الغراء سيانوكريلات لإصلاح كتلة البوليسترين إلى مرحلة القطع مع جذع الدماغ المرفقة والمغلقة. استخدام سرعة متقدمة من 0.16 ملليمتر في الثانية واهتزاز سعة ثلاثة ملليمترات للحصول على 200 ميكرومتر شرائح عرضية من MVN.ثم استخدم ماصة بلاستيكية مشذبة لنقل شرائح الأنسجة إلى قرص ورقي مُنسج من ACSF في درجة حرارة 25 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة على الأقل. لخلية كاملة من التصحيح الكهربائي، أولا سحب ماصات صغيرة مع المقاومة النهائية التي سوف تتراوح بين ثلاثة إلى خمسة أومس ميجا عندما مليئة حل داخلي القائم على البوتاسيوم ووضعها في الحمام. للحصول على تسجيلات المشبك التصحيح الخلية الكاملة من الخلايا العصبية الفردية في MVN، نقل شريحة نسيج واحد من غرفة الحضانة إلى غرفة تسجيل مجموعة الكهربائية القياسية، واستخدام خيط النايلون على الوزن على شكل يو لتأمين شريحة.باستمرار غمر غرفة التسجيل مع ACSF الغازية في 25 درجة مئوية بمعدل تدفق من ثلاثة ملليلتر في الدقيقة وملء ماصة صغيرة مع الحل الداخلي. تطبيق كمية صغيرة من الضغط الإيجابي باستخدام ماصة لدفع الحطام بعيدا عن تلميح ماصة. باستخدام هدف أقل قوة، حدد موقع MVN قبل التحول إلى قوة عالية لتحديد موقع الخلايا العصبية الفردية داخل MVN.قبل اختراق الأنسجة مع الماصة، وتطبيق كمية صغيرة من الضغط الإيجابي لدفع الحطام بعيدا عن طرف ماصة، واستخدام المتلاعب الدقيق لتحريك ماص نحو الخلايا العصبية المختارة. وينبغي أن تتشكل غمل صغيرة على غشاء الخلايا العصبية. الافراج عن الضغط الإيجابي، وتطبيق كمية صغيرة من الضغط السلبي.مرة واحدة وقد تم تحقيق ختم واحد أوم جيجا، وتطبيق ضغط سلبي لطيف قصيرة وحادة على حامل ماصة من خلال منفذ شفط لتمزق الغشاء وخلق تكوين الخلية الكاملة. ثم الحصول على كامل الخلية تسجيلات المشبك الحالي وفقا للبروتوكولات القياسية. لتطبيق الضوضاء الستوكاوية والجيوبيدية على الخلايا العصبية نواة الدهليزية الفردية، تعيين مجموعة من السعات من ثلاثة إلى 24 أمبير بيكو لتحديد عتبة الخلايا العصبية ومعدل اطلاق النار ومجموعة من كثافة التحفيز أعلى وانخفاض لتحديد العتبة الحسية.بعد ذلك، حساب متوسط معدل إطلاق النار على مدى فترة 10 ثانية، خلالها سيتم حقن الخطوة الحالية النافرة لكل مستوى حالي فردي. استخدم متوسط قيم معدل إطلاق النار لإنشاء معدل إطلاق مقابل مخطط حالي. ثم إجراء تحليل الانحدار الخطي لتحديد تدرج خط تناسب أفضل لتحديد مكاسب الخلايا العصبية.لا sinusoidal ولا الضوضاء العشوائية التغييرات معدلات الريحان اطلاق النار من الخلايا العصبية MVN بالمقارنة مع السيطرة على أي تسجيلات الضوضاء. في هذه التجربة، فإن مستوى الضوضاء المختارة من 6 أمبير بيكو هو عتبة فرعية، كما يمكن ملاحظة أن متوسط معدل إطلاق النار يبدأ في الزيادة من عتبة تجريبية من 12 أمبير بيكو. وقد تم تحديد هذه العتبة بموضوعية عن طريق تجميع مستويات التحفيز فوق العتبة التجريبية وتحتها.تم تقييم اكتساب الخلايا العصبية من خلال إخضاع الخلايا العصبية لمجموعة من الخطوات الحالية من الصفر إلى 50 أمبير بيكو في 10 زيادات بيكو أمبير مع وبدون ضوضاء. في الواقع، يمكن أن الضوضاء الجيوب الأنفية والستوكاستيك المطبقة على السعات عتبة فرعية من ستة أمبير بيكو تغيير مكسب الخلايا العصبية MVN. يمكن تطبيق المعلمات التحفيز المنشأة على الأعصاب ابتكار الخلايا العصبية الفردية لتوفير محفزات أكثر طبيعية.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Comprehensive Protocol for Manual Segmentation of the Medial Temporal Lobe Structures

بروتوكول الشامل للتجزئة دليل الهياكل الفص الصدغي الإنسي

The present paper describes a comprehensive protocol for manual tracing of the set of brain regions comprising the medial temporal lobe (MTL): amygdala, ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

طريقة بسيطة وغير مكلفة لتحديد الباردة الحساسية والتكيف في الفئران

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Recording Gamma Band Oscillations in Pedunculopontine Nucleus Neurons

تسجيل غاما التذبذبات الفرقة في Pedunculopontine نواة الخلايا العصبية

Synaptic efferents from the PPN are known to modulate the neuronal activity of several intralaminar thalamic regions (e.g., the ...

The Indirect Neuron-astrocyte Coculture Assay: An In Vitro Set-up for the Detailed Investigation of Neuron-glia Interactions

The Indirect Neuron-astrocyte Coculture Assay: An In Vitro Set-up for the Detailed Investigation of Neuron-glia Interactions

وغير المباشرة العصبية نجمية Coculture الفحص: هناك<em&gt; في المختبر</em&gt; مجموعة المتابعة للتحقيق مفصل من التفاعلات العصبية، الدبقية

Proper neuronal development and function is the prerequisite of the developing and the adult brain. However, the mechanisms underlying the highly ...

Assessment of Neuronal Viability Using Fluorescein Diacetate-Propidium Iodide Double Staining in Cerebellar Granule Neuron Culture

تقييم الجدوى العصبية باستخدام فلوريسئين دياسيتات-بروبيديوم يوديد تلطيخ مزدوج في المخيخ الحبيبية الثقافة العصبية

Primary cultured Cerebellar Granule Neurons (CGNs) have been widely used as an in vitro model in neuroscience and neuropharmacology research. However, the ...

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

فحص لقياس نوكلوسيتوبلاسميك النقل في الوقت الحقيقي داخل موتور الخلايا العصبية مثل نسك-34 الخلايا

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

A Microbiomechanical System for Studying Varicosity Formation and Recovery in Central Neuron Axons

نظام ميكروبيوميتشانيكال لدراسة تشكيل فاريكوسيتي والانتعاش في محاور عصبية من الخلايا العصبية المركزية

Axonal varicosities are enlarged structures along the shafts of axons with a high degree of heterogeneity. They are present not only in brains with ...

The Power of Interstimulus Interval for the Assessment of Temporal Processing in Rodents

قوة إينتيرستيمولوس الفاصل الزمني للتقييم لتجهيز الزمانية في القوارض

Temporal processing deficits have been implicated as a potential elemental dimension of higher-level cognitive processes, commonly observed in ...

Stereological Estimation of Cholinergic Fiber Length in the Nucleus Basalis of Meynert of the Mouse Brain

تقدير الألياف الكولينية في النواة باساريس من Meynert من دماغ الفأر

The length of cholinergic or other neuronal axons in various brain regions are often correlated with the specific function of the region. Stereology is a ...

Semi-Quantitative Determination of Dopaminergic Neuron Density in the Substantia Nigra of Rodent Models using Automated Image Analysis

تحديد شبه كمي لكثافة الخلايا العصبية الدوبامين في Substantia Nigra من نماذج القوارض باستخدام تحليل الصورة الآلي

Estimation of the number of dopaminergic neurons in the substantia nigra is a key method in pre-clinical Parkinson's disease research. Currently, unbiased ...