Name: adoptive immunotherapy of inkt cells in glucose-6-phosphate isomerase (g6pi)-induced ra mice
Uploaded: 2020-01-31T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice at JoVE.com

تم دعم دراستنا من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (NSFC) (81771755) ، والكليات والجامعة العلمية والتكنولوجية مشروع البحوث الرئيسية في مقاطعة خبى (ZD2017009) ومختبر الحيوان من مركز التجارب الطبية ، جامعة خبى. ونحن ممتنون لدعمهم.

كانت جميع الفئران التجريبية (150 في المجموع) من الذكور الأصحاء DBA/1 الفئران، 6-8 أسابيع من العمر (20.0 ± 1.5 غرام)، تربى في بيئة محددة خالية من مسببات الأمراض (SPF). لا توجد معاملة خاصة قبل النمذجة. تم تقسيم التجربة إلى مجموعة تحكم صحية (15 فأرًا) ومجموعة تحكم نموذجية (15 فأرًا) ومجموعة علاج بالخلايا (55 فأ?...

<ol>
	<li>Tob&#243;n, G. J., Youinou, P., Saraux, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+environment,+geo-epidemiology,+and+autoimmune+disease:+Rheumatoid+arthritis.">The environment, geo-epidemiology, and autoimmune disease: Rheumatoid arthritis.</a> Autoimmunity Reviews. 35 (1), 0 (2010).</li><li>Cross, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+burden+of+rheumatoid+arthritis:+estimates+from+the+Global+Burden+of+Disease+2010+study.">The global burden of rheumatoid arthritis: estimates from the Global Burden of Disease 2010 study.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 73 (7), 1316-1322 (2014).</li><li>Kanashiro, A., Bassi, G. S., Queir&#243;z Cunha, F. D., Ulloa, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+neuroimunomodulation+to+bioelectronic+treatment+of+rheumatoid+arthritis.">From neuroimunomodulation to bioelectronic treatment of rheumatoid arthritis.</a> Bioelectronics in Medicine. 1 (2), 151-165 (2018).</li><li>Brennan, P. J., Brigl, M., Brenner, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invariant+natural+killer+T+cells:+an+innate+activation+scheme+linked+to+diverse+effector+functions.">Invariant natural killer T cells: an innate activation scheme linked to diverse effector functions.</a> Nature Reviews Immunology. 13 (2), 101-117 (2013).</li><li>Bianca, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unraveling+Natural+Killer+T-Cells+Development.">Unraveling Natural Killer T-Cells Development.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1950 (2018).</li><li>Mitsuo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+CD161+CD8++T+cells+in+the+peripheral+blood+of+patients+suffering+from+rheumatic+diseases.">Decreased CD161+CD8+ T cells in the peripheral blood of patients suffering from rheumatic diseases.</a> Rheumatology. 45 (12), 1477-1484 (2006).</li><li>Miellot, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+invariant+NK+T+cells+protects+against+experimental+rheumatoid+arthritis+by+an+IL-10-dependent+pathway.">Activation of invariant NK T cells protects against experimental rheumatoid arthritis by an IL-10-dependent pathway.</a> European Journal of Immunology. 35 (12), 3704-3713 (2005).</li><li>Miellot-Gafsou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+activation+of+invariant+natural+killer+T+cells+in+a+rheumatoid+arthritis+model+and+application+to+disease+treatment.">Early activation of invariant natural killer T cells in a rheumatoid arthritis model and application to disease treatment.</a> Immunology. 130 (2), 296-306 (2010).</li><li>Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+invariant+natural+killer+t-cell+deficiency+in+inflammatory+arthritis.">Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).</li><li>Ming, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+on+immunoregulation+of+iNKT+cells+in+RA+by+novel+synthetic+immunostimulator+CH1b.">Effects on immunoregulation of iNKT cells in RA by novel synthetic immunostimulator CH1b.</a> Chinese Journal of Immunology. 32 (02), 218-222 (2016).</li><li>Ming, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+correlation+between+the+percentage+of+iNKT+cells+and+the+ratio+of+IFN-&#947;/IL-4+in+patients+with+rheumatoid+arthritis.">Study of the correlation between the percentage of iNKT cells and the ratio of IFN-&#947;/IL-4 in patients with rheumatoid arthritis.</a> Chinese Journal of Microbiology Immunology. 35 (3), 213-218 (2015).</li><li>Sharif, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+natural+killer+T+cells+by+&#945;-galactosylceramide+treatment+prevents+the+onset+and+recurrence+of+autoimmune+Type+1+diabetes.">Activation of natural killer T cells by &#945;-galactosylceramide treatment prevents the onset and recurrence of autoimmune Type 1 diabetes.</a> Nature Medicine. 7, 1057-1062 (2010).</li><li>Gapin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+invariant+natural+killer+T+cells.">Development of invariant natural killer T cells.</a> Current Opinion in Immunology. 39, 68-74 (2016).</li><li>Kwon, D. I., Lee, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+Differentiation+Program+of+Invariant+Natural+Killer+T+Cells.">Lineage Differentiation Program of Invariant Natural Killer T Cells.</a> Immune Network. 17 (6), (2017).</li><li>Thapa, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+differentiation+of+ROR-&#947;t+expressing+iNKT17+cells+is+orchestrated+by+Runx1.">The differentiation of ROR-&#947;t expressing iNKT17 cells is orchestrated by Runx1.</a> Scientific Reports. 7 (1), 7018 (2017).</li><li>Schurgers, E., Billiau, A., Matthys, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-induced+arthritis+as+an+animal+model+for+rheumatoid+arthritis:+focuson+interferon-&#947;.">Collagen-induced arthritis as an animal model for rheumatoid arthritis: focuson interferon-&#947;.</a> Interferon Cytokine Research. 31 (12), 917-926 (2011).</li><li>Van Haalen, H. G. M., Severens, J. L., Tran-Duy, A., Boonen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+cost-effectiveness+A+systematic+review+and+stepwise+approach+for+selecting+a+transferable+health+economic+evaluation+rheumatoid+arthritis.">How cost-effectiveness A systematic review and stepwise approach for selecting a transferable health economic evaluation rheumatoid arthritis.</a> Pharmacoeconomics. 32 (5), 429-442 (2014).</li><li>Schubert, D., Maier, B., Morawietz, L., Krenn, V., Kamradt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+T+cell-dependent+peripheral+polyarthritis+in+genetically+unaltered+mice.">Immunization with glucose-6-phosphate isomerase induces T cell-dependent peripheral polyarthritis in genetically unaltered mice.</a> Journal of Immunology. 172, 4503-4509 (2004).</li><li>Bockermann, R., Schubert, D., Kamradt, T., Holmdahl, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+a+B-cell-dependent+chronic+arthritis+with+glucose-6-phosphate+isomerase.">Induction of a B-cell-dependent chronic arthritis with glucose-6-phosphate isomerase.</a> Arthritis Research, Therapy. 7, 131613-131624 (2005).</li><li>Kamradt, T., Schubert, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+and+clinical+implications+of+G6PI+in+experimental+models+of+rheumatoid+arthritis.">The role and clinical implications of G6PI in experimental models of rheumatoid arthritis.</a> Arthritis Research, Therapy. 7, 20-28 (2005).</li><li>Horikoshi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Invariant+NKT+Cells+with+Glycolipid+Ligand+&#945;-Galactosylceramide+Ameliorates+Glucose-6-Phosphate+Isomerase+Peptide-Induced+Arthritis.">Activation of Invariant NKT Cells with Glycolipid Ligand &#945;-Galactosylceramide Ameliorates Glucose-6-Phosphate Isomerase Peptide-Induced Arthritis.</a> PlosOne. 7 (12), 51215 (2012).</li><li>Zhang, X. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+mixed+peptides+derived+from+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+rheumatoid+arthritis+in+DBA+/1+mice.">Immunization with mixed peptides derived from glucose-6-phosphate isomerase induces rheumatoid arthritis in DBA /1 mice.</a> Chinese Journal of Pathophysiology. 32 (3), 569-576 (2016).</li><li>Motohashi, S., Nakayama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invariant+natural+killer+T+cell-based+immunotherapy+for+cancer.">Invariant natural killer T cell-based immunotherapy for cancer.</a> Immunotherapy. 1 (1), 73 (2017).</li><li>Jung, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+requirement+of+natural+killer+T-cells+in+tolerogenic+APCs-mediated+suppression+of+collagen-induced+arthritis.">The requirement of natural killer T-cells in tolerogenic APCs-mediated suppression of collagen-induced arthritis.</a> Experimental and Molecular Medicine. 42 (8), 547-554 (2010).</li><li>Luc, V. K., Lan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+Potential+of+Invariant+Natural+Killer+T+Cells+in+Autoimmunity.">Therapeutic Potential of Invariant Natural Killer T Cells in Autoimmunity.</a> Frontiers in Immunology. 9, 519-526 (2018).</li><li>Chiba, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+collagen-induced+arthritis+by+natural+killer+T+cell+activation+with+OCH,+a+sphingosine-truncated+analog+of+&#945;-galactosylceramide.">Suppression of collagen-induced arthritis by natural killer T cell activation with OCH, a sphingosine-truncated analog of &#945;-galactosylceramide.</a> Arthritis, Rheumatism. 50 (1), 305-313 (2004).</li><li>Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+invariant+natural+killer+t-cell+deficiency+in+inflammatory+arthritis.">Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).</li><li>Bruns, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+an+immunodominant+self-peptide+derived+from+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+arthritis+in+DBA/1+mice.">Immunization with an immunodominant self-peptide derived from glucose-6-phosphate isomerase induces arthritis in DBA/1 mice.</a> Arthritis Research, Therapy. 11 (4), (2009).</li><li>Parietti, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rituximab+treatment+overcomes+reduction+of+regulatory+iNKT+cells+in+patients+with+rheumatoid+arthritis.">Rituximab treatment overcomes reduction of regulatory iNKT cells in patients with rheumatoid arthritis.</a> Clinical Immunology. 134 (3), 331-339 (2010).</li><li>Yoshida, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+mechanism(s)+of+the+inhibition+of+disease+progression+by+combination+treatment+with+fingolimod+plus+pathogenic+antigen+in+a+glucose-6-phosphate+isomerase+peptide-induced+arthritis+mouse+model.">Functional mechanism(s) of the inhibition of disease progression by combination treatment with fingolimod plus pathogenic antigen in a glucose-6-phosphate isomerase peptide-induced arthritis mouse model.</a> Biological, Pharmaceutical Bulletin. 38 (8), 1120-1125 (2015).</li><li>Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+adoptive+immunotherapy+on+rheumatoid+arthritis+with+Thymus-derived+invariant+natural+killer+T+cells.">Study of the adoptive immunotherapy on rheumatoid arthritis with Thymus-derived invariant natural killer T cells.</a> International Immunopharmacology. 67, 427-440 (2019).</li></ol>

خلايا iNKT هي خلايا T خاصة تسد المناعة الفطرية والتكيفية ويتم تطويرها بشكل رئيسي من CD4++/ CD8+ thymocytes. خلايا iNKT لديها وظائف متنوعة المناعة التنظيمية وتتفاعل مع الخلايا المناعية الأخرى عن طريق الاتصال المباشر وإفراز السيتوكينات المختلفة23، مما يؤثر على الخلا...

التهاب المفاصل الروماتويدي (RA) هو مرض المناعة الذاتية التي تتميز المزمنة، الغازية التدريجيمع 0.5-1% الإصابة1،2. ويعزى الإمراض الكامنة إلى الانتشار غير الطبيعي للخلايا CD4+ و CD8+ T ، التي تتجلى في زيادة في نسبة CD4+IFN- ο + وCD4+IL - 17A+ الخلايا التائية ، وانخفاض عدد CD4+IL - 4+ وCD4+CD25+FoxP3+ الخلايا التائية. لذلك ، يتم زيادة إفراز السيتوكينات الالتهابية ، ويدمر التفاعل الالتهابي المفرط التوازن الأصلي ووظيفة التسامح في الجهاز المناعي في الجسم. وعلاوة على ذلك، فإن الخلايا اللمفاوية T المساعد (Th) 1 الخلايا التي تخترق المفصل تفاقم الاستجابة الالتهابية وتلف المفاصل. لذلك ، فإن تثبيط الاستجابة الالتهابية المفرطة واستعادة التسامح المناعي والتوازن المناعي هي المفتاح لعلاج RA3،4.
تحتوي خلايا iNKT على كل من وظائف وخصائص الخلية NK وT. خلايا iNKT تأوي مستقبلات خلايا T (TCR) مميزة وثابتة (TCR) α-chain مع TCR α-chain محدود 5وتتعرف على مستضد الجليكوبيد الذي تقدمه الفئة الرئيسية من المعقدة الهيستونتيفية (MHC) I جزيء CD1d على سطح الخلايا التي تقدم المستضد. اكتشف ميتسو وآخرون6 عددًا كبيرًا من خلايا iNKT وعيوبوظيفية في العديد من أمراض المناعة الذاتية، بما في ذلك RA. Aurore وآخرون7 أظهرت أن خلايا iNKT لها تأثير إيجابي على الحفاظ على التسامح المناعة الذاتية وأنه عندما يتم استعادة عدد ووظيفة الخلايا iNKT، يتم تخفيف المرض. وبالإضافة إلى ذلك، وجد ميللوت - غاسو وآخرون8 أن خلايا iNKT لم تقم بإلغاء المرض فحسب، بل زادت أيضا ً من تطور المرض. تشير هذه النتائج المتناقضة إلى أن خلايا iNKT هي خلايا T غير متجانسة ، ويمكن عكس وظيفة المجموعات الفرعية المختلفة. في دراسة سريرية لجمهورية راك، تواتر خلايا iNKT ترتبط مع درجة نشاط المرض9. وأكدت النتائج أيضا أن تواتر iNKT انخفض في مرضى RA، وعدد CD4+IFN-ο+ مجموعات الخلايا T زاد، ومستويات إفراز السيتوكينات الالتهابية IFN-α وTNF-α زيادة10،11. بالإضافة إلى ذلك ، حقق شريف وآخرون12 في مرض السكري من النوع 1 (T1D) ووجدوا أن التسريب الانتقائي لخلايا iNKT أدى إلى زيادة تنظيم التعبير عن السيتوكين الالتهابي IL-4 ، وحافظ على التسامح المناعي ، ومنع تطور مرض السكري من النوع 1. ولذلك، ضخ بالتبني من خلايا iNKT محددة أو التنشيط المستهدف للخلايا iNKT يزيد من مستوى خلايا iNKT في مرضى RA، والتي يمكن أن تكون اختراقا في العلاج RA.
العلاج المناعي الخلوي حاليا من اهتمام كبير، وقد استخدمت على نطاق واسع في علاج السرطان. ومع ذلك، فإن خلايا iNKT هي خلايا نادرة وغير متجانسة للمناعة (فقط 0.3٪ من العدد الإجمالي لمركبات ثنائي الفينيل متعدد البروم)13، مما يحد من التطبيقات السريرية المحتملة. وتنقسم هذه الخلايا أساسا إلى ثلاث مجموعات فرعية: 1) خلايا iNKT1، التي لديها تعبير عال من بروتين البلعوم الببروني بالإصبع الزنك (PLZF) وعامل النسخ T-box (T-bet)؛ 2) خلايا iNKT2 مع التعبير المتوسط من PLZF وجاتا البروتين ملزمة 3 (GATA3)؛ 3) iNKT17 الخلايا مع انخفاض التعبير عن PLZF والرتينويد ذات الصلة مستقبلات نووية يتيمة (ROR) - αt التي تفرز IFN-ο، IL-4، وIL-1714. خلايا iNKT المنشطة تفرز Th1 و Th2 و Th17 مثل السيتوكينات ، والتي تحدد الآثار المناعية المختلفة لخلايا iNKT15. تختلف الآثار المناعية والعلاجالمناعي للتنشيط المحدد لمختلف الفئات السكانية الفرعية لخلايا iNKT. لذلك ، فإن اختيار الأنماط الظاهرية المحددة لخلايا iNKT (بشكل رئيسي iNKT2) مع وظائف مضادة للالتهابات لتنظيم الاستجابة المناعية للجسم يمكن أن يصحح عدم التوازن المناعي والاضطرابات المناعية في RA.
إنشاء نموذج مثالي للحيوانات ذات أهمية كبيرة لعلاج ودراسة الإمراض RA. في الوقت الحاضر ، تشمل النماذج الحيوانية الأكثر استخدامًا ونضجًا التهاب المفاصل الناجم عن الكولاجين ، والتهاب المفاصل المعقّد ، والتهاب المفاصل الناجم عن الزيموسان ، والتهاب المفاصل الناجم عن البوليسكاريد16-17. ومع ذلك ، لا يوجد نموذج يمكن أن يحاكي بشكل كامل جميع ميزات RA الإنسان. النوع الثاني من التهاب المفاصل الناجم عن الكولاجين (CIA) هو نموذج التهاب المفاصل الكلاسيكي. وكالة المخابرات المركزية هو الناجم عن تحصين الفئران مع النوع الثاني الكولاجين محددة الأجسام المضادة أحادية النسيلة، مما يعكس الاعتماد على الأجسام المضادة لهذا النموذج المرض. وصف Benurs وآخرون نموذجًا مع استجابة مناعية جهازية لـ glucose-6-phosphate isomerase (G6PI) ، والذي يحفز التهاب المفاصل المتماثل المحيطي في سلالات الماوس الحساسة18،19. في هذا النموذج ، يعتمد تطور التهاب المفاصل على الخلايا التائية والخلايا B والمناعة الفطرية18و19و20. وجد Horikoshi21 أن نماذج RA الناتجة عن تحصين فئران DBA/1 بشظايا البولي ببتيد G6PI هي أكثر تشابهًا مع RA البشري من حيث خلايا CD4+ T والسيتوكينات (أي IL-6 و TNF-α) من نماذج وكالة الاستخبارات المركزية. من أجل زيادة التأثير المحفز على موقع التعرف على TCR ، تم استخدام شظايا البولي ببتيد المختلطة من G6PI (hGPI325-339 و hGPI469-483) لتحصين فئران DBA/1 لبناء نموذج الماوس RA. يمكن أن يكون معدل نجاح هذا النهج مرتفعًا لأن hGPI325-339 و hGPI469-483 هما مناعيان مهيمنان لاستجابات الخلايا التُوتية المقيدة I-A. لذلك ، يمكن لهذا النموذج محاكاة الانتشار المفرط لخلايا CD4+ T وعيوب خلايا iNKT في مرضى RA22. وضعت الأبحاث الأساسية لعلم الأمراض المناعية RA الأساس لمزيد من التحقيق المتعمق.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 Mouse Anti-PLZF</td>
			<td>BD</td>
			<td>563490</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PE MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-048-801</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Columns</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>MS</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryogenic Centrifuge</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>Allegra&#174; X-15R</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DiR</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>D12731</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding Center</td>
			<td>Tianjin Aviation Electromechanical Co., Ltd.</td>
			<td>BMJ-1</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Hamster Anti-Mouse TCR &#946; Chain</td>
			<td>BD</td>
			<td>553170</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometer</td>
			<td>BD</td>
			<td>Accuri C6</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freund&#39;s complete adjuvant</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F5881</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hGPI325-339 (IWYINCFGCETHAML)</td>
			<td>Karebay Biochem</td>
			<td>18062202</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hGPI469-483 (EGNRPTNSIVFTKLT)</td>
			<td>Karebay Biochem</td>
			<td>18062203</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In Vivo Imaging System</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>caliper IVIS lumina II</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ionomycin Calcium</td>
			<td>Cayman</td>
			<td>10004974</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KRN7000</td>
			<td>AdipoGen</td>
			<td>AG-CN2-0013</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse CD1d Tetramer-PE</td>
			<td>MBL</td>
			<td>TS-MCD-1</td>
			<td>Japan</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse percoll</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P8620</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Olympus-II</td>
			<td>Japan</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-CyTM5.5 Mouse anti-ROR-&#978;t</td>
			<td>BD</td>
			<td>562683</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-CyTM5.5 Mouse anti-T-bet</td>
			<td>BD</td>
			<td>561316</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pertussis toxin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7208</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phorbol esters</td>
			<td>Cayman</td>
			<td>10008014</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red Blood Cell Lysis Buffer</td>
			<td>BD</td>
			<td>555899</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>01-100-1ACS</td>
			<td>Israel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Th1/Th2/Th17 cytokines kit</td>
			<td>BD</td>
			<td>560485</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultramicrotome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica EM UC6</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

adoptive immunotherapy of inkt cells in glucose-6-phosphate isomerase (g6pi)-induced ra mice

التهاب المفاصل الروماتويدي (RA) هو مرض المناعة الذاتية الالتهابي المزمن المعقد. يرتبط الإمراض للمرض بخلايا T (iNKT) القاتلة الطبيعية الثابتة. المرضى الذين يعانون من RA النشطة تقديم عدد أقل من الخلايا iNKT, وظيفة الخلية المعيبة, والاستقطاب المفرط من Th1. في هذه الدراسة، تم إنشاء نموذج الحيوانات RA باستخدام خليط من hGPI325-339 وhGPI469-483 الببتيدات. تم الحصول على خلايا iNKT عن طريق الاستقراء في الجسم الحي وتنقية المختبر، تليها ضخ في الفئران RA للعلاج المناعي بالتبني. كشف نظام التصوير في الجسم الحي (IVIS) تتبع أن خلايا iNKT كانت موزعة بشكل رئيسي في الطحال والكبد. في اليوم 12 بعد العلاج بالخلايا ، تباطأ تطور المرض بشكل كبير ، وتم تخفيف الأعراض السريرية ، وزيادة وفرة خلايا iNKT في الغدة الصعترية ، وانخفضت نسبة iNKT1 في الغدة الصعترية ، وانخفضت مستويات TNF-α ، IFN-α ، وIL-6 في انخفض المصل. العلاج المناعي بالتبني من خلايا iNKT استعادة توازن الخلايا المناعية وتصحيح الالتهاب المفرط في الجسم.

درجة مؤشر التهاب المفاصل وسمك مخلب زاد بعد النمذجة. بالمقارنة مع مجموعة التحكم ، بدأت أقدام مجموعة نموذج RA تظهر تورمًا أحمر في 6 أيام بعد النمذجة ، مع تفاقم تدريجي. في 14 يوما، بلغ التورم الأحمر في مفصل الكاحل ذروته، يليه تخفيف تدريجي. سمك مخلب تغيرت بالمثل(P < 0.05)(الشكل 1).<...

Watch this Scientific Journal Video about Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice at JoVE.com

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

يستخدم هذا البروتوكول الببتيدات المختلطة G6PI لبناء نماذج التهاب المفاصل الروماتويدي التي هي أقرب إلى أن من التهاب المفاصل الروماتويدي الإنسان في CD4+ الخلايا التائية وسيتوكينات. تم الحصول على الخلايا التائية القاتلة الطبيعية عالية النقاء (iNKT2 بشكل رئيسي) مع أنماط ظاهرية ووظائف محددة عن طريق الاستقراء في الجسم الحي والتنقية المختبرية للعلاج المناعي بالتبني.

العلاج المناعي بالتبني من خلايا iNKT في الجلوكوز-6-الفوسفات Isomerase (G6PI) الناجمة عن الفئران RA

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

يصف البروتوكول أسلوبًا لإنشاء نموذج RA. معدل نجاحها هو أكثر من 93 في المئة والأمراض لها هو يعتمد على الخلايا التائية، والخلايا B، والمناعة الفطرية، والذي يسمح للباحثين لدراسة أفضل للأمراض من RA من منظور مناعي عالمي. ثم نستخدم خلايا INKT مع تأثيرات المناعة لعلاجها.خلايا INKT لها تأثير جيد على العلاج من خلال في إدخال الجسم الحي التي توفر الدعم الأساسي للبيانات للتطبيق السريري للخلايا INKT وتنفجر حقا قيمة التطبيق السريري للخلايا INKT. أكبر ميزة من هذه التكنولوجيا هو أنه من السهل أن تعمل وسهلة لنسخ. وسوف يكون إثبات الإجراء تشن شنغدي، قاو شيانغ، وتشانغ جينغنان، طالب الدراسات العليا من مختبري.للبدء، تزن 1.75 ملليغرام من كل من HGPI325 إلى 339 وGGPI469 إلى 483 شظايا وتذوب في 5.25 ملليلتر من 4 درجات مئوية ثلاثة مائية مقطرة. حل كامل فرويند 'sDjuvant في حمام الماء 50 درجة مئوية. ارسم 5.25 ملليلتر في أنبوب طرد مركزي آخر 10 ملليلتر وبرّده للاستخدام.وضع خليط من حل HG6PI وكامل Freund في حل Adjuvant في وحدة استحلاب الاصطناعي مع اثنين من الحقن الزجاجية، متصلة. في حمام الثلج، ودفع حقنة في سرعة ثابتة وتواتر من عشر إلى عشرين مرة في الدقيقة الواحدة مستحلب تماما محلول ببتيد خليط واستكمال حل فرويند في Adjuvant. ثم، والحفاظ على قطرات مستحلب في الماء لمدة عشر دقائق.المقبل، حقن 150 ميكرولترات من HG6PIs مستحلب في جذر ذيل الماوس تحت الجلد. على الفور وبعد 48 ساعة، حقن 200 ملليغرام من السم السعال الديكي في الماوس intraperineally. الآن، حقن العادية DBA1 الماوس intraperineally دون gausser في جرعة من 0.1 ملليغرام لكل كيلوغرام من وزن الجسم.بعد ثلاثة أيام من النمذجة ، وبعد التخدير ، وعزل الطحال من الماوس. إعداد تعليق خلية واحدة عن طريق قطع وطحن الطحال في غربال شبكة 200. اغسل تعليق الخلية مع برنامج تلفزيوني.أجهزة الطرد المركزي في 200 مرة ز لمدة خمس دقائق والتخلص من الفائق. إعادة تعليق الخلايا مع ملليلتر واحد من محلول أنسجة الدم كله. إضافة ثلاثة ملليلترات من الفوفوفية الفارمة المتوسطة.ثم الطرد المركزي الخلايا لمدة 20 دقيقة في 300 مرة ز في درجة حرارة الغرفة. لتنقية خلايا INKT، resuspend 10 إلى الخلايا السابعة مع 100 ميكرولترات من أربع درجات مئوية PBS، إضافة 10 ميكرولتر من ألفا غاوسر تحميل CD1 tetramer PE واحتضان لهم في 4 درجات مئوية لمدة خمس عشرة دقيقة في الظلام. غسل الخلايا مرتين مع برنامج تلفزيوني وإعادة تعليقها في 80 ميكرولترس من برنامج تلفزيوني.إضافة 20 ميكرولترات من الميكروبات المضادة للPE واحتضانها في أربع درجات مئوية لمدة عشرين دقيقة في الظلام. غسلها مرتين مع برنامج تلفزيوني وإعادة تعليق الخلايا مع 500 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني. ضع عمود الفرز في المجال المغناطيسي لمزّر MACS وشطفه بـ 500 ميكرولترات من PBS.إضافة تعليق الخلية المعدة إلى عمود الفرز، وجمع تدفق من خلال، وشطف ثلاث مرات مع المخزن المؤقت برنامج تلفزيوني. إزالة المجال المغناطيسي وإضافة ملليلتر واحد من المخزن المؤقت PBS إلى عمود الفرز. دفع بسرعة المكبس في ضغط مستمر لدفع الخلايا المسمى في أنبوب جمع.والحصول على خلايا INKT المنقىة. عد مع عداد خلية تلقائي. لتحديد النمط الظاهري للخلية INKT، أولاً، خذ مرة واحدة عشرة إلى الخلايا السادسة من خلايا INKT المنقية وإعادة وضعها في 50 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني.إضافة 0.5 ميكرولترات من ألفا غاوسر PE CD1 tetramer، أو 10 ميكرولترات من FITC TCR بيتا في أنبوب التحكم إيجابية واحدة. إضافة 0.5 ميكرولترات من ألفا غاوسر PE CD1 tetramer، إضافة 10 ميكرولترات من FITC TCR بيتا في أنبوب عينة. احتضانهم في أربع درجات مئوية لمدة ثلاثين دقيقة في الظلام.بعد ذلك، قم بغسل الخلايا في برنامج تلفزيوني ثم الطرد المركزي بمعدل 200 مرة في g لمدة خمس دقائق. تجاهل supernatant وإضافة ملليلتر واحد من حل عمل التثبيت FoxP3. و حضن الخلايا لمدة 45 دقيقة بأربع درجات مئوية في الظلامثم، إضافة ملليلتر واحد من 1x حل العمل permeabilization والطرد المركزي الخلايا في 500 مرة ز في درجة حرارة الغرفة لمدة خمس دقائق. تجاهل المُندفع. إضافة ميكرولتر واحد من AlexaFluor 647 ماوس لمكافحة PLZF وميكر واحد من PerCP Cy5.5 ماوس مضاد للتبيت واحتضان لمدة ثلاثين دقيقة في درجة حرارة الغرفة في الظلام.بعد ذلك، إضافة اثنين من ميكرولترات من حل العمل العازلة permeabilization والطرد المركزي في 200 مرة ز لمدة خمس دقائق للتنظيف. تجاهل المُندفع. إعادة تعليق الخلايا في 500 ميكرولترات من برنامج تلفزيوني وقياس عن طريق تدفق القياسات.في هذه الدراسة، بالمقارنة مع مجموعة التحكم، بدأت أصابع مجموعة نموذج RA لإظهار تورم أحمر بعد النمذجة مع تفاقم تدريجي. في 14 يوما، وتورم أحمر في مفصل الكاحل ذروتها تليها الإغاثة التدريجي. تظهر النتائج المرضية أن درجة تسلل الخلايا الالتهابية في أنسجة الكاحل الزليلية للفئران نموذج RA كانت مختلفة في مراحل مختلفة.حدث التهاب الذروة في اليوم 14 آخر النمذجة. في المجموعة النموذجية RA، زادت مستويات المصل من السيتوكينات الموالية للالتهابات بشكل كبير 11 يوما و 14 يوما بعد النمذجة. في حين انخفض السيتوكينات المضادة للالتهابات بشكل كبير.هذا الرقم يظهر أن معدل INKT2 في الفئران العادية كان حوالي خمسة في المئة. وكان معدل INK2 حوالي 82 في المئة بعد في تحريض الجسم الحي. وكان معدل INK2 أكثر من 92 في المئة بعد تنقية أجهزة ماكينتوش.هنا نعرض طريقة مستحلب بوليبتيد الرئيسية التي نراها في جمهورية أرمينيا. يتم الاحتفاظ قطرات مستحلب في الماء لمدة 10 دقائق. النتائج تتفرق هذا البروتوكول هو وظيفة إضافية جديدة لعلاج خلايا NKT RA التي تم رفعها.التي يمكن تطبيقها نحو العلاج المناعي الخلوي أو أمراض المناعة الذاتية الأخرى والأورام. هذا النموذج يمكن أن تحفز الانتشار الشامل للخلايا CD4 T وNKT العجز في الخلايا في المرضى RA, الذي يضع الأساس لدراسة متعمقة للمسارات المناعية RA. في هذا البروتوكول، يتم حقن السم السعال الديكي interperitoneally أثناء النمذجة.يرجى ارتداء الملابس التجريبية والقفازات التي يمكن التخلص منها. وتحمل جميع معايير العملية وذلك لمنع طعنة التهابات.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

الإنبثاث التجريبية وCTL المناعي نقل بالتبني النموذجي ماوس

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

Preparation of Tumor Antigen-loaded Mature Dendritic Cells for Immunotherapy

إعداد ورم مستضد محملة الخلايا الجذعية الناضجة لعلاج مناعي

While clinical studies have established that antigen-loaded DC vaccines are safe and promising therapy for tumors 1, their clinical efficacy remains to be ...

Accelerated Type 1 Diabetes Induction in Mice by Adoptive Transfer of Diabetogenic CD4+ T Cells

المعجل نوع 1 الحث السكري في الفئران عن طريق نقل بالتبني من CD4 + T خلايا سكري

The nonobese diabetic (NOD) mouse spontaneously develops autoimmune diabetes after 12 weeks of age and is the most extensively studied animal model of ...

Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice

الخلايا الجذعية داخل الوعاء اللمفي والتطعيم في الفئران

Vaccines are typically injected subcutaneously or intramuscularly for stimulation of immune responses. The success of this requires efficient drainage of ...

Assessing the Development of Murine Plasmacytoid Dendritic Cells in Peyer's Patches Using Adoptive Transfer of Hematopoietic Progenitors

تقييم تطوير خلايا الفئران الجذعية بلازماوية في بقع باير طريق نقل بالتبني من أسلاف المكونة للدم

This protocol details a method to analyze the ability of purified hematopoietic progenitors to generate plasmacytoid dendritic cells (pDC) in intestinal ...

Generation of CAR T Cells for Adoptive Therapy in the Context of Glioblastoma Standard of Care

جيل من الخلايا T CAR للعلاج بالتبني في سياق ورم أرومي دبقي مستوى الرعاية

Adoptive T cell immunotherapy offers a promising strategy for specifically targeting and eliminating malignant gliomas. T cells can be engineered ex vivo ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

تحريض الفئران المعوية التهاب عن طريق نقل بالتبني من المستجيب CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; عالية</sup&gt; خلايا T في الفئران العوز المناعي

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

التعريفي للشلل وإصابة النظام المرئي في الفئران التي تي الخلايا المحددة للبصري المياليني أقوابورين أوتوانتيجين-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

جيل من التمييزية مونوكلونل البشرية من خلايا نادرة محددة مستضد ب المتداولة في الدم

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the ...

Stereotactic Adoptive Transfer of Cytotoxic Immune Cells in Murine Models of Orthotopic Human Glioblastoma Multiforme Xenografts

نقل الخلايا المناعية السامة للخلايا في نماذج مورين لتكثيفها عديدة الأشكال جليوبلاستوما أورثوتوبيك الإنسان التبني المناظير باستخدام الأشعة

Glioblastoma multiforme (GBM), the most frequent and aggressive primary brain cancer in adults, is generally associated with a poor prognosis, and scarce ...