Name: adoptive immunotherapy of inkt cells in glucose-6-phosphate isomerase (g6pi)-induced ra mice
Uploaded: 2020-01-31T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice at JoVE.com

我々の研究は、中国自然科学財団(NSFC)(81771755)、河北省の大学と大学の科学技術主要研究プロジェクト(ZD2017009)、河北大学動物実験センターによって支援されました。私たちは彼らのサポートに感謝しています。

全ての実験マウス(合計150匹)は健常な雄DBA/1マウス、6~8週齢(20.0±1.5g)で、特異的病原体フリー(SPF)環境で飼育した。モデリング前に特別扱いはありません。実験は、健常対照群(15匹)、モデル対照群(15匹)、及び細胞療法群(55匹のマウス)に分けた。この研究は、ヘバイ大学動物福祉倫理委員会によって承認されました。
1. 疾患モデルの構築
<ol><li>RA動物モデルの複製<ol>
<li>h...

<ol>
	<li>Tob&#243;n, G. J., Youinou, P., Saraux, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+environment,+geo-epidemiology,+and+autoimmune+disease:+Rheumatoid+arthritis.">The environment, geo-epidemiology, and autoimmune disease: Rheumatoid arthritis.</a> Autoimmunity Reviews. 35 (1), 0 (2010).</li><li>Cross, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+burden+of+rheumatoid+arthritis:+estimates+from+the+Global+Burden+of+Disease+2010+study.">The global burden of rheumatoid arthritis: estimates from the Global Burden of Disease 2010 study.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 73 (7), 1316-1322 (2014).</li><li>Kanashiro, A., Bassi, G. S., Queir&#243;z Cunha, F. D., Ulloa, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+neuroimunomodulation+to+bioelectronic+treatment+of+rheumatoid+arthritis.">From neuroimunomodulation to bioelectronic treatment of rheumatoid arthritis.</a> Bioelectronics in Medicine. 1 (2), 151-165 (2018).</li><li>Brennan, P. J., Brigl, M., Brenner, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invariant+natural+killer+T+cells:+an+innate+activation+scheme+linked+to+diverse+effector+functions.">Invariant natural killer T cells: an innate activation scheme linked to diverse effector functions.</a> Nature Reviews Immunology. 13 (2), 101-117 (2013).</li><li>Bianca, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unraveling+Natural+Killer+T-Cells+Development.">Unraveling Natural Killer T-Cells Development.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1950 (2018).</li><li>Mitsuo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+CD161+CD8++T+cells+in+the+peripheral+blood+of+patients+suffering+from+rheumatic+diseases.">Decreased CD161+CD8+ T cells in the peripheral blood of patients suffering from rheumatic diseases.</a> Rheumatology. 45 (12), 1477-1484 (2006).</li><li>Miellot, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+invariant+NK+T+cells+protects+against+experimental+rheumatoid+arthritis+by+an+IL-10-dependent+pathway.">Activation of invariant NK T cells protects against experimental rheumatoid arthritis by an IL-10-dependent pathway.</a> European Journal of Immunology. 35 (12), 3704-3713 (2005).</li><li>Miellot-Gafsou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+activation+of+invariant+natural+killer+T+cells+in+a+rheumatoid+arthritis+model+and+application+to+disease+treatment.">Early activation of invariant natural killer T cells in a rheumatoid arthritis model and application to disease treatment.</a> Immunology. 130 (2), 296-306 (2010).</li><li>Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+invariant+natural+killer+t-cell+deficiency+in+inflammatory+arthritis.">Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).</li><li>Ming, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+on+immunoregulation+of+iNKT+cells+in+RA+by+novel+synthetic+immunostimulator+CH1b.">Effects on immunoregulation of iNKT cells in RA by novel synthetic immunostimulator CH1b.</a> Chinese Journal of Immunology. 32 (02), 218-222 (2016).</li><li>Ming, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+correlation+between+the+percentage+of+iNKT+cells+and+the+ratio+of+IFN-&#947;/IL-4+in+patients+with+rheumatoid+arthritis.">Study of the correlation between the percentage of iNKT cells and the ratio of IFN-&#947;/IL-4 in patients with rheumatoid arthritis.</a> Chinese Journal of Microbiology Immunology. 35 (3), 213-218 (2015).</li><li>Sharif, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+natural+killer+T+cells+by+&#945;-galactosylceramide+treatment+prevents+the+onset+and+recurrence+of+autoimmune+Type+1+diabetes.">Activation of natural killer T cells by &#945;-galactosylceramide treatment prevents the onset and recurrence of autoimmune Type 1 diabetes.</a> Nature Medicine. 7, 1057-1062 (2010).</li><li>Gapin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+invariant+natural+killer+T+cells.">Development of invariant natural killer T cells.</a> Current Opinion in Immunology. 39, 68-74 (2016).</li><li>Kwon, D. I., Lee, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+Differentiation+Program+of+Invariant+Natural+Killer+T+Cells.">Lineage Differentiation Program of Invariant Natural Killer T Cells.</a> Immune Network. 17 (6), (2017).</li><li>Thapa, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+differentiation+of+ROR-&#947;t+expressing+iNKT17+cells+is+orchestrated+by+Runx1.">The differentiation of ROR-&#947;t expressing iNKT17 cells is orchestrated by Runx1.</a> Scientific Reports. 7 (1), 7018 (2017).</li><li>Schurgers, E., Billiau, A., Matthys, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-induced+arthritis+as+an+animal+model+for+rheumatoid+arthritis:+focuson+interferon-&#947;.">Collagen-induced arthritis as an animal model for rheumatoid arthritis: focuson interferon-&#947;.</a> Interferon Cytokine Research. 31 (12), 917-926 (2011).</li><li>Van Haalen, H. G. M., Severens, J. L., Tran-Duy, A., Boonen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+cost-effectiveness+A+systematic+review+and+stepwise+approach+for+selecting+a+transferable+health+economic+evaluation+rheumatoid+arthritis.">How cost-effectiveness A systematic review and stepwise approach for selecting a transferable health economic evaluation rheumatoid arthritis.</a> Pharmacoeconomics. 32 (5), 429-442 (2014).</li><li>Schubert, D., Maier, B., Morawietz, L., Krenn, V., Kamradt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+T+cell-dependent+peripheral+polyarthritis+in+genetically+unaltered+mice.">Immunization with glucose-6-phosphate isomerase induces T cell-dependent peripheral polyarthritis in genetically unaltered mice.</a> Journal of Immunology. 172, 4503-4509 (2004).</li><li>Bockermann, R., Schubert, D., Kamradt, T., Holmdahl, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+a+B-cell-dependent+chronic+arthritis+with+glucose-6-phosphate+isomerase.">Induction of a B-cell-dependent chronic arthritis with glucose-6-phosphate isomerase.</a> Arthritis Research, Therapy. 7, 131613-131624 (2005).</li><li>Kamradt, T., Schubert, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+and+clinical+implications+of+G6PI+in+experimental+models+of+rheumatoid+arthritis.">The role and clinical implications of G6PI in experimental models of rheumatoid arthritis.</a> Arthritis Research, Therapy. 7, 20-28 (2005).</li><li>Horikoshi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Invariant+NKT+Cells+with+Glycolipid+Ligand+&#945;-Galactosylceramide+Ameliorates+Glucose-6-Phosphate+Isomerase+Peptide-Induced+Arthritis.">Activation of Invariant NKT Cells with Glycolipid Ligand &#945;-Galactosylceramide Ameliorates Glucose-6-Phosphate Isomerase Peptide-Induced Arthritis.</a> PlosOne. 7 (12), 51215 (2012).</li><li>Zhang, X. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+mixed+peptides+derived+from+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+rheumatoid+arthritis+in+DBA+/1+mice.">Immunization with mixed peptides derived from glucose-6-phosphate isomerase induces rheumatoid arthritis in DBA /1 mice.</a> Chinese Journal of Pathophysiology. 32 (3), 569-576 (2016).</li><li>Motohashi, S., Nakayama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invariant+natural+killer+T+cell-based+immunotherapy+for+cancer.">Invariant natural killer T cell-based immunotherapy for cancer.</a> Immunotherapy. 1 (1), 73 (2017).</li><li>Jung, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+requirement+of+natural+killer+T-cells+in+tolerogenic+APCs-mediated+suppression+of+collagen-induced+arthritis.">The requirement of natural killer T-cells in tolerogenic APCs-mediated suppression of collagen-induced arthritis.</a> Experimental and Molecular Medicine. 42 (8), 547-554 (2010).</li><li>Luc, V. K., Lan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+Potential+of+Invariant+Natural+Killer+T+Cells+in+Autoimmunity.">Therapeutic Potential of Invariant Natural Killer T Cells in Autoimmunity.</a> Frontiers in Immunology. 9, 519-526 (2018).</li><li>Chiba, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+collagen-induced+arthritis+by+natural+killer+T+cell+activation+with+OCH,+a+sphingosine-truncated+analog+of+&#945;-galactosylceramide.">Suppression of collagen-induced arthritis by natural killer T cell activation with OCH, a sphingosine-truncated analog of &#945;-galactosylceramide.</a> Arthritis, Rheumatism. 50 (1), 305-313 (2004).</li><li>Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+invariant+natural+killer+t-cell+deficiency+in+inflammatory+arthritis.">Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).</li><li>Bruns, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+an+immunodominant+self-peptide+derived+from+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+arthritis+in+DBA/1+mice.">Immunization with an immunodominant self-peptide derived from glucose-6-phosphate isomerase induces arthritis in DBA/1 mice.</a> Arthritis Research, Therapy. 11 (4), (2009).</li><li>Parietti, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rituximab+treatment+overcomes+reduction+of+regulatory+iNKT+cells+in+patients+with+rheumatoid+arthritis.">Rituximab treatment overcomes reduction of regulatory iNKT cells in patients with rheumatoid arthritis.</a> Clinical Immunology. 134 (3), 331-339 (2010).</li><li>Yoshida, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+mechanism(s)+of+the+inhibition+of+disease+progression+by+combination+treatment+with+fingolimod+plus+pathogenic+antigen+in+a+glucose-6-phosphate+isomerase+peptide-induced+arthritis+mouse+model.">Functional mechanism(s) of the inhibition of disease progression by combination treatment with fingolimod plus pathogenic antigen in a glucose-6-phosphate isomerase peptide-induced arthritis mouse model.</a> Biological, Pharmaceutical Bulletin. 38 (8), 1120-1125 (2015).</li><li>Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+adoptive+immunotherapy+on+rheumatoid+arthritis+with+Thymus-derived+invariant+natural+killer+T+cells.">Study of the adoptive immunotherapy on rheumatoid arthritis with Thymus-derived invariant natural killer T cells.</a> International Immunopharmacology. 67, 427-440 (2019).</li></ol>

iNKT細胞は、自然免疫と適応免疫を橋渡しする特殊なT細胞であり、主にCD4++ /CD8+胸腺細胞から開発されています。iNKT細胞は多様な免疫調節機能を有し、異なるサイトカイン23の直接接触および分泌により他の免疫細胞と相互作用し、樹状細胞(DC)、マクロファージ、好中球、B細胞、T細胞、およびNK細胞の分化および発達2<sup ...

慢性関節リウマチ(RA)は、0.5~1%発生率1、2の慢性進行性侵襲を特徴とする自己免疫疾患である。その根底にある病因は自己反応性CD4+およびCD8+T細胞の異常増殖に起因し、CD4+IFN-γ+およびCD4+IL-17A+T細胞の割合の増加、およびCD4+IL-4+ + FoxP3+T細胞の減少した数によって明らかにされる。したがって、炎症性サイトカインの分泌が増加し、過度の炎症反応が身体の免疫系のネイティブバランスおよび耐性機能を破壊する。また、ヘルパーTリンパ球(Th)を関節に浸透させる1細胞は炎症反応や関節損傷を悪化させる。したがって、過剰な炎症反応の阻害と免疫寛容および免疫バランスの回復がRA3の治療の鍵である、4。
iNKT細胞は、NK細胞とT細胞の両方の機能と特性を有する。iNKT細胞には、限定TCRβ鎖レパートリー5を有する異なる不変T細胞受容体(TCR)α鎖を有し、抗原提示細胞の表面に主要組織適合性複合体(MHC)クラスI分子CD1dによって提示される糖脂質抗原を認識する。ミツオら6は、RAを含む多くの自己免疫疾患において多数のiNKT細胞および機能的欠陥を検出した。Aurore et al.7は、iNKT細胞が自己免疫寛容を維持するのにプラスの効果を有し、iNKT細胞の数と機能が回復すると、疾患が緩和されることを実証した。さらに、ミエロット・ガフソウら8は、iNKT細胞が病気を失起しただけでなく、病気の進行を増加させたことを発見した。これらの矛盾した結果は、iNKT細胞が異種T細胞であり、異なるサブセットの機能が逆転する可能性があることを示唆している。RAの臨床研究において、iNKT細胞の頻度は、疾患活性9のスコアと相関した。また、結果は、INKTの頻度がRA患者において減少し、CD4+IFN-γ+T細胞サブセットの数が増加し、炎症性サイトカインIFN-γおよびTNF-αの分泌レベルが10、11増加したことを確認した。さらに、シャリフら12は1型糖尿病(T1D)を調査し、iNKT細胞の選択的注入が炎症性サイトカインIL-4の発現をアップレギュレートし、免疫寛容を維持し、1型糖尿病の発症を妨げた。したがって、特定のiNKT細胞の導入またはiNKT細胞の標的活性化は、RA患者におけるiNKT細胞のレベルを増加させ、RA治療において画期的となり得る。
細胞免疫療法は現在、大きな関心を持っており、癌治療に広く使用されています。しかし、iNKT細胞は稀であり、異種免疫調節細胞(PBMCの総数のわずか0.3%)13であり、潜在的な臨床応用を制限する。これらの細胞は主に3つの亜集団に分けられる:1)iNKT1細胞は、前骨髄球性白血病ジンフィンガータンパク質(PLZF)およびTボックス転写因子(T-ベット)の高発現を有する。2) PLZFおよびGATA結合タンパク質3(GATA3)の中間発現を有するiNKT2細胞。3)INKT17細胞の発現が低いPLZF及びレチノイド関連の孤児核受容体(ROR)-γtがIFN-γ、IL-4、およびIL-1714を分泌する。活性化されたiNKT細胞は、Th1、Th2、およびTh17様サイトカインを分泌し、iNKT細胞15の異なる免疫調節効果を決定する。iNKT細胞の様々な亜集団の特異的活性化の免疫調節作用および免疫療法効果は異なる。従って、体の免疫応答を調節する抗炎症機能を有するiNKT細胞(主にiNKT2)の特定の表型の選択は、RAにおける免疫の不均衡および免疫障害を補正することができる。
理想的な動物モデルの確立は、RA病因の治療および研究にとって非常に重要である。現在、最も一般的に使用される成熟した動物モデルには、コラーゲン誘発関節炎、アジュバント関節炎、ジモサン誘発関節炎、多糖による関節炎16-17が含まれる。しかし、人間のRAのすべての特徴を完全にシミュレートできるモデルはありません。II型コラーゲン誘発関節炎(CIA)は、古典的な関節炎モデルです。CIAは、II型コラーゲン特異的モノクローナル抗体を用いたマウスの免疫によって誘導され、この疾患モデルの抗体依存性を反映している。Be歳代は、グルコース-6-リン酸イソメラーゼ(G6PI)に対する全身免疫応答を有するモデルを記載し、これは、感受性マウス株における末梢対称多関節炎を誘導する18、19である。このモデルでは、関節炎の発症はT細胞、B細胞、および自然免疫18、19、20に依存する。堀越21は、G6PIポリペプチド断片を有するDBA/1マウスの免疫から生じるRAモデルが、CIAモデルよりもCD4+T細胞およびサイトカイン(すなわち、IL-6およびTNF-α)の点でヒトRAに類似していることを発見した。TCR認識部位に対する刺激効果を高めるために、G6PI(hGPI325-339およびhGPI469-483)の混合ポリペプチド断片を使用して、DBA/1マウスを免疫化し、RAマウスモデルを構築した。hGPI325-339 および hGPI469-483 は I-A q 制限 T 細胞応答に対して免疫優位であるため、このアプローチの成功率は高くなる可能性があります。したがって、このモデルは、RA患者22におけるCD4+T細胞およびiNKT細胞欠損の過剰増殖をシミュレートすることができる。RA免疫病理学の基礎研究は、さらに詳細な調査の基礎を築きました。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 Mouse Anti-PLZF</td>
			<td>BD</td>
			<td>563490</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PE MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-048-801</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Columns</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>MS</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryogenic Centrifuge</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>Allegra&#174; X-15R</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DiR</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>D12731</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding Center</td>
			<td>Tianjin Aviation Electromechanical Co., Ltd.</td>
			<td>BMJ-1</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Hamster Anti-Mouse TCR &#946; Chain</td>
			<td>BD</td>
			<td>553170</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometer</td>
			<td>BD</td>
			<td>Accuri C6</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freund&#39;s complete adjuvant</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F5881</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hGPI325-339 (IWYINCFGCETHAML)</td>
			<td>Karebay Biochem</td>
			<td>18062202</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hGPI469-483 (EGNRPTNSIVFTKLT)</td>
			<td>Karebay Biochem</td>
			<td>18062203</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In Vivo Imaging System</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>caliper IVIS lumina II</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ionomycin Calcium</td>
			<td>Cayman</td>
			<td>10004974</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KRN7000</td>
			<td>AdipoGen</td>
			<td>AG-CN2-0013</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse CD1d Tetramer-PE</td>
			<td>MBL</td>
			<td>TS-MCD-1</td>
			<td>Japan</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse percoll</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P8620</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Olympus-II</td>
			<td>Japan</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-CyTM5.5 Mouse anti-ROR-&#978;t</td>
			<td>BD</td>
			<td>562683</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-CyTM5.5 Mouse anti-T-bet</td>
			<td>BD</td>
			<td>561316</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pertussis toxin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7208</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phorbol esters</td>
			<td>Cayman</td>
			<td>10008014</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red Blood Cell Lysis Buffer</td>
			<td>BD</td>
			<td>555899</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>01-100-1ACS</td>
			<td>Israel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Th1/Th2/Th17 cytokines kit</td>
			<td>BD</td>
			<td>560485</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultramicrotome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica EM UC6</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

adoptive immunotherapy of inkt cells in glucose-6-phosphate isomerase (g6pi)-induced ra mice

関節リウマチ(RA)は、複雑な慢性炎症性自己免疫疾患である。この疾患の病因は、不変性のナチュラルキラーT(iNKT)細胞に関連している。活性RAを有する患者は、より少ないiNKT細胞、欠損細胞機能、およびTh1の過剰な分極を有する。本研究では、hGPI325-339とhGPI469-483ペプチドの混合物を用いてRA動物モデルを確立した。iNKT細胞をインビボ誘導およびインビトロ精製により得られ、続いて、採用免疫療法用のRAマウスへの注入が行われた。インビボイメージングシステム(IVIS)の追跡により、iNKT細胞は主に脾臓および肝臓に分布していたことが明らかになった。細胞療法後12日目、疾患の進行は著しく低下し、臨床症状は緩和され、胸腺におけるiNKT細胞の存在量は増加し、胸腺におけるiNKT1の割合は減少し、TNF-α、IFN-γ、およびIL-6のレベルは1000年に増加した。血清が減少した。iNKT細胞の養子免疫療法は免疫細胞のバランスを回復させ、身体の過剰な炎症を矯正した。

モデル化後、関節炎指数スコアと足の厚さが増加しました。対照群と比較して、RAモデル群のつま先は、モデル化後6日目に赤い腫脹を示し始め、徐々に悪化した。14日で、足首関節の赤い腫れがピークに達し、その後徐々に軽減した。足の太さは同様に変更されました(P < 0.05) (図 1)。
炎症細胞浸潤は、モデリング後に有意に増加した。病的な...

Watch this Scientific Journal Video about Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice at JoVE.com

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

このプロトコルは、G6PI混合ペプチドを使用して、CD4+ T細胞およびサイトカインにおけるヒト関節リウマチのモデルに近い関節リウマチモデルを構築します。特定の表現型および機能を有する高純度不変不変天然キラーT細胞(主にiNKT2)は、養子免疫療法のためのインビボ誘導およびインビトロ精製によって得られた。

グルコース-6-リン酸イソメラーゼ(G6PI)誘発RAマウスにおけるiNKT細胞の導入免疫療法

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

このプロトコルは RA モデルを構築する方法を記述しています。その成功率は93%を超えており、その病因はT細胞、B細胞、および先天性免疫に依存し、研究者は世界的な免疫の観点からRAの病因をよりよく研究することを可能にする。その後、免疫調節効果を有するINKT細胞を治療に使用します。INKT細胞は、INKT細胞の臨床応用に基本的なデータサポートを提供し、INKT細胞の臨床応用価値を真に爆発させるin vivo導入による治療に良い効果を有する。この技術の最大の利点は、操作が簡単でコピーが簡単であるということです。この手順のデモンストレーションは、私の研究室の大学院生である陳勝大、高翔、張景南です。まず、HGPI325〜339とHGPI469〜483の断片の両方の1.75ミリグラムの重量を量り、摂氏4度の3重蒸留水の5.25ミリリットルに溶解します。フルフロイントアジュバントを摂氏50度の水浴に溶かします。別の10ミリリットルの遠心分離管に5.25ミリリットルを引き込み、使用するために冷却します。HG6PI溶液と完全なフロイントのアジュバント溶液の混合物を、2つのガラス注射器を接続した人工乳化ユニットに入れます。氷浴では、シリンジを1分間に10~20回一定の速度と周波数で押し込み、混合物ペプチド溶液を完全に乳化し、フロイントのアジュバント溶液を完全に乳化させます。その後、エマルジョン液滴を水中に10分間保管します。次に、乳化したHG6PIの150マイクロリットルをマウスの尾根皮下に注入する。すぐに48時間後に, マウスの内腹腔内に百日性毒素の200ミリグラムを注入.さて, 通常の DBA1 マウスの体内でガウザーなしでイントラインペリン体体重のキログラムあたり 0.1 ミリグラムの投与量.モデリングの3日後、麻酔後、マウスの脾臓を分離する。200メッシュふるいで脾臓を切断し、粉砕することにより、単一のセル懸濁液を準備します。細胞懸濁液をPBSで洗浄する。200回gで5分間遠心分離機を出し、上清を捨てる。全血組織溶液の1ミリリットルで細胞を再中断します。マウスリンパ球分離培地を3ミリリットル加える。そして、室温で300倍gで20分間細胞を遠心分離する。INKT細胞を精製するには、摂氏4度PBSの100マイクロリットルで7番目の細胞に10を再懸濁し、アルファガウサーを搭載したCD1四量体PEを10マイクロリットル加え、暗闇の中で摂氏4度でインキュベートします。PBSで細胞を2回洗浄し、80マイクロリットルのPBSで再懸濁します。20マイクロリットルの抗PEマイクロビーズを加え、暗闇の中で摂氏4度で20分間インキュベートします。PBSでそれらを2回洗浄し、PBSの500マイクロリットルで細胞を再中断します。選別カラムを MACS ソーターの磁界に入れ、500 マイクロリットルの PBS でリンスします。準備した細胞懸濁液をソートカラムに加え、流れを通して収集し、PBSバッファーで3回リンスします。磁界を取り除き、ソートカラムにPBSバッファを1ミリリットル加えます。一定の圧力でプランジャーを素早く押し込み、ラベル付きセルを回収管に入れます。精製したINKT細胞を得る。自動セル カウンターでカウントします。INKT細胞表現型を同定するために、まず、精製されたINKT細胞から6番目の細胞に10回10回服用し、50マイクロリットルのPBSで再懸濁する。アルファガウスPE CD1テトラマー0.5マイクロリットル、またはFITC TCRベータの10マイクロリットルを単一の正の対照管に加えます。0.5マイクロリットルのアルファガウサーPE CD1テトラマーを加え、FITC TCRベータを10マイクロリットルのFITC TCRベータをサンプルチューブに加えます。暗闇の中で30分間摂氏4度でインキュベートする。その後、PBSで細胞を洗浄し、200回gで遠心分離機を5分間洗浄します。上清を捨て、FoxP3固定パーメアビライゼーション作業溶液の1ミリリットルを追加します。そして、暗闇の中で摂氏4度で45分間細胞をインキュベートします。次いで、1x透過性ワーキング溶液の1ミリリットルを加え、室温で500倍gの細胞を5分間遠心分離する。上清を捨てます。AlexaFluor 647マウスアンチPLZFの1マイクロリットルとPerCP Cy5.5マウス抗Tbetの1マイクロリットルを追加し、暗闇の中で室温で30分間インキュベートします。次に、2マイクロリットルのパーメビライゼーションバッファー作業溶液と遠心分離機を200回gに加え、5分間洗浄します。上清を捨てます。細胞を500マイクロリットルのPBSで再懸濁し、フローサイトメトリーで測定する。本研究では、対照群と比較して、RAモデル群のつま先が徐々に悪化してモデル化した後に赤い腫れを示し始めた。14日で、足首関節の赤い腫れがピークに達し、続いて徐々に軽減した。病理的な結果は、RAモデルマウスの足首滑膜組織における炎症細胞の浸潤度が異なる段階で異なっていたことを示す。ピーク炎症は14日目のポストモデリングで起こった。RAモデル群では、炎症促進サイトカインの血清レベルは、モデリング後11日および14日後に有意に増加した。抗炎症性サイトカインは有意に減少した。この図は、正常マウスにおけるINKT2の割合が約5%であったことを示す。インビボ誘導後のインク2の割合は約82%であった。INK2の割合は、MACS精製後の92%以上であった。ここでは、RAに見られる主要なポリペプチドを乳化する方法を示す。乳化液滴を10分間水中に保管する。結果が分散している。このプロトコルは、RAの上げられた特別なNKT細胞の治療のための新しいアドオンです。これは、細胞免疫療法または他の自己免疫疾患および腫瘍に適用することができる。このモデルは、RA患者におけるCD4 T細胞およびNKT細胞の欠損の全体的な増殖を刺激することができ、これはRA免疫経路の深い研究の基礎となる。このプロトコルでは、ペルタシス毒素は、モデリング中に間腹腔内に注入される。実験服と使い捨て手袋を着用してください。そして、刺し傷感染症を防ぐために、操作のすべての基準を運ぶ。

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

実験的転移とCTLの養子移入免疫療法のマウスモデル

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

Preparation of Tumor Antigen-loaded Mature Dendritic Cells for Immunotherapy

免疫療法のための腫瘍抗原にロードされた成熟樹状細胞の調製

While clinical studies have established that antigen-loaded DC vaccines are safe and promising therapy for tumors 1, their clinical efficacy remains to be ...

Accelerated Type 1 Diabetes Induction in Mice by Adoptive Transfer of Diabetogenic CD4+ T Cells

糖尿病CD4の養子移入+ T細胞によるマウスの加速された1型糖尿病の誘導

The nonobese diabetic (NOD) mouse spontaneously develops autoimmune diabetes after 12 weeks of age and is the most extensively studied animal model of ...

Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice

マウスのリンパ管内免疫療法やワクチン

Vaccines are typically injected subcutaneously or intramuscularly for stimulation of immune responses. The success of this requires efficient drainage of ...

Assessing the Development of Murine Plasmacytoid Dendritic Cells in Peyer's Patches Using Adoptive Transfer of Hematopoietic Progenitors

造血前駆細胞の養子移入を使用して、パイエル板におけるマウス形質細胞様樹状細胞の開発を評価

This protocol details a method to analyze the ability of purified hematopoietic progenitors to generate plasmacytoid dendritic cells (pDC) in intestinal ...

Generation of CAR T Cells for Adoptive Therapy in the Context of Glioblastoma Standard of Care

ケアの膠芽腫の標準のコンテキストにおける養子療法のためのCAR T細胞の生成

Adoptive T cell immunotherapy offers a promising strategy for specifically targeting and eliminating malignant gliomas. T cells can be engineered ex vivo ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

エフェクターCD4の養子移入によるマウス腸の炎症の誘導<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt;高い</sup&gt;免疫不全マウスへのT細胞

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

麻痺、視神経脊髄炎自己抗原アクアポリン 4 の T 細胞特定のマウスの視覚系障害の誘導

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

まれな抗原特異的 B 細胞血液の循環から弁別に対するモノクローナル抗体の生成

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the ...

Stereotactic Adoptive Transfer of Cytotoxic Immune Cells in Murine Models of Orthotopic Human Glioblastoma Multiforme Xenografts

同所性同種人間神経膠腫異種移植片のマウスモデルの細胞傷害性免疫細胞の定位の養子転送

Glioblastoma multiforme (GBM), the most frequent and aggressive primary brain cancer in adults, is generally associated with a poor prognosis, and scarce ...