Name: adoptive immunotherapy of inkt cells in glucose-6-phosphate isomerase (g6pi)-induced ra mice
Uploaded: 2020-01-31T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice at JoVE.com

Nuestro estudio fue apoyado por la National Natural Science Foundation of China (NSFC) (81771755), Colleges and university's key research project of Hebei province (ZD2017009) y el Animal Lab of Medical Experiment Center, Hebei University. Estamos agradecidos por su apoyo.

Todos los ratones experimentales (150 en total) eran ratones machosanos, de 6 a 8 semanas de edad (20,0 x 1,5 g), criados en un entorno específico libre de patógenos (SPF). No hay ningún tratamiento especial antes del modelado. El experimento se dividió en un grupo de control saludable (15 ratones), un grupo de control de modelos (15 ratones) y un grupo de terapia celular (55 ratones). Este estudio fue aprobado por el Comité de Bienestar Animal y Etica de la Universidad de Hebei.
1. Constru...

<ol>
	<li>Tob&#243;n, G. J., Youinou, P., Saraux, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+environment,+geo-epidemiology,+and+autoimmune+disease:+Rheumatoid+arthritis.">The environment, geo-epidemiology, and autoimmune disease: Rheumatoid arthritis.</a> Autoimmunity Reviews. 35 (1), 0 (2010).</li><li>Cross, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+burden+of+rheumatoid+arthritis:+estimates+from+the+Global+Burden+of+Disease+2010+study.">The global burden of rheumatoid arthritis: estimates from the Global Burden of Disease 2010 study.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 73 (7), 1316-1322 (2014).</li><li>Kanashiro, A., Bassi, G. S., Queir&#243;z Cunha, F. D., Ulloa, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+neuroimunomodulation+to+bioelectronic+treatment+of+rheumatoid+arthritis.">From neuroimunomodulation to bioelectronic treatment of rheumatoid arthritis.</a> Bioelectronics in Medicine. 1 (2), 151-165 (2018).</li><li>Brennan, P. J., Brigl, M., Brenner, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invariant+natural+killer+T+cells:+an+innate+activation+scheme+linked+to+diverse+effector+functions.">Invariant natural killer T cells: an innate activation scheme linked to diverse effector functions.</a> Nature Reviews Immunology. 13 (2), 101-117 (2013).</li><li>Bianca, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unraveling+Natural+Killer+T-Cells+Development.">Unraveling Natural Killer T-Cells Development.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1950 (2018).</li><li>Mitsuo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+CD161+CD8++T+cells+in+the+peripheral+blood+of+patients+suffering+from+rheumatic+diseases.">Decreased CD161+CD8+ T cells in the peripheral blood of patients suffering from rheumatic diseases.</a> Rheumatology. 45 (12), 1477-1484 (2006).</li><li>Miellot, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+invariant+NK+T+cells+protects+against+experimental+rheumatoid+arthritis+by+an+IL-10-dependent+pathway.">Activation of invariant NK T cells protects against experimental rheumatoid arthritis by an IL-10-dependent pathway.</a> European Journal of Immunology. 35 (12), 3704-3713 (2005).</li><li>Miellot-Gafsou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+activation+of+invariant+natural+killer+T+cells+in+a+rheumatoid+arthritis+model+and+application+to+disease+treatment.">Early activation of invariant natural killer T cells in a rheumatoid arthritis model and application to disease treatment.</a> Immunology. 130 (2), 296-306 (2010).</li><li>Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+invariant+natural+killer+t-cell+deficiency+in+inflammatory+arthritis.">Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).</li><li>Ming, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+on+immunoregulation+of+iNKT+cells+in+RA+by+novel+synthetic+immunostimulator+CH1b.">Effects on immunoregulation of iNKT cells in RA by novel synthetic immunostimulator CH1b.</a> Chinese Journal of Immunology. 32 (02), 218-222 (2016).</li><li>Ming, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+correlation+between+the+percentage+of+iNKT+cells+and+the+ratio+of+IFN-&#947;/IL-4+in+patients+with+rheumatoid+arthritis.">Study of the correlation between the percentage of iNKT cells and the ratio of IFN-&#947;/IL-4 in patients with rheumatoid arthritis.</a> Chinese Journal of Microbiology Immunology. 35 (3), 213-218 (2015).</li><li>Sharif, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+natural+killer+T+cells+by+&#945;-galactosylceramide+treatment+prevents+the+onset+and+recurrence+of+autoimmune+Type+1+diabetes.">Activation of natural killer T cells by &#945;-galactosylceramide treatment prevents the onset and recurrence of autoimmune Type 1 diabetes.</a> Nature Medicine. 7, 1057-1062 (2010).</li><li>Gapin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+invariant+natural+killer+T+cells.">Development of invariant natural killer T cells.</a> Current Opinion in Immunology. 39, 68-74 (2016).</li><li>Kwon, D. I., Lee, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+Differentiation+Program+of+Invariant+Natural+Killer+T+Cells.">Lineage Differentiation Program of Invariant Natural Killer T Cells.</a> Immune Network. 17 (6), (2017).</li><li>Thapa, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+differentiation+of+ROR-&#947;t+expressing+iNKT17+cells+is+orchestrated+by+Runx1.">The differentiation of ROR-&#947;t expressing iNKT17 cells is orchestrated by Runx1.</a> Scientific Reports. 7 (1), 7018 (2017).</li><li>Schurgers, E., Billiau, A., Matthys, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-induced+arthritis+as+an+animal+model+for+rheumatoid+arthritis:+focuson+interferon-&#947;.">Collagen-induced arthritis as an animal model for rheumatoid arthritis: focuson interferon-&#947;.</a> Interferon Cytokine Research. 31 (12), 917-926 (2011).</li><li>Van Haalen, H. G. M., Severens, J. L., Tran-Duy, A., Boonen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+cost-effectiveness+A+systematic+review+and+stepwise+approach+for+selecting+a+transferable+health+economic+evaluation+rheumatoid+arthritis.">How cost-effectiveness A systematic review and stepwise approach for selecting a transferable health economic evaluation rheumatoid arthritis.</a> Pharmacoeconomics. 32 (5), 429-442 (2014).</li><li>Schubert, D., Maier, B., Morawietz, L., Krenn, V., Kamradt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+T+cell-dependent+peripheral+polyarthritis+in+genetically+unaltered+mice.">Immunization with glucose-6-phosphate isomerase induces T cell-dependent peripheral polyarthritis in genetically unaltered mice.</a> Journal of Immunology. 172, 4503-4509 (2004).</li><li>Bockermann, R., Schubert, D., Kamradt, T., Holmdahl, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+a+B-cell-dependent+chronic+arthritis+with+glucose-6-phosphate+isomerase.">Induction of a B-cell-dependent chronic arthritis with glucose-6-phosphate isomerase.</a> Arthritis Research, Therapy. 7, 131613-131624 (2005).</li><li>Kamradt, T., Schubert, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+and+clinical+implications+of+G6PI+in+experimental+models+of+rheumatoid+arthritis.">The role and clinical implications of G6PI in experimental models of rheumatoid arthritis.</a> Arthritis Research, Therapy. 7, 20-28 (2005).</li><li>Horikoshi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Invariant+NKT+Cells+with+Glycolipid+Ligand+&#945;-Galactosylceramide+Ameliorates+Glucose-6-Phosphate+Isomerase+Peptide-Induced+Arthritis.">Activation of Invariant NKT Cells with Glycolipid Ligand &#945;-Galactosylceramide Ameliorates Glucose-6-Phosphate Isomerase Peptide-Induced Arthritis.</a> PlosOne. 7 (12), 51215 (2012).</li><li>Zhang, X. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+mixed+peptides+derived+from+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+rheumatoid+arthritis+in+DBA+/1+mice.">Immunization with mixed peptides derived from glucose-6-phosphate isomerase induces rheumatoid arthritis in DBA /1 mice.</a> Chinese Journal of Pathophysiology. 32 (3), 569-576 (2016).</li><li>Motohashi, S., Nakayama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invariant+natural+killer+T+cell-based+immunotherapy+for+cancer.">Invariant natural killer T cell-based immunotherapy for cancer.</a> Immunotherapy. 1 (1), 73 (2017).</li><li>Jung, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+requirement+of+natural+killer+T-cells+in+tolerogenic+APCs-mediated+suppression+of+collagen-induced+arthritis.">The requirement of natural killer T-cells in tolerogenic APCs-mediated suppression of collagen-induced arthritis.</a> Experimental and Molecular Medicine. 42 (8), 547-554 (2010).</li><li>Luc, V. K., Lan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+Potential+of+Invariant+Natural+Killer+T+Cells+in+Autoimmunity.">Therapeutic Potential of Invariant Natural Killer T Cells in Autoimmunity.</a> Frontiers in Immunology. 9, 519-526 (2018).</li><li>Chiba, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+collagen-induced+arthritis+by+natural+killer+T+cell+activation+with+OCH,+a+sphingosine-truncated+analog+of+&#945;-galactosylceramide.">Suppression of collagen-induced arthritis by natural killer T cell activation with OCH, a sphingosine-truncated analog of &#945;-galactosylceramide.</a> Arthritis, Rheumatism. 50 (1), 305-313 (2004).</li><li>Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+invariant+natural+killer+t-cell+deficiency+in+inflammatory+arthritis.">Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).</li><li>Bruns, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+an+immunodominant+self-peptide+derived+from+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+arthritis+in+DBA/1+mice.">Immunization with an immunodominant self-peptide derived from glucose-6-phosphate isomerase induces arthritis in DBA/1 mice.</a> Arthritis Research, Therapy. 11 (4), (2009).</li><li>Parietti, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rituximab+treatment+overcomes+reduction+of+regulatory+iNKT+cells+in+patients+with+rheumatoid+arthritis.">Rituximab treatment overcomes reduction of regulatory iNKT cells in patients with rheumatoid arthritis.</a> Clinical Immunology. 134 (3), 331-339 (2010).</li><li>Yoshida, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+mechanism(s)+of+the+inhibition+of+disease+progression+by+combination+treatment+with+fingolimod+plus+pathogenic+antigen+in+a+glucose-6-phosphate+isomerase+peptide-induced+arthritis+mouse+model.">Functional mechanism(s) of the inhibition of disease progression by combination treatment with fingolimod plus pathogenic antigen in a glucose-6-phosphate isomerase peptide-induced arthritis mouse model.</a> Biological, Pharmaceutical Bulletin. 38 (8), 1120-1125 (2015).</li><li>Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+adoptive+immunotherapy+on+rheumatoid+arthritis+with+Thymus-derived+invariant+natural+killer+T+cells.">Study of the adoptive immunotherapy on rheumatoid arthritis with Thymus-derived invariant natural killer T cells.</a> International Immunopharmacology. 67, 427-440 (2019).</li></ol>

Las células iNKT son células T especiales que unen inmunidad innata y adaptativa y se desarrollan principalmente a partir de CD4++/ CD8+ timocitos. Las células iNKT tienen diversas funciones inmunorreguladoras e interactúan con otras células inmunitarias por contacto directo y secreción de diferentes citoquinas23,afectando a las células dendríticas (CC), macrófagos, neutrófilos, células B, células T y diferenciación y desarrollo de célula...

La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad autoinmune caracterizada por una invasividad crónica progresiva con incidencia de 0,5-1%1,2. La patogénesis subyacente se atribuye a la proliferación anormal de células autoreactivas CD4+ y CD8+ T, manifestadas por un aumento en la proporción de células CD4+IFN-+ y CD4+IL-17A+ T, y el número reducido de células CD4+IL-4+ y CD4+CD25+FoxP3+ T. Por lo tanto, la secreción de citoquinas inflamatorias se incrementa, y una reacción inflamatoria excesiva destruye el equilibrio nativo y la función de tolerancia del sistema inmunológico del cuerpo. Además, las células auxiliares del linfocito T (Th) 1 que penetran en la articulación agravan la respuesta inflamatoria y el daño articular. Por lo tanto, la inhibición de la respuesta inflamatoria excesiva y la restauración de la tolerancia inmune y el equilibrio inmune son clave para el tratamiento de RA3,4.
Las celdas iNKT tienen funciones y características de células NK y células T. Las células iNKT albergan una cadena distinta e invariable de receptor de células T (TCR) con repertorios limitados de cadena TCR5 y reconocen el antígeno glucólido presentado por la molécula CD1d del complejo de histocompatibilidad principal (MHC) CD1d en la superficie de las células que presentan antígenos. 6 detectó un gran número de células iNKT y defectos funcionales en muchas enfermedades autoinmunes, incluida la AR. 7demostraron que las células iNKT tienen un efecto positivo en el mantenimiento de la tolerancia autoinmune y que cuando se restaura el número y la función de las células iNKT, la enfermedad se alivia. Además, Miellot-Gafsou et al.8 encontraron que las células iNKT no sólo abrogaron la enfermedad, sino que también aumentaron la progresión de la enfermedad. Estos resultados contradictorios sugieren que las células iNKT son células T heterogéneas, y la función de diferentes subconjuntos puede revertirse. En un estudio clínico de AR, la frecuencia de las células iNKT se correlacionó con la puntuación de la actividad de la enfermedad9. Los resultados también confirmaron que la frecuencia de iNKT se redujo en pacientes con AR, el número de subconjuntos de células CD4+IFN +T aumentó, y los niveles secretores de citoquinas inflamatorias IFN-o y TNF-o aumentaron10,11. Además,12 investigaron la diabetes tipo 1 (T1D) y encontraron que la infusión selectiva de células iNKT reguló la expresión de la citoquina inflamatoria IL-4, mantuvo la tolerancia inmune y presionó el desarrollo de la diabetes tipo 1. Por lo tanto, la infusión adoptiva de células iNKT específicas o la activación dirigida de células iNKT aumenta el nivel de células iNKT en pacientes con AR, lo que puede ser un avance en el tratamiento con AR.
La inmunoterapia celular es actualmente de gran interés y ha sido ampliamente utilizada en la terapia contra el cáncer. Sin embargo, las células iNKT son células inmunorreguladoras heterogéneas raras (sólo 0,3% del número total de PBMC)13,lo que limita las posibles aplicaciones clínicas. Estas células se dividen principalmente en tres subpoblaciones: 1) células iNKT1, que tienen una alta expresión de la leucemia promielocítica proteína zinc-dedo (PLZF) y factor de transcripción T-caja (T-bet); 2) células iNKT2 con expresión intermedia de PLZF y proteína de unión GATA 3 (GATA3); 3) células iNKT17 con baja expresión de PLZF y receptor nuclear huérfano (ROR) relacionado con retinoides- que secretan IFN-, IL-4 e IL-1714. Las células iNKT activadas secretan citoquinas similares a Th1, Th2 y Th17, que determinan los diferentes efectos inmunomoduladores de las células iNKT15. Los efectos inmunomoduladores e inmunoterapéuticos de la activación específica de varias subpoblaciones de células iNKT son diferentes. Por lo tanto, la selección de fenotipos específicos de células iNKT (principalmente iNKT2) con funciones antiinflamatorias para regular la respuesta inmune del cuerpo puede corregir el desequilibrio inmune y los trastornos inmunológicos en la AR.
El establecimiento de un modelo animal ideal es de gran importancia para el tratamiento y estudio de la patogénesis de la AR. Actualmente, los modelos animales más comúnmente utilizados y maduros incluyen artritis inducida por colágeno, artritis adyuvante, artritis inducida por cimosa, y artritis inducida por polisacáridos16–17. Sin embargo, no hay ningún modelo que pueda simular completamente todas las características de la RA humana. La artritis inducida por colágeno tipo II (CIA) es un modelo clásico de artritis. La CIA es inducida por la inmunización de ratones con anticuerpos monoclonales específicos para colágeno tipo II, lo que refleja la dependencia de anticuerpos de este modelo de enfermedad. Describió un modelo con una respuesta inmune sistémica a la isomerasa de glucosa-6-fosfato (G6PI), que induce la poliartritis simétrica periférica en cepas de ratón susceptibles18,19. En este modelo, el desarrollo de la artritis depende de las células T, células B, e inmunidad innata18,19,20. Horikoshi21 encontró que los modelos de RA resultantes de la inmunización de ratones DBA/1 con fragmentos de polipéptidos G6PI son más similares a la RA humana en términos de células CD4+ T y citoquinas (es decir, IL-6 y TNF)) que los modelos de la CIA. Con el fin de aumentar el efecto estimulante en el sitio de reconocimiento TCR, los fragmentos de polipéptidos mixtos de G6PI (hGPI325-339 y hGPI469-483) se utilizaron para inmunizar ratones DBA/1 para construir el modelo de ratón RA. La tasa de éxito de este enfoque puede ser alta porque hGPI325-339 y hGPI469-483 son inmunodominantes para las respuestas de células T restringidas a Q-A. Por lo tanto, este modelo puede simular la sobreproliferación de células CD4+ T y defectos celulares iNKT en pacientes con AR22. La investigación básica de la inmunopatología de la AR sentó las bases para nuestra investigación más profunda.

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	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 Mouse Anti-PLZF</td>
			<td>BD</td>
			<td>563490</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PE MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-048-801</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Columns</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>MS</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryogenic Centrifuge</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>Allegra&#174; X-15R</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DiR</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>D12731</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding Center</td>
			<td>Tianjin Aviation Electromechanical Co., Ltd.</td>
			<td>BMJ-1</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Hamster Anti-Mouse TCR &#946; Chain</td>
			<td>BD</td>
			<td>553170</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometer</td>
			<td>BD</td>
			<td>Accuri C6</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freund&#39;s complete adjuvant</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F5881</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hGPI325-339 (IWYINCFGCETHAML)</td>
			<td>Karebay Biochem</td>
			<td>18062202</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hGPI469-483 (EGNRPTNSIVFTKLT)</td>
			<td>Karebay Biochem</td>
			<td>18062203</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In Vivo Imaging System</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>caliper IVIS lumina II</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ionomycin Calcium</td>
			<td>Cayman</td>
			<td>10004974</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KRN7000</td>
			<td>AdipoGen</td>
			<td>AG-CN2-0013</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse CD1d Tetramer-PE</td>
			<td>MBL</td>
			<td>TS-MCD-1</td>
			<td>Japan</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse percoll</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P8620</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Olympus-II</td>
			<td>Japan</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-CyTM5.5 Mouse anti-ROR-&#978;t</td>
			<td>BD</td>
			<td>562683</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-CyTM5.5 Mouse anti-T-bet</td>
			<td>BD</td>
			<td>561316</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pertussis toxin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7208</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phorbol esters</td>
			<td>Cayman</td>
			<td>10008014</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red Blood Cell Lysis Buffer</td>
			<td>BD</td>
			<td>555899</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>01-100-1ACS</td>
			<td>Israel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Th1/Th2/Th17 cytokines kit</td>
			<td>BD</td>
			<td>560485</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultramicrotome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica EM UC6</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

adoptive immunotherapy of inkt cells in glucose-6-phosphate isomerase (g6pi)-induced ra mice

La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad autoinmune inflamatoria crónica compleja. La patogénesis de la enfermedad está relacionada con células T (iNKT) asesinas naturales invariables. Los pacientes con AR activa presentan menos células iNKT, función celular defectuosa y polarización excesiva de Th1. En este estudio, se estableció un modelo animal de RA utilizando una mezcla de péptidos hGPI325-339 y hGPI469-483. Las células iNKT se obtuvieron por inducción in vivo y purificación in vitro, seguida de perfusión en ratones RA para inmunoterapia adoptiva. El seguimiento del sistema de imágenes in vivo (IVIS) reveló que las células iNKT se distribuyeron principalmente en el bazo y el hígado. El día 12 después de la terapia celular, la progresión de la enfermedad se desaceleró significativamente, los síntomas clínicos se aliviaron, la abundancia de células iNKT en el timo aumentó, la proporción de iNKT1 en el timo disminuyó, y los niveles de TNF-, IFN-o, y IL-6 en el suero disminuyó. La inmunoterapia adoptiva de las células iNKT restauró el equilibrio de las células inmunitarias y corrigió la inflamación excesiva del cuerpo.

La puntuación del índice de artritis y el grosor de la pata aumentaron después del modelado. En comparación con el grupo de control, los dedos del grupo modelo RA comenzaron a mostrar hinchazón roja a los 6 días después del modelado, con agravamiento gradual. A los 14 días, la hinchazón roja en la articulación del tobillo alcanzó su punto máximo, seguido de un alivio gradual. El grosor de la pata cambió de forma similar (P < 0.05) (Figura 1).
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Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

Este protocolo utiliza péptidos mixtos G6PI para construir modelos de artritis reumatoide que están más cerca de la artritis reumatoide humana en células CD4+ T y citoquinas. Células T asesinas naturales invariables de alta pureza (principalmente iNKT2) con fenotipos y funciones específicas se obtuvieron mediante inducción in vivo y purificación in vitro para inmunoterapia adoptiva.

Inmunoterapia adoptiva de células iNKT en ratones RA inducidos por glucosa-6-fosfato (G6PI)

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

Nuestro protocolo describe un método para crear un modelo de RA. Su tasa de éxito es superior al 93 por ciento y su patogénesis depende de las células T, las células B y la inmunidad innata, lo que permite a los investigadores estudiar mejor la patogénesis de la AR desde una perspectiva inmune global. Luego utilizamos células INKT con efectos inmunomoduladores para su tratamiento.Las células INKT tienen un buen efecto en el tratamiento mediante la introducción in vivo que proporcionan soporte de datos básicos para la aplicación clínica de células INKT y realmente explotan el valor de aplicación clínica de las células INKT. La mayor ventaja de esta tecnología es que es fácil de operar y fácil de copiar. Demostrando el procedimiento serán Chen Shengde, Gao Xiang y Zhang Jingnan, estudiante graduado de mi laboratorio.Para empezar, pesa 1,75 miligramos de fragmentos HGPI325 a 339 y HGPI469 a 483 y disuelve en 5,25 mililitros de 4 grados centígrados de agua triple destilada. Disolver el adyuvante completo de Freund en un baño de agua Celsius de 50 grados. Dibuje 5,25 mililitros en otro tubo centrífugo de 10 mililitros y enfríelo para su uso.Coloque la mezcla de la solución HG6PI y la solución adyuvante de Complete Freund en una unidad de emulsión artificial con dos jeringas de vidrio conectadas. En un baño de hielo, empuje la jeringa a una velocidad y frecuencia constantes de diez a veinte veces por minuto para emulsionar completamente la solución de péptido de mezcla y completar la solución adyuvante de Freund. Luego, mantenga las gotas de emulsión en el agua durante diez minutos.A continuación, inyectar 150 microlitros de los HG6BP emulsionados en la raíz de la cola del ratón por vía subcutánea. Inmediatamente y después de 48 horas, inyectar 200 miligramos de toxina tos ferina en el ratón por vía intraperineal. Ahora, inyectar ratón DBA1 normal por vía intraperineal sin el gausser en la dosis de 0.1 miligramos por kilogramo de peso corporal.Tres días después del modelado, después de la anestesia, aísle el bazo del ratón. Preparar una suspensión de una sola célula cortando y moliendo el bazo en un tamiz de malla 200. Lave la suspensión celular con PBS.Centrifugar a 200 veces g durante cinco minutos y deseche el sobrenadante. Re suspenda las células con un mililitro de solución de tejido sanguíneo entero. Añadir tres mililitros de medio de separación de linfocitos de ratón.Y luego centrifugar las células durante 20 minutos a 300 veces g a temperatura ambiente. Para purificar las células INKT, resuspendir 10 a las células séptimas con 100 microlitros de cuatro grados Celsius PBS, añadir 10 microlitros de gasa alfa cargado CD1 tetramer PE e incubarlos a 4 grados Celsius durante quince minutos en la oscuridad. Lavar las células dos veces con PBS y resuspenderlas en 80 microlitros de PBS.Añadir 20 microlitros de microperlas anti-PE e incubarlos a cuatro grados centígrados durante veinte minutos en la oscuridad. Lávelos dos veces con PBS y resuspender las células con 500 microlitros de PBS. Coloque la columna de clasificación en el campo magnético del clasificador MACS y enjuague con 500 microlitros de PBS.Agregue la suspensión de celda preparada a la columna de clasificación, recoja el flujo y enjuague tres veces con el búfer PBS. Quite el campo magnético y agregue un mililitro de búfer PBS a la columna de clasificación. Empuje rápidamente el émbolo a una presión constante para introducir las células etiquetadas en el tubo de recogida.Y obtener las células purificadas inKT. Cuente con un contador de celdas automatizado. Para identificar el fenotipo celular INKT, primero, tome una vez diez a las sextas células de las células PURIFICAdas de INKT y resusppend en 50 microlitros de PBS.Agregue 0,5 microlitros de tetrámero alpha gausser PE CD1, o 10 microlitros de FITC TCR beta en el tubo de control positivo único. Añadir 0,5 microlitros de tetrámero alpha gausser PE CD1, Añadir 10 microlitros de FITC TCR beta en el tubo de muestra. Incubarlos a cuatro grados centígrados durante treinta minutos en la oscuridad.Después de eso, lavar las células en PBS y luego centrífuga a 200 veces g durante cinco minutos. Deseche el sobrenadante y agregue un mililitro de solución de trabajo de permeabilización de fijación FoxP3. Y incubar las células durante 45 minutos a cuatro grados centígrados en la oscuridad.A continuación, agregue un mililitro de 1x solución de trabajo de permeabilización y centrifugar las células a 500 veces g a temperatura ambiente durante cinco minutos. Deseche el sobrenadante. Añadir un microlitro de AlexaFluor 647 ratón anti-PLZF y un microlitro de PerCP Cy5.5 ratón anti-Tbet e incubar durante treinta minutos a temperatura ambiente en la oscuridad.A continuación, añada dos microlitros de solución de trabajo de tampón de permeabilización y centrifugar a 200 veces g durante cinco minutos para su limpieza. Deseche el sobrenadante. Resuspender las células en 500 microlitros de PBS y medir por citometría de flujo.En este estudio, en comparación con el grupo de control, los dedos del grupo modelo RA comenzaron a mostrar hinchazón roja después de modelar con agravamiento gradual. A los 14 días, la hinchazón roja en la articulación del tobillo alcanzó su punto máximo seguido de un alivio gradual. Los resultados patológicos muestran que el grado de infiltración de las células inflamatorias en el tejido sinovial del tobillo de los ratones modelo RA fue diferente en diferentes etapas.La inflamación máxima se produjo en el día 14 después del modelado. En el grupo modelo de RA, los niveles séricos de citoquinas proinflamatorias aumentaron significativamente 11 días y 14 días después del modelado. Mientras que las citoquinas antiinflamatorias disminuyeron significativamente.Esta cifra muestra que la tasa de INKT2 en ratones normales fue de alrededor del cinco por ciento. La tasa de INK2 fue de aproximadamente el 82 por ciento después de la inducción in vivo. La tasa de INK2 fue más del 92 por ciento después de la purificación del MACS.Aquí mostramos un método para emulsionar el polipéptido principal que vemos en RA. Las gotas emulsionadas se mantienen en el agua durante 10 minutos. Los resultados se están dispersando. Este protocolo es un nuevo complemento para el tratamiento de células NKT especiales elevadas por RA.Que se puede aplicar hacia la inmunoterapia celular u otras enfermedades autoinmunes y tumores. Este modelo puede estimular la proliferación general de células T CD4 y déficits de células NKT en pacientes con AR, lo que sienta las bases para un estudio en profundidad de las vías inmunitarias de la AR. En este protocolo, la toxina de la tos ferina se inyecta interperitonealmente durante el modelado.Por favor, use ropa experimental y guantes desechables. Y llevar todas las normas de funcionamiento con el fin de evitar la puñalada una infección.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

La metástasis experimentales y CTL Modelo inmunoterapia adoptiva de transferencia de ratón

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

Investigación

Inmunología e Infección

Preparation of Tumor Antigen-loaded Mature Dendritic Cells for Immunotherapy

Preparación de las células dendríticas maduras cargadas con antígeno del tumor para inmunoterapia

While clinical studies have established that antigen-loaded DC vaccines are safe and promising therapy for tumors 1, their clinical efficacy remains to be ...

Accelerated Type 1 Diabetes Induction in Mice by Adoptive Transfer of Diabetogenic CD4+ T Cells

Tipo 1 Diabetes inducción acelerada en ratones por transferencia adoptiva de células CD4 + células T diabetogénico

The nonobese diabetic (NOD) mouse spontaneously develops autoimmune diabetes after 12 weeks of age and is the most extensively studied animal model of ...

Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice

Intralinfática inmunoterapia y vacunación en ratones

Vaccines are typically injected subcutaneously or intramuscularly for stimulation of immune responses. The success of this requires efficient drainage of ...

Assessing the Development of Murine Plasmacytoid Dendritic Cells in Peyer's Patches Using Adoptive Transfer of Hematopoietic Progenitors

Evaluar el desarrollo de las células murino plasmocitoide dendríticas en las placas de Peyer Usando la transferencia adoptiva de Progenitores Hematopoyéticas

This protocol details a method to analyze the ability of purified hematopoietic progenitors to generate plasmacytoid dendritic cells (pDC) in intestinal ...

Generation of CAR T Cells for Adoptive Therapy in the Context of Glioblastoma Standard of Care

Generación de células T CAR para realizar la terapia adoptiva en el contexto de Glioblastoma estándar de cuidado

Adoptive T cell immunotherapy offers a promising strategy for specifically targeting and eliminating malignant gliomas. T cells can be engineered ex vivo ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

La inducción de la inflamación intestinal murino por transferencia adoptiva de Efector CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Alta</sup&gt; T células en ratones inmunodeficientes

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Inducción de parálisis y lesión del sistema Visual en ratones por T las células específicas para el Optica del Neuromyelitis Autoantigen Acuaporina-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

Generación de anticuerpos monoclonales humanos discriminativo de células B antígeno específicas raras circulan en sangre

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the ...

Stereotactic Adoptive Transfer of Cytotoxic Immune Cells in Murine Models of Orthotopic Human Glioblastoma Multiforme Xenografts

Estereotáctica transferencia adoptiva de células inmunes citotóxicas en modelos murinos de xenoinjertos de Glioblastoma Multiforme de Orthotopic humanos

Glioblastoma multiforme (GBM), the most frequent and aggressive primary brain cancer in adults, is generally associated with a poor prognosis, and scarce ...