Name: adoptive immunotherapy of inkt cells in glucose-6-phosphate isomerase (g6pi)-induced ra mice
Uploaded: 2020-01-31T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice at JoVE.com

Vår studie stöddes av National Natural Science Foundation of China (NSFC) (81771755), Högskolor och universitetets vetenskap och teknik viktiga forskningsprojekt i Hebei-provinsen (ZD2017009) och Animal Lab of Medical Experiment Center, Hebei University. Vi är tacksamma för deras stöd.

Alla experimentella möss (totalt 150) var friska manliga DBA/1 möss, 6–8 veckor gamla (20,0 ± 1,5 g), som växte upp i en specifik patogenfri miljö (SPF). Det finns ingen särskild behandling före modellering. Experimentet delades in i en hälsosam kontrollgrupp (15 möss), en modellkontrollgrupp (15 möss) och en cellterapigrupp (55 möss). Denna studie godkändes av Hebeis universitets djurskydds- och etikkommitté.
1. Konstruktion av sjukdomsmodellen
<ol><li>Duplicera RA djurmodell...

<ol>
	<li>Tob&#243;n, G. J., Youinou, P., Saraux, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+environment,+geo-epidemiology,+and+autoimmune+disease:+Rheumatoid+arthritis.">The environment, geo-epidemiology, and autoimmune disease: Rheumatoid arthritis.</a> Autoimmunity Reviews. 35 (1), 0 (2010).</li><li>Cross, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+global+burden+of+rheumatoid+arthritis:+estimates+from+the+Global+Burden+of+Disease+2010+study.">The global burden of rheumatoid arthritis: estimates from the Global Burden of Disease 2010 study.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 73 (7), 1316-1322 (2014).</li><li>Kanashiro, A., Bassi, G. S., Queir&#243;z Cunha, F. D., Ulloa, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+neuroimunomodulation+to+bioelectronic+treatment+of+rheumatoid+arthritis.">From neuroimunomodulation to bioelectronic treatment of rheumatoid arthritis.</a> Bioelectronics in Medicine. 1 (2), 151-165 (2018).</li><li>Brennan, P. J., Brigl, M., Brenner, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invariant+natural+killer+T+cells:+an+innate+activation+scheme+linked+to+diverse+effector+functions.">Invariant natural killer T cells: an innate activation scheme linked to diverse effector functions.</a> Nature Reviews Immunology. 13 (2), 101-117 (2013).</li><li>Bianca, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unraveling+Natural+Killer+T-Cells+Development.">Unraveling Natural Killer T-Cells Development.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1950 (2018).</li><li>Mitsuo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decreased+CD161+CD8++T+cells+in+the+peripheral+blood+of+patients+suffering+from+rheumatic+diseases.">Decreased CD161+CD8+ T cells in the peripheral blood of patients suffering from rheumatic diseases.</a> Rheumatology. 45 (12), 1477-1484 (2006).</li><li>Miellot, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+invariant+NK+T+cells+protects+against+experimental+rheumatoid+arthritis+by+an+IL-10-dependent+pathway.">Activation of invariant NK T cells protects against experimental rheumatoid arthritis by an IL-10-dependent pathway.</a> European Journal of Immunology. 35 (12), 3704-3713 (2005).</li><li>Miellot-Gafsou, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+activation+of+invariant+natural+killer+T+cells+in+a+rheumatoid+arthritis+model+and+application+to+disease+treatment.">Early activation of invariant natural killer T cells in a rheumatoid arthritis model and application to disease treatment.</a> Immunology. 130 (2), 296-306 (2010).</li><li>Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+invariant+natural+killer+t-cell+deficiency+in+inflammatory+arthritis.">Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).</li><li>Ming, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+on+immunoregulation+of+iNKT+cells+in+RA+by+novel+synthetic+immunostimulator+CH1b.">Effects on immunoregulation of iNKT cells in RA by novel synthetic immunostimulator CH1b.</a> Chinese Journal of Immunology. 32 (02), 218-222 (2016).</li><li>Ming, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+correlation+between+the+percentage+of+iNKT+cells+and+the+ratio+of+IFN-&#947;/IL-4+in+patients+with+rheumatoid+arthritis.">Study of the correlation between the percentage of iNKT cells and the ratio of IFN-&#947;/IL-4 in patients with rheumatoid arthritis.</a> Chinese Journal of Microbiology Immunology. 35 (3), 213-218 (2015).</li><li>Sharif, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+natural+killer+T+cells+by+&#945;-galactosylceramide+treatment+prevents+the+onset+and+recurrence+of+autoimmune+Type+1+diabetes.">Activation of natural killer T cells by &#945;-galactosylceramide treatment prevents the onset and recurrence of autoimmune Type 1 diabetes.</a> Nature Medicine. 7, 1057-1062 (2010).</li><li>Gapin, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+invariant+natural+killer+T+cells.">Development of invariant natural killer T cells.</a> Current Opinion in Immunology. 39, 68-74 (2016).</li><li>Kwon, D. I., Lee, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lineage+Differentiation+Program+of+Invariant+Natural+Killer+T+Cells.">Lineage Differentiation Program of Invariant Natural Killer T Cells.</a> Immune Network. 17 (6), (2017).</li><li>Thapa, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+differentiation+of+ROR-&#947;t+expressing+iNKT17+cells+is+orchestrated+by+Runx1.">The differentiation of ROR-&#947;t expressing iNKT17 cells is orchestrated by Runx1.</a> Scientific Reports. 7 (1), 7018 (2017).</li><li>Schurgers, E., Billiau, A., Matthys, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-induced+arthritis+as+an+animal+model+for+rheumatoid+arthritis:+focuson+interferon-&#947;.">Collagen-induced arthritis as an animal model for rheumatoid arthritis: focuson interferon-&#947;.</a> Interferon Cytokine Research. 31 (12), 917-926 (2011).</li><li>Van Haalen, H. G. M., Severens, J. L., Tran-Duy, A., Boonen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+cost-effectiveness+A+systematic+review+and+stepwise+approach+for+selecting+a+transferable+health+economic+evaluation+rheumatoid+arthritis.">How cost-effectiveness A systematic review and stepwise approach for selecting a transferable health economic evaluation rheumatoid arthritis.</a> Pharmacoeconomics. 32 (5), 429-442 (2014).</li><li>Schubert, D., Maier, B., Morawietz, L., Krenn, V., Kamradt, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+T+cell-dependent+peripheral+polyarthritis+in+genetically+unaltered+mice.">Immunization with glucose-6-phosphate isomerase induces T cell-dependent peripheral polyarthritis in genetically unaltered mice.</a> Journal of Immunology. 172, 4503-4509 (2004).</li><li>Bockermann, R., Schubert, D., Kamradt, T., Holmdahl, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+a+B-cell-dependent+chronic+arthritis+with+glucose-6-phosphate+isomerase.">Induction of a B-cell-dependent chronic arthritis with glucose-6-phosphate isomerase.</a> Arthritis Research, Therapy. 7, 131613-131624 (2005).</li><li>Kamradt, T., Schubert, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+and+clinical+implications+of+G6PI+in+experimental+models+of+rheumatoid+arthritis.">The role and clinical implications of G6PI in experimental models of rheumatoid arthritis.</a> Arthritis Research, Therapy. 7, 20-28 (2005).</li><li>Horikoshi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Invariant+NKT+Cells+with+Glycolipid+Ligand+&#945;-Galactosylceramide+Ameliorates+Glucose-6-Phosphate+Isomerase+Peptide-Induced+Arthritis.">Activation of Invariant NKT Cells with Glycolipid Ligand &#945;-Galactosylceramide Ameliorates Glucose-6-Phosphate Isomerase Peptide-Induced Arthritis.</a> PlosOne. 7 (12), 51215 (2012).</li><li>Zhang, X. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+mixed+peptides+derived+from+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+rheumatoid+arthritis+in+DBA+/1+mice.">Immunization with mixed peptides derived from glucose-6-phosphate isomerase induces rheumatoid arthritis in DBA /1 mice.</a> Chinese Journal of Pathophysiology. 32 (3), 569-576 (2016).</li><li>Motohashi, S., Nakayama, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Invariant+natural+killer+T+cell-based+immunotherapy+for+cancer.">Invariant natural killer T cell-based immunotherapy for cancer.</a> Immunotherapy. 1 (1), 73 (2017).</li><li>Jung, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+requirement+of+natural+killer+T-cells+in+tolerogenic+APCs-mediated+suppression+of+collagen-induced+arthritis.">The requirement of natural killer T-cells in tolerogenic APCs-mediated suppression of collagen-induced arthritis.</a> Experimental and Molecular Medicine. 42 (8), 547-554 (2010).</li><li>Luc, V. K., Lan, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+Potential+of+Invariant+Natural+Killer+T+Cells+in+Autoimmunity.">Therapeutic Potential of Invariant Natural Killer T Cells in Autoimmunity.</a> Frontiers in Immunology. 9, 519-526 (2018).</li><li>Chiba, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+collagen-induced+arthritis+by+natural+killer+T+cell+activation+with+OCH,+a+sphingosine-truncated+analog+of+&#945;-galactosylceramide.">Suppression of collagen-induced arthritis by natural killer T cell activation with OCH, a sphingosine-truncated analog of &#945;-galactosylceramide.</a> Arthritis, Rheumatism. 50 (1), 305-313 (2004).</li><li>Tudhope, S. J., Delwig, A. V., Falconer, J., Pratt, A., Ng, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profound+invariant+natural+killer+t-cell+deficiency+in+inflammatory+arthritis.">Profound invariant natural killer t-cell deficiency in inflammatory arthritis.</a> Annals of the Rheumatic Diseases. 69 (10), 1873-1879 (2010).</li><li>Bruns, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunization+with+an+immunodominant+self-peptide+derived+from+glucose-6-phosphate+isomerase+induces+arthritis+in+DBA/1+mice.">Immunization with an immunodominant self-peptide derived from glucose-6-phosphate isomerase induces arthritis in DBA/1 mice.</a> Arthritis Research, Therapy. 11 (4), (2009).</li><li>Parietti, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rituximab+treatment+overcomes+reduction+of+regulatory+iNKT+cells+in+patients+with+rheumatoid+arthritis.">Rituximab treatment overcomes reduction of regulatory iNKT cells in patients with rheumatoid arthritis.</a> Clinical Immunology. 134 (3), 331-339 (2010).</li><li>Yoshida, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+mechanism(s)+of+the+inhibition+of+disease+progression+by+combination+treatment+with+fingolimod+plus+pathogenic+antigen+in+a+glucose-6-phosphate+isomerase+peptide-induced+arthritis+mouse+model.">Functional mechanism(s) of the inhibition of disease progression by combination treatment with fingolimod plus pathogenic antigen in a glucose-6-phosphate isomerase peptide-induced arthritis mouse model.</a> Biological, Pharmaceutical Bulletin. 38 (8), 1120-1125 (2015).</li><li>Chen, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Study+of+the+adoptive+immunotherapy+on+rheumatoid+arthritis+with+Thymus-derived+invariant+natural+killer+T+cells.">Study of the adoptive immunotherapy on rheumatoid arthritis with Thymus-derived invariant natural killer T cells.</a> International Immunopharmacology. 67, 427-440 (2019).</li></ol>

iNKT celler är speciella T-celler som överbryggar medfödda och adaptiva immunitet och är huvudsakligen utvecklade från CD4++/ CD8+ thymocytes. iNKT celler har olika immunoregulatory funktioner och interagera med andra immunceller genom direkt kontakt och utsöndring av olika cytokiner23, som påverkar dendritiska celler (DCs), makrofager, neutrofiler, B-celler, T-celler och NK cell differentiering och utveckling2<sup class=...

Reumatoid artrit (RA) är en autoimmun sjukdom som kännetecknas av kronisk, progressiv invasivitet med 0,5–1% incidens1,2. Den underliggande patogenesen tillskrivs den onormala spridningen av autoreaktiva CD4+ och CD8+ T-celler, manifesteras av en ökning av andelen CD4+IFN-γ+ och CD4+IL-17A+ T-celler, och det minskade antalet CD4+IL-4+ och CD4+CD25+FoxP3+ T celler. Därför ökar utsöndrandet av inflammatoriska cytokiner, och en överdriven inflammatorisk reaktion förstör den inhemska balansen och toleransfunktionen i kroppens immunsystem. Dessutom, hjälparen T-lymfocyter (Th) 1 celler som tränger in i leden förvärra den inflammatoriska reaktionen och ledskador. Därför är hämning av överdriven inflammatorisk reaktion och återställande av immuntolerans och immunbalans nyckeln till behandling av RA3,4.
INKT-cellerna har både NK-cell- och T-cellfunktioner och egenskaper. INKT-cellerna hyser en distinkt, invariant T-cellsreceptor (TCR) α-kedja med begränsad TCR β-kedja repertoar5 och känner igen glykolipidantigenet som presenteras av det större histokompatibilitetskomplexet (MHC) klass I-molekylen CD1d på ytan av de antigenpresenterande cellerna. Mitsuo et al.6 upptäckte ett stort antal iNKT-celler och funktionella defekter vid många autoimmuna sjukdomar, inklusive RA. Aurore et al.7 visade att iNKT-celler har en positiv effekt på att upprätthålla autoimmun tolerans och att när antalet och funktionen hos iNKT-celler återställs lindras sjukdomen. Dessutom fann Miellot-Gafsou et al.8 att iNKT celler inte bara upphävs sjukdomen utan också ökat utvecklingen av sjukdomen. Dessa motstridiga resultat tyder på att iNKT-celler är heterogena T-celler, och funktionen hos olika undergrupper kan vändas. I en klinisk studie av RA korrelerade frekvensen av iNKT-celler med poängen för sjukdomsaktiviteten9. Resultaten bekräftade också att frekvensen av iNKT minskade hos RA-patienter, antalet CD4+IFN-γ+ T-cellundergrupper ökade och sekretoriska nivåer av inflammatoriska cytokiner IFN- γ och TNF- α ökade10,11. Dessutom undersökte Sharif et al.12 typ 1-diabetes (T1D) och fann att selektiv infusion av iNKT-celler uppreglerade uttrycket av den inflammatoriska cytokinEN IL-4, bibehållen immuntolerans och förhindrade utvecklingen av typ 1-diabetes. Därför ökar adoptivinfusion av specifika iNKT-celler eller riktad aktivering av iNKT-celler nivån av iNKT-celler hos RA-patienter, vilket kan vara ett genombrott vid RA- behandling.
Cellulär immunterapi är för närvarande av stort intresse och har använts i stor utsträckning i cancerbehandling. INKT-celler är dock sällsynta, heterogena immunoregulatory celler (endast 0,3% av det totala antalet PBMCs)13, vilket begränsar potentiella kliniska tillämpningar. Dessa celler är huvudsakligen indelade i tre subpopulationer: 1) iNKT1 celler, som har ett högt uttryck för promyelocytisk leukemi zink-finger protein (PLZF) och T-box transkription faktor (T-bet); 2) iNKT2 celler med mellanliggande uttryck för PLZF och GATA bindande protein 3 (GATA3); 3) iNKT17-celler med lågt uttryck för PLZF och retinoidrelaterad särnukleär receptor (ROR)-γt som utsöndrar IFN-γ, IL-4 och IL-1714. Aktiverade iNKT-celler utsöndrar Th1, Th2 och Th17-liknande cytokiner, som bestämmer de olika immunmodulerande effekterna av iNKT-celler15. Immunmodulerande och immunoterapeutiska effekterna av specifik aktivering av olika subpopulationer av iNKT celler är olika. Därför kan valet av specifika fenotyper av iNKT-celler (främst iNKT2) med antiinflammatoriska funktioner för att reglera kroppens immunsvar korrigera immunobalansen och immunsjukdomarna i RA.
Inrättandet av en idealisk djurmodell är av stor betydelse för behandling och studier av RA patogenes. För närvarande, de vanligaste och mogna djurmodeller inkluderar kollagen-inducerad artrit, adjuvans artrit, zymosan-inducerad artrit, och polysackarider-inducerad artrit16–17. Det finns dock ingen modell som helt kan simulera alla funktioner i mänskliga RA. Typ II kollagen-inducerad artrit (CIA) är en klassisk artrit modell. CIA induceras av immunisering av möss med typ II kollagen-specifika monoklonala antikroppar, vilket återspeglar antikroppsberoendet av denna sjukdommodell. Benurs et al. beskrev en modell med ett systemiskt immunsvar mot glukos-6-fosfatisomeras (G6PI), som inducerar perifer symmetrisk polyartrit i känsliga musstammar18,19. I denna modell beror utvecklingen av artrit på T-celler, B-celler och medfödd immunitet18,19,20. Horikoshi21 fann att RA-modeller till följd av immunisering av DBA/1 möss med G6PI polypeptidfragment är mer lika mänskliga RA i termer av CD4+ T-celler och cytokiner (dvs IL-6 och TNF-α) än CIA-modellerna. För att öka den stimulerande effekten på TCR erkännande webbplats, blandade polypeptid fragment av G6PI (hGPI325-339 och hGPI469-483) användes för att vaccinera DBA/1 möss för att konstruera RA musmodell. Framgången för detta tillvägagångssätt kan hög eftersom hGPI325-339 och hGPI469-483 är immundominanta för I-A q-begränsad T-cell svar. Därför kan denna modell simulera överproliferation av CD4+ T-celler och iNKT celldefekter hos RA-patienter22. Den grundläggande forskningen av RA immunopathology lade grunden för vår ytterligare fördjupade undersökning.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 Mouse Anti-PLZF</td>
			<td>BD</td>
			<td>563490</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PE MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-048-801</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Columns</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>MS</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryogenic Centrifuge</td>
			<td>Beckman</td>
			<td>Allegra&#174; X-15R</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DiR</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>D12731</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding Center</td>
			<td>Tianjin Aviation Electromechanical Co., Ltd.</td>
			<td>BMJ-1</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Hamster Anti-Mouse TCR &#946; Chain</td>
			<td>BD</td>
			<td>553170</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometer</td>
			<td>BD</td>
			<td>Accuri C6</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freund&#39;s complete adjuvant</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F5881</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hGPI325-339 (IWYINCFGCETHAML)</td>
			<td>Karebay Biochem</td>
			<td>18062202</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hGPI469-483 (EGNRPTNSIVFTKLT)</td>
			<td>Karebay Biochem</td>
			<td>18062203</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>In Vivo Imaging System</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>caliper IVIS lumina II</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ionomycin Calcium</td>
			<td>Cayman</td>
			<td>10004974</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KRN7000</td>
			<td>AdipoGen</td>
			<td>AG-CN2-0013</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse CD1d Tetramer-PE</td>
			<td>MBL</td>
			<td>TS-MCD-1</td>
			<td>Japan</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse percoll</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>P8620</td>
			<td>China</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optical Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Olympus-II</td>
			<td>Japan</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-CyTM5.5 Mouse anti-ROR-&#978;t</td>
			<td>BD</td>
			<td>562683</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-CyTM5.5 Mouse anti-T-bet</td>
			<td>BD</td>
			<td>561316</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pertussis toxin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7208</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phorbol esters</td>
			<td>Cayman</td>
			<td>10008014</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red Blood Cell Lysis Buffer</td>
			<td>BD</td>
			<td>555899</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI-1640</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>01-100-1ACS</td>
			<td>Israel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Th1/Th2/Th17 cytokines kit</td>
			<td>BD</td>
			<td>560485</td>
			<td>America</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultramicrotome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica EM UC6</td>
			<td>Germany</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

adoptive immunotherapy of inkt cells in glucose-6-phosphate isomerase (g6pi)-induced ra mice

Reumatoid artrit (RA) är en komplex kronisk inflammatorisk autoimmun sjukdom. Patogenesen vid sjukdomen är relaterad till invariant naturliga mördare T (iNKT) celler. Patienter med aktiv RA presenterar färre iNKT-celler, defekt cellfunktion och överdriven polarisering av Th1. I denna studie, en RA djurmodell fastställdes med hjälp av en blandning av hGPI325-339 och hGPI469-483 peptider. INKT-cellerna erhölls genom induktion och in vitro-rening, följt av infusion till RA-möss för adoptivimmunterapi. Den in vivo imaging system (IVIS) spårning visade att iNKT celler huvudsakligen distribuerades i mjälte och lever. Dag 12 efter cellbehandling avtog sjukdomsprogressionen signifikant, de kliniska symtomen lindrades, överflödet av iNKT-celler i brässökade, andelen iNKT1 i brässminskade och nivåerna av TNF-α, IFN-γ och IL-6 hos serumet minskade. Adoptiv immunterapi av iNKT-celler återställde balansen i immunceller och korrigerade den överdrivna inflammationen i kroppen.

Artrit index poäng och tass tjocklek ökade efter modellering. Jämfört med kontrollgruppen började tårna i RA-modellgruppen visa röd svullnad vid 6 dagar efter modellering, med gradvis försämring. Vid 14 dagar, den röda svullnaden i fotleden leden nådde sin topp, följt av gradvis lättnad. Tjockleken på tassen ändrades på samma sätt (P < 0,05) (figur 1).
Den inflammatoriska cellinfiltrationen ökade betydligt efter modellering. De patologis...

Watch this Scientific Journal Video about Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice at JoVE.com

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

Detta protokoll använder G6PI blandade peptider för att konstruera reumatoid artrit modeller som är närmare den mänskliga reumatoid artrit i CD4+ T celler och cytokiner. Hög renhet invariant naturlig mördare T-celler (främst iNKT2) med specifika fenotyper och funktioner erhölls genom in vivo induktion och in vitro rening för adoptiv immunterapi.

Adoptiv immunterapi av iNKT-celler i glukos-6-fosfatisomeras (G6PI)-inducerad RA Möss

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

Vårt protokoll beskriver en metod för att bygga en RA-modell. Dess framgång är över 93 procent och dess patogenes är beroende av T-celler, B-celler, och medfödd immunitet, vilket gör det möjligt för forskare att bättre studera patogenesen av RA från ett globalt immunperspektiv. Sedan använder vi INKT-celler med immunmodulerande effekter för deras behandling.INKT celler har god effekt på behandlingen genom in vivo introduktion som ger grundläggande data stöd för klinisk tillämpning av INKT celler och verkligen exploderar kliniska tillämpningsvärdet av INKT celler. Den största fördelen med denna teknik är att det är enkelt att driva och lätt att kopiera. Demonstrera förfarandet kommer att Chen Shengde, Gao Xiang, och Zhang Jingnan, doktorand från mitt laboratorium.Till att börja, väga 1,75 milligram av både HGPI325 till 339 och HGPI469 till 483 fragment och lösa upp dem i 5,25 milliliter av 4 grader Celsius trippel destillerat vatten. Lös Upp Komplett Freunds Adjuvant i ett 50 graders Celsius vattenbad. Dra 5,25 milliliter i ytterligare 10 milliliter centrifugrör och kyl det för användning.Lägg blandningen av HG6PI-lösning och Complete Freunds Adjuvant-lösning i en artificiell emulgeringsenhet med två glassprutor, anslutna. I ett isbad trycker du sprutan med en konstant hastighet och frekvens på tio till tjugo gånger per minut för att helt emulgera blandningens peptidlösning och fullborda Freunds Adjuvant-lösning. Håll sedan emulsionsdropparna i vattnet i tio minuter.Injicera därefter 150 mikroliter av de emulgerade HG6PIs i musens svansrot subkutant. Omedelbart och efter 48 timmar, injicera 200 milligram pertussis toxin i musen intraperineally. Nu, injicera normal DBA1 mus intraperineally utan gausser vid doseringen av 0.1 milligram per kilo kroppsvikt.Tre dagar efter modellering, efter anesthetisering, isolera mjälten av musen. Förbered en enda cellupphängning genom att skära och slipa mjälten i en 200 mesh sikt. Tvätta cellupphängningen med PBS.Centrifug vid 200 gånger g i fem minuter och kassera supernatanten. Re suspendera cellerna med en milliliter helblod vävnad lösning. Tillsätt tre milliliter av mus lymfocyt separationsmedium.Och sedan centrifugcellerna i 20 minuter vid 300 gånger g vid rumstemperatur. För att rena INKT-cellerna, resuspend 10 till de sjunde cellerna med 100 mikroliter av fyra grader Celsius PBS, tillsätt 10 mikroliter alfa gausser laddade CD1 tetramer PE och inkubera dem på 4 grader Celsius i femton minuter i mörker. Tvätta cellerna två gånger med PBS och resuspend dem i 80 mikroliter pbs.Tillsätt 20 mikroliter av anti-PE mikropärlor och inkubera dem i fyra grader Celsius i tjugo minuter i mörkret. Tvätta dem två gånger med PBS och resuspend cellerna med 500 mikroliter pbs. Placera sorteringskolumnen i MACS-sorterares magnetfält och skölj med 500 mikroliter pbs.Lägg till den förberedda cellupphängningen i sorteringskolumnen, samla in flödet genom och skölj tre gånger med PBS-buffert. Ta bort magnetfältet och lägg till en milliliter PBS-buffert i sorteringskolumnen. Tryck snabbt kolven med ett konstant tryck för att driva in de märkta cellerna i uppsamlingsröret.Och få de renade INKT-cellerna. Räkna med en automatiserad cellräknare. För att identifiera INKT cellen fenotyp, först, ta en gånger tio till den sjätte celler från de renade INKT celler och resuspend dem i 50 microliters av PBS.Tillsätt 0,5 mikroliter av alfa-gausser PE CD1-tetramer, eller 10 mikroliter av FITC TCR-beta i det enda positiva kontrollröret. Lägg till 0,5 mikroliter av alfa gausser PE CD1 tetramer, Lägg till 10 mikroliter av FITC TCR beta i provröret. Inkubera dem i fyra grader Celsius i trettio minuter i mörkret.Därefter tvättar du cellerna i PBS och sedan centrifug vid 200 gånger g i fem minuter. Kassera supernatanten och tillsätt en milliliter av FoxP3 fixeringspermeabilisering arbetslösning. Och inkubera cellerna i 45 minuter vid fyra grader Celsius i mörkret.Tillsätt sedan en milliliter av 1x permeabilisering arbetslösning och centrifug cellerna vid 500 gånger g vid rumstemperatur i fem minuter. Kassera supernatanten. Lägg till en mikroliter av AlexaFluor 647 mus anti-PLZF och en mikroliter av PerCP Cy5.5 mus anti-Tbet och inkubera i trettio minuter i rumstemperatur i mörker.Därefter lägger du till två mikroliter av permeabiliseringsbuffert arbetslösning och centrifug vid 200 gånger g i fem minuter för rengöring. Kassera supernatanten. Resuspend cellerna i 500 mikroliter av PBS och mäta av flödescytometri.I denna studie, jämfört med kontrollgruppen, började tårna i RA-modellgruppen visa röd svullnad efter modellering med gradvis försämring. Vid 14 dagar, den röda svullnad i fotleden toppade följt av gradvis lättnad. De patologiska resultaten visar att infiltrationsgraden av inflammatoriska celler i vristen synovial vävnad av RA modell möss var olika i olika skeden.Peak inflammation inträffade dag 14 post modellering. I RA-modellgruppen ökade serumnivåerna av proinflammatoriska cytokiner signifikant 11 dagar och 14 dagar efter modellering. Medan antiinflammatoriska cytokiner minskade avsevärt.Denna siffra visar graden av INKT2 i normala möss var runt fem procent. Frekvensen av INK2 var cirka 82 procent efter in vivo induktion. Hastigheten på INK2 var mer än 92 procent efter MACS rening.Här visar vi en metod för att emulgera de stora polypeptiden vi ser i RA. De emulgerade dropparna hålls i vattnet i 10 minuter. Resultaten är spridda. Detta protokoll är ett nytt tillägg för behandling av RA upp särskilda NKT celler.Som kan tillämpas mot cell immunterapi eller andra autoimmuna sjukdomar och tumörer. Denna modell kan stimulera den totala spridningen av CD4 T-celler och NKT celler underskott i RA patienter, som lägger grunden för i djup studie av RA immun vägar. I detta protokoll injiceras pertussistoxin interperitoneally under modellering.Använd gärna experimentella kläder och engångshandskar. Och bära alla normer för drift för att förhindra knivhugg sår en infektioner.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

Experimentell Metastas och CTL adoptiv transfer Immunterapi musmodell

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

Preparation of Tumor Antigen-loaded Mature Dendritic Cells for Immunotherapy

Framställning av tumörantigen-laddade mogna dendritceller för Immunotherapy

While clinical studies have established that antigen-loaded DC vaccines are safe and promising therapy for tumors 1, their clinical efficacy remains to be ...

Accelerated Type 1 Diabetes Induction in Mice by Adoptive Transfer of Diabetogenic CD4+ T Cells

Accelerated Type 1 Diabetes induktion i möss genom adoptiv överföring av diabetogen CD4 + T-celler

The nonobese diabetic (NOD) mouse spontaneously develops autoimmune diabetes after 12 weeks of age and is the most extensively studied animal model of ...

Intralymphatic Immunotherapy and Vaccination in Mice

Intralymfatisk Immunterapi och vaccination hos möss

Vaccines are typically injected subcutaneously or intramuscularly for stimulation of immune responses. The success of this requires efficient drainage of ...

Assessing the Development of Murine Plasmacytoid Dendritic Cells in Peyer's Patches Using Adoptive Transfer of Hematopoietic Progenitors

Bedöma utvecklingen av murina plasmacytoid dendritiska celler i Peyers Patches Använda adoptiv överföring av hematopoetiska stamfäder

This protocol details a method to analyze the ability of purified hematopoietic progenitors to generate plasmacytoid dendritic cells (pDC) in intestinal ...

Generation of CAR T Cells for Adoptive Therapy in the Context of Glioblastoma Standard of Care

Generering av CAR T-celler för adoptiv terapi som led i Glioblastoma Standard of Care

Adoptive T cell immunotherapy offers a promising strategy for specifically targeting and eliminating malignant gliomas. T cells can be engineered ex vivo ...

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induction of Murine Intestinal Inflammation by Adoptive Transfer of Effector CD4+CD45RBhigh T Cells into Immunodeficient Mice

Induktion av murina tarminflammation med adoptiv överföring av Effector CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Hög</sup&gt; T-celler i möss med immunbrist

There are many different animal models available for studying the pathogenesis of human inflammatory bowel diseases (IBD), each with its own advantages ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Induktion av förlamning och visuella systemet skada hos möss av T celler specifika för Neuromyelitis Optica Autoantigen akvaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

Generation av diskriminerande humana monoklonala antikroppar från sällsynta Antigen-specifika B-celler som cirkulerar i blodet

Monoclonal antibodies (mAbs) are powerful tools useful for both fundamental research and in biomedicine. Their high specificity is indispensable when the ...

Stereotactic Adoptive Transfer of Cytotoxic Immune Cells in Murine Models of Orthotopic Human Glioblastoma Multiforme Xenografts

Stereotaktisk överföring av cytotoxiska immunceller i murina modeller av ortotop mänskliga Glioblastoma Multiforme xenograft

Glioblastoma multiforme (GBM), the most frequent and aggressive primary brain cancer in adults, is generally associated with a poor prognosis, and scarce ...