Name: assessment of lymphocyte migration in an ex vivo transmigration system
Uploaded: 2019-09-20T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Lymphocyte Migration in an Ex Vivo Transmigration System at JoVE.com

Dit werk werd gefinancierd door de American Lung Association (K.J.W.), het Memorial Eugene Kenney Fund toegekend aan T.A.W. en K.J.W., royale start-up ondersteuning van de Universiteit van Utah voor K.J.W., en een afdeling van Veterans Affairs Award to T.A.W. (VA I01BX0003635). T.A.W. is de ontvanger van een Research Career Scientist Award (IK6 BX003781) van het departement Veterans Affairs. De auteurs willen de redactionele assistentie van mevrouw Lisa Chudomelka erkennen. De auteurs danken de unmc flow flowcytometrieonderzoeken core voor hun ondersteuning bij het verzamelen van de flow cytometrie-gegevens die voor dit manuscript zijn gegenereerd.

Alle hier beschreven methoden zijn beoordeeld en goedgekeurd door de institutionele Dierenzorg-en gebruiks comités van de Universiteit van Nebraska Medical Center (UNMC) en de Universiteit van Utah.
1. installatie en bereiding van reagentia
<ol><li>
Maak een complete RPMI (Roswell Park Memorial Institute) media.
	<ol>
<li>Voeg 10 mL warmtegeïnactiveerd foetaal serum (FBS) toe aan 90 mL RPMI.</li>
		<li>Voeg 1 mL 100x Penicillaire-streptomycine-glutamine toe aan 100 mL 10% ...

<ol>
	<li>Boyden, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemotactic+effect+of+mixtures+of+antibody+and+antigen+on+polymorphonuclear+leucocytes.">The chemotactic effect of mixtures of antibody and antigen on polymorphonuclear leucocytes.</a> The Journal of Experimental Medicine. 115, 453-466 (1962).</li><li>Moser, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Editorial:+History+of+Chemoattractant+Research.">Editorial: History of Chemoattractant Research.</a> Frontiers in Immunology. 6, 548 (2015).</li><li>Borroni, E. M., Savino, B., Bonecchi, R., Locati, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+sound+the+alarmin:+The+role+of+atypical+chemokine+in+inflammation+and+cancer.">Chemokines sound the alarmin: The role of atypical chemokine in inflammation and cancer.</a> Seminars in Immunology. 38, 63-71 (2018).</li><li>Charo, I. F., Ransohoff, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+many+roles+of+chemokines+and+chemokine+receptors+in+inflammation.">The many roles of chemokines and chemokine receptors in inflammation.</a> The New England Journal of Medicine. 354 (6), 610-621 (2006).</li><li>Abboud, D., Hanson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokine+neutralization+as+an+innovative+therapeutic+strategy+for+atopic+dermatitis.">Chemokine neutralization as an innovative therapeutic strategy for atopic dermatitis.</a> Drug Discovery Today. 22 (4), 702-711 (2017).</li><li>Aldinucci, D., Casagrande, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+the+CCL5/CCR5+Axis+against+the+Progression+of+Gastric+Cancer.">Inhibition of the CCL5/CCR5 Axis against the Progression of Gastric Cancer.</a> International Journal of Molecular Sciences. 19 (5), E1477 (2018).</li><li>Chonco, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+DNA+Aptamers+Against+CCL21+Protein:+Characterization+and+Biomedical+Applications+for+Targeted+Drug+Delivery+to+T+Cell-Rich+Zones.">Novel DNA Aptamers Against CCL21 Protein: Characterization and Biomedical Applications for Targeted Drug Delivery to T Cell-Rich Zones.</a> Nucleic Acid Therapy. 28 (4), 242-251 (2018).</li><li>Trivedi, P. J., Adams, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+and+Chemokine+Receptors+as+Therapeutic+Targets+in+Inflammatory+Bowel+Disease;+Pitfalls+and+Promise.">Chemokines and Chemokine Receptors as Therapeutic Targets in Inflammatory Bowel Disease; Pitfalls and Promise.</a> Journal of Crohn's and Colitis. 12 (12), 1508 (2018).</li><li>Pietrosimone, K. M., Bhandari, S., Lemieux, M. G., Knecht, D. A., Lynes, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+assays+of+chemotaxis+as+a+window+into+mechanisms+of+toxicant-induced+immunomodulation.">In vitro assays of chemotaxis as a window into mechanisms of toxicant-induced immunomodulation.</a> Current Protocols in Toxicology. 58 (Unit 18.17), (2013).</li><li>Davis, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+studying+the+immune+system+leads+us+to+new+medicines.">How studying the immune system leads us to new medicines.</a> Lancet. 391 (10136), 2205-2206 (2018).</li><li>Culley, F. J., Pennycook, A. M., Tregoning, J. S., Hussell, T., Openshaw, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+chemokine+expression+following+respiratory+virus+infection+reflects+Th1-+or+Th2-biased+immunopathology.">Differential chemokine expression following respiratory virus infection reflects Th1- or Th2-biased immunopathology.</a> Journal of Virology. 80 (9), 4521-4527 (2006).</li><li>Denney, H., Clench, M. R., Woodroofe, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleavage+of+chemokines+CCL2+and+CXCL10+by+matrix+metalloproteinases-2+and+-9:+implications+for+chemotaxis.">Cleavage of chemokines CCL2 and CXCL10 by matrix metalloproteinases-2 and -9: implications for chemotaxis.</a> Biochemical and Biophysics Research Communications. 382 (2), 341-347 (2009).</li><li>Burrell, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+Node+Stromal+Fiber+ER-TR7+Modulates+CD4++T+Cell+Lymph+Node+Trafficking+and+Transplant+Tolerance.">Lymph Node Stromal Fiber ER-TR7 Modulates CD4+ T Cell Lymph Node Trafficking and Transplant Tolerance.</a> Transplantation. 99 (6), 1119-1125 (2015).</li><li>Warren, K. J., Iwami, D., Harris, D. G., Bromberg, J. S., Burrell, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laminins+affect+T+cell+trafficking+and+allograft+fate.">Laminins affect T cell trafficking and allograft fate.</a> The Journal of Clinical Investigation. 124 (5), 2204-2218 (2014).</li><li>Hirata, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th2+cell+differentiation+from+naive+CD4(+)+T+cells+is+enhanced+by+autocrine+CC+chemokines+in+atopic+diseases.">Th2 cell differentiation from naive CD4(+) T cells is enhanced by autocrine CC chemokines in atopic diseases.</a> Clinical and Experimental Allergy: Journal of the British Society for Allergy and Clinical Immunology. , (2018).</li><li>Lin, R., Choi, Y. H., Zidar, D. A., Walker, J. K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=beta-Arrestin-2-Dependent+Signaling+Promotes+CCR4-mediated+Chemotaxis+of+Murine+T-Helper+Type+2+Cells.">beta-Arrestin-2-Dependent Signaling Promotes CCR4-mediated Chemotaxis of Murine T-Helper Type 2 Cells.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 58 (6), 745-755 (2018).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+antagonist+for+CCR4+attenuates+allergic+lung+inflammation+in+a+mouse+model+of+asthma.">A new antagonist for CCR4 attenuates allergic lung inflammation in a mouse model of asthma.</a> Science Reports. 7 (1), 15038 (2017).</li><li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+helper+CD4+T+cells+during+acute+and+stable+allergic+asthma.">Dynamics of helper CD4 T cells during acute and stable allergic asthma.</a> Mucosal Immunology. 11 (6), 1640-1652 (2018).</li><li>Li, B. W. S., Beerens, D., Brem, M. D., Hendriks, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Group+2+Innate+Lymphoid+Cells+in+Allergic+Airway+Inflammation+Models+in+the+Mouse.">Characterization of Group 2 Innate Lymphoid Cells in Allergic Airway Inflammation Models in the Mouse.</a> Methods in Molecular Biology. 1559, 169-183 (2017).</li><li>Li, B. W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Group+2+Innate+Lymphoid+Cells+Exhibit+a+Dynamic+Phenotype+in+Allergic+Airway+Inflammation.">Group 2 Innate Lymphoid Cells Exhibit a Dynamic Phenotype in Allergic Airway Inflammation.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1684 (2017).</li><li>Warren, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences+in+activation+of+lung-related+type-2+innate+lymphoid+cells+in+experimental+asthma.">Sex differences in activation of lung-related type-2 innate lymphoid cells in experimental asthma.</a> Annals of Allergy, Asthma, Immunology: Official Publication of the American College of Allergy, Asthma, Immunology. , (2016).</li><li>Warren, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovalbumin-sensitized+mice+have+altered+airway+inflammation+to+agriculture+organic+dust.">Ovalbumin-sensitized mice have altered airway inflammation to agriculture organic dust.</a> Respiratory Research. 20 (1), 51 (2019).</li><li>Poole, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=alphabeta+T+cells+and+a+mixed+Th1/Th17+response+are+important+in+organic+dust-induced+airway+disease.">alphabeta T cells and a mixed Th1/Th17 response are important in organic dust-induced airway disease.</a> Annals of Allergy, Asthma, Immunology: Official Publication of the American College of Allergy, Asthma, Immunology. 109 (4), 266-273 (2012).</li><li>Matsuo, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+CCR4+antagonist+ameliorates+atopic+dermatitis-like+skin+lesions+induced+by+dibutyl+phthalate+and+a+hydrogel+patch+containing+ovalbumin.">A CCR4 antagonist ameliorates atopic dermatitis-like skin lesions induced by dibutyl phthalate and a hydrogel patch containing ovalbumin.</a> Biomedical Pharmacotherapy. 109, 1437-1444 (2019).</li><li>Mikhak, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+CCR4+and+CCR8+to+antigen-specific+T(H)2+cell+trafficking+in+allergic+pulmonary+inflammation.">Contribution of CCR4 and CCR8 to antigen-specific T(H)2 cell trafficking in allergic pulmonary inflammation.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 123 (1), 67-73 (2009).</li><li>Monticelli, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+lymphoid+cells+promote+lung-tissue+homeostasis+after+infection+with+influenza+virus.">Innate lymphoid cells promote lung-tissue homeostasis after infection with influenza virus.</a> Nature Immunology. 12 (11), 1045-1054 (2011).</li><li>Saenz, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL25+elicits+a+multipotent+progenitor+cell+population+that+promotes+T(H)2+cytokine+responses.">IL25 elicits a multipotent progenitor cell population that promotes T(H)2 cytokine responses.</a> Nature. 464 (7293), 1362-1366 (2010).</li><li>Hoyler, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transcription+factor+GATA-3+controls+cell+fate+and+maintenance+of+type+2+innate+lymphoid+cells.">The transcription factor GATA-3 controls cell fate and maintenance of type 2 innate lymphoid cells.</a> Immunity. 37 (4), 634-648 (2012).</li><li>Nakajima, H., Shores, E. W., Noguchi, M., Leonard, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+common+cytokine+receptor+gamma+chain+plays+an+essential+role+in+regulating+lymphoid+homeostasis.">The common cytokine receptor gamma chain plays an essential role in regulating lymphoid homeostasis.</a> The Journal of Experimental Medicine. 185 (2), 189-195 (1997).</li><li>Warren, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RSV-specific+anti-viral+immunity+is+disrupted+by+chronic+ethanol+consumption.">RSV-specific anti-viral immunity is disrupted by chronic ethanol consumption.</a> Alcohol. , (2016).</li><li>Warren, K. J., Poole, J. A., Sweeter, J. M., DeVasure, J. M., Wyatt, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+association+between+MMP-9+and+impaired+T+cell+migration+in+ethanol-fed+BALB/c+mice+infected+with+Respiratory+Syncytial+Virus-2A.">An association between MMP-9 and impaired T cell migration in ethanol-fed BALB/c mice infected with Respiratory Syncytial Virus-2A.</a> Alcohol. , (2018).</li><li>Molteni, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+device+to+concurrently+assess+leukocyte+extravasation+and+interstitial+migration+within+a+defined+3D+environment.">A novel device to concurrently assess leukocyte extravasation and interstitial migration within a defined 3D environment.</a> Lab on a Chip. 15 (1), 195-207 (2015).</li><li>Bersini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+in+vitro+3D+co-culture+model+to+engineer+vascularized+bone-mimicking+tissues+combining+computational+tools+and+statistical+experimental+approach.">Human in vitro 3D co-culture model to engineer vascularized bone-mimicking tissues combining computational tools and statistical experimental approach.</a> Biomaterials. 76, 157-172 (2016).</li><li>Jeon, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+3D+vascularized+organotypic+microfluidic+assays+to+study+breast+cancer+cell+extravasation.">Human 3D vascularized organotypic microfluidic assays to study breast cancer cell extravasation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (1), 214-219 (2015).</li></ol>

Hierin presenteren we een vaste methode voor de beoordeling van Chemokine-geïnduceerde migratie van lymfocyten in een ex vivo-transmigratiesysteem. Er zijn verschillende kritische stappen in het Protocol, waarvan de eerste de uitdrukking van de juiste Chemokine receptor op de immuuncellen in het experiment verifieert. In onze handen kozen we CCR4 vanwege het lichaam van de literatuur die het belang van CCR4 op Th2 helper T cellen in allergische ontsteking benadrukt. Ovalbumine-geïnduceerde ontsteking werd eerder aanget...

Deze oorspronkelijke transmigratie methode werd gepresenteerd door Stephen Boyden in 1962 in het tijdschrift van experimentele geneeskunde1. Veel van wat we weten over chemotaxis en chemokinetica zou niet mogelijk zijn zonder de ontwikkeling van de Boyden kamer. Voorafgaand aan de ontdekking van de eerste Chemokine in 1977, werden ex vivo-transmigratie systemen gebruikt om te leren over serum factoren die de cellulaire beweging in macrofagen konden arresteren terwijl de cellulaire beweeglijkheid in neutrofielen1,2werd vergroot. Een enorme rijkdom aan kennis is ontwikkeld met betrekking tot de immuuncelmigratie, en tot op heden, 47 chemokines zijn nu ontdekt met 19 overeenkomstige receptoren3,4. Bovendien, menigten van remmers/versterkers van deze Chemokine trajecten hebben ondergaan ontwikkeling voor therapeutische doeleinden5,6,7,8. Veel van deze verbindingen zijn getest in soortgelijke transmigratie kamers om te begrijpen van directe interacties tussen de verbindingen en immuuncellen responsiviteit op een bepaalde Chemokine9.
Transmigratie, of diapedesis, in ontstoken weefsel is een essentieel proces voor een gezonde ontstekingsreactie op heldere infectie10,11. Een Boyden kamer, transmigratiesysteem of trans Well-apparaat bestaan over het algemeen uit twee kamers, gescheiden door een poreus membraan van1,12. De onderste kamer bevat meestal media met de Chemokine van belang, terwijl leukocyten in de bovenste kamer worden geplaatst. De grootte van de porie in het membraan kan worden geselecteerd op basis van de grootte van de cel van belang. Voor dit project selecteerden we een 3 μm poreus membraan, omdat lymfoïde cellen 7-20 μm groot zijn, afhankelijk van het stadium van cellulaire ontwikkeling. Deze poriegrootte zorgt ervoor dat deze cellen niet passief door de poriën vallen, maar dat ze actief migreren naar aanleiding van de Chemokine gradiënt.
Het grote voordeel van dit protocol is de kosteneffectiviteit. In vivo is transmigratie moeilijk omdat het uitgebreide training vereist in dier hantering en chirurgie, en vaak gaat het om krachtige microscopie die niet altijd beschikbaar is voor een onderzoeker. Kostenefficiënte screening van verbindingen die bedoeld zijn om de transmigratie te verbeteren of te remmen, kan worden uitgevoerd voordat in vivo beeldvorming mogelijk is. Omdat het transmigratiesysteem strak wordt gecontroleerd, kunnen cellen aanvankelijk worden behandeld en vervolgens aan de trans well-apparatuur worden toegevoegd, of omgekeerd kan de Chemokine eerst met een Chemokine remmer worden behandeld, waarna cellen worden toegevoegd aan de trans well-apparatuur. Tot slot kunnen endotheelcellen en/of basaalmembraan proteïnen worden toegevoegd aan de onderzijde van de transwell insert 1-2 dagen voorafgaand aan het transmigratieexperiment om de betrokkenheid van deze barrière cellen in de chemokinetica te begrijpen. Nogmaals, deze manipulaties van het systeem bieden een krachtig middel om belangrijke informatie over de effectiviteit van een bepaalde compound te bepalen voor de ingewikkeldere in vivo studies.
Het gebruik van een systeem voor de transmigratie kamer is een effectieve manier om de lymfocyten mobiliteit te beoordelen onder verschillende in vivo en in vitro omstandigheden12,13,14. Hierin beschrijven we een geoptimaliseerde methode voor het beoordelen van de responsiviteit van ex vivo lymfocyten op chemokinen in een transmigratiekamer. In dit voorbeeld experiment werden CD4+ T-cellen en groep 2 aangeboren lymfoïde cellen (ILC2) geïsoleerd van mannelijke en vrouwelijke, Balb/c-muizen na blootstelling aan OVA-allergenen. Er werd een hypothese gegenereerd dat CCR4+ CD45+ Lineage-(Lin-) ILC2 van met allergenen betwiste muizen efficiënter zou migreren naar CCL17 en CCL22 dan CCR4+ CD4+ T-helpercellen. CCL17 en CCL22 zijn chemokines die gewoonlijk worden geproduceerd door dendritische cellen en macrofagen van het m2 (allergische) fenotype, onder andere cellen, bij allergie15,16. CCL17 en CCL22 kunnen worden gezien als biomarkers van allergische ontsteking, omdat ze gemakkelijk in de longen worden gedetecteerd tijdens luchtweg exacerbaties16,17,18. Belangrijk is dat CCR4 expressie wordt verhoogd in vergelijking met onbehandelde controles, zoals blijkt uit bioinformatische gegevens die zijn gegenereerd uit ILC2 geïsoleerd van huisstofmijt behandelde dieren, en op dezelfde manier ILC2 van naïeve dieren behandeld ex vivo met IL-33 ( allergenen-bevorderend aangeboren cytokine) upregulates CCR419,20. Bovendien, volgens gegevens voor ILC2 in de database van het immunologische genoom project (www.immgen.org), CCR4 mRNA wordt sterk uitgedrukt in deze aangeboren immuuncellen. Tot op heden is er weinig bekend over de handel in ILC2 in weefsels, maar het is waarschijnlijk dat de ILC2 en CD4+ T-cellen soortgelijke chemokines en receptoren voor chemotaxis en chemokinetica gebruiken, omdat ze vergelijkbare transcriptiefactoren en receptoren uitdrukken. Zo vergeleken we CCL17 versus CCL22 responsiviteit, van ILC2 en CD4+ T-lymfocyten, van zowel mannelijke als vrouwelijke, met eicellen betwiste dieren.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.4% Trypan Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>15250061</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL syringe</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>329424</td>
			<td>U-100 Syringes Micro-Fine 28G 1/2&#34; 1cc</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100x Penicillin-Streptomycin, L-Glutamine</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10378-016</td>
			<td>Dilute to 1x in RPMI media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical tubes</td>
			<td>Olympus Plastics</td>
			<td>28-101</td>
			<td>polypropylene tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 um transwell inserts</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>25-288</td>
			<td>24-well plate containing 12 transwell inserts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3x stabilizing fixative</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>338036</td>
			<td>Prepare 1x solution according to manufacturers protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL polystyrene tubes</td>
			<td>STEM Cell Technologies</td>
			<td>38007</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical tubes</td>
			<td>Olympus Plastics</td>
			<td>28-106</td>
			<td>polypropylene tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-chamber easy separation magnet</td>
			<td>STEM Cell Technologies</td>
			<td>18103</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysing Buffer</td>
			<td>Life Technologies Corporation</td>
			<td>A1049201</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advanced cell strainer, 40 um</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>25-375</td>
			<td>nylon mesh, 40 micron strainers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminum Hydroxide, Reagent Grade</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>239186-25G</td>
			<td>20 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti- mouse CCR4; APC-conjugated</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>131211</td>
			<td>0.5 ug/test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse CD11b</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>557396</td>
			<td>0.5 ug/test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse CD11c; PE eFluor 610</td>
			<td>Thermo-Fischer Scientific</td>
			<td>61-0114-82</td>
			<td>0.25 ug/test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse CD16/32, Fc block</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>553141</td>
			<td>0.5 ug/test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse CD19; APC-eFluor 780 conjugated</td>
			<td>Thermo-Fischer Scientific</td>
			<td>47-0193-82</td>
			<td>0.5 ug/test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse CD3; PE Cy 7-conjugated</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>552774</td>
			<td>0.25 ug/test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse CD45; PE conjugated</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>56087</td>
			<td>0.5 ug/test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse ICOS (CD278)</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>564070</td>
			<td>0.5 ug/test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse NK1.1 (CD161); FITC-conjugated</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>553164</td>
			<td>0.25 ug/test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse ST2 (IL-33R); PerCP Cy5.5 conjugated</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>145311</td>
			<td>0.5 ug/test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated Cell Counter</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td>1450102</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated Dissociator</td>
			<td>MACS Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-235</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin, Lyophilized Powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2153-10G</td>
			<td>0.5% in serum-free RPMI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Counter Clides</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td>1450015</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken Egg Ovalbumin, Grade V</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5503-10G</td>
			<td>500 ug/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase, Type 1, Filtered</td>
			<td>Worthington Biochemical Corporation</td>
			<td>CLSS-1, purchase as 5 X 50 mg vials (LS004216)</td>
			<td>25 U/mL in RPMI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>compensation beads</td>
			<td>Affymetrix</td>
			<td>01-1111-41</td>
			<td>1 drop per contol tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissociation Tubes</td>
			<td>MACS Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-096-335</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Buffer</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>554657</td>
			<td>1x PBS + 2% FBS, w/ sodium azide; stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat Inactivated-FBS</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>25-525H</td>
			<td>10% in complete RPMI &#38; ILC2 Expansion Media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse CCL17</td>
			<td>GenScript</td>
			<td>Z02954-20</td>
			<td>50 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse CCL22</td>
			<td>GenScript</td>
			<td>Z02856-20</td>
			<td>50 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse CD4+ T cell enrichment kit</td>
			<td>STEM Cell Technologies</td>
			<td>19852</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse IL-2</td>
			<td>GenScript</td>
			<td>Z02764-20</td>
			<td>20 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse ILC2 enrichment kit</td>
			<td>STEM Cell Technologies</td>
			<td>19842</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse recombinant IL-33</td>
			<td>STEM Cell Technologies</td>
			<td>78044</td>
			<td>20 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI</td>
			<td>Life Technologies Corporation</td>
			<td>22400071</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Separation Buffer</td>
			<td>STEM Cell Technologies</td>
			<td>20144</td>
			<td>1 X PBS + 2% FBS; stored at 4C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>small animal nebulizer and chamber</td>
			<td>Data Sciences International</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sterile saline</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>2F7124; NDC 0338-0048-04</td>
			<td>0.9% Sodium Chloride</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of lymphocyte migration in an ex vivo transmigration system

Hierin presenteren we een efficiënte methode die kan worden uitgevoerd met elementaire laboratorium vaardigheden en-materialen om de chemokinetische beweging van lymfocyten in een ex vivo-transmigratie systeem te beoordelen. Groep 2 aangeboren lymfoïde cellen (ILC2) en CD4+ T helper cellen werden geïsoleerd uit milt en longen van kip ei ovalbumine (OVA)-uitgedaagd Balb/c muizen. We bevestigden de uitdrukking van CCR4 op zowel CD4+ T-cellen als ILC2, relatief. CCL17 en CCL22 zijn de bekende liganden voor CCR4; Daarom onderzochten we met deze ex vivo-transmigratie methode CCL17- en CCL22-geïnduceerde beweging van CCR4+ lymfocyten. Om Chemokine gradiënten vast te stellen, werden CCL17 en CCL22 in de onderste kamer van het transmigratiesysteem geplaatst. Geïsoleerde lymfocyten werden vervolgens toegevoegd aan topkamers en over een periode van 48 uur werden de lymfocyten actief gemigreerd via 3 μm poriën naar de Chemokine in de onderste kamer. Dit is een effectief systeem voor het bepalen van de chemokinetica van lymfocyten, maar, begrijpelijkerwijs, niet nabootsen van de complexiteiten gevonden in de in vivo Organ micro-omgevingen. Dit is een beperking van de methode die kan worden overwonnen door de toevoeging van in situ beeldvorming van het orgel en lymfocyten onder studie. Het voordeel van deze methode is daarentegen dat deze kan worden uitgevoerd door een technicus op instapniveau die een veel kosteneffectiever tarief heeft dan live Imaging. Aangezien therapeutische verbindingen beschikbaar komen om de migratie te verbeteren, zoals in het geval van tumor infiltrerende cytotoxische immuuncellen, of om migratie te remmen, misschien in het geval van auto-immuunziekten waar Immunopathologie van belang is, kan deze methode worden gebruikt als een screening tool. In het algemeen is de methode effectief als de Chemokine van belang consequent chemokinetica genereert op een statistisch hoger niveau dan de media controle. In dergelijke gevallen kan de mate van remming/verbetering door een bepaalde verbinding ook worden bepaald.

CCR4 expressie op CD4 + T-cellen en ILC2.
Voor het succes van het ex vivo transmigratie-experiment is het noodzakelijk om te bepalen of de lymfocyten reageren op CCL17 en CCL22 door middel van CCR4; Daarom bepaalden we CCR4 expressie op zowel CD4+ T-cellen als ILC2 door Flowcytometrie. Hoewel het bekend is dat OVA-specifieke CD4+ helper T cellen Express CCR4, minder is bekend van de uitdrukking van CCR4 op ILC2. Figuur 1 toon...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Lymphocyte Migration in an Ex Vivo Transmigration System at JoVE.com

Assessment of Lymphocyte Migration in an Ex Vivo Transmigration System

In dit protocol worden lymfocyten in de bovenste kamer van een transmigratiesysteem geplaatst, gescheiden van de onderste kamer door een poreus membraan. Chemokine wordt toegevoegd aan de onderste kamer, die actieve migratie langs een Chemokine gradiënt induceert. Na 48 h worden lymfocyten in beide kamers geteld tot transmigratiegekwantata.

Beoordeling van de lymfocyten migratie in een ex vivo-Transmigratiesysteem

Herein, we present an efficient method that can be executed with basic laboratory skills and materials to assess lymphocyte chemokinetic movement in an ex ...

Lymfocytentransmigratie is een belangrijk kenmerk van elke immuunrespons. Daarom is dit protocol belangrijk omdat het een onderzoeker in staat stelt om de mobiliteit van lymfocyten in een goed gedefinieerd in vitrosysteem te beoordelen. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat verschillende chemokines kunnen worden beoordeeld om hun effectiviteit van inducerende migratie in recent gedefinieerde cellen te bepalen, zoals de groep twee aangeboren lymfoïde cellen, of ILC2.Een tweede voordeel is dat remmers of biologische therapieën gericht op het blokkeren van bepaalde chemokine trajecten kunnen worden getest met deze methode voorafgaand aan het doen van duurdere experimenten met dieren. Begin met het uitsnijden van longen en milt van geëuthanaseerde eicellen behandelde mannelijke en vrouwelijke muizen met behulp van twee tot drie dieren per groep. Plaats uitgesneden weefsels in afzonderlijke dissociatiebuizen op basis van weefseltype en dierlijk geslacht.Plaats het longweefsel in 500 microliters van longdissociatiemedia in een dissociatiebuis, plaats de buis in de geautomatiseerde weefseldissociator en distantieer het met behulp van het longprotocol. Herhaal deze stappen in totaal twee keer. Om miltweefsel te scheiden, plaatst u het in 500 microliters van volledige RPMI-media in de dissociator en gebruikt u vervolgens het miltprotocol.Werken in een biologische veiligheidskast met behulp van steriele techniek van nu af aan, filter elk gescheiden weefsel door een 40-micrometer cel zeef, en verzamelen in 50-milliliter conische buizen. Spoel de dissociatiebuizen met longhomogenates met vijf milliliter extra longdissociatiemedia, buizen met milthomogenates met vijf milliliter complete RPMI's en filter de inhoud ervan door de filters die voor de bijbehorende weefsels worden gebruikt. Om het longweefsel verder te scheiden, homoogeneert incubeer long gedurende 15 tot 30 minuten in een 37-graden Celsius incubator met 5% kooldioxide.Voeg vervolgens vijf milliliter complete RPMI toe aan zowel de long- als milthomogenates en centrifuge. Na het weggooien van de supernatant, combineer de pellets met splenocyten en longcellen uit de groep dieren van hetzelfde geslacht in een enkele 50-milliliter conische buis. Voeg 10 milliliter complete RPMI toe aan elke buis en maak het opnieuw op.Bepaal het totale aantal cellen met behulp van een geautomatiseerde celteller. Pas mannelijke en vrouwelijke celsuspensies aan tot 100 miljoen cellen per milliliter in scheidingsbuffer en voeg vervolgens toe aan een polystyreenbuis van vijf milliliter. Gebruik na het isoleren van groep twee aangeboren lymfoïdecellen uit 2/3 van de totale cellen zoals beschreven in het manuscript, de resterende cellen voor de CD4-positieve T-celisolatieprocedure.Om cd4-positieve T-celisolatie te starten, voegt u rattenserum toe aan de CD4 T-celverrijkingsssuspensie. Voeg vervolgens isolatiecocktail toe aan het celmonster en broed gedurende 10 minuten bij kamertemperatuur. Vortex snelle bollen gedurende 30 seconden, en toe te voegen aan de cel monster om een verdunning van 75 microliter per milliliter te bereiken.Meng en broed gedurende 2 1/2 minuten op kamertemperatuur. Top de monsters met ongeveer twee milliliter scheiding buffer tot drie milliliter, plaats de vijf-milliliter buizen in de acht-kamer gemakkelijke scheiding magneet, en uitbroeden gedurende vijf minuten bij kamertemperatuur. Dan tip de magneet naar voren, en pipette elke cel schorsing in een schone vijf milliliter buis.Voeg 1,5 milliliter serumvrije RPMI toe aan elke buis en centrifuge. Giet de supernatant af en verdaag de CD4-positieve T-celpellet op 10 miljoen cellen per milliliter in serumvrije RPMI. Om dit deel van het protocol te beginnen, bepaalt u het aantal Transwell-inserts dat nodig is voor het experiment voor zowel ILC2- als CD4-positieve T-cellen zoals beschreven in het manuscript.Beweeg voorzichtig drie-micron Transwell inserts van de middelste rijen van een 24-well plaat naar de bovenste en onderste rijen van dezelfde 24-put plaat met een pipet tip en gehandschoende handen. Voeg 500 microliters migratiemedia toe met CCL17 tot 1/3 van de putten in de middelste rij van de 24-putplaat. Voeg 500 microliters migratiemedia met CCL22 toe aan nog eens 1/3 van de putten.En voeg tenslotte 500 microliter serumvrije RPMI toe zonder chemokine aan de laatste 1/3 van de putten. Label het deksel op de plaat duidelijk met de naam van de juiste transmigratiemedia die in de onderste putten zijn geplaatst. Plaats vervolgens de Transwell-inzetjes terug in de putten met de verschillende behandelingen.Voeg voorzichtig 100 microliter cd4 T-cellen of ILC2 toe aan de bovenste put van elke wisselplaat, om ervoor te zorgen dat de celopening niet op en neer in de Transwells wordt gemengd of pipette. Label het deksel op de plaat duidelijk met het celtype geplaatst in elke put, en schrijf de datum en het tijdstip van de dag dat de cellen zijn toegevoegd. Herhaal dit proces vanaf het verwijderen van de Transwell inserts van de plaat totdat alle cellen zijn geplaatst in Transwell inserts met media.Zodra de cellen van belang zijn geïsoleerd, de belangrijkste stappen zijn om bij te houden van de chemokines en celtypes die zijn geplaatst in bepaalde putten, om voorzichtig cellen toe te voegen aan de bovenste kamers, en ten slotte om onnodig contact met de transmigratie plaat te voorkomen tijdens de 48-uurs incubatie. Plaats de plaat voorzichtig in een 37-graden Celsius incubator met 5%kooldioxide, en incubeer gedurende 48 uur, zorg ervoor dat het contact met de plaat te minimaliseren over de incubatietijd. Nadat u de plaat voorzichtig uit de couveuse hebt verwijderd, verwijdert u alle Transwell-inzetstukken uit de middelste rijen in de lege putten net boven of onder.Verzamel de cellen van de boven- en onderputten van de Transwell-invoegt in buizen met boven- of onderkant met CCL17, CCL22 of media, met het celtype en met het replicerend nummer. Spoel de onderste putten met 500 microliters van 1x PBS, verzamel het in de bijbehorende buizen en doe hetzelfde voor de bovenste putten. Centrifugeren de buizen op 378 keer g bij kamertemperatuur gedurende vijf minuten.Gebruik een pipet om voorzichtig te verwijderen van alle supernatant, en vervolgens resuspend T-cel en ILC2 pellets met 50 microliters van 1x PBS. Na het verwijderen van 10 microliter van de celsuspensie, voeg 90 microliter van 0,4% trypan blauw. Tel de cellen op de geautomatiseerde celteller.En voor elk monster, record percentage van de levensvatbaarheid en het aantal cellen per milliliter, en bepalen het totale aantal cellen per behandeling in de boven-en onderkant kamer. Toen de CCR4-expressie werd beoordeeld op zowel CD4-positieve T-cellen als ILC2 door stroomcytometrie, waren er geen verschillen tussen mannelijke en vrouwelijke gastheren. De expressie van CCR4 per cel op ILC2 was echter hoger in vergelijking met CD4-positieve T-cellen.Toen de onderste kamer van het Transwell-apparaat was gevuld met onbehandelde celkweekmedia, media met CCL22 of media met CCL17, migreerde minder dan 14% van de cellen in mediacontroleomstandigheden. In reactie op CCL22, beide celtypen, ongeacht of ze van mannelijke of vrouwelijke gastheren, gereageerd op CCL22. CCL22 veroorzaakte ook een grotere migratie dan CCL17 in mannelijke ILC2.Aan de andere kant, CCL17 geïnduceerde aanzienlijke migratie van de vrouwelijke CD4 T-cellen en ILC2 in vergelijking met de media alleen. CCL17 behandeling was niet anders dan media voor mannelijke CD4-positieve T-cellen of mannelijke ILC2. Onder suboptimale omstandigheden, toen de plaat met CD4 cellen bleef op kamertemperatuur voor de eerste 24 uur en vervolgens verplaatst naar de incubator, was er geen migratie naar CCL22 en CCL17.Bovendien was de levensvatbaarheid van de cellen bijzonder laag voor de cellen in de onderste kamer, waaruit bleek hoe belangrijk het is om de juiste temperaturen en omstandigheden te gebruiken die in dit protocol worden beschreven om optimale resultaten te bereiken. Zodra de transmigratieprocedure is voltooid, moet men zien aanzienlijke migratie naar de chemokine van belang in vergelijking met de media controle putten. Als er geen significante migratie wordt gezien, kan men ervan uitgaan dat de procedure niet goed heeft gewerkt of dat de lymfocyten niet reageren op de chemokine in kwestie.Deze techniek kan in grote lijnen worden gebruikt om lymfocytenmigratie te begrijpen wanneer deze lymfocyten een breed scala aan in vivo behandelingen hebben ondergaan.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

Human T-lymfocyt Isolatie, Cultuur en Analyse van de migratie In Vitro</em

The migration of T lymphocytes involves the adhesive interaction of cell surface integrins with ligands expressed on other cells or with extracellular ...

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Niet-invasieve beeldvorming van Leukocyte Homing en migratie In vivo</em

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists.  The value of 2P microscopy is that it ...

Quantitative Assessment of Human Neutrophil Migration Across a Cultured Bladder Epithelium

Kwantitatieve beoordeling van Human migratie van neutrofielen door een Gekweekte blaas epitheel

The recruitment of immune cells from the periphery to the site of inflammation is an essential step in the innate immune response at any mucosal surface. ...

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Het beoordelen van de Aangeboren Sensing van HIV-1 geïnfecteerde CD4<sup&gt; +</sup&gt; T cellen door plasmacytoïde dendritische cellen gebruiken een<em&gt; Ex vivo</em&gt; Co-cultuur systeem.

HIV-1 innate sensing requires direct contact of infected CD4+ T cells with plasmacytoid dendritic cells (pDCs). In order to study this process, the ...

An Ex vivo Model of an Oligodendrocyte-directed T-Cell Attack in Acute Brain Slices

An Ex vivo Model of an Oligodendrocyte-directed T-Cell Attack in Acute Brain Slices

Een<em&gt; Ex vivo</em&gt; Model van een Oligodendrocyte gericht T-Cell Attack in Acute Brain Slices

Death of oligodendrocytes accompanied by destruction of neurons and axons are typical histopathological findings in cortical and subcortical grey matter ...

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymfocyt Isolatie van Human Skin voor Fenotypische Analyse en<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Cell Culture

Human skin has an important barrier function and contains various immune cells that contribute to tissue homeostasis and protection from pathogens. As the ...

Isolation and Ex Vivo Culture of V&#948;1+CD4+&#947;&#948; T Cells, an Extrathymic &#945;&#946;T-cell Progenitor

Isolation and Ex Vivo Culture of VÃƒÅ½Ã‚Â´1+CD4+ÃƒÅ½Ã‚Â³ÃƒÅ½Ã‚Â´ T Cells, an Extrathymic ÃƒÅ½Ã‚Â±ÃƒÅ½Ã‚Â²T-cell Progenitor

Isolatie en<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Cultuur van Vδ1<sup&gt; +</sup&gt; CD4<sup&gt; +</sup&gt; γδ T-cellen, een Extrathymic αβT-cel Progenitor

The thymus, the primary organ for the generation of &#945;&#946; T cells and backbone of the adaptive immune system in vertebrates, has long been ...

Flow Cytometric Analysis of Particle-bound Bet v 1 Allergen in PM10

Flow cytometrische analyse van deeltjes gebonden Bet v 1 allergeen in PM10

Flow cytometry is a method widely used to quantify suspended solids such as cells or bacteria in a size range from 0.5 to several tens of micrometers in ...

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo Cell Trafficking by PET/CT

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo  Cell Trafficking by PET/CT

Muizen-lymfocyt Labeling door<sup&gt; 64</sup&gt; Cu-Antibody Receptor targeting voor<em&gt; In Vivo</em&gt; Celverkeer PET / CT

This protocol illustrates the production of 64Cu and the chelator conjugation/radiolabeling of a monoclonal antibody (mAb) followed by murine lymphocyte ...