Name: assessment of lymphocyte migration in an ex vivo transmigration system
Uploaded: 2019-09-20T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Lymphocyte Migration in an Ex Vivo Transmigration System at JoVE.com

Bu çalışma Amerikan Akciğer Birliği (K.J.W.), T.A.W. ve K.J.W.'ye verilen Memorial Eugene Kenney fonu, Utah Üniversitesi'nden K.J.W. için cömert başlangıç desteği ve T.A.W. (VA I01BX0003635) gaziler bölümü tarafından finanse edilmiştir. T.A.W. Gaziler İşleri Bölümü'nden Bir Araştırma Kariyer Bilim Adamı Ödülü (IK6 BX003781) sahibidir. Yazarlar Bayan Lisa Chudomelka editoryal yardım kabul etmek istiyorum. Yazarlar bu makale için oluşturulan akış sitometri veri toplama destekiçin UNMC Akış Sitometri çekirdek teşekkür ederiz.

Burada açıklanan tüm yöntemler Nebraska Üniversitesi Tıp Merkezi (UNMC) ve Utah Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komiteleri tarafından gözden geçirildi ve onaylandı.
1. Reaktiflerin Kurulumu ve Hazırlanması
<ol><li>
Komple RPMI (Roswell Park Memorial Institute) medya hazırlayın.
	<ol>
<li>90 mL RPMI'ye 10 mL ısı yalıtılmış fetal sığır serumu (FBS) ekleyin.</li>
		<li>100x Penisilin-Streptomisin-Glutamin 100 mL% 10 FBS RPMI 1mL ekleyin....

<ol>
	<li>Boyden, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+chemotactic+effect+of+mixtures+of+antibody+and+antigen+on+polymorphonuclear+leucocytes.">The chemotactic effect of mixtures of antibody and antigen on polymorphonuclear leucocytes.</a> The Journal of Experimental Medicine. 115, 453-466 (1962).</li><li>Moser, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Editorial:+History+of+Chemoattractant+Research.">Editorial: History of Chemoattractant Research.</a> Frontiers in Immunology. 6, 548 (2015).</li><li>Borroni, E. M., Savino, B., Bonecchi, R., Locati, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+sound+the+alarmin:+The+role+of+atypical+chemokine+in+inflammation+and+cancer.">Chemokines sound the alarmin: The role of atypical chemokine in inflammation and cancer.</a> Seminars in Immunology. 38, 63-71 (2018).</li><li>Charo, I. F., Ransohoff, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+many+roles+of+chemokines+and+chemokine+receptors+in+inflammation.">The many roles of chemokines and chemokine receptors in inflammation.</a> The New England Journal of Medicine. 354 (6), 610-621 (2006).</li><li>Abboud, D., Hanson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokine+neutralization+as+an+innovative+therapeutic+strategy+for+atopic+dermatitis.">Chemokine neutralization as an innovative therapeutic strategy for atopic dermatitis.</a> Drug Discovery Today. 22 (4), 702-711 (2017).</li><li>Aldinucci, D., Casagrande, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+the+CCL5/CCR5+Axis+against+the+Progression+of+Gastric+Cancer.">Inhibition of the CCL5/CCR5 Axis against the Progression of Gastric Cancer.</a> International Journal of Molecular Sciences. 19 (5), E1477 (2018).</li><li>Chonco, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+DNA+Aptamers+Against+CCL21+Protein:+Characterization+and+Biomedical+Applications+for+Targeted+Drug+Delivery+to+T+Cell-Rich+Zones.">Novel DNA Aptamers Against CCL21 Protein: Characterization and Biomedical Applications for Targeted Drug Delivery to T Cell-Rich Zones.</a> Nucleic Acid Therapy. 28 (4), 242-251 (2018).</li><li>Trivedi, P. J., Adams, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+and+Chemokine+Receptors+as+Therapeutic+Targets+in+Inflammatory+Bowel+Disease;+Pitfalls+and+Promise.">Chemokines and Chemokine Receptors as Therapeutic Targets in Inflammatory Bowel Disease; Pitfalls and Promise.</a> Journal of Crohn's and Colitis. 12 (12), 1508 (2018).</li><li>Pietrosimone, K. M., Bhandari, S., Lemieux, M. G., Knecht, D. A., Lynes, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+assays+of+chemotaxis+as+a+window+into+mechanisms+of+toxicant-induced+immunomodulation.">In vitro assays of chemotaxis as a window into mechanisms of toxicant-induced immunomodulation.</a> Current Protocols in Toxicology. 58 (Unit 18.17), (2013).</li><li>Davis, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+studying+the+immune+system+leads+us+to+new+medicines.">How studying the immune system leads us to new medicines.</a> Lancet. 391 (10136), 2205-2206 (2018).</li><li>Culley, F. J., Pennycook, A. M., Tregoning, J. S., Hussell, T., Openshaw, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+chemokine+expression+following+respiratory+virus+infection+reflects+Th1-+or+Th2-biased+immunopathology.">Differential chemokine expression following respiratory virus infection reflects Th1- or Th2-biased immunopathology.</a> Journal of Virology. 80 (9), 4521-4527 (2006).</li><li>Denney, H., Clench, M. R., Woodroofe, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cleavage+of+chemokines+CCL2+and+CXCL10+by+matrix+metalloproteinases-2+and+-9:+implications+for+chemotaxis.">Cleavage of chemokines CCL2 and CXCL10 by matrix metalloproteinases-2 and -9: implications for chemotaxis.</a> Biochemical and Biophysics Research Communications. 382 (2), 341-347 (2009).</li><li>Burrell, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+Node+Stromal+Fiber+ER-TR7+Modulates+CD4++T+Cell+Lymph+Node+Trafficking+and+Transplant+Tolerance.">Lymph Node Stromal Fiber ER-TR7 Modulates CD4+ T Cell Lymph Node Trafficking and Transplant Tolerance.</a> Transplantation. 99 (6), 1119-1125 (2015).</li><li>Warren, K. J., Iwami, D., Harris, D. G., Bromberg, J. S., Burrell, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laminins+affect+T+cell+trafficking+and+allograft+fate.">Laminins affect T cell trafficking and allograft fate.</a> The Journal of Clinical Investigation. 124 (5), 2204-2218 (2014).</li><li>Hirata, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th2+cell+differentiation+from+naive+CD4(+)+T+cells+is+enhanced+by+autocrine+CC+chemokines+in+atopic+diseases.">Th2 cell differentiation from naive CD4(+) T cells is enhanced by autocrine CC chemokines in atopic diseases.</a> Clinical and Experimental Allergy: Journal of the British Society for Allergy and Clinical Immunology. , (2018).</li><li>Lin, R., Choi, Y. H., Zidar, D. A., Walker, J. K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=beta-Arrestin-2-Dependent+Signaling+Promotes+CCR4-mediated+Chemotaxis+of+Murine+T-Helper+Type+2+Cells.">beta-Arrestin-2-Dependent Signaling Promotes CCR4-mediated Chemotaxis of Murine T-Helper Type 2 Cells.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 58 (6), 745-755 (2018).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+antagonist+for+CCR4+attenuates+allergic+lung+inflammation+in+a+mouse+model+of+asthma.">A new antagonist for CCR4 attenuates allergic lung inflammation in a mouse model of asthma.</a> Science Reports. 7 (1), 15038 (2017).</li><li>Lu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+helper+CD4+T+cells+during+acute+and+stable+allergic+asthma.">Dynamics of helper CD4 T cells during acute and stable allergic asthma.</a> Mucosal Immunology. 11 (6), 1640-1652 (2018).</li><li>Li, B. W. S., Beerens, D., Brem, M. D., Hendriks, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Group+2+Innate+Lymphoid+Cells+in+Allergic+Airway+Inflammation+Models+in+the+Mouse.">Characterization of Group 2 Innate Lymphoid Cells in Allergic Airway Inflammation Models in the Mouse.</a> Methods in Molecular Biology. 1559, 169-183 (2017).</li><li>Li, B. W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Group+2+Innate+Lymphoid+Cells+Exhibit+a+Dynamic+Phenotype+in+Allergic+Airway+Inflammation.">Group 2 Innate Lymphoid Cells Exhibit a Dynamic Phenotype in Allergic Airway Inflammation.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1684 (2017).</li><li>Warren, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+differences+in+activation+of+lung-related+type-2+innate+lymphoid+cells+in+experimental+asthma.">Sex differences in activation of lung-related type-2 innate lymphoid cells in experimental asthma.</a> Annals of Allergy, Asthma, Immunology: Official Publication of the American College of Allergy, Asthma, Immunology. , (2016).</li><li>Warren, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ovalbumin-sensitized+mice+have+altered+airway+inflammation+to+agriculture+organic+dust.">Ovalbumin-sensitized mice have altered airway inflammation to agriculture organic dust.</a> Respiratory Research. 20 (1), 51 (2019).</li><li>Poole, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=alphabeta+T+cells+and+a+mixed+Th1/Th17+response+are+important+in+organic+dust-induced+airway+disease.">alphabeta T cells and a mixed Th1/Th17 response are important in organic dust-induced airway disease.</a> Annals of Allergy, Asthma, Immunology: Official Publication of the American College of Allergy, Asthma, Immunology. 109 (4), 266-273 (2012).</li><li>Matsuo, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+CCR4+antagonist+ameliorates+atopic+dermatitis-like+skin+lesions+induced+by+dibutyl+phthalate+and+a+hydrogel+patch+containing+ovalbumin.">A CCR4 antagonist ameliorates atopic dermatitis-like skin lesions induced by dibutyl phthalate and a hydrogel patch containing ovalbumin.</a> Biomedical Pharmacotherapy. 109, 1437-1444 (2019).</li><li>Mikhak, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+CCR4+and+CCR8+to+antigen-specific+T(H)2+cell+trafficking+in+allergic+pulmonary+inflammation.">Contribution of CCR4 and CCR8 to antigen-specific T(H)2 cell trafficking in allergic pulmonary inflammation.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 123 (1), 67-73 (2009).</li><li>Monticelli, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+lymphoid+cells+promote+lung-tissue+homeostasis+after+infection+with+influenza+virus.">Innate lymphoid cells promote lung-tissue homeostasis after infection with influenza virus.</a> Nature Immunology. 12 (11), 1045-1054 (2011).</li><li>Saenz, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL25+elicits+a+multipotent+progenitor+cell+population+that+promotes+T(H)2+cytokine+responses.">IL25 elicits a multipotent progenitor cell population that promotes T(H)2 cytokine responses.</a> Nature. 464 (7293), 1362-1366 (2010).</li><li>Hoyler, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transcription+factor+GATA-3+controls+cell+fate+and+maintenance+of+type+2+innate+lymphoid+cells.">The transcription factor GATA-3 controls cell fate and maintenance of type 2 innate lymphoid cells.</a> Immunity. 37 (4), 634-648 (2012).</li><li>Nakajima, H., Shores, E. W., Noguchi, M., Leonard, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+common+cytokine+receptor+gamma+chain+plays+an+essential+role+in+regulating+lymphoid+homeostasis.">The common cytokine receptor gamma chain plays an essential role in regulating lymphoid homeostasis.</a> The Journal of Experimental Medicine. 185 (2), 189-195 (1997).</li><li>Warren, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RSV-specific+anti-viral+immunity+is+disrupted+by+chronic+ethanol+consumption.">RSV-specific anti-viral immunity is disrupted by chronic ethanol consumption.</a> Alcohol. , (2016).</li><li>Warren, K. J., Poole, J. A., Sweeter, J. M., DeVasure, J. M., Wyatt, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+association+between+MMP-9+and+impaired+T+cell+migration+in+ethanol-fed+BALB/c+mice+infected+with+Respiratory+Syncytial+Virus-2A.">An association between MMP-9 and impaired T cell migration in ethanol-fed BALB/c mice infected with Respiratory Syncytial Virus-2A.</a> Alcohol. , (2018).</li><li>Molteni, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+device+to+concurrently+assess+leukocyte+extravasation+and+interstitial+migration+within+a+defined+3D+environment.">A novel device to concurrently assess leukocyte extravasation and interstitial migration within a defined 3D environment.</a> Lab on a Chip. 15 (1), 195-207 (2015).</li><li>Bersini, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+in+vitro+3D+co-culture+model+to+engineer+vascularized+bone-mimicking+tissues+combining+computational+tools+and+statistical+experimental+approach.">Human in vitro 3D co-culture model to engineer vascularized bone-mimicking tissues combining computational tools and statistical experimental approach.</a> Biomaterials. 76, 157-172 (2016).</li><li>Jeon, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+3D+vascularized+organotypic+microfluidic+assays+to+study+breast+cancer+cell+extravasation.">Human 3D vascularized organotypic microfluidic assays to study breast cancer cell extravasation.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (1), 214-219 (2015).</li></ol>

Burada, eksvivo transmigration sisteminde lenfositlerin kemokin kaynaklı göçlerini değerlendirmek için köklü bir yöntem sayılmiyoruz. Protokolde birkaç kritik adım vardır, bunlardan ilki deneydeki bağışıklık hücreleri üzerindeki doğru kemokin reseptörünün ekspresyonunu doğrulamaktır. Elimizde, biz alerjik inflamasyon Th2 yardımcı T hücrelerinde CCR4 önemini vurgulayan literatür vücut nedeniyle CCR4 seçti. Ovalbumin kaynaklı inflamasyon daha önce en az iki CCR4 antagonisti<sup class="xref...

Bu orijinal transmigration yöntemi Stephen Boyden tarafından 1962 yılında Journal of Experimental Medicine1'desunulmuştur. Kemotaksis ve keokinetik hakkında bildiklerimiz Boyden odasının gelişimi olmadan mümkün olmazdı. 1977 yılında ilk kemokin keşfinden önce, ex vivo transmigration sistemleri nötrofiller hücresel hareketlilik yükseltirken makrofajlarda hücresel hareketi durdurabilecek serum faktörleri hakkında bilgi edinmek için kullanılmıştır1,2. Bağışıklık hücresi göçü ile ilgili olarak büyük bir bilgi zenginliği geliştirilmiştir, ve bugüne kadar, 47 kemokinler şimdi 19 ilgili reseptörleri3ile keşfedilmiştir,4. Buna ek olarak, inhibitörleri / bu kemokin yollarının arttırıcılar çoksayıda terapötik amaçlar için geliştirme uğramıştır5,6,7,8. Bu bileşiklerin çoğu belirli bir kemokin 9 bileşikler ve bağışıklık hücresi yanıt arasındaki doğrudan etkileşimleri anlamak için benzer transmigration odalarında test edilmiştir.
Transmigration, veya diapedesis, iltihaplı doku içine açık enfeksiyon için sağlıklı bir inflamatuar yanıt için önemli bir süreçtir10,11. Bir Boyden odası, transmigration sistemi, veya transwell cihazları genellikle gözenekli bir membran1,12ile ayrılmış iki odacık oluşur. Alt oda en sık ilgi chemokine içeren medya tutar, lökositler üst odaya yerleştirilir iken. Membrandaki gözeneğin boyutu, ilgi çeken hücrenin büyüklüğüne göre seçilebilir. Bu proje için, lenfoid hücreler hücresel gelişim aşamasına bağlı olarak 7-20 μm boyutunda olduğundan, 3 μm gözenekli membran seçtik. Bu gözenek boyutu, bu hücrelerin gözeneklerin içinden pasif olarak düşmemesini, ancak kemokin degradesine yanıt olarak aktif olarak göç etmesini sağlar.
Bu protokolün en büyük avantajı maliyet etkinliğidir. In vivo transmigration zordur, çünkü hayvan taşıma ve cerrahi konusunda kapsamlı bir eğitim gerektirir ve genellikle bir araştırmacının her zaman kullanamadığı yüksek güçlü mikroskopi içerir. Transmigration'i artırıcı veya inhibe ettiği düşünülen bileşiklerin uygun maliyetli taranması in vivo görüntüleme öncesinde gerçekleştirilebilir. Transmigration sistemi sıkı bir şekilde kontrol edilince, hücreler başlangıçta transwell cihazına eklenebilir, ya da tam tersi, kemokin önce keokin inhibitörü ile tedavi edilebilir, sonra hücreler transwell cihazına eklenebilir. Son olarak, bu bariyer hücrelerinin kemokinetiklere katılımını anlamak için transwell insertinin altına transwell insert1-2 gün önce eklenebilir. Yine, sistemin bu manipülasyonlar vivo çalışmalarda daha karmaşık öncesinde belirli bir bileşiğin etkinliği hakkında önemli bilgileri belirleme güçlü bir araç sağlar.
Bir transmigration oda sistemi kullanarak çeşitli in vivo ve in vitro koşullar altında lenfosit hareketliliği değerlendirmek için etkili bir yoldur12,13,14. Burada, bir transmigration odasında kemokinlere ex vivo lenfosit duyarlılığını değerlendirmek için optimize edilmiş bir yöntem tanımlıyoruz. Bu örnek deneyde, CD4+ T hücreleri ve grup 2 doğuştan gelen lenfoid hücreler (ILC2) OVA-alerjen maruziyetini takiben erkek ve dişi BALB/c farelerinden izole edildi. Alerjene meydan okuyan farelerden CCR4 + CD45+ Lineage- (LIN-) ILC2'nin CCR4+ CD4+ T yardımcı hücrelerden ccl17 ve CCL22'ye daha verimli bir şekilde göç edeceği hipotezi oluşturuldu. CCL17 ve CCL22 genellikle dendritik hücreler ve M2 makrofajlar tarafından üretilen kemokinler (alerjik) fenotip, diğer hücreler arasında, alerji15,16. CCL17 ve CCL22 onlar kolayca hava yolu alevlenmeleri sırasında akciğerlerde tespit edilir gibi alerjik inflamasyon biyobelirteçleri olarak düşünülebilir16,17,18. Daha da önemlisi, CCR4 ekspresyonu, ev tozu işledi hayvanlardan izole edilen ILC2'den elde edilen biyoinformatik verilerde ortaya konan ve benzer şekilde IL-33 ile ex vivo ile tedavi edilen saf hayvanlardan ILC2'nin işlenmemiş kontrollere göre yükseltilir ( alerjen teşvik doğuştan sitokin) CCR419,20düzenler. Ayrıca, Immünolojik Genom Projesi veritabanında (www.immgen.org) ILC2 verilerine göre, CCR4 mRNA bu doğuştan gelen bağışıklık hücrelerinde yüksek oranda ifade edilir. Bugüne kadar ILC2'nin dokulara ticareti konusunda çok az şey bilinmektedir, ancak ILC2 ve CD4+ T hücrelerinin benzer transkripsiyon faktörleri ve reseptörleri ifade ettikleri için kemotaksiler ve kemokinetikler için benzer kemokinler ve reseptörler kullanmaları muhtemeldir. Böylece, CCL17 karşı CCL22 duyarlılık karşılaştırıldı, ILC2 ve CD4+ T lenfositler, hem erkek hem de kadın, OVA meydan hayvanlardan.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.4% Trypan Blue</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>15250061</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL syringe</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>329424</td>
			<td>U-100 Syringes Micro-Fine 28G 1/2&#34; 1cc</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100x Penicillin-Streptomycin, L-Glutamine</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10378-016</td>
			<td>Dilute to 1x in RPMI media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical tubes</td>
			<td>Olympus Plastics</td>
			<td>28-101</td>
			<td>polypropylene tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 um transwell inserts</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>25-288</td>
			<td>24-well plate containing 12 transwell inserts</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3x stabilizing fixative</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>338036</td>
			<td>Prepare 1x solution according to manufacturers protocol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5 mL polystyrene tubes</td>
			<td>STEM Cell Technologies</td>
			<td>38007</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical tubes</td>
			<td>Olympus Plastics</td>
			<td>28-106</td>
			<td>polypropylene tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-chamber easy separation magnet</td>
			<td>STEM Cell Technologies</td>
			<td>18103</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACK Lysing Buffer</td>
			<td>Life Technologies Corporation</td>
			<td>A1049201</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Advanced cell strainer, 40 um</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>25-375</td>
			<td>nylon mesh, 40 micron strainers</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminum Hydroxide, Reagent Grade</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>239186-25G</td>
			<td>20 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti- mouse CCR4; APC-conjugated</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>131211</td>
			<td>0.5 ug/test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse CD11b</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>557396</td>
			<td>0.5 ug/test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse CD11c; PE eFluor 610</td>
			<td>Thermo-Fischer Scientific</td>
			<td>61-0114-82</td>
			<td>0.25 ug/test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse CD16/32, Fc block</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>553141</td>
			<td>0.5 ug/test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse CD19; APC-eFluor 780 conjugated</td>
			<td>Thermo-Fischer Scientific</td>
			<td>47-0193-82</td>
			<td>0.5 ug/test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse CD3; PE Cy 7-conjugated</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>552774</td>
			<td>0.25 ug/test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse CD45; PE conjugated</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>56087</td>
			<td>0.5 ug/test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse ICOS (CD278)</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>564070</td>
			<td>0.5 ug/test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse NK1.1 (CD161); FITC-conjugated</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>553164</td>
			<td>0.25 ug/test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse ST2 (IL-33R); PerCP Cy5.5 conjugated</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>145311</td>
			<td>0.5 ug/test</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated Cell Counter</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td>1450102</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automated Dissociator</td>
			<td>MACS Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-093-235</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin, Lyophilized Powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A2153-10G</td>
			<td>0.5% in serum-free RPMI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Counter Clides</td>
			<td>BIORAD</td>
			<td>1450015</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chicken Egg Ovalbumin, Grade V</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5503-10G</td>
			<td>500 ug/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase, Type 1, Filtered</td>
			<td>Worthington Biochemical Corporation</td>
			<td>CLSS-1, purchase as 5 X 50 mg vials (LS004216)</td>
			<td>25 U/mL in RPMI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>compensation beads</td>
			<td>Affymetrix</td>
			<td>01-1111-41</td>
			<td>1 drop per contol tube</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissociation Tubes</td>
			<td>MACS Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-096-335</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Buffer</td>
			<td>BD Pharmigen</td>
			<td>554657</td>
			<td>1x PBS + 2% FBS, w/ sodium azide; stored at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat Inactivated-FBS</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>25-525H</td>
			<td>10% in complete RPMI &#38; ILC2 Expansion Media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse CCL17</td>
			<td>GenScript</td>
			<td>Z02954-20</td>
			<td>50 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse CCL22</td>
			<td>GenScript</td>
			<td>Z02856-20</td>
			<td>50 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse CD4+ T cell enrichment kit</td>
			<td>STEM Cell Technologies</td>
			<td>19852</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse IL-2</td>
			<td>GenScript</td>
			<td>Z02764-20</td>
			<td>20 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse ILC2 enrichment kit</td>
			<td>STEM Cell Technologies</td>
			<td>19842</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mouse recombinant IL-33</td>
			<td>STEM Cell Technologies</td>
			<td>78044</td>
			<td>20 ng/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI</td>
			<td>Life Technologies Corporation</td>
			<td>22400071</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Separation Buffer</td>
			<td>STEM Cell Technologies</td>
			<td>20144</td>
			<td>1 X PBS + 2% FBS; stored at 4C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>small animal nebulizer and chamber</td>
			<td>Data Sciences International</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sterile saline</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>2F7124; NDC 0338-0048-04</td>
			<td>0.9% Sodium Chloride</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of lymphocyte migration in an ex vivo transmigration system

Burada, ex vivo transmigration sisteminde lenfosit kemokinetik hareketini değerlendirmek için temel laboratuvar becerileri ve malzemeleri ile yürütülebilecek etkili bir yöntem salıyoruz. Grup 2 doğuştan gelen lenfoid hücreler (ILC2) ve CD4+ T yardımcı hücreleri tavuk yumurtası ovalbumin (OVA)-meydan BALB/ c farelerin dalak ve akciğerlerinden izole edildi. Hem CD4+ T hücrelerinde hem de ILC2'de CCR4 ekspresyonunu nispeten doğruladık. CCL17 ve CCL22 CCR4 için bilinen ligands vardır; bu nedenle, bu ex vivo transmigration yöntemini kullanarak CCL17- ve CCR4+ lenfositlerin CCL22 kaynaklı hareketi inceledik. Kemoin gradyanları oluşturmak için, CCL17 ve CCL22 transmigration sisteminin alt odasına yerleştirildi. İzole lenfositler daha sonra üst odalara eklendi ve 48 saat lik bir süre içinde lenfositler aktif olarak 3 μm gözeneklerden alt odadaki kemokine doğru göç ettiler. Bu lenfositlerin kemokinetikbelirlemek için etkili bir sistemdir, ama, anlaşılır, in vivo organ mikroortamlarında bulunan karmaşıklığı taklit etmez. Bu çalışma altında organ ve lenfositlerin yerinde görüntüleme eklenmesi ile aşılabilir yöntemin bir sınırlamadır. Buna karşılık, bu yöntemin avantajı, canlı görüntüleme çok daha uygun maliyetli bir oranda bir giriş seviyesi teknisyen tarafından yapılabilir olmasıdır. Terapötik bileşikler göçü artırmak için kullanılabilir hale geldikçe, tümör sitotoksik bağışıklık hücrelerine sızma durumunda olduğu gibi, ya da göçü inhibe etmek için, belki de immünolojinin endişe verici olduğu otoimmün hastalıklarda, bu yöntem tarama aracı. Genel olarak, ilgi chemokine sürekli medya kontrolü daha istatistiksel olarak daha yüksek bir düzeyde kemokinetik üreten ise yöntem etkilidir. Bu gibi durumlarda, belirli bir bileşik tarafından inhibisyon / geliştirme derecesi de belirlenebilir.

CD4+ T hücrelerinde CCR4 ekspresyonu ve ILC2.
Ex vivo transmigration deneyinin başarısı için, lenfositlerin CCL17 ve CCL22'ye CCR4 ile yanıt verip vermediğini belirlemek zorunludur; bu nedenle hem CD4+ T hücrelerinde hem de ILC2'de ccr4 ekspresyonu akış sitometrisi ile belirledik. OVA'ya özgü CD4+ yardımcı T hücrelerinin CCR4'ü ifade ettiği iyi bilinmekle birlikte, ILC2'deki CCR4 ekspresyonu daha az bilinir. Şekil 1,...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Lymphocyte Migration in an Ex Vivo Transmigration System at JoVE.com

Assessment of Lymphocyte Migration in an Ex Vivo Transmigration System

Bu protokolde lenfositler, alt odadan gözenekli bir zarla ayrılan bir transmigration sisteminin üst odasına yerleştirilir. Keokin alt hazneye eklenir, bu da bir kemokin gradyan boyunca aktif göçe neden olur. 48 saat sonra, lenfositler transmigration quantitate için her iki odada sayılır.

Ex Vivo Transmigration Sisteminde Lenfosit Göçünün Değerlendirilmesi

Herein, we present an efficient method that can be executed with basic laboratory skills and materials to assess lymphocyte chemokinetic movement in an ex ...

Lenfosit transmigration herhangi bir bağışıklık yanıtı önemli bir özelliğidir. Bu nedenle, bir araştırmacı iyi tanımlanmış bir in vitro sistemde lenfositlerin hareketliliğini değerlendirmek için izin verir, çünkü bu protokol önemlidir. Bu tekniğin en büyük avantajı çeşitli kemokinler son tanımlanan hücrelerde göç indükleyen etkinliğini belirlemek için değerlendirilebilir, grup iki doğuştan lenfoid hücreler gibi, veya ILC2.İkinci bir avantajı inhibitörleri veya belirli kemokin yollarını engellemeamaçlı biyolojik tedaviler hayvanlarla daha pahalı deneyler yapmadan önce bu yöntemle test edilebilir olmasıdır. Grup başına iki ila üç hayvan kullanarak ötenazi ova-tedavi erkek ve dişi fareler den akciğerler ve dalak çıkarma ile başlayın. Doku tipine ve hayvan cinsiyetine göre ayrı ayrışma tüplerine eksise edilmiş dokuları yerleştirin.Akciğer dokusunu 500 mikrolitre akciğer ayrıştırma ortamına yerleştirin, tüpü otomatik doku ayrıştırıcıya yerleştirin ve akciğer protokolünü kullanarak ayrıştırın. Bu adımları toplam iki kez tekrarlayın. Dalak dokusunu ayrıştırmak için, ayrıştırıcıda 500 mikrolitre tam RPMI media yerleştirin ve sonra dalak protokolünü kullanın.Bundan böyle steril bir teknik kullanarak biyolojik bir güvenlik kabininde çalışarak, ayrıştırığı her dokuyu 40 mikrometrelik bir hücre süzgecinden geçirin ve 50 mililitrelik konik tüpler halinde toplayın. Akciğer homojeni içeren dissosiasyon tüplerini beş mililitre ek akciğer dissociation media, dalak homojeni içeren tüpleri beş mililitre tam RPMI ile durulayın ve içeriklerini ilgili dokular için kullanılan filtreleraracılığıyla filtreleyin. Akciğer dokusunu daha da ayrıştırmak için, %5 karbondioksit içeren 37 derecelik bir kantinde 15-30 dakika kuluçkaya yatırılır.Sonra akciğer ve dalak homojenler hem de tam RPMI beş mililitre ekleyin ve santrifüj. Supernatant attıktan sonra, tek bir 50 mililitrelik konik tüp içine aynı cinsiyetten hayvanların grubundan splenositler ve akciğer hücreleri içeren pelet birleştirir. Her tüpe 10 mililitre tam RPMI ekleyin ve yeniden askıya alın.Otomatik bir hücre sayacı kullanarak toplam hücre sayısını belirleyin. Ayırma tamponunda mililitre başına 100 milyon hücreye erkek ve kadın hücre süspansiyonlarını ayarlayın ve ardından beş mililitrelik polistiren tüpe ekleyin. El yazmasında açıklandığı gibi toplam hücrelerin 2/3'ünden grup iki doğuştan gelen lenfoid hücreyi izole ettikten sonra, CD4-pozitif T hücre izolasyonu işlemi için kalan hücreleri kullanın.CD4-pozitif T hücre izolasyonuna başlamak için, CD4 T hücre zenginleştirme süspansiyonuna sıçan serumu ekleyin. Daha sonra hücre örneğine izolasyon kokteyli ekleyin ve oda sıcaklığında 10 dakika kuluçkaya yatın. Girdap hızlı küreler için 30 saniye, ve mililitre başına 75 mikrolitre bir seyreltme elde etmek için hücre örneğine ekleyin.Yavaşça karıştırın ve oda sıcaklığında 21/2 dakika kuluçkaya yatırın. Üç mililitreye kadar yaklaşık iki mililitre ayırma tamponu ile örneklerin üst kısmında, beş mililitrelik tüpleri sekiz odalı kolay ayırma mıknatısına yerleştirin ve oda sıcaklığında beş dakika kuluçkaya yatırın. Sonra mıknatısı öne doğru çevirin ve her hücresüspansiyonlu pipeti temiz bir beş mililitrelik tüpe dönüştürün.Her tüpe 1,5 mililitre serumsuz RPMI ve santrifüj ekleyin. Supernatant dökün ve serum içermeyen RPMI mililitre başına 10 milyon hücrede CD4-pozitif T hücre pelet yeniden askıya. Protokolün bu bölümüne başlamak için, makalede açıklandığı gibi hem ILC2 hem de CD4-pozitif T hücreleri için deneme için gereken Transwell uçlarının sayısını belirleyin.Üç mikronluk Transwell'i 24 kuyulu bir plakanın orta sıralarından pipet ucu ve eldivenli ellerle aynı 24 kuyulu plakanın üst ve alt sıralarına hafifçe hareket ettirin. 24 kuyulu plakanın orta sırasındaki kuyuların 1/3'üne CCL17 ile 500 mikrolitre göç ortamı ekleyin. Kuyuların 1/3'üne CCL22 ile 500 mikrolitre geçiş ortamı ekleyin.Ve son olarak, kuyuların son 1/3'üne kemokin içermeyen 500 mikrolitre serumsuz RPMI ekleyin. Plakaüzerindeki kapağı, alt kuyulara yerleştirilen uygun transmigration ortamının adı ile net bir şekilde etiketlayın. Daha sonra Transwell'i çeşitli tedavileriçeren kuyulara geri yerleştirin.Transwells'te hücre süspansiyonunun yukarı ve aşağı karıştırılmamasını veya pipetleilmemesini sağlayarak, her kesici uçtaki üst kuyuya 100 mikrolitre CD4 T hücresi veya ILC2 ekleyin. Plakaüzerindeki kapağı her kuyuya yerleştirilen hücre tipiyle net bir şekilde etiketlayın ve hücrelerin eklendiğinin tarih ve saatini yazın. Transwell kesici uçlardan tüm hücreler transwell kesici uçlara ortam la yerleştirilene kadar bu işlemi plakadan çıkararak tekrarlayın.İlgi hücreleri izole olduktan sonra, en önemli adımlar kemokinler ve özellikle kuyulara yerleştirilir hücre tipleri takip etmek, yavaşça üst odalarına hücreleri eklemek için, ve son olarak 48 saatlik kuluçka sırasında transmigration plaka ile gereksiz temas önlemek için. Plakayı %5 karbondioksit içeren 37 derecelik bir kantine yavaşça yerleştirin ve kuluçka süresi boyunca plakayla teması en aza indirmek için 48 saat kuluçkaya yatırın. Plakayı kuvözden hafifçe çıkardıktan sonra, orta sıralardan tüm Transwell kesici uçlarını hemen üstündeki veya altındaki boş kuyulara çıkarın.Transwell eklerüst ve alt kuyularından CCL17, CCL22 veya medya ile üst veya alt etiketli tüpler içine hücreleri toplamak, hücre türü ile, ve çoğaltma numarası ile. 1x PBS 500 mikrolitre ile alt kuyuları durulayın, ilgili tüpler içine toplamak ve üst kuyular için aynı şeyi. Tüpleri oda sıcaklığında 378 kez 5 dakika santrifüj edin.Tüm supernatant'ı nazikçe çıkarmak ve ardından 50 mikrolitre 1x PBS ile T hücresini ve ILC2 peletlerini yeniden askıya almak için bir pipet kullanın. Hücre süspansiyon10 mikrolitre çıkardıktan sonra, 0.4% trypan mavi 90 mikrolitre ekleyin. Otomatik hücre sayacındaki hücreleri say.Ve her örnek için, mililitre başına canlılık ve hücre sayısı nın rekor yüzdesi, ve üst ve alt odasında tedavi başına hücre toplam sayısını belirlemek. CCR4 ekspresyonu hem CD4-pozitif T hücrelerinde hem de ILC2'de akış sitometrisi ile değerlendirildiğinde, erkek ve kadın konaklar arasında fark yoktu. Ancak, ILC2'de hücre başına CCR4 ifadesi CD4-pozitif T hücrelerine göre daha yüksekti.Transwell cihazının alt odası işlenmemiş hücre kültürü ortamı, CCL22 içeren ortam veya CCL17 içeren ortamlarla doldurulduğunda, hücrelerin %14'ünden azı medya kontrol koşullarında göç etti. CCL22'ye yanıt olarak, her iki hücre tipi, ister erkek ister kadın konaklardan olsun, CCL22'ye yanıt verdi. Ayrıca, CCL22 erkek ILC2 CCL17 daha büyük göç indüklenen.Öte yandan, CCL17 kadın CD4 T hücreleri ve ILC2 medya tek başına göre önemli göç indüklenen. CCL17 tedavisi erkek CD4-pozitif T hücreleri veya erkek ILC2 için ortam farklı değildi. Optimal olmayan koşullarda, CD4 hücreleri olan plaka ilk 24 saat oda sıcaklığında kaldığında ve daha sonra kuvöze taşındığında, CCL22 ve CCL17'ye doğru herhangi bir göç olmadı.Ayrıca, hücrelerin canlılığı özellikle alt odadaki hücreler için düşüktü ve bu protokolde açıklanan doğru sıcaklık ve koşulları nen iyi sonuçları elde etmek için kullanmanın önemini gösteriyordu. Transmigration prosedürü tamamlandıktan sonra, medya kontrol kuyuları ile karşılaştırıldığında ilgi chemokine önemli göç görmek gerekir. Önemli bir göç görülmezse, işlemin düzgün çalışmadığı veya lenfositlerin söz konusu kemokine yanıt vermediğini varsayabiliriz.Bu lenfositler in vivo tedavilerin geniş bir yelpazede uğramıştır zaman bu teknik lenfosit göç anlamak için geniş kullanılabilir.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

Human T Lymphocyte Isolation, Culture and Analysis of Migration In Vitro

Göç İnsan T Lenfosit İzolasyon, Kültür ve Analiz In Vitro</em

The migration of T lymphocytes involves the adhesive interaction of cell surface integrins with ligands expressed on other cells or with extracellular ...

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Non-invasive Imaging of Leukocyte Homing and Migration in vivo

Lökosit Homing Göç ve non-invaziv Görüntüleme In vivo</em

Two-photon (2P) microscopy is a high resolution imaging technique that has been broadly adapted by biologists.  The value of 2P microscopy is that it ...

Quantitative Assessment of Human Neutrophil Migration Across a Cultured Bladder Epithelium

Bir kültür Mesane EPİTELİ karşısında İnsan Nötrofil Göç Kantitatif Değerlendirilmesi

The recruitment of immune cells from the periphery to the site of inflammation is an essential step in the innate immune response at any mucosal surface. ...

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

Assessing the Innate Sensing of HIV-1 Infected CD4+ T Cells by Plasmacytoid Dendritic Cells Using an Ex vivo Co-culture System.

HIV-1 Enfekte CD4 Doğuştan Algılama Değerlendirilmesi<sup&gt; +</sup&gt; Bir kullanılması plazmositoid dendritik hücreler tarafından T Hücreleri<em&gt; Ex vivo</em&gt; Co-kültür sistemi.

HIV-1 innate sensing requires direct contact of infected CD4+ T cells with plasmacytoid dendritic cells (pDCs). In order to study this process, the ...

An Ex vivo Model of an Oligodendrocyte-directed T-Cell Attack in Acute Brain Slices

An Ex vivo Model of an Oligodendrocyte-directed T-Cell Attack in Acute Brain Slices

Bir<em&gt; Ex vivo</em&gt; Akut Beyin Dilimleri bir Oligodendrosit yönelik T-Hücre Saldırı Modeli

Death of oligodendrocytes accompanied by destruction of neurons and axons are typical histopathological findings in cortical and subcortical grey matter ...

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Lymphocyte Isolation from Human Skin for Phenotypic Analysis and Ex Vivo Cell Culture

Fenotipik Analizi ve İnsan Cilt lenfosit izolasyonu<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Hücre Kültürü

Human skin has an important barrier function and contains various immune cells that contribute to tissue homeostasis and protection from pathogens. As the ...

Isolation and Ex Vivo Culture of V&#948;1+CD4+&#947;&#948; T Cells, an Extrathymic &#945;&#946;T-cell Progenitor

Isolation and Ex Vivo Culture of VÃƒÅ½Ã‚Â´1+CD4+ÃƒÅ½Ã‚Â³ÃƒÅ½Ã‚Â´ T Cells, an Extrathymic ÃƒÅ½Ã‚Â±ÃƒÅ½Ã‚Â²T-cell Progenitor

İzolasyon ve<em&gt; Ex Vivo</emVδ1 of&gt; Kültür<sup&gt; +</sup&gt; CD4<sup&gt; +</sup&gt; γδ T hücrelerinin bir Extrathymic αβT hücre Progenitör

The thymus, the primary organ for the generation of &#945;&#946; T cells and backbone of the adaptive immune system in vertebrates, has long been ...

Flow Cytometric Analysis of Particle-bound Bet v 1 Allergen in PM10

PM10 parçacık bağlı Bet v 1 Allergen Akışı Sitometrik Analizi

Flow cytometry is a method widely used to quantify suspended solids such as cells or bacteria in a size range from 0.5 to several tens of micrometers in ...

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo Cell Trafficking by PET/CT

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo  Cell Trafficking by PET/CT

tarafından Kemirgen Lenfosit Etiketleme<sup&gt; 64</sup&gt; Cu-Antikor Reseptör için hedefleme<em&gt; In Vivo</em&gt; PET / CT ile hücre Trafik

This protocol illustrates the production of 64Cu and the chelator conjugation/radiolabeling of a monoclonal antibody (mAb) followed by murine lymphocyte ...