Name: chronic salmonella infection induced intestinal fibrosis
Uploaded: 2019-09-22T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Chronic Salmonella Infection Induced Intestinal Fibrosis at JoVE.com

Мы благодарим Ингрид Барта за гистологические услуги.

Все протоколы животных были одобрены Комитетом по уходу за животными Университета Британской Колумбии.
1. Подготовка сальмонеллы Typhimurium культур ароА для устных gavage мышей
<ol><li>Из замороженного глицерола бульона С. Тифимур зароА, подготовить полоса пластины с по...

<ol>
	<li>Danese, S., Fiocchi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ulcerative+colitis.">Ulcerative colitis.</a> New England Journal of Medicine. 365 (18), 1713-1725 (2011).</li><li>Baumgart, D. C., Sandborn, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crohn's+disease.">Crohn's disease.</a> The Lancet. 380 (9853), 1590-1605 (2012).</li><li>Knights, D., Lassen, K. G., Xavier, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+inflammatory+bowel+disease+pathogenesis:+linking+host+genetics+and+the+microbiome.">Advances in inflammatory bowel disease pathogenesis: linking host genetics and the microbiome.</a> Gut. 62 (10), 1505-1510 (2013).</li><li>Xavier, R. J., Podolsky, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unravelling+the+pathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease.">Unravelling the pathogenesis of inflammatory bowel disease.</a> Nature. 448 (7152), 427-434 (2007).</li><li>Cho, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genetics+and+immunopathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease.">The genetics and immunopathogenesis of inflammatory bowel disease.</a> Nature Reviews Immunology. 8 (6), 458-466 (2008).</li><li>Ogura, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+frameshift+mutation+in+NOD2+associated+with+susceptibility+to+Crohn's+disease.">A frameshift mutation in NOD2 associated with susceptibility to Crohn's disease.</a> Nature. 411 (6837), 603-606 (2001).</li><li>Jostins, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-microbe+interactions+have+shaped+the+genetic+architecture+of+inflammatory+bowel+disease.">Host-microbe interactions have shaped the genetic architecture of inflammatory bowel disease.</a> Nature. 491 (7422), 119-124 (2012).</li><li>Rivas, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+resequencing+of+GWAS+loci+identifies+independent+rare+variants+associated+with+inflammatory+bowel+disease.">Deep resequencing of GWAS loci identifies independent rare variants associated with inflammatory bowel disease.</a> Nature Genetics. 43 (11), 1066-1073 (2011).</li><li>Rioux, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+association+study+identifies+new+susceptibility+loci+for+Crohn+disease+and+implicates+autophagy+in+disease+pathogenesis.">Genome-wide association study identifies new susceptibility loci for Crohn disease and implicates autophagy in disease pathogenesis.</a> Nature Genetics. 39 (5), 596-604 (2007).</li><li>Uhlig, H. H., Powrie, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+intestinal+inflammation+as+tools+to+understand+the+pathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease.">Mouse models of intestinal inflammation as tools to understand the pathogenesis of inflammatory bowel disease.</a> European Journal of Immunology. 39 (8), 2021-2026 (2009).</li><li>Nell, S., Suerbaum, S., Josenhans, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+the+microbiota+on+the+pathogenesis+of+IBD:+lessons+from+mouse+infection+models.">The impact of the microbiota on the pathogenesis of IBD: lessons from mouse infection models.</a> Nature Reviews Microbiology. 8 (8), 564-577 (2010).</li><li>Grassl, G. A., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathogenesis+of+enteric+Salmonella+infections.">Pathogenesis of enteric Salmonella infections.</a> Current Opinion in Gastroenterology. 24 (1), 22-26 (2008).</li><li>Barthel, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pretreatment+of+mice+with+streptomycin+provides+a+Salmonella+enterica+serovar+Typhimurium+colitis+model+that+allows+analysis+of+both+pathogen+and+host.">Pretreatment of mice with streptomycin provides a Salmonella enterica serovar Typhimurium colitis model that allows analysis of both pathogen and host.</a> Infection and Immunity. 71 (5), 2839-2858 (2003).</li><li>Grassl, G. A., Valdez, Y., Bergstrom, K., Vallance, B. A., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+Enteric+Salmonella+Infection+in+Mice+Leads+to+Severe+and+Persistent+Intestinal+Fibrosis.">Chronic Enteric Salmonella Infection in Mice Leads to Severe and Persistent Intestinal Fibrosis.</a> Gastroenterology. 134 (3), 768-780 (2008).</li><li>Hoiseth, S. K., Stocker, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aromatic-dependent+Salmonella+typhimurium+are+non-virulent+and+effective+as+live+vaccines.">Aromatic-dependent Salmonella typhimurium are non-virulent and effective as live vaccines.</a> Nature. 291 (5812), 238-239 (1981).</li><li>Valdez, Y., Ferreira, R. B., Finlay, B. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+Salmonella+virulence+and+host+resistance.">Molecular mechanisms of Salmonella virulence and host resistance.</a> Current Topics in Microbiology and Immunology. 337, 93-127 (2009).</li><li>Valdez, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nramp1+drives+an+accelerated+inflammatory+response+during+Salmonella-induced+colitis+in+mice.">Nramp1 drives an accelerated inflammatory response during Salmonella-induced colitis in mice.</a> Cellular Microbiology. 11 (2), 351-362 (2009).</li><li>Lo, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+orphan+nuclear+receptor+RORalpha+and+group+3+innate+lymphoid+cells+drive+fibrosis+in+a+mouse+model+of+Crohn's+disease.">The orphan nuclear receptor RORalpha and group 3 innate lymphoid cells drive fibrosis in a mouse model of Crohn's disease.</a> Science Immunology. 1 (3), eaaf8864 (2016).</li><li>Burke, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrogenesis+in+Crohn's+disease.">Fibrogenesis in Crohn's disease.</a> American Journal of Gastroenterology. 102 (2), 439-448 (2007).</li><li>Hogan, B. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Repair+and+regeneration+of+the+respiratory+system:+complexity,+plasticity,+and+mechanisms+of+lung+stem+cell+function.">Repair and regeneration of the respiratory system: complexity, plasticity, and mechanisms of lung stem cell function.</a> Cell Stem Cell. 15 (2), 123-138 (2014).</li><li>Fiocchi, C., Lund, P. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Themes+in+fibrosis+and+gastrointestinal+inflammation.">Themes in fibrosis and gastrointestinal inflammation.</a> American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 300 (5), G677-G683 (2011).</li><li>Rieder, F., Fiocchi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+fibrosis+in+IBD&#8212;a+dynamic,+multifactorial+process.">Intestinal fibrosis in IBD&#8212;a dynamic, multifactorial process.</a> Nature Reviews Gastroenterology &amp; Hepatology. 6 (4), 228-235 (2009).</li><li>Bouguen, G., Peyrin-Biroulet, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgery+for+adult+Crohn's+disease:+what+is+the+actual+risk?.">Surgery for adult Crohn's disease: what is the actual risk?.</a> Gut. 60 (9), 1178-1181 (2011).</li><li>Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+mechanisms+of+fibrosis.">Cellular and molecular mechanisms of fibrosis.</a> The Journal of Pathology. 214 (2), 199-210 (2008).</li><li>Junqueira, L. C., Bignolas, G., Brentani, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Picrosirius+staining+plus+polarization+microscopy,+a+specific+method+for+collagen+detection+in+tissue+sections.">Picrosirius staining plus polarization microscopy, a specific method for collagen detection in tissue sections.</a> Histochem J. 11 (4), 447-455 (1979).</li><li>Lo, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-22+Preserves+Gut+Epithelial+Integrity+and+Promotes+Disease+Remission+during+Chronic+Salmonella+Infection.">IL-22 Preserves Gut Epithelial Integrity and Promotes Disease Remission during Chronic Salmonella Infection.</a> Journal of Immunology. 202 (3), 956-965 (2019).</li><li>Fichtner-Feigl, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+IL-13+triggers+TGF-beta1-dependent+tissue+fibrosis+in+chronic+2,4,6-trinitrobenzene+sulfonic+acid+colitis.">Induction of IL-13 triggers TGF-beta1-dependent tissue fibrosis in chronic 2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid colitis.</a> Journal of Immunology. 178 (9), 5859-5870 (2007).</li><li>Fichtner-Feigl, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-13+signaling+via+IL-13R+alpha2+induces+major+downstream+fibrogenic+factors+mediating+fibrosis+in+chronic+TNBS+colitis.">IL-13 signaling via IL-13R alpha2 induces major downstream fibrogenic factors mediating fibrosis in chronic TNBS colitis.</a> Gastroenterology. 135 (6), e2001-e2007 (2013).</li><li>Johnson, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+fibrosis+is+reduced+by+early+elimination+of+inflammation+in+a+mouse+model+of+IBD:+impact+of+a+&amp;#34;Top-Down&amp;#34;+approach+to+intestinal+fibrosis+in+mice.">Intestinal fibrosis is reduced by early elimination of inflammation in a mouse model of IBD: impact of a &amp;#34;Top-Down&amp;#34; approach to intestinal fibrosis in mice.</a> Inflammatory Bowel Diseases. 18 (3), 460-471 (2012).</li><li>Darfeuille-Michaud, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+prevalence+of+adherent-invasive+Escherichia+coli+associated+with+ileal+mucosa+in+Crohn's+disease.">High prevalence of adherent-invasive Escherichia coli associated with ileal mucosa in Crohn's disease.</a> Gastroenterology. 127 (2), 412-421 (2004).</li><li>Small, C. L., Reid-Yu, S. A., McPhee, J. B., Coombes, B. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistent+infection+with+Crohn's+disease-associated+adherent-invasive+Escherichia+coli+leads+to+chronic+inflammation+and+intestinal+fibrosis.">Persistent infection with Crohn's disease-associated adherent-invasive Escherichia coli leads to chronic inflammation and intestinal fibrosis.</a> Nature Communications. 4, 1957 (2013).</li><li>Imai, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flagellin-mediated+activation+of+IL-33-ST2+signaling+by+a+pathobiont+promotes+intestinal+fibrosis.">Flagellin-mediated activation of IL-33-ST2 signaling by a pathobiont promotes intestinal fibrosis.</a> Mucosal Immunology. , (2019).</li></ol>

Наше понимание патогенеза IBD было значительно усилено мышимодели кишечного воспаления. Хотя такие индивидуальные модели не подизглажают все особенности сложной и многофакторной болезни человека, они были полезны для выявления ключевых особенностей прогрессирования заболевания. Фиб...

Язвенный колит (UC) и болезнь Крона (CD) являются двумя основными формами IBD и характеризуются как хронические и рецидивирующих воспалительных расстройств желудочно-кишечного тракта 1,2. Эти расстройства оказывают значительное влияние на качество жизни пациентов. Симптомы IBD включают боли в животе, диарея, тошнота, потеря веса, лихорадка, и усталость3. Недавние исследования выявили генетические и экологические факторы, способствующие патогенеза болезней; считается, что такие факторы риска способствуют нарушению эпителиального барьера, что приводит к транслокации или перевыборе светящихся антигенов4. Как следствие, это инициирует аномальную воспалительную реакцию на коммунальную флору, опосредованный кишечными иммунными клетками4. Особенности IBD-связанных осложнений может распространяться на сайты за пределами желудочно-кишечного тракта, затрагивающих различные органы, включая суставы, кожу и печень1,2. Признаки UC включают тяжелые и диффузное воспаление обычно локализованы в толстой кишке1. Патология заболеваний поражает слизистую оболочку и субмукоз кишечника, что приводит к поверхностным язвам слизистойоболочки 1. В отличие от этого, CD может повлиять на любую часть желудочно-кишечного тракта, хотя доказательства болезни обычно встречаются в толстой кишке и дистальном илеуме2. Кроме того, воспаление в CD является трансмуральным, затрагивающих все слои стенки кишечника2.
Несколько генов восприимчивости IBD, которые были определены будет означать, что дисрегуляция эпителиального барьера или иммунитета являются критическиважными факторами прогрессирования болезни5. Мутации в домене нуклеотидной олигомеризации 2 (NOD2), выраженные моноцитами, были связаны с повышенной восприимчивостью к CD; это подчеркивает связь между измененным врожденным иммунным обнаружением бактериальных компонентов и заболеванием6. Более поздние исследования ассоциации генома (GWAS) выявили дополнительные пути, потенциально участвующие в патогенеза IBD, включая генетические вариации в: STAT1, NKX2-3, IL2RA, IL23R зависимых путей связаны с адаптивным иммунитетом, MUC1, MUC19, и PTGER4 в кишечном барьере обслуживания, и ATG16L-опосредованныйаутофагии7,8,9. Хотя эти популяционные исследования генетики улучшили наше понимание IBD, восприимчивость аллелей только, вероятно, недостаточно в иначинии и поддержания хронических заболеваний3. Другие негенетические факторы, включая изменения в составе микрофлоры кишечника и уменьшение разнообразия, были связаны с воспалением кишечника. Тем не менее, неясно, является ли дисбактериоз кишечника предшествует или является следствием дисрегулируемых иммунных реакций3. Хотя этиология IBD остается неясным, наше понимание патогенеза болезни была усилена экспериментальных моделей мыши кишечного воспаления10,11. Эти модели индивидуально не в полной мере представляют сложность болезни человека, но они являются ценными для выяснения патофизиологических путей, которые могут иметь отношение к IBD и для проверки предварительных терапевтических стратегий10, 11. Такие модели мыши обычно полагаются на начало воспаления химической индукции или инфекции, передачи иммунных клеток, или генетические манипуляции. Кроме того, эти стратегии часто включают возмущения в эпителиальной целостности или модуляции врожденного или адаптивного иммунитета.
Salmonella enterica серовары кишечных патогенов, которые могут инфицировать людей и мышей. После приема, Salmonella может колонизировать кишечник путем прямого вторжения эпителии, M клеток, или антигена представления клеток12. Мыши, инфицированные устно С. Typhimurium приводит к колонизации в первую очередь системных сайтов, таких как селезенка и брюшной лимфатической узлы с относительно низким изобилием в желудочно-кишечном тракте12. Тем не менее, предварительное лечение мышей стрептомицин повышает эффективность колонизации кишечника сальмонеллы за счет уменьшения принимающей защитные эффекты нормальной микробиоты13. Патологические особенности этой модели включают нарушение или язву эпителиального барьера, набор гранулоцитов и тяжелый отек13. Кроме того, инфекция вакциной класса S. Тифимурий ЗароА мутант приводит к хронической колонизации цекум и толстой кишки, которая сохраняется до дня 40 после инфекции14. С. Штамм Тифимурий ЗароА имеет дефект в биосинтезе ароматических аминокислот; это делает мутант штамм аврулентным и может быть использован в качестве высокоэффективной вакцины15. Устные инфекции у мышей приводит к Th1- и Th17-цитокинов связанных воспалительных ответ, обширные ткани ремоделирования, и осаждение коллагена. Ткань патологии связано с повышенным уровнем профиброзного фактора, таких как TGF-No1, CTGF, и IGF14. Трансморфальные фиброзные рубцы, зарегистрированные в этой модели, напоминают стриктурные образования, часто наблюдаемые в IBD. Индукция фиброза сальмонеллой требует вирулентности, кодированной патогенными островами Salmonella (SPI)-1 и 2 12. Важно, что это С. Модель инфекции Tymphimurium qAroA является полезной системой для изучения фиброзных реакций у мышей-мутантов, поддерживаемых на фоне C57/Bl6. Штамм C57/Bl6 чрезвычайно чувствителен к S. Typhiumurim SL1344 инфекция из-за потери функции мутации в гене кодирования естественной резистентности связанных макрофаг белка (NRAMP)-116,17. Мы обнаружили, что IL-17A и ROR-зависимые врожденные лимфоидные клетки являются важными факторами, способствующими патогенеза в этой модели18.
Основным осложнением CD является дисрегулируемое и чрезмерное осаждение внеклеточной матрицы (ECM), включая коллаген2,19. Хотя желудочно-кишечного тракта имеет относительно высокую способность к регенерации, фиброзные рубцы могут возникнуть из-за нерешенных реакций заживления ран, которые связаны с хроническим и тяжелым воспалением20,21. В CD, это приводит к пагубным последствиям для архитектуры тканей, что приводит к значительным нарушениям органов21,22. Трансмуральный характер воспаления наблюдается в CD в конечном счете предшествует утолщение стенки кишечника, связанные с симптоматическим стенозом или стриктурного образования21. Около трети пациентов cd требуют резекции кишечника для этого осложнения22. В IBD нет эффективных противофиброзных методов лечения, учитывая, что использование иммунодепрессантов, таких как азатиоприн или биопрепараты против ТНФЗ, не оказывает никакого влияния или лишь незначительно снижает потребность в хирургических вмешательствах19,23 . Хотя фиброз считается следствием хронического воспаления, клетки мезенхимального происхождения, такие как фибробласты и перициты, как полагают, являются основными клеточными источниками ECM в фиброзных рубцов21,24. Хронический С. Typhimurium ЗароА инфекции является надежной моделью мыши кишечного фиброза, которые могут предложить понимание патогенеза CD-подобных функций.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>2 ml round bottom safe lock tubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22363344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel beads</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010031</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large-Orifice Pipet Tips</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>2707134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2 mL megablock plates</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>82.1972.002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gavage needles</td>
			<td>FST</td>
			<td>18061-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycin sulfate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S9137</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mixer mill</td>
			<td>Retsch</td>
			<td>MM</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

chronic salmonella infection induced intestinal fibrosis

Ткань фиброз характеризуется патологическим накоплением внеклеточной матрицы, такие как коллаген является результатом постоянного воспаления и дисрегулируемого ремонта. При воспалительных заболеваниях кишечника (IBD) фиброз приводит к периодическим стрикционным образованиям, для которых нет эффективной терапии, кроме хирургической резекции. Из-за его позднего начала, процессы, которые управляют фиброзом менее изучены и в значительной степени неизвестны. Таким образом, фиброзные осложнения представляют собой серьезную проблему в IBD. В этом протоколе, надежная модель in vivo кишечного фиброза описывается, где стрептомицин предварительной обработки C57Bl/6 мышей следуют устные gavage с вакциной класса Salmonella Typhimurium мутант ароА приводит к стойкой колонизации патогена и фиброз цекума. Методики подготовки С. Объясняется тифимурий ЗароА для прививки, количественной оценки патогенных нагрузок в цекуме и селезенке, а также оценки осаждения коллагена в тканях кишечника. Эта экспериментальная модель заболевания полезна для изучения факторов, которые либо усиливают, либо усугубляют CD-подобный кишечный фиброз.

Стрептомицин лечение с последующим оральным инфекцией С. Тифимурий ЗароА приводит к сильному воспалению кишечника и фиброзу, особенно в цекуме(рисунок 1). Типичные патогенные нагрузки от 108 до 109 CFU на 1 г цекума и 104 CFU на 1 г селезенки могут быть восст...

Watch this Scientific Journal Video about Chronic Salmonella Infection Induced Intestinal Fibrosis at JoVE.com

Chronic Salmonella Infection Induced Intestinal Fibrosis

Этот протокол описывает модель мыши Сальмонеллы инициативе кишечного фиброза, который напоминает ключевые патологические признаки болезни Крона, включая трансмурльное воспаление и фиброз. Этот метод может быть использован для оценки факторов, которые изменяют фиброзные исходы с помощью мышей-мутантов поддерживается на C57Bl/6 генетического фона.

Хроническая инфекция сальмонеллы индуцированных кишечный фиброз

Tissue fibrosis characterized by the pathological accumulation of extracellular matrix such as collagen is the outcome of persistent inflammation and ...

Фиброз тканей является основным способом, что органы терпят неудачу с течением времени, в ответ на хроническое воспаление или старение. И в самом деле, я бы сказал, что если вы не умрете от инфекционного агента или рака, вы, вероятно, умрет от фиброза органов, как вы возраста. К сожалению, есть не так много больших моделей мыши, чтобы имитировать фиброз тканей человека.Итак, мы разработали модель мыши болезни Крона, это болезнь у человека, которая вызывает фиброз кишечника и в значительной степени неизлечима. В самом деле, единственный способ вы можете лечить это через хирургическое удаление фиброзной ткани и повторной перевязки кишечника. Преимущество нашей модели заключается в том, что она полностью покоилась во всех штаммах мыши и очень тесно имитирует болезнь человека Крона, и фиброз сохраняется уже более месяца, что является действительно надежной моделью.Наиболее сложной частью этой процедуры является обработка мышей и особенно устные gavage так как это требует много практики специальной сертификации. При выполнении этой процедуры в первый раз, следует знать, что работа с сальмонеллой требует надлежащих мер предосторожности и стерильной техники. Утилизация отходов и бактерий должна быть запланирована до начала эксперимента.Визуальная демонстрация этой процедуры очень важна, потому что она включает в себя обработку сальмонеллы, которая требует специальных мер предосторожности, а также надлежащей стерильной техники. Чтобы начать эту процедуру, установите пластину с Агаром LB, содержащую стрептомицин в концентрации 100 микрограмм на миллилитр. Используя стерильную инокулятную петлю, протрите пластину замороженным запасом глицерола стрелки дельты S typhimurium a.Инкубировать ночь при 37 градусах по Цельсию. Полосовые пластины могут храниться при четырех градусах Цельсия в течение одной недели. За день до заражения растворите 0,5 грамма стрептомицина в 2,5 миллилитров воды для приготовления антибиотика.Фильтр стерилизовать раствор стрептомицина. Затем используйте лампу наконечником 22 калибра гаваж иглы с одним миллилитров шприц устно gavage мышей с 100 микролитров стрептомицина решения. Затем добавьте три миллилитров бульона LB, содержащего стрептомицин в концентрации 50 микрограмм на миллилитр, в культурную трубку.Используя петлю прививки, привить бульон LB с одной колонией. Инкубировать культуру аэробно ночь на 37 градусов по Цельсию с тряской на 200 об /мин. В день заражения, выполнить два последовательных от одного до 10 разбавления ночь сальмонеллы культур с стерильными PBS подготовить окончательную дозу инфекции.Это приводит к 100 микролитер инокулум, содержащий около трех миллионов единиц формирования колонии. После этого используйте лампу наконечником 22 калибра гаваж иглы с миллилитровый шприц, чтобы gavage каждой мыши с 100 микролитров подготовленных сальмонеллы. Во-первых, изучат два миллилитров безопасного замка круглые нижние микротрубки, добавить один миллилитр стерильных PBS и автоклавной шарик из нержавеющей стали для каждой трубки.Предварительно взвесить трубки до сбора тканей. После усыпления мышей, повторно их cecal и splenic тканей, убедившись, что собирать ткани из отдельных животных в отдельные трубки. Взвесь каждую трубку, чтобы определить вес ткани.Используйте прибор смесителя мельницы для гомогенизации тканей на 30 герц в течение 15 минут. Затем перенесите 900 микролитров PBS в каждый колодец 96-ну два миллилитров мегаблока. Pipette 100 микролитров ткани гомогенирует в первую колодец, и хорошо перемешать.Выполняем серийные разбавления, добавляя 100 микролитров к последующим скважинам, пока не будет получено от 10 до отрицательного шестого разбавления. Плита 10 микролитров каждого разбавления в трипликатах на LB агар, который содержит стрептомицин. Затем подсчитайте средние единицы формирования колонии и определите единицы формирования колонии на грамм ткани, как указано в текстовом протоколе.Откройте Фиджи, которая является открытым исходным кодом изображения программного обеспечения и перетащить и падение tif файл изображения на бар инструментов. В баре меню выберите стек Image, Type, RGB, чтобы разделить изображение на красные, зеленые и синие каналы. Сдвиньте горизонтальную планку в нижней части панели, чтобы установить канал на зеленый.Открытое изображение, Отрегулируйте, Пороговый инструмент. Отрегулируйте минимальные и максимальные ограничения для устранения любых фоновых сигналов. После того, как желаемый порог установлен, закройте пороговый инструмент и перейдите на анализ, установить измерения, проверить площадь, площадь фракции, предел порога и отображения этикетки.Получить выбор тканей либо от руки выбор или полигон выбор инструмента и измерить процент области положительный для коллагена, нажав Анализ, Мера. Затем нормализуют абсолютную область положительной для коллагена окрашивания в области тканей. Лечение стрептомицина с последующим пероральной инфекцией со стрелкой дельты S typhimurium приводит к надежному воспалению кишечника и фиброзу, особенно в cecum.Типичные патогенные нагрузки от 100 миллионов до одного миллиарда единиц формирования колонии могут быть восстановлены на грамм cecum от инфицированных животных, в то время как 10 тысяч колоний формирования единиц, как правило, могут быть восстановлены на грамм селезенки. Оценка фиброза в пикрозий красных окрашенных секций cecal указывает пик фиброз 21 дней после заражения, в то время как большая часть патологии решается на день 42 после инфекции. Тщательная подготовка материалов имеет важное значение, поскольку этот эксперимент требует нескольких дней, чтобы настроить.Подготовка пластин LB и сальмонеллы и стрептомицина все должно быть сделано асептически. Перед началом эксперимента убедитесь, что экспериментатор знаком с протоколом животных, а также с опасностями безопасности. При оценке бремени коллагена экспериментатор может выбрать для выполнения других биологических анализов, таких как секвенирование РНК для оценки профилей экспрессии генов или цитометрии потока для оценки подмножества иммунных клеток или ткани ELISA для оценки профилей цитокинов.Так что наша модель особенно хороша в имитации болезни человека, называемой болезнью Крона, где вы получаете фиброз кишечника, который в значительной степени неизлечим и единственный способ, которым вы можете лечить это, чтобы удалить часть кишечника и сшить его обратно вместе и надеюсь, что он не вернется. Наша модель очень надежна, и мы уже показали, что таргетинг врожденных лимфоидных клеток типа 3, транскрипционный фактор, называемый сырой альфа, или интерлеукин 17, амелиорирует болезнь и предотвращает фиброз. Наша модель особенно хороша в выявлении факторов, которые играют в патогенезе болезни Крона и фиброз кишечника, и мы уже на пути к выявлению ряда целей, которые можно лечить терапевтически, чтобы облегчить воспалительные заболевания кишечника.Наша модель уже вступила же ILC3 или альфа NIL17 доступ может быть в игре в других фиброзных заболеваний, и они включают в себя такие вещи, как псориаз, рассеянный склероз, идиопатический легочный фиброз. Так что вполне возможно, что ориентации этих же факторов может облегчить фиброз в этих заболеваниях, а также. Хотя поток мутантов сальмонеллы не вирулентный, важно следовать стандартным протоколам безопасности биоопасной опасности, данным объектом.Кроме того, поскольку пары формальдегида, как известно, канцерогенные, важно работать за капотом дыма во время шага фиксации.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Долгосрочная Хронический<em&gt; Синегнойной палочки</em&gt; Дыхательных инфекции у мышей

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

Мышь Модель для патогенных микроорганизмов, вызванной хроническим воспалением на локальном и системном сайтов

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

A Protocol to Infect Caenorhabditis elegans with Salmonella typhimurium

A Protocol to Infect Caenorhabditis elegans with Salmonella typhimurium

Протокол заразить<em&gt; Caenorhabditis Элеганс</em&gt; С<em&gt; Сальмонелла Typhimurium</em

In the last decade, C. elegans has emerged as an invertebrate organism to study interactions between hosts and pathogens, including the host defense ...

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

Количественное Цитозольные против вакуолярной<em&gt; Сальмонелла</em&gt; В первичных макрофагах дифференциальной проницаемости

Intracellular bacterial pathogens can replicate in the cytosol or in specialized pathogen-containing vacuoles (PCVs). To reach the cytosol, bacteria like ...

A Multimodal Imaging Approach Based on Micro-CT and Fluorescence Molecular Tomography for Longitudinal Assessment of Bleomycin-Induced Lung Fibrosis in Mice

Мультимодального Imaging подход на основе микро CT и флуоресценции молекулярные томографии для продольной оценки фиброза блеомицин индуцированного легких у мышей

Idiopathic pulmonary fibrosis (IPF) is a fatal lung disease characterized by the progressive and irreversible destruction of lung architecture, which ...

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Isolation of Salmonella typhimurium-containing Phagosomes from Macrophages

Изоляция Salmonella typhimurium-содержащих Phagosomes от макрофагов

Salmonella typhimurium is a facultative intracellular bacterium that causes gastroenteritis in humans. After invasion of the lamina propria, S. ...

Using Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Intestinal Organoids to Study and Modify Epithelial Cell Protection Against Salmonella and Other Pathogens

Using Human Induced Pluripotent Stem Cell-derived Intestinal Organoids to Study and Modify Epithelial Cell Protection Against Salmonella and Other Pathogens

Использование человека индуцированных плюрипотентных стволовых клеток-производные кишечные органоиды для изучения и изменения эпителиальной защиты клеток против сальмонеллы и других патогенов

The intestinal &#8216;organoid&#8217; (iHO) system, wherein 3-D structures representative of the epithelial lining of the human gut can be produced from ...

Mechanistic Insight into the Development of TNBS-Mediated Intestinal Fibrosis and Evaluating the Inhibitory Effects of Rapamycin

Механистический Взгляд на развитие TNBS-опосредованного кишечного фиброза и оценки ингибиторных эффектов рапамицина

Significant studies have been carried out to understand effective management of intestinal fibrosis. However, the lack of better knowledge of fibrosis has ...

A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

A Delayed Inoculation Model of Chronic Pseudomonas aeruginosa Wound Infection

Задержка прививки Модель хронической Pseudomonas aeruginosa раневой инфекции

Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) is a major nosocomial pathogen of increasing relevance to human health and disease, particularly in the setting of ...

Systematic Scoring Analysis for Intestinal Inflammation in a Murine Dextran Sodium Sulfate-Induced Colitis Model

Систематический анализ скоринга для воспаления кишечника в Murine Dextran Сульфат-индуцированных Колит модели

Murine colitis models are tools that are extensively employed in studies focused on understanding the pathobiology of inflammatory intestinal disorders. ...