Name: bone marrow transplantation platform to investigate the role of dendritic cells in graft-versus-host disease
Uploaded: 2020-03-17T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bone Marrow Transplantation Platform to Investigate the Role of Dendritic Cells in Graft-versus-Host Disease at JoVE.com

Это исследование поддерживается Университетом Центральной Флориды колледж медицины запуска гранта (для HN), Университет Питтсбурга Медицинский центр Хиллман онкологический центр Хиллман онкологический центр запуска гранта (в HL), Соединенные Штаты NIH Грант #1P20CA210300-01 и Вьетнамского Министерства здравоохранения Грант #4694 / КД-BYT (к PTH). Мы благодарим д-ра Сюэ Чжун Ю в Медицинском университете южной Каролины за предоставление материалов для исследования.

Экспериментальные процедуры были одобрены Институциональным комитетом по уходу за животными и использованию Университета Центральной Флориды.
1. Индукция GVHD
ПРИМЕЧАНИЕ: Аллогенная трансплантация клеток костного мозга (БМ) (шаг 1.2) выполняется в течение 24 ч...

<ol>
	<li>Shlomchik, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Graft-versus-host+disease.">Graft-versus-host disease.</a> Nature Reviews Immunology. 7, 340-352 (2007).</li><li>Appelbaum, F. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haematopoietic+cell+transplantation+as+immunotherapy.">Haematopoietic cell transplantation as immunotherapy.</a> Nature. 411, 385-389 (2001).</li><li>Blazar, B. R., Murphy, W. J., Abedi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+graft-versus-host+disease+biology+and+therapy.">Advances in graft-versus-host disease biology and therapy.</a> Nature Reviews Immunology. 12, 443-458 (2012).</li><li>Pasquini, M. C., Wang, Z., Horowitz, M. M., Gale, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2010+report+from+the+Center+for+International+Blood+and+Marrow+Transplant+Research+(CIBMTR):+current+uses+and+outcomes+of+hematopoietic+cell+transplants+for+blood+and+bone+marrow+disorders.">2010 report from the Center for International Blood and Marrow Transplant Research (CIBMTR): current uses and outcomes of hematopoietic cell transplants for blood and bone marrow disorders.</a> Clinical Transplantation. , 87-105 (2010).</li><li>Schroeder, M. A., DiPersio, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+graft-versus-host+disease:+advances+and+limitations.">Mouse models of graft-versus-host disease: advances and limitations.</a> Disease Model &amp; Mechanism. 4, 318-333 (2011).</li><li>Graves, S. S., Parker, M. H., Storb, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+Models+for+Preclinical+Development+of+Allogeneic+Hematopoietic+Cell+Transplantation.">Animal Models for Preclinical Development of Allogeneic Hematopoietic Cell Transplantation.</a> ILAR Journal. , ily006 (2018).</li><li>Sprent, J., Schaefer, M., Korngold, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+T+cell+subsets+in+lethal+graft-versus-host+disease+(GVHD)+directed+to+class+I+versus+class+II+H-2+differences.+II.+Protective+effects+of+L3T4++cells+in+anti-class+II+GVHD.">Role of T cell subsets in lethal graft-versus-host disease (GVHD) directed to class I versus class II H-2 differences. II. Protective effects of L3T4+ cells in anti-class II GVHD.</a> Journal of Immunology. 144, 2946-2954 (1990).</li><li>Rolink, A. G., Radaszkiewicz, T., Pals, S. T., van der Meer, W. G., Gleichmann, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allosuppressor+and+allohelper+T+cells+in+acute+and+chronic+graft-vs-host+disease.+I.+Alloreactive+suppressor+cells+rather+than+killer+T+cells+appear+to+be+the+decisive+effector+cells+in+lethal+graft-vs.-host+disease.">Allosuppressor and allohelper T cells in acute and chronic graft-vs-host disease. I. Alloreactive suppressor cells rather than killer T cells appear to be the decisive effector cells in lethal graft-vs.-host disease.</a> The Journal of Experimental Medicine. 155, 1501-1522 (1982).</li><li>Lu, Y., Waller, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dichotomous+role+of+interferon-gamma+in+allogeneic+bone+marrow+transplant.">Dichotomous role of interferon-gamma in allogeneic bone marrow transplant.</a> Biology of Blood and Marrow Transplantation. 15, 1347-1353 (2009).</li><li>Abdollahi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+platelet-derived+growth+factor+signaling+attenuates+pulmonary+fibrosis.">Inhibition of platelet-derived growth factor signaling attenuates pulmonary fibrosis.</a> The Journal of Experimental Medicine. 201, 925-935 (2005).</li><li>Banchereau, J., Steinman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+and+the+control+of+immunity.">Dendritic cells and the control of immunity.</a> Nature. 392, 245-252 (1998).</li><li>Stenger, E. O., Turnquist, H. R., Mapara, M. Y., Thomson, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cells+and+regulation+of+graft-versus-host+disease+and+graft-versus-leukemia.">Dendritic cells and regulation of graft-versus-host disease and graft-versus-leukemia.</a> Blood. 119, 5088-5103 (2012).</li><li>Ullmann, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Posaconazole+or+fluconazole+for+prophylaxis+in+severe+graft-versus-host+disease.">Posaconazole or fluconazole for prophylaxis in severe graft-versus-host disease.</a> New England Journal of Medicine. 356, 335-347 (2007).</li><li>Dittel, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depletion+of+specific+cell+populations+by+complement+depletion.">Depletion of specific cell populations by complement depletion.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2010).</li><li>Nguyen, H. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+reprogramming+of+alloantigen-activated+T+cells+after+hematopoietic+cell+transplantation.">Metabolic reprogramming of alloantigen-activated T cells after hematopoietic cell transplantation.</a> Journal of Clinical Investigation. 126, 1337-1352 (2016).</li><li>Cooke, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+experimental+model+of+idiopathic+pneumonia+syndrome+after+bone+marrow+transplantation:+I.+The+roles+of+minor+H+antigens+and+endotoxin.">An experimental model of idiopathic pneumonia syndrome after bone marrow transplantation: I. The roles of minor H antigens and endotoxin.</a> Blood. 88, 3230-3239 (1996).</li><li>Nguyen, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complement+C3a+and+C5a+receptors+promote+GVHD+by+suppressing+mitophagy+in+recipient+dendritic+cells.">Complement C3a and C5a receptors promote GVHD by suppressing mitophagy in recipient dendritic cells.</a> Journal of Clinical Investigation Insight. 3, (2018).</li><li>McNutt, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+immunotherapy.">Cancer immunotherapy.</a> Science. 342, 1417 (2013).</li><li>Negrin, R. S., Contag, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+using+bioluminescence:+a+tool+for+probing+graft-versus-host+disease.">In vivo imaging using bioluminescence: a tool for probing graft-versus-host disease.</a> Nature Reviews in Immunology. 6, 484-490 (2006).</li><li>Roy, D. C., Perreault, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Major+vs+minor+histocompatibility+antigens.">Major vs minor histocompatibility antigens.</a> Blood. 129, 664-666 (2017).</li><li>Gendelman, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host+conditioning+is+a+primary+determinant+in+modulating+the+effect+of+IL-7+on+murine+graft-versus-host+disease.">Host conditioning is a primary determinant in modulating the effect of IL-7 on murine graft-versus-host disease.</a> Journal of Immunology. 172, 3328-3336 (2004).</li><li>Li, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HY-Specific+Induced+Regulatory+T+Cells+Display+High+Specificity+and+Efficacy+in+the+Prevention+of+Acute+Graft-versus-Host+Disease.">HY-Specific Induced Regulatory T Cells Display High Specificity and Efficacy in the Prevention of Acute Graft-versus-Host Disease.</a> Journal of Immunology. 195, 717-725 (2015).</li><li>Zeiser, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+CD30+signaling+is+critical+for+adoptively+transferred+CD4+CD25++regulatory+T+cells+in+prevention+of+acute+graft-versus-host+disease.">Early CD30 signaling is critical for adoptively transferred CD4+CD25+ regulatory T cells in prevention of acute graft-versus-host disease.</a> Blood. 109, 2225-2233 (2007).</li><li>Sadeghi, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GVHD+after+chemotherapy+conditioning+in+allogeneic+transplanted+mice.">GVHD after chemotherapy conditioning in allogeneic transplanted mice.</a> Bone Marrow Transplant. 42, 807-818 (2008).</li></ol>

Использование стволовых клеток в соответствии с конкретным человеком является эффективным подходом для лечения передовых и устойчивых раковых заболеваний18. Малые молекулы фармацевтических препаратов, однако, уже давно остается основным направлением персонализированн?...

Аллогенная гематопоатическая трансплантация стволовых клеток (BMT) является эффективной терапией для лечения гематологических злокачественных новообразований31,,2 через трансплантат-против лейкемии (GVL) эффект 3 . Тем не менее, донорские лимфоциты всегда монтировать нежелательные иммунологические атаки против тканей реципиента, процесс, называемый трансплантата против хозяина болезни (GVHD)4.
Murine модели GVHD являются эффективным инструментом для изучения биологии GVHD и GVL ответ5. Мыши являются экономически эффективной моделью исследования животных. Они небольшие и эффективно дозируются с молекулами и биопрепаратами на ранних стадиях развития6. Мыши являются идеальными исследованиями животных для генетических исследований манипуляции, потому что они генетически хорошо определены, что идеально подходит для изучения биологических путей и механизмов6. Несколько мышь основных гистосовместимости комплекса (MHC) MHC-несоответствие модели GVHD были хорошо созданы, такие как C57BL/6 (H2b) к BALB/c (H25,7d) и FVB (H2q) )b Это особенно ценные модели для определения роли отдельных типов клеток, генов и факторов, влияющих на ГВХД. Трансплантация от C57/BL/6 (H2b) родительским донорам получателям с мутациями в MHC I (B6.C-H2bm1)и/или MHC II (B6.C-H2bm12) показала, что несоответствие как в классе MHC I, так и в классе II является важным требованием для развития острого GVHD. Это говорит о том, что для развития болезни необходимы какCD4, так иCD8 - Т-клетки7,,8. GVHD также участвует в воспалительном каскаде, известном как «провоспалительный цитокиновый шторм»9. Наиболее распространенным методом кондиционирования в моделях мурина является полное облучение тела (TBI) рентгеновским снимком или 137Cs. Это приводит к абляции костного мозга реципиента, тем самым позволяя донору прививать стволовые клетки и предотвращая отторжение трансплантата. Это делается путем ограничения распространения Т-клеток реципиента в ответ на донорские клетки. Кроме того, генетическое неравенство играет важную роль в индукции заболеваний, которая также зависит от незначительных MHC-несоответствие10. Таким образом, доза миелоабливного облучения варьируется в различных штаммов мыши (например, BALB/c'C57BL/6).
Активация т-клеток донора хост антигеном, представляя клетки (APCs) имеет важное значение для развития GVHD. Среди БТР, дендритные клетки (ДК) являются наиболее мощными. Они наследуют способны индуцировать GVHD из-за их превосходного поглощения антигена, экспрессии Т-клеточных костимулирующих молекул, и производства провоспалительных цитокинов, которые поляризуют Т-клетки в патогенные подмножества. Получатель DCs имеют решающее значение для облегчения Т-клеток грунтовки и Индукции GVHD после трансплантации11,12. Соответственно, DCs стали интересными целями в лечении GVHD12.
TBI требуется для повышения донорской клетки прививование. Благодаря эффекту TBI, реципиент DC активируются и выживают в течение короткого времени после трансплантации12. Несмотря на значительные достижения в области использования биолюминесценции или флуоресценции, создание эффективной модели для изучения роли получателя DCs в GVHD по-прежнему является сложной задачей.
Поскольку донорские Т-клетки являются движущей силой для активности GVL, стратегии лечения с использованием иммуносупрессивных препаратов, таких как стероиды для подавления Т-клеточной аллореактивности часто вызывают рецидив опухоли или инфекции13. Таким образом, таргетинг получателя DCs может обеспечить альтернативный подход для лечения GVHD при сохранении эффекта GVL и избежать инфекции.
Короче говоря, текущее исследование предоставляет платформу, чтобы понять, как различные типы сигнализации в получатель DCs регулирует развитие GVHD и эффект GVL после BMT.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5 M EDTA pH 8.0 100ML</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP2482100</td>
			<td>MACS buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10X PBS</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP3994</td>
			<td>MACS buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A20 B-cell lymphoma</td>
			<td>University of Central Florida</td>
			<td>In house</td>
			<td>GVL experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACC1 fl/fl</td>
			<td>Jackson Lab</td>
			<td>30954</td>
			<td>GVL experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ACC1 fl/fl CD4cre</td>
			<td>University of Central Florida</td>
			<td></td>
			<td>GVL experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Biotin MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-090-485</td>
			<td>T-cell enrichment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Human/Mouse CD45R (B220)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13-0452-85</td>
			<td>T-cell enrichment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse B220 FITC</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10452-85</td>
			<td>Flow cytometry analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD11c- AF700</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>117319</td>
			<td>Flow cytometry analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD25 PE</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12-0251-82</td>
			<td>Flow staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD4 Biotin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13-0041-86</td>
			<td>T-cell enrichment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD4 eFluor&#174; 450 (Pacific Blue&#174; replacement)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>48-0042-82</td>
			<td>Flow staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD45.1 PE</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12-0900-83</td>
			<td>Flow cytometry analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse CD8a APC</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17-0081-83</td>
			<td>Flow cytometry analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse H-2Kb PerCP-Fluor 710</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>46-5958-82</td>
			<td>Flow cytometry analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse MHC Class II-antibody APC</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>17-5320-82</td>
			<td>Flow cytometry analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse TER-119 Biotin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13-5921-85</td>
			<td>T-cell enrichment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Thy1.2</td>
			<td>Bio Excel</td>
			<td>BE0066</td>
			<td>BM generation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B6 fB-/- mice</td>
			<td>University of Central Florida</td>
			<td>In house</td>
			<td>Recipients</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B6.Ly5.1 (CD45.1+) mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>564</td>
			<td>Donors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/c mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>028</td>
			<td>Transplant recipients</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6 mice</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>027</td>
			<td>Donors/Recipients</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD11b</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13-0112-85</td>
			<td>T-cell enrichment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD25-biotin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13-0251-82</td>
			<td>T-cell enrichment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45R</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13-0452-82</td>
			<td>T-cell enrichment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD49b Monoclonal Antibody (DX5)-biotin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13-5971-82</td>
			<td>T-cell enrichment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer 40 uM</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>22363547</td>
			<td>Cell preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell strainer 70 uM</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>22363548</td>
			<td>Cell preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin</td>
			<td>Goldbio</td>
			<td>LUCK-1G</td>
			<td>Live animal imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Atlanta Bilogicals R&#38;D system</td>
			<td>D17051</td>
			<td>Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometry tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>352008</td>
			<td>Flow cytometry analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FVB/NCrl</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>207</td>
			<td>Donors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipopolysacharide (LPS)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>L4391-1MG</td>
			<td>DC mature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LS column</td>
			<td>Mitenyi Biotec</td>
			<td>130-042-401</td>
			<td>Cell preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MidiMACS</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-042-302</td>
			<td>T-cell enrichment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>New Brunswick Galaxy 170R incubator</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Galaxy 170 R</td>
			<td>Cell Culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicilin+streptomycinPenicillin/Streptomycin (10,000 units penicillin / 10,000 mg/ml strep)</td>
			<td>GIBCO</td>
			<td>15140</td>
			<td>Media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>Thermo Fisher Scienctific</td>
			<td>11875-093</td>
			<td>Media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TER119</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13-5921-82</td>
			<td>T-cell enrichment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xenogen IVIS-200</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td>Xenogen IVIS-200</td>
			<td>Live animal imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-RAD 320 Biological Irradiator</td>
			<td>Precision X-RAY</td>
			<td>X-RAD 320</td>
			<td>Total Body Irradiation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bone marrow transplantation platform to investigate the role of dendritic cells in graft-versus-host disease

Аллогенная трансплантация костного мозга (BMT) является эффективной терапией гематологических злокачественных новообразований из-за трансплантата против лейкемии (GVL) эффект для искоренения опухолей. Тем не менее, его применение ограничено развитием трансплантата против хозяина болезни (GVHD), основное осложнение BMT. GVHD вызывается, когда Т-клетки в донорских трансплантатах распознаюталонантиген, выраженный клетками-реципиентами, и монтируют нежелательные иммунологические атаки против здоровых тканей реципиента. Таким образом, традиционные методы лечения предназначены для подавления донорской Т-клеточной аллореактивности. Однако эти подходы существенно ухудшают эффект GVL, чтобы выживаемость реципиента не улучшилась. Понимание влияния терапевтических подходов на BMT, GVL и GVHD, таким образом, имеет важное значение. Благодаря антиген-представлению и цитокин-секретов способности стимулировать донора Т-клеток, получатель дендритных клеток (DCs) играют значительную роль в индукции GVHD. Таким образом, таргетинг получателя DCs становится потенциальным подходом для управления GVHD. Эта работа предоставляет описание новой платформы BMT, чтобы исследовать, как принимающие DCs регулируют ответы GVH и GVL после трансплантации. Также представлена эффективная модель BMT для изучения биологии GVHD и GVL после трансплантации.

Основная модель MHC-mismatched B6b(H2k b)-BALB/C (H2kd)тесно соответствовала развитию GVHD после трансплантации(рисунок 2). Все шесть клинических признаков ГВХД, установленных ранее Cooke et al.16, произошли у реципиентов, пересаженных СВ-В6 Т-клеток, но...

Watch this Scientific Journal Video about Bone Marrow Transplantation Platform to Investigate the Role of Dendritic Cells in Graft-versus-Host Disease at JoVE.com

Bone Marrow Transplantation Platform to Investigate the Role of Dendritic Cells in Graft-versus-Host Disease

Трансплантация против хозяина болезнь является одним из основных осложнений после аллогенной трансплантации костного мозга. Дендритные клетки играют важную роль в патогенеза болезни трансплантата против хозяина. В настоящей статье описывается новая платформа трансплантации костного мозга для изучения роли дендритных клеток в развитии трансплантата против хозяина болезни и трансплантата против лейкемии эффект.

Платформа трансплантации костного мозга для изучения роли дендритных клеток в трансплантации против хост болезни

Allogeneic bone marrow transplantation (BMT) is an effective therapy for hematological malignancies due to the graft-versus-leukemia (GVL) effect to ...

Этот новый протокол трансплантации костного мозга может быть использован для исследования того, как принимающие дендритные клетки регулируют трансплантат против хозяина и трансплантата против лейкемии ответы после трансплантации. Регенерация клеток Ex vivo позволяет адаптировать этот протокол для проверки роли других популяций иммунных клеток, таких как макрофаг и нейтрофилов, просто изменяя состояние культуры. Демонстрацией процедуры со мной будут руководитель лаборатории Кристал Хсак и студент Санджив Гуршани.Для донорской Т-клеточной истощенной подготовки C57BL/6 костного мозга, урожай бедренной кости и голени в соответствии со стандартными протоколами от усыпляемых мышей-доноров и передачи костей в 92 миллиметра диаметром Петри блюдо, содержащее 1%RPMI среды. Используя ножницы, удалить концы из каждой кости и заполнить три миллилитров шприц оснащен 26 калибровочных иглы со свежим 1%RPMI среды. Вставьте иглу в один конец одной кости и угнетайте поршень, чтобы вымыть костный мозг из полости и в ситечко клетки сбора.Когда весь костный мозг будет собран, процедите кусочки костного мозга через 75-метровый сетчатый фильтр и перенесите одноклеточную подвеску в новую 50-миллилитровую трубку. Осадок клеток центрифугации и повторно гранулы в 20 раз 10 до шести клеток на миллилитр концентрации в PBS дополняется 0,5% BSA. Затем добавьте 0,05 микрограмма антитела THI1 на один раз 10 в шесть клеток для 30-минутной инкубации при четырех градусах Цельсия.В конце инкубации, мыть клетки дважды с 10 миллилитров ледяной PBS и повторно гранулы в два раза от 10 до семи клеток на миллилитр концентрации в 0,5%BSA дополнены 10%молодой кролик дополнение и 2%DNAse в стерильной воде для 45-минутной инкубации при 37 градусах по Цельсию. В конце инкубации, мыть клетки дважды с 15 миллилитров свежего PBS за стирку и повторно гранулы в 20 миллилитров PBS, содержащих 0,5%BSA. Бассейн лимфатических узлов и селезенки в 40 микрометровый поры ситечко и использовать шприц порнер для macerate тканей через фильтры, чтобы освободить клетки.Вымойте ситечко и поршень со средой RPMI, дополненной 1%FBS, чтобы собрать все клетки и от осадки клеток центрифугой. Добавьте пять миллилитров буфера лиза ACK в клеточные гранулы. После пяти минут при комнатной температуре, остановить реакцию с пятью миллилитров среднего дополняется 1%FBS и гранулы белых кровяных телец центрифугации.Переусердуйте гранулы в пяти миллилитров буфера MACS для подсчета и разбавления клеток до концентрации в два раза от 10 до восьми ячеек на миллилитр в свежем буфере MACS. Добавьте соответствующую концентрацию антиэритроидов, анти-гранулоцитов, анти-В-клеток и анти-НК-клеток истощения антител на один раз от 10 до шести клеток для 15-минутной инкубации при четырех градусах Цельсия. В конце инкубации, мыть клетки с 10 миллилитров ледяного буфера MACS и повторно гранулы в один раз от 10 до восьми клеток на миллилитр концентрации в свежем буфере MACS.Далее добавьте 0,22 микролитера антибиотиновых микробусов на 10 раз в шесть клеток с смешиванием для 15-минутной инкубации при четырех градусах Цельсия. В конце инкубации, мыть клетки с 10 миллилитров ледяного буфера MACS и собирать неограниченные обогащенные Т-клетки магнитного разделения шарика с помощью MACSxpress сепаратор в соответствии со стандартными протоколами изоляции бисера. В конце отделения осадочные Т-клетки путем центрифугации и повторного вложения гранул в пять миллилитров свежего буфера MACS для подсчета.Для генерации костного мозга полученных дендритных клеток, изолировать костный мозг от бедренной кости дикого типа или фактор B нокаут мышей, как попродемонстрировано, и лизировать красные кровяные тельца в пяти миллилитров ACK лиза буфера, останавливая реакцию с 10 миллилитров RPMI дополнены 1%FBS через пять минут. После сбора целых кровяных клеток центрифугации, повторно гранулы в 10 миллилитров культуры среднего до двух раз от 10 до шестой клетки на миллилитр концентрации и добавить 20 нанограмм на миллилитр ГМ-CSF к клеткам до посева 10 миллилитров клеток на отдельные 100 на 15 миллиметров Петри блюда при 37 градусов по Цельсию и 5%углекислого газа в течение шести дней. На шестой день активируйте дендритные клеточные культуры костного мозга с 25 микрограммами на миллилитр LPS на тарелку.По крайней мере 85% культурных клеток костного мозга дифференцируются в дендритные клетки. Чистота Т-клеток после обогащения магнитного шарика составляет 90%Основная модель MHC, несоответствуя C57BL/6 BALB/c, тесно соответствует развитию GVHD после трансплантации. Пик тяжести происходит примерно через 11 дней после переноса клеток с последующим снижением клинических результатов и восстановлением массы тела до 16-го дня.Получатели равномерно уступили GVHD от 30 до 40 дней после пересадки. Интересно, что трансплантация с фактором B нокаут дендритных клеток улучшает выживаемость реципиента и GVHD клинических баллов. Люцифераза-трансдуцированная А20 В-клеточная лимфома позволяет контролировать рост опухоли у живых животных.В этом репрезентативном эксперименте все получатели дикого типа BALB/c, которые получали только костный мозг плюс A20, умерли от рецидива опухоли. Дикий тип BALB / C реципиентов, пересаженных с костного мозга полученных АКК1 истощенных доноров Т-клеток умер от GVHD. Кроме того, животные, получившие донорский костный мозг и Т-клетки, истощенные ACC1, умерли как от ГВХД, так и от рецидива опухоли.Для генерации достаточного количества клеток костного мозга, собранные кости голени и бедренной кости должны быть полностью свободны от мышечной ткани до коррекции костного мозга. Отрицательная очистка клеток костного мозга с биотинилазы анти-CD3 и анти-биотин MicroBeads также может в выполняется для истощения лимфоцитов из костного мозга.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Generation and Labeling of Murine Bone Marrow-derived Dendritic Cells with Qdot Nanocrystals for Tracking Studies

Генерация и маркировки костного мозга мышей-дендритных клеток с Qdot нанокристаллов для отслеживания исследований

Dendritic cells (DCs) are professional antigen presenting cells (APCs) found in peripheral tissues and in immunological organs such as thymus, bone ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Индукционная трансплантат против хозяина и<em&gt; В Vivo</em&gt; Т-клеток Мониторинг Использование MHC соответствием мышиной модели

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Differentiating Functional Roles of Gene Expression from Immune and Non-immune Cells in Mouse Colitis by Bone Marrow Transplantation

Дифференцируя функциональной роли экспрессии генов от иммунной и не-иммунных клеток в мышь колит трансплантацией костного мозга

To understand the role of a gene in the development of colitis, we compared the responses of wild-type mice and gene-of-interest deficient knockout mice ...

Methods to Investigate the Regulatory Role of Small RNAs and Ribosomal Occupancy of Plasmodium falciparum

Methods to Investigate the Regulatory Role of Small RNAs and Ribosomal Occupancy of Plasmodium falciparum

Методы по расследованию регулирующей роли малых РНК и рибосомного размещения в<em&gt; Малярийного плазмодия</em

The genetic variation responsible for the sickle cell allele (HbS) enables erythrocytes to resist infection by the malaria parasite, P. falciparum. The ...

Generation and Identification of GM-CSF Derived Alveolar-like Macrophages and Dendritic Cells From Mouse Bone Marrow

Генерация и идентификация GM-CSF производный альвеол, как макрофаги и дендритные клетки из костного мозга мыши

Macrophages and dendritic cells (DCs) are innate immune cells found in tissues and lymphoid organs that play a key role in the defense against pathogens. ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

Флуоресценция активированных сортировки клеток для очистки плазмоцитов дендритных клеток из костного мозга мыши

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Precision-cut Mouse Lung Slices to Visualize Live Pulmonary Dendritic Cells

Точность резки Мышь легких Кусочки визуализировать в прямом легочная дендритные клетки

Inhalation of allergens and pathogens elicits multiple changes in a variety of immune cell types in the lung. Flow cytometry is a powerful technique for ...

An In Vivo Mouse Model to Measure Na&#239;ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells

An In Vivo Mouse Model to Measure NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells

В естественных условиях модель мыши для активации Т-клеток CD4 наивно мера, пролиферации и дифференцирования Th1, индуцированных дендритные клетки костного мозга, полученных

Quantification of na&#239;ve CD4 T cell activation, proliferation, and differentiation to T helper 1 (Th1) cells is a useful way to assess the role played ...

Induction of Intestinal Graft-versus-host Disease and Its Mini-endoscopic Assessment in Live Mice

Индукция кишечного трансплантата – versus – хост заболевания и его мини эндоскопическая оценки в живых мышей

Acute graft-versus-host disease (GvHD) represents the most severe complication that patients previously undergoing allogeneic hematopoietic stem cell ...

Induction and Scoring of Graft-Versus-Host Disease in a Xenogeneic Murine Model and Quantification of Human T Cells in Mouse Tissues using Digital PCR

Индукция и скоринг трансплантата-Versus-Host болезни в Xenogeneic Murine модели и количественной оценки человеческих Т-клеток в мышь тканей с помощью цифровых ПЦР

Acute graft-versus-host disease (GVHD) is a significant limitation for patients receiving hematopoietic stem cell transplant as therapy for hematological ...