Name: immunoglobulin g n-glycan analysis by ultra-performance liquid chromatography
Uploaded: 2020-01-18T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Immunoglobulin G N-Glycan Analysis by Ultra-Performance Liquid Chromatography at JoVE.com

وقد دعم هذا العمل بمنح مقدمه من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (81673247 & 81872682) والمنحة التعاونية الاستراليه الصينية (NH & APP1112767-NSFC 81561128020).

وقد تمت الموافقة علي جميع المواضيع المدرجة في البروتوكول من قبل لجنه الأخلاق في جامعه العاصمة الطبية ، بكين ، الصين12. وتم الحصول علي موافقه خطيه مستنيرة من كل موضوع في بداية الدراسة.
1. مفتش العزلة
<ol><li>اعداد المواد الكيميائية بما في ذلك ملزمه العازلة (الفوسفات ...

<ol>
	<li>Kolarich, D., Lepenies, B., Seeberger, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycomics,+glycoproteomics+and+the+immune+system.">Glycomics, glycoproteomics and the immune system.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 16, 214 (2012).</li><li>Cummings, R., Pierce, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Challenge+and+Promise+of+Glycomics.">The Challenge and Promise of Glycomics.</a> Chemistry Biology. 21 (1), (2014).</li><li>Shade, K. T. C., Anthony, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+Glycosylation+and+Inflammation.">Antibody Glycosylation and Inflammation.</a> Antibodies. 2, 392 (2013).</li><li>Gudelj, I., Lauc, G., Pezer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoglobulin+G+glycosylation+in+aging+and+diseases.">Immunoglobulin G glycosylation in aging and diseases.</a> Cellular Immunology. 333, 65 (2018).</li><li>Huffman, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+performance+of+four+methods+for+high-throughput+glycosylation+analysis+of+immunoglobulin+G+in+genetic+and+epidemiological+research.">Comparative performance of four methods for high-throughput glycosylation analysis of immunoglobulin G in genetic and epidemiological research.</a> Molecular Cellular Proteomics. 13, 1598 (2014).</li><li>Stockmann, H., Adamczyk, B., Hayes, J., Rudd, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated,+high-throughput+IgG-antibody+glycoprofiling+platform.">Automated, high-throughput IgG-antibody glycoprofiling platform.</a> Analytical Chemistry. 85, 8841 (2013).</li><li>Kristic, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycans+are+a+novel+biomarker+of+chronological+and+biological+ages.">Glycans are a novel biomarker of chronological and biological ages.</a> Journals of Gerontology. Series A, Biological Sciences Medical Sciences. 69, 779 (2014).</li><li>Nikolac, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+association+between+galactosylation+of+immunoglobulin+G+and+body+mass+index.">The association between galactosylation of immunoglobulin G and body mass index.</a> Progress in Neuropsychopharmacology Biological Psychiatry. 48, 20 (2014).</li><li>Liu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+changes+of+immunoglobulin+G+N-glycosylation+in+blood+lipids+and+dyslipidaemia.">The changes of immunoglobulin G N-glycosylation in blood lipids and dyslipidaemia.</a> Journal of Translational Medicine. 16, 235 (2018).</li><li>Lemmers, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IgG+glycan+patterns+are+associated+with+type+2+diabetes+in+independent+European+populations.">IgG glycan patterns are associated with type 2 diabetes in independent European populations.</a> Biochimica Biophysica Acta General Subjects. 1861, 2240 (2017).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Association+Between+Glycosylation+of+Immunoglobulin+G+and+Hypertension:+A+Multiple+Ethnic+Cross-Sectional+Study.">The Association Between Glycosylation of Immunoglobulin G and Hypertension: A Multiple Ethnic Cross-Sectional Study.</a> Medicine (Baltimore). 95, e3379 (2016).</li><li>Liu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemic+stroke+is+associated+with+the+pro-inflammatory+potential+of+N-glycosylated+immunoglobulin+G.">Ischemic stroke is associated with the pro-inflammatory potential of N-glycosylated immunoglobulin G.</a> Journal of Neuroinflammation. 15, 123 (2018).</li><li>Russell, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+N-glycosylation+of+immunoglobulin+G+as+a+novel+biomarker+of+Parkinson's+disease.">The N-glycosylation of immunoglobulin G as a novel biomarker of Parkinson's disease.</a> GLYCOBIOLOGY. 27, 501 (2017).</li><li>Bones, J., Mittermayr, S., O'Donoghue, N., Guttman, A., Rudd, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultra+performance+liquid+chromatographic+profiling+of+serum+N-glycans+for+fast+and+efficient+identification+of+cancer+associated+alterations+in+glycosylation.">Ultra performance liquid chromatographic profiling of serum N-glycans for fast and efficient identification of cancer associated alterations in glycosylation.</a> Analytical Chemistry. 82, 10208 (2010).</li><li>Pucic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+throughput+isolation+and+glycosylation+analysis+of+IgG-variability+and+heritability+of+the+IgG+glycome+in+three+isolated+human+populations.">High throughput isolation and glycosylation analysis of IgG-variability and heritability of the IgG glycome in three isolated human populations.</a> Molecular Cellular Proteomics. 10, M111 (2011).</li><li>Berruex, L. G., Freitag, R., Tennikova, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+antibody+binding+to+immobilized+group+specific+affinity+ligands+in+high+performance+monolith+affinity+chromatography.">Comparison of antibody binding to immobilized group specific affinity ligands in high performance monolith affinity chromatography.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 24, 95 (2000).</li><li>Ren, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+IgG+galactosylation+as+a+promising+biomarker+for+cancer+screening+in+multiple+cancer+types.">Distribution of IgG galactosylation as a promising biomarker for cancer screening in multiple cancer types.</a> Cell Research. 26, 963 (2016).</li></ol>

Uplc بمثابه التحليل الكمي النسبي طريقه5،15. وتشير النتائج إلى ان UPLC هو تكنولوجيا الكشف مستقره مع استنساخ جيده والدقة الكمية النسبية. يتم التعبير عن كميه غليكانز في كل ذروه كنسبه مئوية من إجمالي المنطقة المتكاملة باستخدام UPLC ، وهي القيمة النسبية. ويؤدي القياس ا...

N-glycosylation من البروتينات البشرية هو تعديل المشتركة والاساسيه بعد الانتقالية1 وقد تساعد علي التنبؤ بحدوث وتطور الامراض بشكل دقيق نسبيا. نظرا لتعقيد هيكلها ، فمن المتوقع ان هناك أكثر من 5,000 glycan الهياكل ، وتوفير إمكانات كبيره كما التشخيص والمؤشرات الحيوية التنبؤيه للامراض2. N-غليكانز تعلق علي الغلوبولين المناعي G (مفتش) وقد ثبت ان تكون ضرورية لوظيفة مفتش ، ومفتش ن-glycosylation يشارك في التوازن بين الموالية للانظمه والمضادة للالتهابات3. وتشارك التفاضلية مفتش ن-glycosylation في تطوير الامراض والتقدم ، والتي تمثل كل من الاستعداد واليه الوظيفية المشاركة في امراض المرض. وقد ارتبط الدور التهابي من مفتش ن-glycosylation مع الشيخوخة, الامراض التهابيه, امراض المناعة الذاتية, والسرطان4.
مع تطوير تكنولوجيا الكشف ، وتستخدم الطرق التالية علي نطاق واسع في غليكوميكس عاليه الانتاجيه: اللوني تفاعل هيدروفيلي (HILIC) اللوني السائل فائقه الأداء مع الكشف عن الفلورية (UPLC-FLR) ، متعدد الشعرية هلام الكهربائي مع الليزر التي يسببها الكشف عن الفلورية (Xgggg-ليف) ، مصفوفة بمساعده الليزر/تاين الوقت من الطيران الطيف الكتلي (MALDI-تسوف-MS) ، واللوني السائل الحراري الطيف الكتلي (LC-ESI-MS) . وقد تغلبت هذه الأساليب علي أوجه القصور السابقة للتدفق المنخفض ، والنتائج غير المستقرة ، وخصوصية الحساسية الضعيفة5،6.
ويستخدم علي نطاق واسع UPLC لاستكشاف العلاقة بين مفتش ن-glycosylation وبعض الامراض (اي ، الشيخوخة7، السمنة8، ديسسليبيدميا9، النوع الثاني السكري10، ارتفاع ضغط الدم11، السكتة الدماغية12، ومرض باركنسون13). بالمقارنة مع الطرق الثلاثة المذكورة أعلاه ، uplc لديه المزايا التالية5،14. أولا ، فانه يوفر طريقه التحليل الكمي النسبي ، وتحليل البيانات التي تنطوي علي تطبيع المنطقة الاجماليه يحسن قابليه للمقارنة لكل عينه. ثانيا ، تكلفه المعدات والخبرات المطلوبة منخفضه نسبيا ، مما يجعل من الأسهل لتنفيذ وتحويل العلامات الحيوية الغليكويليشن في التطبيقات السريرية. يقدم هنا مقدمه إلى UPLC بحيث يمكن استخدامها علي نطاق أوسع.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2-aminobenzamide, 2-AB</td>
			<td>Sigma, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well collection plate</td>
			<td>AXYGEN</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well filter plate</td>
			<td>Pol</td>
			<td>0.45 um GHP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well monolithic plate</td>
			<td>BIA Separations</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well plate rotor</td>
			<td>Eppendorf Co., Ltd, Germany</td>
			<td>T_1087461900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Sigma, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Huihai Keyi Technology Co., Ltd, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium bicarbonate</td>
			<td>Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium formate</td>
			<td>Beijing Minruida Technology Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Constant shaking incubator/rocker</td>
			<td>Zhicheng analytical instrument manufacturing co., Ltd, China</td>
			<td>ZWY-10313</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran Calibration Ladder/Glycopeptide column</td>
			<td>Watts technology Co., Ltd, China</td>
			<td>BEH column</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium phosphate</td>
			<td>Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric ovens</td>
			<td>Tester instruments Co., Ltd</td>
			<td>202-2AB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Empower 3.0</td>
			<td>Waters technology Co., Ltd, America</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Huihai Keyi Technology Co., Ltd, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic acid</td>
			<td>Sigma, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlycoProfile 2-AB Labeling kit</td>
			<td>Sigma, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl</td>
			<td>Junrui Biotechnology Co., Ltd, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-speed centrifuge</td>
			<td>Eppendorf Co., Ltd, Germany</td>
			<td>5430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Igepal</td>
			<td>Sigma, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low temperature centrifuge</td>
			<td>Eppendorf Co., Ltd, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low temperature refrigerator</td>
			<td>Qingdao Haier Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manifold 96-well plate</td>
			<td>Watts technology Co., Ltd, China</td>
			<td>186001831</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Huihai Keyi Technology Co., Ltd, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milli-Q pure water meter</td>
			<td>Millipore Co., Ltd, America</td>
			<td>Advantage A10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PH tester</td>
			<td>Sartorius Co., Ltd, Germany</td>
			<td>PB-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline, PBS</td>
			<td>Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette</td>
			<td>Eppendorf Co., Ltd, Germany</td>
			<td>4672100, 0.5-10&#956;l &#38; 10-100&#956;l &#38; 20-200&#956;l &#38; 1000&#956;l</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PNGase F enzyme</td>
			<td>Sigma, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium dihydrogen phosphate</td>
			<td>Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propan-2-ol</td>
			<td>Huihai Keyi Technology Co., Ltd, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>Sigma, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium cyanoborohydride (NaBH3CN)</td>
			<td>Sigma, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrophotometer</td>
			<td>Shanghai Yuanxi instrument Co., Ltd</td>
			<td>B-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer liquid gun</td>
			<td>Smer Fell Science and Technology Co., Ltd, China</td>
			<td>4672100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Amresco, America</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-low temperature refrigerator</td>
			<td>Thermo Co., Ltd, America</td>
			<td>MLT-1386-3-V; MDF-382E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-performance liquid chromatography</td>
			<td>Watts technology Co., Ltd, China</td>
			<td>Acquity MLtraPerformance LC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Pump</td>
			<td>Watts technology Co., Ltd, China</td>
			<td>725000604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volatilizing machine/Dryer</td>
			<td>Eppendorf Co., Ltd, Germany</td>
			<td>T_1087461900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex</td>
			<td>Changzhou Enpei instrument Co., Ltd, China</td>
			<td>NP-30S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water-bath</td>
			<td>Tester instruments Co., Ltd</td>
			<td>DK-98-IIA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weighing balance</td>
			<td>Shanghai Jingke Scientific Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>MP200B</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

immunoglobulin g n-glycan analysis by ultra-performance liquid chromatography

غليكوميكس هو تخصص فرعي جديد في البحوث نظام اوميكس التي توفر إمكانات كبيره في اكتشاف الجيل التالي من المؤشرات الحيوية للاصابه بالمرض ، واكتشاف هدف المخدرات ، والطب الدقيق. وقد تم الإبلاغ عن البديلة مفتش ن-غليكانز في العديد من الامراض المزمنة الشائعة ، واقترح ان يكون لها إمكانات كبيره في التطبيقات السريرية (اي ، المؤشرات الحيوية للتشخيص والتنبؤ بالامراض). وتتميز علي نطاق واسع مفتش ن-غليكانز باستخدام طريقه التفاعل هيدروفيلي اللوني (hilic) اللوني السائل فائقه الأداء (uplc). UPLC هو تكنولوجيا الكشف مستقره مع استنساخ جيده وعاليه الدقة الكمية النسبية. الاضافه إلى ذلك ، يتم فصل هيكل مفتش ن-glycan بشكل واضح ، وتتميز تكوين glycan ووفره نسبيه في البلازما.

كما هو مبين في الشكل 1، تم تحليلها مفتش N-غليكانز إلى 24 الاوليه مفتش القمم غليكان (GPs) علي أساس موقف الذروة والاحتفاظ بالوقت. وتتوفر هياكل N-glycan من خلال الكشف عن الطيف الكتلي وفقا لدراسة سابقه (الجدول 1)15. ولضمان ان تكون النتائج ...

Watch this Scientific Journal Video about Immunoglobulin G N-Glycan Analysis by Ultra-Performance Liquid Chromatography at JoVE.com

Immunoglobulin G N-Glycan Analysis by Ultra-Performance Liquid Chromatography

ويتميز الغلوبولين المناعي G (مفتش) N-glycan باستخدام التفاعل هيدروفيلييك اللوني uplc. الاضافه إلى ذلك ، يتم فصل هيكل مفتش N-glycan بشكل واضح. يقدم هنا مقدمه لهذه الطريقة التجريبية بحيث يمكن استخدامها علي نطاق واسع في إعدادات البحث.

تحليل الغلوبولين المناعي G-Glycan بواسطة اللوني السائل فائق الأداء

Glycomics is a new subspecialty in omics system research that offers significant potential in discovering next-generation biomarkers for disease ...

يتم تأسيس تقنية كروماتوغرافيا فائقة الأداء السائل لتحليل دقيق للIgG n-glycan بسبب حساسيته ويبدو أن لديه القدرة على توفير معلومات محددة من الجليكان هذه الطريقة هي سهلة الاستخدام ولها عدد من مختلف التكلفة المنخفضة نسبيا من الزيادات، وإعادة إنتاج عالية القدرة على ايزومرات الجليكان. قياسات البروتين في البلازما يمكن أن تكون جذابة. في الطب.يرتبط أيضا مع IgG في قاعدة الجليكوز ومثل هذا والبيولوجية التي تحتوي على السكان. أنت تعرف أن من حالة نجس يستخدم لاختبار IgG في الجليكانات. في الواقع، يمكن أن اختبار ن-الجليكانات من البروتين.وهذا مطلوب في البروتين عبر ربط اثنين من حالة نقية يمكن تطبيقها على البروتين عملية أو التجريبية بسيطة نسبيا في حين أن عملية تجريبية تحتاج إلى أن تكون موحدة. العملية التجريبية من نهاية إلى نهاية تستغرق ثلاثة أيام للعمل، والخطوات التجريبية تحتاج إلى حفظها من أجل إتقان المهارات التجريبية. لتحضير العينات، قم بإذابة عينة البلازما المجمدة.ثم، الطرد المركزي في 80 مرة G لمدة 10 دقائق. اتركي الطبق المتجانسة من البروتين G في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. نقل 100 ميكرومتر من العينة في كل بئر من لوحة جمع مليلتر.إضافة الماء النقي جداً كعينة تحكم واحدة. تمييع العينات مع واحد X PBS بمقدار واحد إلى سبعة حجم من حيث نسبة الحجم. تنظيف 0.45 ميكرون البولي بروبلين البولي بروبلين مرشح لوحة مع 200 ميكرولترات من المياه النقية جدا.كرر التنظيف مرتين إضافيتين. نقل العينات المخففة في لوحة التصفية، وتصفية العينات في لوحة الجماعية باستخدام مضخة فراغ مع الضغط في 266.6 إلى 399.9 باسكال. لتحضير الألواح المتجانسة من البروتين G، تخلص أولاً من مخزن التخزين المؤقت.تنظيف لوحات متجانسة مع ملليلتر اثنين من المياه النقية جدا، واثنين من ملليلتر من برنامج تلفزيوني X واحد، ملليلتر واحد من حمض فليكدر 0.17 المول، ملليلتر اثنين من 10 X PBS، واثنين من ملليلتر من واحد X PBS بالتسلسل. إزالة السائل التالي باستخدام مضخة فراغ. باستخدام الأنابيب متعددة القنوات، نقل العينات المصفاة إلى لوحة بروتين G متجانسة لتجليد IgG والتنظيف.ثم، إضافة ملليلتر اثنين من برنامج تلفزيوني X واحد لتنظيف لوحات متجانسة. إزالة برنامج تلفزيوني باستخدام مضخة فراغ، وتكرار التنظيف مرتين إضافية. Illute IgG مع ملليلتر واحد من حمض فليك 0.17 المول، وتصفية العينات في لوحة جمع بواسطة مضخة فراغ.ثم، إضافة 170 ميكرولترات من بيكربونات أمونيوم واحد الوليار في لوحة جمع. الكشف عن تركيز IgG باستخدام مقياس طيف امتصاص في الطول الموجي الأمثل من 280 نانومتر. ضع IgG المستخرجة في فرن لتجف عند 60 درجة مئوية لمدة ثلاث ساعات.تحديد الكمية التي يجب ملاحظتها حسب تركيزها كما هو موضح في المخطوطة، والحفاظ عليها في ناقص 80 درجة مئوية. جمع IgG المجففة، وتخزين المواد الكيميائية بما في ذلك 1.33٪SDS، وأربعة في المئة IgePal و 5٪ برنامج تلفزيوني في درجة حرارة الغرفة. إعداد إنزيم F indoglycosidase عن طريق تمييع 250 وحدة من انزيم مع 250 ميكرولترات من المياه النقية جدا.لتحريف IgG، إضافة 30 ميكرولترات من 1.33٪ SDS ومزيج من دوامة. نقل العينة إلى فرن درجة 65 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. ثم، إزالته من الفرن، ونتركه يبرد لمدة 15 دقيقة.إضافة 10 ميكرولترات من أربعة في المئة IgePal في نفس العينة، ووضعها على حاضنة تهتز لمدة خمس دقائق. إضافة 20 ميكرولترات من خمسة X PBS و 30 إلى 35 ميكرولترات من 0.1 هيدروكسيد الصوديوم الضرس لتنظيم pH إلى 8.0، ومزيج من دوامة. إضافة أربعة ميكروليترات من إنغغليكوسيداسي F إنزيم، ومزيج من دوامة.ثم، احتضان لمدة 18 إلى 20 ساعة في حمام مائي 37 درجة مئوية. في اليوم التالي، ضع الزيكا في فرن عند 60 درجة مئوية لتجف لمدة ساعتين ونصف إلى ثلاث ساعات. حفظ الجليكانات الإفراج في ناقص 80 درجة مئوية حتى مزيد من القياس.إعداد اثنين من الأحماض الأمينية وضع الكواشف مع 24.5 ميكرولتردات من DMSO, 10.5 ميكرولترات من حمض الخليك, 0.7 ملليغرام من اثنين من البنزيميد الأمينية, وستة ملليغرام من الصوديوم cyanoborohydride. بعد ذلك ، في غرفة مظلمة ، تسمية الجليكان بإضافة 35 ميكروليتر من اثنين من البنزين أمينيميد وضع الكواشف. نقل glcans المسمى إلى مذبذب لمدة خمس دقائق، ومن ثم، نقله إلى الفرن لمدة ثلاث ساعات في 65 درجة مئوية.بعد ذلك، نقله إلى درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. وIgG ن- glycase، سنقوم تسمية مع من أجل أن يتم الكشف عنها من قبل الكشف الفلورسنت من حالة نجس. قبل معالجة 0.2 ميكرون GHP لوحة مرشح مع 200 ميكرولترات من 70٪ الإيثانول، 200 ميكرولترات من المياه النقية جدا، و 200 ميكرولترات من 96٪ الاسيتو نيتريل في أربع درجات مئوية.ثم، وإزالة النفايات باستخدام مضخة فراغ. لتنقية اثنين من البنزيمات الأمينية المسمى الجليكان، إضافة 700 ميكرولترات من 100٪ الأسيتونتريل إلى العينة، ونقله إلى حاضنة تهتز لمدة خمس دقائق. أجهزة الطرد المركزي في 134 مرة G لمدة خمس دقائق في أربع درجات مئوية.نقل supernatent إلى 0.2 ميكرون GHP لوحة مرشح لمدة دقيقتين، وإزالة الترشيح باستخدام الفراغ. غسل اثنين من benzimide الأمينية المسمى غليزان مع 200 ميكرولترات من 96٪ الأسيتونيتريل في أربع درجات مئوية، وإزالة الترشيح باستخدام مضخة فراغ خمس إلى ست مرات. Illute اثنين من البنزيميد الأمينية المسمى الجليكان مع 100 ميكرولترات من المياه النقية جدا ثلاث مرات.نقل اثنين من البنزيميد الأمينية المسمى غليزان في فرن لتجف في 60 درجة مئوية لمدة ثلاث ساعات ونصف الساعة. حفظ تسمية ن-الجليكانز في ناقص 80 درجة مئوية حتى مزيد من القياس. أولاً، افتح البرنامج للتحكم في مراحل الهاتف المحمول.غسل أدوات UPLC مع 50٪ المذيب B و 50٪ مذيب C بمعدل تدفق 0.2 ملليلتر في الدقيقة لمدة 30 دقيقة. ثم، يغسل مع 25٪ المذيب A و 75٪ المذيب B بمعدل تدفق 0.2 ملليلتر في الدقيقة لمدة 20 دقيقة. ثم، إضافة معدل تدفق 0.4 ملليلتر في الدقيقة الواحدة.قم بحل الـ n-glycans المسمى مع 25 ميكروليتر من خليط من 100٪ أسيتونتريريل والمياه النقية جداً في حجم اثنين إلى وحدة واحدة بنسبة الحجم. ثم، الطرد المركزي في 134 مرات G لمدة خمس دقائق في أربع درجات مئوية، واستخدام أنبوب جاف لتحميل 10 ميكرولترات من supernatent في أجهزة UPLC. فصل الـ n-glycans المسمى بمعدل تدفق 0.4 ملليلتر في الدقيقة مع تدرج خطي من 75٪ إلى 62٪ الأسيتونتريل لمدة 25 دقيقة.ثم، تنفيذ تحليل تشغيل من قبل العمود glycopeptide سلم المعايرة الدهسترة على UPLC في 60 درجة مئوية. الكشف عن ن-غليكان الفلورسنتين في الاقتباس X وأطوال موجية الانبعاثات من 330 نانومتر و 420 نانومتر، على التوالي. كما هو مبين في هذا الشكل، تم تحليل IgG ن-الجليكانات في 24 ذروة غليكان IgG الأولية على أساس موقف الذروة ووقت الاحتفاظ.تتوفر هياكل n-glycan في 24 نوعًا من خلال الكشف عن القياس الطيفي الكتلي. إلى الـ asses تكرار واستقرار الأسلوب، تم اختبار العينة القياسية في نفس الوقت ست مرات. وأظهرت قمم الجليكان بنسب صغيرة نسبيا أخطاء قياس عالية من أكثر من 10٪ من معامل الاختلاف.في قطعة ومهمة لتشكيل إلى تأسيسها من هيكل IgG ن جليكان، وخاصة لإنشاء محطة لذلك، بدلا من 3.3 IgG ن-غليكيس وجدت في أمر بالغ الأهمية في هذا أهمية IgG. من المعروف أن الجليكانات من أن تكون مختلفة. مع التطورات في الكولين بروتوميك، جنبا إلى جنب في الجليكان لاستكشاف المعلومات إلى هذا بحيث يمكن استخدامه كإمكانية لتشخيص اليوم.بعد تطوير هذه التقنية، فإنه يوفر طريقة جديدة لاستكشاف

Research

JoVE Journal

Medicine

Mouse Model of Intraluminal MCAO: Cerebral Infarct Evaluation by Cresyl Violet Staining

نموذج الفأر من MCAO داخل اللمعة: الدماغي التقييم عائق من قبل تلوين البنفسج الكريزيل

Stroke is the third  cause of mortality and the leading cause of disability in the World. Ischemic  stroke accounts for approximately 80% of all strokes. ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

شبكية العين مفرزة النموذجي في القوارض بواسطة حقن تحت الشبكية من هيالورونات الصوديوم

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

In utero Measurement of Heart Rate in Mouse by Noninvasive M-mode Echocardiography

In utero Measurement of Heart Rate in Mouse by Noninvasive M-mode Echocardiography

في قياس الرحم من معدل ضربات القلب في الماوس بواسطة موسع M-وضع ضربات القلب

Congenital heart disease (CHD) is the most frequent noninfectious cause of death at birth. The incidence of CHD ranges from 4 to 50/1,000 births (Disease ...

Isolation of Human Lymphatic Endothelial Cells by Multi-parameter Fluorescence-activated Cell Sorting

عزل خلايا الإنسان اللمفاوي البطانية التي كتبها متعدد المعلمة تنشيط الإسفار الفرز خلية

Lymphatic system disorders such as primary lymphedema, lymphatic malformations and lymphatic tumors are rare conditions that cause significant morbidity ...

VDJ-Seq: Deep Sequencing Analysis of Rearranged Immunoglobulin Heavy Chain Gene to Reveal Clonal Evolution Patterns of B Cell Lymphoma

VDJ تسلسل: تحليل تسلسل عميق من سلسلة ترتيبها المناعي الثقيلة جين لكشف أنماط نسيلي تطور سرطان الغدد الليمفاوية B الخليوي

Understanding tumor clonality is critical to understanding the mechanisms involved in tumorigenesis and disease progression. In addition, understanding ...

Exosomal miRNA Analysis in Non-small Cell Lung Cancer (NSCLC) Patients' Plasma Through qPCR: A Feasible Liquid Biopsy Tool

Exosomal miRNA Analysis in Non-small Cell Lung Cancer NSCLC Patients' Plasma Through qPCR: A Feasible Liquid Biopsy Tool

Exosomal تحليل ميرنا في الخلية غير الصغيرة سرطان الرئة (NSCLC) المرضى البلازما من خلال QPCR: والممكنة السائل أداة خزعة

The discovery of alterations in the EGFR and ALK genes, amongst others, in NSCLC has driven the development of targeted-drug therapy using selective ...

Spatial Quantification of Drugs in Pulmonary Tuberculosis Lesions by Laser Capture Microdissection Liquid Chromatography Mass Spectrometry (LCM-LC/MS)

Spatial Quantification of Drugs in Pulmonary Tuberculosis Lesions by Laser Capture Microdissection Liquid Chromatography Mass Spectrometry LCM-LC/MS

التقاط الكمي المكانية للمخدرات في الآفات السل الرئوي بالليزر اللوني السائل ميكروديسيكشن الكتلي (LCM-LC/MS)

Tuberculosis is still a leading cause of morbidity and mortality worldwide. Improvements to existing drug regimens and the development of novel ...

Application of Biochip Microfluidic Technology to Detect Serum Allergen-specific Immunoglobulin E (sIgE)

Application of Biochip Microfluidic Technology to Detect Serum Allergen-specific Immunoglobulin E sIgE

تطبيق تكنولوجيا Biochip موائع جزيئية "الكشف عن مصل" الحساسية الخاصة "كريين مناعي ه" (sIgE)

Allergic disease is common in both adults and children. Identification of the causative allergens is significant in disease management and prevention. ...

Assessment of the Acute Inhalation Toxicity of Airborne Particles by Exposing Cultivated Human Lung Cells at the Air-Liquid Interface

تقييم سمية الاستنشاق الحاد للجسيمات المحمولة جواً من خلال كشف خلايا الرئة البشرية المزروعة في واجهة الهواء والسائل

Here, we present a specially designed modular in vitro exposure system that enables the homogenous exposure of cultivated human lung cells at the ALI to ...

Quality-Controlled Sputum Analysis by Flow Cytometry

تحليل البلغم الذي يتم التحكم فيه بالجودة حسب قياس التدفق الخلوي

Sputum, widely used to study the cellular content and other microenvironmental features to understand the health of the lung, is traditionally analyzed ...