Name: immunoglobulin g n-glycan analysis by ultra-performance liquid chromatography
Uploaded: 2020-01-18T12:00:00
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この研究は、中国国立自然科学財団(81673247&81872682)とオーストラリア・中国共同補助金(NH&MRC - APP1112767 -NSFC 81561128020)からの助成金によって支援されました。

議定書に含まれるすべての科目は、首都医科大学、北京、中国12の倫理委員会によって承認されています。書面によるインフォームド・コンセントは、研究の開始時に各被験者から得られた。
1. IgGの分離
<ol><li>結合緩衝液(リン酸緩衝生理食塩水、PBS):1x PBS(pH=7.4)、中和緩衝液:10x PBS(pH=6.6-6.8)、溶離剤:0.1Mギ酸(pH=2.5)、溶離液中和溶液:1M炭酸アンモニウム?...

<ol>
	<li>Kolarich, D., Lepenies, B., Seeberger, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycomics,+glycoproteomics+and+the+immune+system.">Glycomics, glycoproteomics and the immune system.</a> Current Opinion in Chemical Biology. 16, 214 (2012).</li><li>Cummings, R., Pierce, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Challenge+and+Promise+of+Glycomics.">The Challenge and Promise of Glycomics.</a> Chemistry Biology. 21 (1), (2014).</li><li>Shade, K. T. C., Anthony, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+Glycosylation+and+Inflammation.">Antibody Glycosylation and Inflammation.</a> Antibodies. 2, 392 (2013).</li><li>Gudelj, I., Lauc, G., Pezer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoglobulin+G+glycosylation+in+aging+and+diseases.">Immunoglobulin G glycosylation in aging and diseases.</a> Cellular Immunology. 333, 65 (2018).</li><li>Huffman, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+performance+of+four+methods+for+high-throughput+glycosylation+analysis+of+immunoglobulin+G+in+genetic+and+epidemiological+research.">Comparative performance of four methods for high-throughput glycosylation analysis of immunoglobulin G in genetic and epidemiological research.</a> Molecular Cellular Proteomics. 13, 1598 (2014).</li><li>Stockmann, H., Adamczyk, B., Hayes, J., Rudd, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated,+high-throughput+IgG-antibody+glycoprofiling+platform.">Automated, high-throughput IgG-antibody glycoprofiling platform.</a> Analytical Chemistry. 85, 8841 (2013).</li><li>Kristic, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycans+are+a+novel+biomarker+of+chronological+and+biological+ages.">Glycans are a novel biomarker of chronological and biological ages.</a> Journals of Gerontology. Series A, Biological Sciences Medical Sciences. 69, 779 (2014).</li><li>Nikolac, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+association+between+galactosylation+of+immunoglobulin+G+and+body+mass+index.">The association between galactosylation of immunoglobulin G and body mass index.</a> Progress in Neuropsychopharmacology Biological Psychiatry. 48, 20 (2014).</li><li>Liu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+changes+of+immunoglobulin+G+N-glycosylation+in+blood+lipids+and+dyslipidaemia.">The changes of immunoglobulin G N-glycosylation in blood lipids and dyslipidaemia.</a> Journal of Translational Medicine. 16, 235 (2018).</li><li>Lemmers, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IgG+glycan+patterns+are+associated+with+type+2+diabetes+in+independent+European+populations.">IgG glycan patterns are associated with type 2 diabetes in independent European populations.</a> Biochimica Biophysica Acta General Subjects. 1861, 2240 (2017).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Association+Between+Glycosylation+of+Immunoglobulin+G+and+Hypertension:+A+Multiple+Ethnic+Cross-Sectional+Study.">The Association Between Glycosylation of Immunoglobulin G and Hypertension: A Multiple Ethnic Cross-Sectional Study.</a> Medicine (Baltimore). 95, e3379 (2016).</li><li>Liu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemic+stroke+is+associated+with+the+pro-inflammatory+potential+of+N-glycosylated+immunoglobulin+G.">Ischemic stroke is associated with the pro-inflammatory potential of N-glycosylated immunoglobulin G.</a> Journal of Neuroinflammation. 15, 123 (2018).</li><li>Russell, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+N-glycosylation+of+immunoglobulin+G+as+a+novel+biomarker+of+Parkinson's+disease.">The N-glycosylation of immunoglobulin G as a novel biomarker of Parkinson's disease.</a> GLYCOBIOLOGY. 27, 501 (2017).</li><li>Bones, J., Mittermayr, S., O'Donoghue, N., Guttman, A., Rudd, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultra+performance+liquid+chromatographic+profiling+of+serum+N-glycans+for+fast+and+efficient+identification+of+cancer+associated+alterations+in+glycosylation.">Ultra performance liquid chromatographic profiling of serum N-glycans for fast and efficient identification of cancer associated alterations in glycosylation.</a> Analytical Chemistry. 82, 10208 (2010).</li><li>Pucic, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+throughput+isolation+and+glycosylation+analysis+of+IgG-variability+and+heritability+of+the+IgG+glycome+in+three+isolated+human+populations.">High throughput isolation and glycosylation analysis of IgG-variability and heritability of the IgG glycome in three isolated human populations.</a> Molecular Cellular Proteomics. 10, M111 (2011).</li><li>Berruex, L. G., Freitag, R., Tennikova, T. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+antibody+binding+to+immobilized+group+specific+affinity+ligands+in+high+performance+monolith+affinity+chromatography.">Comparison of antibody binding to immobilized group specific affinity ligands in high performance monolith affinity chromatography.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 24, 95 (2000).</li><li>Ren, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+IgG+galactosylation+as+a+promising+biomarker+for+cancer+screening+in+multiple+cancer+types.">Distribution of IgG galactosylation as a promising biomarker for cancer screening in multiple cancer types.</a> Cell Research. 26, 963 (2016).</li></ol>

UPLCは相対定量分析方法5、15として機能する。この結果は、UPLCが再現性と相対的な定量精度を備えた安定した検出技術であることを示しています。各ピークのグリカンの量は、UPLCを使用して総統合領域のパーセンテージとして表されます。相対定量は、試験サンプルの比較性を向上させます。さらに、96ウェルタンパク質Gプレートを使用して、一?...

ヒトタンパク質のN-グリコシル化は、一般的かつ必須の翻訳後修飾1であり、比較的正確に疾患の発生および発症を予測するのに役立ち得る。その構造の複雑さのために、5,000以上のグリカン構造があり、疾患の診断および予測バイオマーカーとして大きな可能性を提供することが期待される2.免疫グロブリンG(IgG)に結合したN−グリカンは、IgGの機能に必須であることが示されており、IgG N-グリコシル化は、プロおよび抗炎症系3との間のバランスに関与する。微分IgG N-グリコシル化は、疾患の発症および進行に関与し、疾患病理に関与する素因および機能機構の両方を表す。IgG N-グリコシル化の炎症役割は、老化、炎症性疾患、自己免疫疾患、および癌4に関連している。
検出技術の開発に伴い、 以下の方法は、高スループットグリコミクスで最も広く使用されています:蛍光性相互作用クロマトグラフィー(HILIC)超高性能液体クロマトグラフィー(UPLC-FLR)、レーザー誘導蛍光検出による多重キャピラリーゲル電気泳動 (xCGE-LIF)、マトリックスアシストレーザー脱離/イオン化時間質量分析(MALDI-TOF-MS)、液体クロマトグラフィーエレクトロスプレー質量分析法(LC-ESI-MS).これらの方法は、低フラックス、不安定な結果、および低感度特異性の以前の欠点を克服しています5,6.
UPLCは、IgG N-グリコシル化と特定の疾患(すなわち、老化7、肥満8、脂質異常症9、II型糖尿病10、高血圧11、虚血性脳卒中12、およびパーキンソン病13)との関連を探索するために広く使用されている。上記の他の3つの方法と比較して、UPLCは以下の利点を有する5、14である。まず、相対的な定量分析方法を提供し、総面積正規化を伴うデータ分析により、各サンプルの比較性が向上します。第二に、機器のコストと必要な専門知識は比較的低いため、グリコシル化バイオマーカーの実装と臨床応用への変換が容易になります。ここでは UPLC の概要を紹介します。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>2-aminobenzamide, 2-AB</td>
			<td>Sigma, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well collection plate</td>
			<td>AXYGEN</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well filter plate</td>
			<td>Pol</td>
			<td>0.45 um GHP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well monolithic plate</td>
			<td>BIA Separations</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well plate rotor</td>
			<td>Eppendorf Co., Ltd, Germany</td>
			<td>T_1087461900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetic acid</td>
			<td>Sigma, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Huihai Keyi Technology Co., Ltd, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium bicarbonate</td>
			<td>Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium formate</td>
			<td>Beijing Minruida Technology Co., Ltd.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Constant shaking incubator/rocker</td>
			<td>Zhicheng analytical instrument manufacturing co., Ltd, China</td>
			<td>ZWY-10313</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran Calibration Ladder/Glycopeptide column</td>
			<td>Watts technology Co., Ltd, China</td>
			<td>BEH column</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disodium phosphate</td>
			<td>Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric ovens</td>
			<td>Tester instruments Co., Ltd</td>
			<td>202-2AB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Empower 3.0</td>
			<td>Waters technology Co., Ltd, America</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Huihai Keyi Technology Co., Ltd, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic acid</td>
			<td>Sigma, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlycoProfile 2-AB Labeling kit</td>
			<td>Sigma, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HCl</td>
			<td>Junrui Biotechnology Co., Ltd, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-speed centrifuge</td>
			<td>Eppendorf Co., Ltd, Germany</td>
			<td>5430</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Igepal</td>
			<td>Sigma, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low temperature centrifuge</td>
			<td>Eppendorf Co., Ltd, Germany</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Low temperature refrigerator</td>
			<td>Qingdao Haier Co., Ltd</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manifold 96-well plate</td>
			<td>Watts technology Co., Ltd, China</td>
			<td>186001831</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Huihai Keyi Technology Co., Ltd, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Milli-Q pure water meter</td>
			<td>Millipore Co., Ltd, America</td>
			<td>Advantage A10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PH tester</td>
			<td>Sartorius Co., Ltd, Germany</td>
			<td>PB-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline, PBS</td>
			<td>Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette</td>
			<td>Eppendorf Co., Ltd, Germany</td>
			<td>4672100, 0.5-10&#956;l &#38; 10-100&#956;l &#38; 20-200&#956;l &#38; 1000&#956;l</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PNGase F enzyme</td>
			<td>Sigma, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium dihydrogen phosphate</td>
			<td>Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propan-2-ol</td>
			<td>Huihai Keyi Technology Co., Ltd, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>Sigma, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Shenggong Biological Engineering Co., Ltd, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium cyanoborohydride (NaBH3CN)</td>
			<td>Sigma, China</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrophotometer</td>
			<td>Shanghai Yuanxi instrument Co., Ltd</td>
			<td>B-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transfer liquid gun</td>
			<td>Smer Fell Science and Technology Co., Ltd, China</td>
			<td>4672100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris</td>
			<td>Amresco, America</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-low temperature refrigerator</td>
			<td>Thermo Co., Ltd, America</td>
			<td>MLT-1386-3-V; MDF-382E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-performance liquid chromatography</td>
			<td>Watts technology Co., Ltd, China</td>
			<td>Acquity MLtraPerformance LC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Pump</td>
			<td>Watts technology Co., Ltd, China</td>
			<td>725000604</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volatilizing machine/Dryer</td>
			<td>Eppendorf Co., Ltd, Germany</td>
			<td>T_1087461900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex</td>
			<td>Changzhou Enpei instrument Co., Ltd, China</td>
			<td>NP-30S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water-bath</td>
			<td>Tester instruments Co., Ltd</td>
			<td>DK-98-IIA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Weighing balance</td>
			<td>Shanghai Jingke Scientific Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>MP200B</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

immunoglobulin g n-glycan analysis by ultra-performance liquid chromatography

グリコミックスは、疾患感受性、創薬、精密医療のための次世代バイオマーカーの発見に大きな可能性を秘めた、オミックスシステム研究の新しいサブスペシャリティです。代替IgG N-グリカンは、いくつかの一般的な慢性疾患で報告されており、臨床応用に大きな可能性を有することが示唆されている(すなわち、疾患の診断および予測のためのバイオマーカー)。IgG N-グリカンは、親水性相互作用クロマトグラフィー(HILIC)超高性能液体クロマトグラフィー(UPLC)の方法を用いて広く特徴付けられている。UPLCは、再現性と高い相対定量精度を備えた安定した検出技術です。さらに、IgG N-グリカンの構造が明確に分離され、血漿中のグリカン組成と相対的な存在量が特徴です。

図1に示すように、IgG N-グリカンはピーク位置と保持時間に基づいて24個の初期IgGグリカンピーク(GP)に分析した。N-グリカン構造は、以前の研究(表1)15に従った質量分析検出を通じて利用可能である。結果が同等であることを確認するために、各ピークのグリカン量を総集積面積に対するパーセンテージ...

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Immunoglobulin G N-Glycan Analysis by Ultra-Performance Liquid Chromatography

免疫グロブリンG(IgG)N-グリカンは、親水性相互作用クロマトグラフィーUPLCを用いて特徴付けられている。 また、IgG N-グリカンの構造は明確に分離されている。ここでは、研究設定で広く使用できるように、この実験方法の紹介です。

超高性能液体クロマトグラフィーによる免疫グロブリンG N-グリカン分析

Glycomics is a new subspecialty in omics system research that offers significant potential in discovering next-generation biomarkers for disease ...

超高性能液体クロマトグラフィーは、その感度に起因するIgG n-glycanの正確な分析のための技術を確立し、グリカンの特定の情報を提供する能力を有するこの方法は使いやすく、異なる比較的低コストの増分、高い再現性異性体を有する。血漿中のタンパク質の測定は魅力的である可能性があります。薬で。また、グリコーゼ塩基および集団を含むそのような生物学的にIgGと関連する。不純な状態のことは、グリカンでIgGをテストするために使用されることを知っています。実際には、タンパク質のn-グリカンをテストすることができます。これは、2つの純粋な状態のクロスバウンドタンパク質で必要とされ、実験プロセスを標準化する必要がある一方で、OR実験プロセスは比較的簡単であるタンパク質に適用することができる。エンドツーエンドの実験プロセスは、操作に3日かかり、実験のスキルを習得するために、実験ステップを暗記する必要があります。サンプルを調製するために、凍結したプラズマサンプルを解凍する。その後、80回Gで遠心分離機を10分間行う。プロテインGモノリシックプレートを室温で30分間放置します。2ミリリットルの回収プレートの各ウェルに100マイクロメートルのサンプルを移します。1つのコントロールサンプルとして超純水を加えます。サンプルを1 X PBSで1~7体積比で希釈します。200マイクロリットルの超純水で0.45ミクロンの親水性ポリプロポレンフィルタープレートを洗浄します。クリーニングを 2 回繰り返します。希釈したサンプルをフィルタープレートに移し、266.6~399.9パスカルの真空ポンプを使用してサンプルを集合プレートにフィルターします。タンパク質Gモノリシックプレートを調製するために、まず保存バッファーを廃棄する。2ミリリットルの超純水、1 X PBS 2ミリリットル、0.17モルギ酸1ミリリットル、10 X PBS2ミリリットル、X PBS1個2ミリリットルを順次洗浄します。真空ポンプを使用して、次の液体を取り除きます。マルチチャネルパイプを使用して、フィルタされたサンプルをIgG結合および洗浄用のタンパク質Gモノリシックプレートに移します。次に、1つのX PBSを2ミリリットル加え、モノリシックプレートを洗浄します。真空ポンプを使用してPBSを取り出し、さらに2回洗浄を繰り返します。0.17モルギ酸の1ミリリットルでIgGをイルテし、真空ポンプでサンプルを回収プレートにフィルターします。次に、170マイクロリットルの重炭酸大モルアンモニウムを回収プレートに加えます。280ナノメートルの最適波長で吸収スペクトルメーターを使用してIgG濃度を検出します。抽出したIgGをオーブンに入れ、摂氏60度で3時間乾燥させます。原稿に記載されている濃度に従って観察される量を決定し、マイナス80°Cに保存します。乾燥したIgGを収集し、室温で1.33%SDS、4%IgePalと5%PBSを含む化学物質を保存します。250マイクロリットルの超純水で250単位の酵素を希釈して、インドグリコシダーゼF酵素を調製します。IgGを変性させるには、30マイクロリットルの1.33%SDSを加え、渦を混ぜて混ぜます。サンプルを65°Cのオーブンに10分間移します。その後、オーブンから取り出し、15分間冷まします。同じサンプルに4%のIgePalの10マイクロリットルを加え、5分間揺れるインキュベーターの上に置きます。20マイクロリットルのX PBSと0.1モル水酸化ナトリウムの30〜35マイクロリットルを加えてpHを8.0に調節し、渦を混ぜて混合します。4マイクロリットルのエンドグリコシダーゼF酵素を加え、渦を混ぜて混ぜます。その後、摂氏37度の水浴で18〜20時間インキュベートする。翌日、放出したギルカンを60°Cのオーブンに入れ、2時間半から3時間乾燥します。さらに測定するまで、リリースグリカンをマイナス80°Cで保存します。2つのアミノベンジミド標識試薬をDMSO24.5マイクロリットル、酢酸10.5マイクロリットル、0.7ミリグラムの2つのアミノベンジミド、および6ミリグラムのシアノボロ水素化ナトリウムで調製します。次に、暗室で、2つのアミノベンジミド標識試薬の35マイクロリットルを添加してグリカンにラベルを付ける。ラベル付きのglcansを発振器に5分間移し、摂氏65度で3時間オーブンに移します。その後、室温まで30分移します。IgG n-グリケースでは、不純状態の蛍光検出によって検出されるために標識します。200マイクロリットルの70%エタノール、200マイクロリットルの超純水、摂氏4度で96%のアセトニトリルの200マイクロリットルを用いて0.2ミクロンGHPフィルタープレートを退却。次に、真空ポンプを用いて廃棄物を除去する。グリカンに標識した2つのアミノベンジミドを精製するには、サンプルに100%アセトニトリルの700マイクロリットルを加え、5分間振盪インキュベーターに移します。摂氏4度で5分間Gの134倍の遠心分離機。スーパーナテントを0.2ミクロンのGHPフィルタープレートに2分間移し、真空を使用して濾液を取り除きます。200マイクロリットルの96%アセトニトリルを200マイクロリットルでグリカンとラベルした2つのアミノベンジミドを摂氏4度で洗浄し、真空ポンプを用いて濾液を5~6回除去する。100マイクロリットルの超純水でラベル付けされた2つのアミノベンジミドを3回イルタート。ラベル付けした2つのアミノベンジミドをオーブンに移し、摂氏60度で3時間半乾燥させます。さらに測定されるまで、ラベル付きn-グリカンをマイナス80°Cで保存します。まず、ソフトウェアを開いてモバイルフェーズを制御します。UPLCの器具を50%の溶媒Bと50%の溶媒Cで、毎分0.2ミリリットルの流量で30分間洗浄します。その後、25%の溶媒Aと75%の溶媒Bで毎分0.2ミリリットルの流量で20分間洗浄する。次に、毎分0.4ミリリットルの流量を加えます。標識したn-グリカンを100%アセトニトリルと超純水の混合物の25マイクロリットルを体積比で2~1体積で溶解します。その後、摂氏4度で5分間Gの134倍の遠心分離機を使用し、ドライパイプを使用して10マイクロリットルのスーパーナテントをUPLC機器に積み込みます。標識したn-グリカンを1分間0.4ミリリットルの流量で分離し、線形勾配は75%から62%のアセトニトリルで25分間分離します。次いで、摂氏60度のUPLC上でデクテラン較正ラダーグリコペプチドカラムによる分析実行を行う。X引用でn-グリカン蛍光を検出し、それぞれ330ナノメートルと420ナノメートルの発光波長を検出します。この図に示すように、IgG n-グリカンは、ピーク位置および保持時間に基づいて24の初期IgGグリカンピークに分析した。n-グリカン構造は質量分析法の検出によって24のタイプで利用できる。この方法の再現性と安定性をアセスするために、標準試料を6回並行して試験した。比較的小さな割合のグリカンピークは、変動係数の10%以上の高い測定誤差を示した。この部分では、特に末端を確立するために、IgG n-グリカン構造の確立に形成することが重要であり、その代わりに3.3で見つかったIgG n-グリケースは、IgGの重要性において重要である。からグリカンは異なることを知られています。グリカン原始トトミックの発展と, それは今日の診断の可能性として使用することができるようにこれに情報を探求するためにグリカンに組み合わ.この技術開発の後、新しい方法を提供し、

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Exosomal miRNA Analysis in Non-small Cell Lung Cancer (NSCLC) Patients' Plasma Through qPCR: A Feasible Liquid Biopsy Tool

Exosomal miRNA Analysis in Non-small Cell Lung Cancer NSCLC Patients' Plasma Through qPCR: A Feasible Liquid Biopsy Tool

定量PCRを通じて非小細胞肺癌（NSCLC）患者の血漿中のエキソソームのmiRNA解析：実行可能な液体生検ツール

The discovery of alterations in the EGFR and ALK genes, amongst others, in NSCLC has driven the development of targeted-drug therapy using selective ...

Spatial Quantification of Drugs in Pulmonary Tuberculosis Lesions by Laser Capture Microdissection Liquid Chromatography Mass Spectrometry (LCM-LC/MS)

Spatial Quantification of Drugs in Pulmonary Tuberculosis Lesions by Laser Capture Microdissection Liquid Chromatography Mass Spectrometry LCM-LC/MS

レーザーによる肺の結核病変における薬物の空間の定量化をキャプチャ レーザーマイクロダイ セクション液体クロマトグラフィー質量分析法 (LCM-LC/MS)

Tuberculosis is still a leading cause of morbidity and mortality worldwide. Improvements to existing drug regimens and the development of novel ...

Application of Biochip Microfluidic Technology to Detect Serum Allergen-specific Immunoglobulin E (sIgE)

Application of Biochip Microfluidic Technology to Detect Serum Allergen-specific Immunoglobulin E sIgE

バイオチップ マイクロ流体技術を応用した検出の血清中のアレルゲン特異免疫グロブリン E (sIgE)

Allergic disease is common in both adults and children. Identification of the causative allergens is significant in disease management and prevention. ...

Assessment of the Acute Inhalation Toxicity of Airborne Particles by Exposing Cultivated Human Lung Cells at the Air-Liquid Interface

空気-液体界面で培養したヒト肺細胞を曝露した空気中粒子の急性吸入毒性の評価

Here, we present a specially designed modular in vitro exposure system that enables the homogenous exposure of cultivated human lung cells at the ALI to ...

Quality-Controlled Sputum Analysis by Flow Cytometry

フローサイトメトリーによる品質管理痰解析

Sputum, widely used to study the cellular content and other microenvironmental features to understand the health of the lung, is traditionally analyzed ...