Name: murine surgical model of topical elastase induced descending thoracic aortic aneurysm
Uploaded: 2019-08-24T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Surgical Model of Topical Elastase Induced Descending Thoracic Aortic Aneurysm at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door AHA Scientist Development Grant 14SDG18730000 (M.S.), NIH K08 HL098560 (G.A.) en RO1 HL081629 (G.R.U.) subsidies. Dit project werd gesteund door de thoracic surgery Foundation for Research & Education (TSFRE) Research Grant (PI: G. Ailawadi). De inhoud is uitsluitend de verantwoordelijkheid van de auteurs en vertegenwoordigt niet noodzakelijkerwijs de standpunten van de NHLBI of de TSFRE. We bedanken Anthony Herring en Cindy Dodson voor hun kennis en technische expertise.

De dieren protocollen zijn goedgekeurd door de Universiteit van Virginia institutioneel Dierenzorg-en gebruiks Comité (nr. 3634).
1. inductie van anesthesie en intubatie
<ol><li>Plaats een 8-10-week oude mannelijke C57BL/6-muis in een gesloten kamer met een continue stroom van 5% Isofluraan en zuurstof mengsel gedurende 5 minuten, totdat de ademhaling zichtbaar wordt vertraagd. Opmerking: afhankelijk van het experimentele protocol kunnen verschillende stammen, geslachten en leeftijden va...

<ol>
	<li>Coady, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+the+appropriate+size+criterion+for+resection+of+thoracic+aortic+aneurysms.">What is the appropriate size criterion for resection of thoracic aortic aneurysms.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 113 (3), 489-491 (1997).</li><li>Aggarwal, S., Qamar, A., Sharma, V., Sharma, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abdominal+aortic+aneurysm:+A+comprehensive+review.">Abdominal aortic aneurysm: A comprehensive review.</a> Experimental and Clinical Cardiology. 16 (1), 11-15 (2011).</li><li>Bickerstaff, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thoracic+aortic+aneurysms:+a+population-based+study.">Thoracic aortic aneurysms: a population-based study.</a> Surgery. 92 (6), 1103-1108 (1982).</li><li>Cheng, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endovascular+aortic+repair+versus+open+surgical+repair+for+descending+thoracic+aortic+disease+a+systematic+review+and+meta-analysis+of+comparative+studies.">Endovascular aortic repair versus open surgical repair for descending thoracic aortic disease a systematic review and meta-analysis of comparative studies.</a> Journal of the American College of Cardiology. 55 (10), 986-1001 (2010).</li><li>Walsh, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endovascular+stenting+versus+open+surgery+for+thoracic+aortic+disease:+systematic+review+and+meta-analysis+of+perioperative+results.">Endovascular stenting versus open surgery for thoracic aortic disease: systematic review and meta-analysis of perioperative results.</a> Journal of Vascular Surgery. 47 (5), 1094-1098 (2008).</li><li>Absi, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+patterns+of+gene+expression+distinguishing+ascending+aortic+aneurysms+from+abdominal+aortic+aneurysms:+complementary+DNA+expression+profiling+in+the+molecular+characterization+of+aortic+disease.">Altered patterns of gene expression distinguishing ascending aortic aneurysms from abdominal aortic aneurysms: complementary DNA expression profiling in the molecular characterization of aortic disease.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 126 (2), 344-357 (2003).</li><li>Ailawadi, G., Eliason, J. L., Upchurch, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+concepts+in+the+pathogenesis+of+abdominal+aortic+aneurysm.">Current concepts in the pathogenesis of abdominal aortic aneurysm.</a> Journal of Vascular Surgery. 38 (3), 584-588 (2003).</li><li>Ikonomidis, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+thoracic+aortic+aneurysms.">A murine model of thoracic aortic aneurysms.</a> Journal of Surgical Research. 115 (1), 157-163 (2003).</li><li>Daugherty, A., Manning, M. W., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+promotes+atherosclerotic+lesions+and+aneurysms+in+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Angiotensin II promotes atherosclerotic lesions and aneurysms in apolipoprotein E-deficient mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 105 (11), 1605-1612 (2000).</li><li>Trachet, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ascending+Aortic+Aneurysm+in+Angiotensin+II-Infused+Mice:+Formation,+Progression,+and+the+Role+of+Focal+Dissections.">Ascending Aortic Aneurysm in Angiotensin II-Infused Mice: Formation, Progression, and the Role of Focal Dissections.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 36 (4), 673-681 (2016).</li><li>Johnston, W. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+interleukin-1beta+decreases+aneurysm+formation+and+progression+in+a+novel+model+of+thoracic+aortic+aneurysms.">Inhibition of interleukin-1beta decreases aneurysm formation and progression in a novel model of thoracic aortic aneurysms.</a> Circulation. 130 (11), 51-59 (2014).</li><li>Pope, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6+Receptor+Inhibition+Prevents+Descending+Thoracic+Aortic+Aneurysm+Formation.">Interleukin-6 Receptor Inhibition Prevents Descending Thoracic Aortic Aneurysm Formation.</a> Annals of Thoracic Surgery. 100 (5), 1620-1626 (2015).</li><li>Vandivort, T. C., An, D., Parks, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Improved+Method+for+Rapid+Intubation+of+the+Trachea+in+Mice.">An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (108), e53771 (2016).</li><li>Ailawadi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+nonintrinsic+regional+basis+for+increased+infrarenal+aortic+MMP-9+expression+and+activity.">A nonintrinsic regional basis for increased infrarenal aortic MMP-9 expression and activity.</a> Journal of Vascular Surgery. 37 (5), 1059-1066 (2003).</li><li>Ruddy, J. M., Jones, J. A., Spinale, F. G., Ikonomidis, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+heterogeneity+within+the+aorta:+relevance+to+aneurysm+disease.">Regional heterogeneity within the aorta: relevance to aneurysm disease.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 136 (5), 1123-1130 (2008).</li><li>Trigueros-Motos, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryological-origin-dependent+differences+in+homeobox+expression+in+adult+aorta:+role+in+regional+phenotypic+variability+and+regulation+of+NF-kappaB+activity.">Embryological-origin-dependent differences in homeobox expression in adult aorta: role in regional phenotypic variability and regulation of NF-kappaB activity.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 33 (6), 1248-1256 (2013).</li><li>Lu, G. S. G., Davis, J. P., Schaheen, B., Downs, E., Roy, R. J., Ailawadi, G., Upchurch, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+chronic+advanced+staged+abdominal+aortic+aneurysm+murine+model.">A novel chronic advanced staged abdominal aortic aneurysm murine model.</a> Journal of Vascular Surgery. 66 (1), 232-242 (2017).</li></ol>

De thoracale en abdominale aorta zijn cellullair en embryologisch verschillend, wat relevant is voor aneurysmaal ziekte14,15,16. Daarom is een specifiek diermodel nodig om TAA te bestuderen. Hoewel andere Murine dTAA modellen zijn gepubliceerd8, onze is het enige model om dalende thoracale aorta dilatatie die kan worden beschouwd als echt aneurysmatische (meer dan 50% verwijding). Bovendien, ons model is ...

Het doel van deze methode is het bestuderen van de ontwikkeling, pathofysiologie, en structurele veranderingen in de Murine dalende thoracale aorta tijdens aorta aneurysma vorming. Ons model biedt een reproduceerbare en consistente methode om thoracische aorta aneurysma (dTAA) in muizen te induceren, waardoor het testen van verschillende genetische en farmacologische remmers mogelijk is. Dit werk kan helpen bij het identificeren van geneesmiddelen en gentherapieën die kunnen worden vertaald naar een levensvatbare behandelingsstrategie voor mensen met dTAA-ziekte.
dtaas vorm wanneer de wand van de thoracale aorta wordt verzwakt en verwijde na verloop van tijd tot het bereiken van een kritische diameter wanneer scheuren of ruptuur kan dan optreden. Klinisch kan dTAA in stilte vooruitgang boeken, in omvang toenemen totdat de structuur van de aorta wand zo vervormd is dat het uiteindelijk faalt, met catastrofale gevolgen. De symptomen ontwikkelen zich meestal alleen wanneer het aneurysma een gevaarlijke omvang heeft bereikt (100-150% verwijding) en een hoog risico op dissectie of ruptuur1,2. dtaa ruptuur is bijna universeel dodelijk3, en electieve chirurgische reparatie draagt significante morbiditeit4,5. Bovendien, de meeste patiënten dragen de diagnose van een aorta aneurysma voor ongeveer 5 jaar voor chirurgische reparatie6,7. Dit venster geeft een geschikt moment om niet-chirurgisch in te grijpen. Dus, medische therapieën voor de behandeling of trage progressie van dTAA zijn nodig en zou een aanzienlijke vooruitgang op het gebied van aneurysma onderzoek vertegenwoordigen. Er zijn momenteel geen medische behandelingen voor dTAA beschikbaar, vooral vanwege een onvolledig begrip van dTAA-pathogenese.
In de afgelopen 20 jaar zijn verschillende dTAA diermodellen ontwikkeld, maar elk van deze modellen waren verschillend van onze eigen en niet produceren robuuste aneurysma. Het meest vergelijkbare Murine dTAA-model is ontwikkeld door Ikonomidis et al.8, met directe toepassing van CACL2 op de adventitia van de aorta. Hoewel ons model is aangepast aan veel van de technieken die door Ikonomidis zijn uiteengezet, is ons model op drie verschillende manieren uniek. Ten eerste, in ons model de aorta wordt blootgesteld aan actuele elastase voor 3-5 minuten, in vergelijking met 15 minuten van CaCl2 blootstelling. Ten tweede, aorta dilatatie treedt op in 2 weken, in vergelijking met 16 weken in de CaCl2 model. Ten slotte produceert ons model consequent aneurysmata van ongeveer 100% dilatatie, in vergelijking met de aorta dilataties van 20-30% geproduceerd door CaCl2 -toepassing (die niet echt als aneurysmata kan worden beschouwd omdat ze worden gedefinieerd als een toename in aorta diameter > 50%). Er zijn andere niet-chirurgische Murine modellen van aneurysma vorming, zoals de APO E knock-out muis, die robuuste aneurysmata vormen met infusie van angiotensine II. Echter, deze muizen ontwikkelen supra-nier of stijgende thoracale aorta aneurysma in plaats van aneurysma specifiek in de dalende thoracale aorta9,10.
Het rationele voor dit protocol is om een eenvoudige, goedkope en tijd geschikte manier te hebben om dTAA in een muriene model te bestuderen. Het muismodel biedt een unieke kans om veel genetische en celspecifieke Knockouts te gebruiken die zijn gevonden om impactvol te zijn in andere vasculaire ziekten. Het gebruik van onze specifieke taa model is goed ontvangen en experimenten met behulp van het zijn gepubliceerd in hoge impact tijdschriften11,12. Op dit punt, het model is gebruikt voor het onderzoeken van mogelijke genetische en farmacologische behandelingen die een significant effect in de abdominale aorta aneurysma (AAA) Murine modellen had; echter, als ons lab heeft uitgebreid gebruik van de dTAA model, we zijn het vinden van doelen die uniek zijn voor dTAA formatie die kan worden gebruikt als gerichte therapieën bij de mens.
Dit model is het meest geschikt voor laboratoria die Murine micro-chirurgische capaciteiten hebben. Hoewel het technisch uitdagend, het kan worden uitgevoerd consequent zelfs door onderzoekers zonder voorafgaande chirurgische ervaring. Voor een onderzoeker zonder muriene chirurgische ervaring kan het model worden beheerst in ongeveer 20 operatieve sessies (of ongeveer 50 muizen). Voor de onderzoeker met voorafgaande chirurgische ervaring, het model kan worden beheerst in 5 operatieve sessies (ongeveer 20 muizen). We geloven met een video van hoge kwaliteit, de tijd tot meesterschap kan verder worden gereduceerd. Nadat de vaardigheid is bereikt, kan de procedure worden voltooid in 35 minuten voor de operatie, en 20 minuten voor de Terminal oogst. De chirurgen in ons laboratorium kunnen 10-12 volledige operaties per dag voltooien, met een operatieve sterfte graad van 5-10%. De meest voorkomende oorzaak van sterfte is long letsel bij binnenkomst op de borst, verdoving toxiciteit, of scheur van de aorta tijdens dissectie. Naast dTAA-onderzoek dient dit model ook als een leidraad voor veilige en gemakkelijke toegang tot de thoracale aorta en Lung Hilum voor onderzoekers die andere interventies in de borstkas bestuderen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:761px;" width="760">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Angiocatheter (22G)</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:167px;">Used for ET Tube</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Dumont Tweezers; Pattern #7 x2</td>
			<td style="width:191px;">Roboz</td>
			<td style="width:161px;">RS-4982</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Graefe Tissue Forceps</td>
			<td style="width:191px;">Roboz</td>
			<td style="width:161px;">RS-5158</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Harms Forceps x2</td>
			<td style="width:191px;">Roboz</td>
			<td style="width:161px;">RS-5097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Intracardiac Needle Holder; Extra Delicate; Carbide Jaws; 7&#34; Length</td>
			<td style="width:191px;">Roboz</td>
			<td style="width:161px;">RS-7800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;KL 1500 LED Light Source</td>
			<td style="width:191px;">Leica</td>
			<td style="width:161px;">150-400</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;M205A Dissction Microscope</td>
			<td style="width:191px;">Leica</td>
			<td style="width:161px;">CH 94-35</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Iris Scissors, 11cm, Tungsten Carbide</td>
			<td style="width:191px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:161px;">500216-G</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Metal Clip board</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:167px;">Use with the Mouse Retractor Set&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Mouse Retractor Set</td>
			<td style="width:191px;">Kent</td>
			<td style="width:161px;">SURGI-5001</td>
			<td style="width:167px;">Need 2 short and 1 tall fixators</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:243px;">Mouse Ventilator MiniVent Type 845, 115 V, Power Supply with US Connector</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:161px;">73-0043</td>
			<td style="width:167px;">MiniVent Ventilator for Mice (Model 845), Single Animal, Volume Controlled</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:191px;">Elastase from porcine pancreas</td>
			<td style="width:161px;">E0258-50MG</td>
			<td style="width:167px;">Can be purchased in various size bottles</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:243px;">Small Vessel Cauterizer Kit</td>
			<td style="width:191px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:161px;">18000-00</td>
			<td style="width:167px;">Recommend using rechargable AA batteries</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Spring Scissors, 10.5cm</td>
			<td style="width:191px;">World Precision Instruments</td>
			<td align="right" style="width:161px;">14127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Steril Swabs (Sponges)</td>
			<td style="width:191px;">Sugi</td>
			<td align="right" style="width:161px;">31603</td>
			<td style="width:167px;">Can be cut to size</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Surgi Suite Surgical Platform</td>
			<td style="width:191px;">Kent</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:167px;">Attach to clip board&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Tech IV Isoflurane Vap</td>
			<td style="width:191px;">Jorgensen&#160;Laboratories&#160;</td>
			<td style="width:161px;">J0561A</td>
			<td style="width:167px;">Anesthesia vaporizer&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine surgical model of topical elastase induced descending thoracic aortic aneurysm

Volgens het centrum voor ziektecontrole, aorta aneurysma (AAs) werden beschouwd als een leidende doodsoorzaak in alle rassen en beide geslachten van 1999-2016. Een aneurysma vormt een gevolg van progressieve verzwakking en uiteindelijke verwijding van de aorta, die kan scheuren of scheuren zodra het een kritische diameter bereikt. Aneurysmata van de afdalende aorta in de borst, genaamd dalende thoracale aorta aneurysmata (dtaa), vormen een groot deel van de aneurysma gevallen in de Verenigde Staten. Onopgenomen dTAA ruptuur is bijna universeel dodelijk, en electieve reparatie heeft een hoge mate van morbiditeit en sterfte. Het doel van ons model is om dTAA specifiek te bestuderen, om de pathofysiologie van dTAA te verhelseren en om moleculaire doelen te zoeken om de groei te stoppen of de grootte van dTAA te verkleinen. Door een Murine model te hebben om thoracische pathologie nauwkeurig te bestuderen, kunnen gerichte therapieën worden ontwikkeld om specifiek dTAA te testen. De methode is gebaseerd op de plaatsing van de varkens alvleesklier elastase (PPE) direct op de buitenste muriene aorta wand na chirurgische blootstelling. Dit creëert een destructieve en inflammatoire reactie, die de aorta wand verzwakt en zorgt voor aneurysma vorming gedurende weken tot maanden. Hoewel Murine-modellen beperkingen hebben, produceert ons dTAA-model robuuste aneurysmata van voorspelbare grootte. Bovendien kan dit model worden gebruikt om genetische en farmaceutische doelstellingen te testen die de groei van dTAA kunnen arresteren of ruptuur voorkomen. Bij menselijke patiënten zouden interventies zoals deze kunnen helpen voorkomen dat aneurysmaruptuur, en moeilijke chirurgische interventie.

De toepassing van ons protocol resulteert in robuuste dTAA bij muizen in vergelijking met zout regelaars. De ontwikkelde TAAs zijn fusiform in vorm en komen alleen voor in het behandelde deel van de aorta (Figuur 1 en Figuur 2)11. Figuur 2 toont een voorbeeld van een video micrometrie meting bij weefsel oogst. Met behulp van vergelijking 1, de aorta-verwijding is 130% in dit voorbeeld.
<p class="jove_cont...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Surgical Model of Topical Elastase Induced Descending Thoracic Aortic Aneurysm at JoVE.com

Murine Surgical Model of Topical Elastase Induced Descending Thoracic Aortic Aneurysm

We beschrijven een chirurgisch protocol voor het consequent induceren van robuuste aflopend thoracische aorta aneurysma bij muizen. De procedure omvat linker Thoracotomie, thoracische aorta blootstelling, en plaatsing van een spons gedrenkt in varkens alvleesklier elastase op de aorta wand.

Murine chirurgische model van actuele elastase geïnduceerde dalende thoracale aorta aneurysma

According to the Center for Disease Control, aortic aneurysms (AAs) were considered a leading cause of death in all races and both sexes from 1999-2016. ...

Dit protocol is in staat om robuuste thoracale aorta-aneurysma's van consistente grootte en locatie bij muizen te produceren en dient als een gids voor veilige toegang tot de murineborst. Dit protocol is een eenvoudige, consistente methode voor het produceren van thoracale aorta-aneurysma's bij muizen gedurende een redelijke hoeveelheid tijd in vergelijking met andere modellen. Na het bevestigen van een passend niveau van sedatie in een acht tot 10 weken oude mannelijke c57 zwarte zes muis, plaats de muis in de juiste laterale decubitus positie en tape de rechterarm rostrally zodat de voorpoot is in lijn met de neus.Trek de staart caudally om een lijn van spanning tussen de rechter arm en staart te creëren, het produceren van uitbreiding van de wervelkolom, en tape het linkerbeen in zijn natuurlijke positie. Dan, tape de linker arm ventrally over rolde gaas. Gebruik voor het begin van de procedure tondeuses om de linkerflank van de linkerschouder naar de linkerbuik te scheren.Gebruik een applicator met katoenkantine om de eerste betadyne-oplossing te borstelen, vervolgens 70% ethanol over de chirurgische site. Wanneer de huid droog is, plaats een steriele gordijn over het dier. Maak een twee centimeter durende laterale incisie in het midden van de hemothorax en gebruik hand-held elektrocautery om de spierlagen te verdelen totdat de ribben zichtbaar zijn.Onder 10 tot 15x vergroting, direct cauterize een twee-millimeter gedeelte tussen de ribben en gebruik een zoutoplossing bevochtigde, fijne katoen-tip applicator in de rib ruimte om te ontleden in de pleura ruimte door de cauterized gedeelte. Plaats een zoutoplossing bevochtigd, drie bij twee millimeter spons in de thorax om te helpen instorten van de long. Gebruik vervolgens een schaar om de thoracotomie te verbreden totdat het middenrif ventrally zichtbaar is en de incisie enkele millimeters verwijderd is van de paraspinusspieren dorsaal.Om de aorta bloot te leggen, plaatst u rib retractors in de thoracotomie incisie en verwijder de spons voorzichtig van het oppervlak van de long. Bedek de long met een zoutoplossing bevochtigt, zes bij vier millimeter spons met de uiteinden die rostrally en caudally wijzen en plaats een breed, platte longoprolmechanisme op de spons. Schuif vervolgens voorzichtig het oprolmechanisme ventrally totdat de dalende thoracale aorta wordt blootgesteld en gebruik nummer zeven tangen om een ongeveer vijf millimeter sectie van bindweefsel en vet uit de aorta te ontleden.Gebruik eerst een micropipet om een spons van 0,5 bij één millimeter met 12 microliters varkensvleespliere te verzadigen en plaats de spons op het blootgestelde oppervlak van de aorta. Gebruik na drie tot vijf minuten nummer zeven tangen om de elastasespons te verwijderen en het oprolmechanisme van de longen te verwijderen. Irrigeer de borstholte met ongeveer de helft van een milliliter steriele zoutoplossing.Verwijder de longspons en gebruik een gerold stuk gaas van twee bij twee inch om de resterende zoutoplossingsirrigatie op te nemen. Verwijder de rib oprolmechanismen en zet de ribben af met drie onderbroken zes-oh niet-absorbeerbare hechtingen, waarbij een losse knoop in elke hechting wordt gebonden zonder de hechtingen vast te binden. Na het opnieuw opblazen van de long, bind de hechtingen en reapproximate de spierlagen met een lopende vijf-oh absorbeerbare gevlochten hechting.Sluit de huid met zeven tot 10 onderbroken vijf-oh niet-absorbeerbare hechtingen. Controleer vervolgens het dier tot volledige recumbency. Gebruik op het juiste experimentele eindpunt een schaar om de huid mediaal van de linkerflank naar de centrale buik te insnijden, waarbij u ervoor zorgt dat het buikvlies niet wordt ingeperkd.Snij de huid van de rug linkerflank rostrally naar de linker schouder en maak een incisie in een hoek van 90 graden door de oksel naar het borstbeen. Met behulp van cautery, ontleden de huid flap in de richting van de ventrale aspect van de muis om de linker hemothorax bloot te stellen en gebruik schaar om de buik langs de linker costal marge van de ventrale naar dorsale richting aan de onderkant van het linkerdiafragma bloot te leggen. Als de lateraal-meeste rand van het diafragma niet opent, incise het diafragma bij zijn meest zijrand.Het plaatsen van de punt van de cautery in dit gat, cauterize het middenrif van de costal marge aan de xiphoid proces en gebruik een vochtige, fijn-getipt katoen-tip applicator om de long voorzichtig te bevrijden van eventuele verklevingen aan de borstwand. Terwijl ervoor te zorgen dat de long is uit de weg, gebruik elektrocautery te snijden door de ribben en borstwand van de costal marge aan de eerste rib, dorsale naar de mid-oksellijn, maar ten minste twee millimeter van de aorta. Snijd langs de superieure marge van de eerste rib en reflecteer de ribbenkast ventrally om de hemothorax bloot te leggen.Plaats oprolmechanismen op de long en trek medially. Plaats een oprolmechanisme of zout-bevochtigd gaasje op het middenrif en teken caudally om zo veel van de aorta mogelijk bloot te leggen. Gebruik een droge, katoen-tip applicator om eventuele verklevingen te verwijderen uit de aorta-aneurysma en een onaangetast distale segment en gebruik video micrometrie om de diameter van de onaangetaste controle segment en het breedste deel van de elastase behandeld aneurysma te meten.Om de aorta te oogsten, pak het vat met harms tangen net distaal aan het behandelde segment en gebruik schaar om distale snijden aan de tangen. Ontleden de aorta af van de wervelkolom en snijd het vat proximaal naar het behandelde segment om het aneurysmaweefsel te verwijderen. Vervolgens, met behulp van een tuberculine spuit en naald, was de aorta lumen met zoutoplossing en het proces van het monster volgens de geplande downstream experimentele analyse.De ontwikkelde thoracale aneurysma's als fusiform in vorm en komen alleen voor in het behandelde gedeelte op de aorta. In deze representatieve videomicrometriemeting werd vastgesteld dat de aortadilatatie 130% was bij weefseloogst. Inderdaad, terwijl type elastase behandelde muizen vertonen een aanzienlijke toename van aorta dilatatie op dagen drie, zeven, 14, en 21 na de behandeling met de maximale dilatatie waargenomen op dag 14 in vergelijking met controle wilde type muizen.Histologische analyse blijkt dat wilde type aneurysma's hebben elastine vezels die dun en gefragmenteerd. Er is ook minder gladde spiercel kleuring met een toename van macrofaag en interlukin one-beta expressie. De murine long is uiterst delicaat, en letsel is meestal fataal.Zorg met de uiterste zorg met de eerste binnenkomst in de borst en manipuleer alleen de long met zoute bevochtigde sponzen. Dit model heeft geholpen om de rol van interlukin one-beta en interlukin zes in de pathogenese van dalende thoracale aorta-aneurysma's te verduidelijken en hoe hun blokkade niet-chirurgische behandeling van deze aneurysma's zou kunnen vergemakkelijken.

Research

JoVE Journal

Medicine

A New Murine Model of Endovascular Aortic Aneurysm Repair

Een nieuw muizenmodel van endovasculaire aortaaneurismareparatie

Endovascular aneurysm exclusion is a validated technique to prevent aneurysm rupture. Long-term results highlight technique limitations and new aspects of ...

Reproducable Paraplegia by Thoracic Aortic Occlusion in a Murine Model of Spinal Cord Ischemia-reperfusion

Reproduceerbaar Paraplegie door thoracale aorta-occlusie in een muizenmodel van Spinal Cord ischemie-reperfusie

Background
Lower extremity paralysis continues to complicate aortic interventions. The lack of understanding of the underlying pathology has hindered ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Een muizenmodel van myocard ischemie-reperfusie schade door de eileiders van de LAD

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Surgical Models of Gastroesophageal Reflux with Mice

Chirurgische Modellen van Gastro-oesofageale met Muizen

Multiple surgical procedures have been reported to induce gastroesophageal reflux in animals. Herein, we report three surgical models with mice aiming to ...

Murine Left Anterior Descending (LAD) Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Murine Left Anterior Descending LAD Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Murine Left Anterior Descending (LAD) coronaire Ligatie: een verbeterde en vereenvoudigd model voor myocardinfarct

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by ...

Creation of a Rodent Model of Abdominal Aortic Aneurysm by Blocking Adventitial Vasa Vasorum Perfusion

Oprichting van een knaagdier Model van abdominale aorta aneurysma door het blokkeren van Adventitial Vasa Vasorum perfusie

The adventitial vasa vasorum (VV) provides oxygen and nourishment to the aortic wall. Hypoxia in the aortic wall can cause enlarged abdominal aortic ...

Standardized Technique of Aortic Valve Re-implantation for Valve-sparing Aortic Root Replacement

Gestandaardiseerde techniek aortaklep opnieuw innesteling voor ventiel-sparend aorta Root vervanging

Despite the obvious advantages of the preservation of a normal aortic valve during aortic root replacement, the complexity of valve sparing procedures ...

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Kwantitatieve analyse van de Micro-CT van Aortopathy in een muismodel van β-aminopropionitrile-geïnduceerde aorta aneurysma en dissectie

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...

Ultrasound Imaging of the Thoracic and Abdominal Aorta in Mice to Determine Aneurysm Dimensions

Echografie beeldvorming van de borst- en buikholte Aorta bij muizen om te bepalen van de afmetingen van het aneurysma

Contemporary high-resolution ultrasound instruments have sufficient resolution to facilitate the measurement of mouse aortas. These instruments have been ...

Murine Myocardial Infarction Model using Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery

Murine myocardinfarct model met behulp van permanente Ligatie van linker anterieure aflopende coronaire slagader

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine ...