Name: murine surgical model of topical elastase induced descending thoracic aortic aneurysm
Uploaded: 2019-08-24T15:00:00
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Ces travaux ont été appuyés par la subvention de développement scientifique 14SDG18730000 (M.S.), les subventions NIH K08 HL098560 (G.A.) et RO1 HL081629 (G.R.U.). Ce projet a été soutenu par la Subvention de recherche de la Fondation de chirurgie thoracique pour la recherche et l'éducation (TSFRE) (PI : G. Ailawadi). Le contenu est uniquement de la responsabilité des auteurs et ne représente pas nécessairement les points de vue de l'NHLBI ou du TSFRE. Nous remercions Anthony Herring et Cindy Dodson pour leurs connaissances et leur expertise technique.

Les protocoles sur les animaux ont été approuvés par le Comité institutionnel de soins et d'utilisation des animaux de l'Université de Virginie (no 3634).
1. Induction de l'anesthésie et de l'intubation
<ol><li>Placez une souris C57BL/6 mâle de 8-10 semaines dans une chambre fermée avec un flux continu de 5% d'isoflurane et de mélange d'oxygène pendant 5 min, jusqu'à ce que les respirations soient visiblement ralenties. REMARQUE : Différentes souches, sexes et âges de souris ...

<ol>
	<li>Coady, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+the+appropriate+size+criterion+for+resection+of+thoracic+aortic+aneurysms.">What is the appropriate size criterion for resection of thoracic aortic aneurysms.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 113 (3), 489-491 (1997).</li><li>Aggarwal, S., Qamar, A., Sharma, V., Sharma, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abdominal+aortic+aneurysm:+A+comprehensive+review.">Abdominal aortic aneurysm: A comprehensive review.</a> Experimental and Clinical Cardiology. 16 (1), 11-15 (2011).</li><li>Bickerstaff, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thoracic+aortic+aneurysms:+a+population-based+study.">Thoracic aortic aneurysms: a population-based study.</a> Surgery. 92 (6), 1103-1108 (1982).</li><li>Cheng, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endovascular+aortic+repair+versus+open+surgical+repair+for+descending+thoracic+aortic+disease+a+systematic+review+and+meta-analysis+of+comparative+studies.">Endovascular aortic repair versus open surgical repair for descending thoracic aortic disease a systematic review and meta-analysis of comparative studies.</a> Journal of the American College of Cardiology. 55 (10), 986-1001 (2010).</li><li>Walsh, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endovascular+stenting+versus+open+surgery+for+thoracic+aortic+disease:+systematic+review+and+meta-analysis+of+perioperative+results.">Endovascular stenting versus open surgery for thoracic aortic disease: systematic review and meta-analysis of perioperative results.</a> Journal of Vascular Surgery. 47 (5), 1094-1098 (2008).</li><li>Absi, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+patterns+of+gene+expression+distinguishing+ascending+aortic+aneurysms+from+abdominal+aortic+aneurysms:+complementary+DNA+expression+profiling+in+the+molecular+characterization+of+aortic+disease.">Altered patterns of gene expression distinguishing ascending aortic aneurysms from abdominal aortic aneurysms: complementary DNA expression profiling in the molecular characterization of aortic disease.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 126 (2), 344-357 (2003).</li><li>Ailawadi, G., Eliason, J. L., Upchurch, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+concepts+in+the+pathogenesis+of+abdominal+aortic+aneurysm.">Current concepts in the pathogenesis of abdominal aortic aneurysm.</a> Journal of Vascular Surgery. 38 (3), 584-588 (2003).</li><li>Ikonomidis, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+thoracic+aortic+aneurysms.">A murine model of thoracic aortic aneurysms.</a> Journal of Surgical Research. 115 (1), 157-163 (2003).</li><li>Daugherty, A., Manning, M. W., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+promotes+atherosclerotic+lesions+and+aneurysms+in+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Angiotensin II promotes atherosclerotic lesions and aneurysms in apolipoprotein E-deficient mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 105 (11), 1605-1612 (2000).</li><li>Trachet, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ascending+Aortic+Aneurysm+in+Angiotensin+II-Infused+Mice:+Formation,+Progression,+and+the+Role+of+Focal+Dissections.">Ascending Aortic Aneurysm in Angiotensin II-Infused Mice: Formation, Progression, and the Role of Focal Dissections.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 36 (4), 673-681 (2016).</li><li>Johnston, W. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+interleukin-1beta+decreases+aneurysm+formation+and+progression+in+a+novel+model+of+thoracic+aortic+aneurysms.">Inhibition of interleukin-1beta decreases aneurysm formation and progression in a novel model of thoracic aortic aneurysms.</a> Circulation. 130 (11), 51-59 (2014).</li><li>Pope, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6+Receptor+Inhibition+Prevents+Descending+Thoracic+Aortic+Aneurysm+Formation.">Interleukin-6 Receptor Inhibition Prevents Descending Thoracic Aortic Aneurysm Formation.</a> Annals of Thoracic Surgery. 100 (5), 1620-1626 (2015).</li><li>Vandivort, T. C., An, D., Parks, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Improved+Method+for+Rapid+Intubation+of+the+Trachea+in+Mice.">An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (108), e53771 (2016).</li><li>Ailawadi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+nonintrinsic+regional+basis+for+increased+infrarenal+aortic+MMP-9+expression+and+activity.">A nonintrinsic regional basis for increased infrarenal aortic MMP-9 expression and activity.</a> Journal of Vascular Surgery. 37 (5), 1059-1066 (2003).</li><li>Ruddy, J. M., Jones, J. A., Spinale, F. G., Ikonomidis, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+heterogeneity+within+the+aorta:+relevance+to+aneurysm+disease.">Regional heterogeneity within the aorta: relevance to aneurysm disease.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 136 (5), 1123-1130 (2008).</li><li>Trigueros-Motos, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryological-origin-dependent+differences+in+homeobox+expression+in+adult+aorta:+role+in+regional+phenotypic+variability+and+regulation+of+NF-kappaB+activity.">Embryological-origin-dependent differences in homeobox expression in adult aorta: role in regional phenotypic variability and regulation of NF-kappaB activity.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 33 (6), 1248-1256 (2013).</li><li>Lu, G. S. G., Davis, J. P., Schaheen, B., Downs, E., Roy, R. J., Ailawadi, G., Upchurch, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+chronic+advanced+staged+abdominal+aortic+aneurysm+murine+model.">A novel chronic advanced staged abdominal aortic aneurysm murine model.</a> Journal of Vascular Surgery. 66 (1), 232-242 (2017).</li></ol>

L'aorte thoracique et abdominale sont cellulairement et embryologiquement distinctes, ce qui est pertinent pour la maladie anévrismale14,15,16. Par conséquent, un modèle animal spécifique pour étudier tAA est nécessaire. Bien que d'autres modèles dTAA murine ont été publiés8, le nôtre est le seul modèle à créer la dilatation aortique thoracique descendante qui peut être considéré comme vr...

Le but de cette méthode est d'étudier le développement, la pathophysiologie, et les changements structurels dans l'aorte thoracique descendante murine pendant la formation aortique d'anévrisme. Notre modèle offre une méthode reproductible et cohérente pour induire des anévrismes aortiques thoraciques (dTAA) chez la souris permettant ainsi l'essai de divers inhibiteurs génétiques et pharmacologiques. Ces travaux peuvent aider à identifier les médicaments et les thérapies géniques qui pourraient se traduire par une stratégie de traitement viable pour les humains atteints de la maladie d'ATD.
dTAAs se forment lorsque la paroi de l'aorte thoracique s'affaiblit et se dilate au fil du temps jusqu'à atteindre un diamètre critique lors de la déchirure ou la rupture peut alors se produire. Cliniquement, dTAA peut progresser en silence, augmentant en taille jusqu'à ce que la structure de la paroi aortique soit si déformée qu'elle échoue finalement, avec des conséquences catastrophiques. En ce qui concerne, les symptômes ne se développent généralement que lorsque l'anévrisme a atteint une taille périlleuse (100-150% de dilatation) et est à haut risque de dissection ou de rupture1,2. la rupture de dTAAest presque universellement mortelle 3, et la réparation chirurgicale élective porte la morbidité significative4,5. En outre, la plupart des patients portent le diagnostic d'un anévrisme aortique pendant approximativement 5 ans avant la réparation chirurgicale6,7. Cette fenêtre représente un moment opportun pour intervenir non-chirurgicalement. Ainsi, des thérapies médicales pour traiter ou ralentir la progression de dTAA sont nécessaires et représenteraient un avancement significatif au domaine de la recherche d'aneurysm. Il n'existe actuellement aucun traitement médical pour le dTAA disponible, principalement en raison d'une compréhension incomplète de la pathogénie dTAA.
Au cours des 20 dernières années, plusieurs modèles animaux d'ATD ont été développés, mais chacun de ces modèles était distinct des nôtres et ne produisait pas d'anévrismes robustes. Un modèle dTAA murine le plus semblable au nôtre a été développé par Ikonomidis et autres8, qui inclut l'application directe de CaCl2 à l'aventitia de l'aorte. Bien que notre modèle ait été adapté à partir de nombreuses techniques énoncées par Ikonomidis, notre modèle est unique à trois égards distincts. Tout d'abord, dans notre modèle, l'aorte est exposée à l'élastase topique pendant 3-5 minutes, comparativement à 15 minutes d'exposition CaCl 2. Deuxièmement, la dilatation aortique se produit en 2 semaines, comparativement à 16 semaines dans le modèle CaCl 2. Enfin, notre modèle produit systématiquement des anévrismes d'environ 100% de dilatation, par rapport aux dilatations aortiques de 20-30% produites par l'application CaCl2 (qui ne peuvent pas être vraiment considérées comme des anévrismes car elles sont définies comme une augmentation de l'aortique diamètre 'gt;50%). Il y a d'autres modèles murinenons non chirurgicaux de formation d'aneurysm, tels que la souris knock-out d'Apo E, qui forment des aneurysms robustes avec l'infusion de l'angiotensine II. Cependant, ces souris développent des anévrismes aortiques thoraciques supra-rénaux ou ascendants plutôt que des anévrismes spécifiquement dans l'aorte thoracique descendante9,10.
Le rationnel pour ce protocole est d'avoir un moyen simple, peu coûteux, et le temps approprié pour étudier dTAA dans un modèle de murine. Le modèle de souris offre une occasion unique d'utiliser de nombreux KO génétiques et cellulaires spécifiques qui se sont avérés être percutants dans d'autres maladies vasculaires. L'utilisation de notre modèle TAA spécifique a été bien reçue et des expériences l'utilisant ont été publiées dans des revues à fort impact11,12. Jusqu'à ce point, le modèle a été employé pour étudier les traitements génétiques et pharmacologiques possibles qui ont eu un effet significatif dans les modèles auriculaires aortiques abdominaux (AAA) de murine ; cependant, comme notre laboratoire a élargi l'utilisation du modèle dTAA, nous trouvons des cibles uniques à la formation dTAA qui pourraient être utilisés comme thérapies ciblées chez l'homme.
Ce modèle est plus approprié pour les laboratoires qui ont des capacités micro-chirurgicales murines. Bien qu'il soit techniquement difficile, il peut être exécuté uniformément même par des chercheurs sans expérience chirurgicale préalable. Pour un chercheur sans expérience chirurgicale murine, le modèle peut être maîtrisé en une vingtaine de séances opératoires (soit environ 50 souris). Pour le chercheur ayant une expérience chirurgicale antérieure, le modèle peut être maîtrisé en 5 séances opératoires (environ 20 souris). Nous croyons qu'avec une vidéo de haute qualité, le temps de maîtrise peut être encore réduit. Une fois la compétence atteinte, la procédure peut être complétée en 35 minutes pour la chirurgie, et 20 minutes pour la récolte terminale. Les chirurgiens de notre laboratoire peuvent effectuer 10 à 12 chirurgies complètes par jour, avec un taux de mortalité opératoire de 5 à 10 %. La cause la plus fréquente de mortalité est une lésion pulmonaire à l'entrée de la poitrine, une toxicité anesthésique ou une déchirure de l'aorte pendant la dissection. En plus de la recherche dTAA, ce modèle sert également de guide pour un accès sûr et facile à l'aorte thoracique et le hilum pulmonaire pour les chercheurs qui étudient d'autres interventions dans la poitrine.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:761px;" width="760">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Angiocatheter (22G)</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:167px;">Used for ET Tube</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Dumont Tweezers; Pattern #7 x2</td>
			<td style="width:191px;">Roboz</td>
			<td style="width:161px;">RS-4982</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Graefe Tissue Forceps</td>
			<td style="width:191px;">Roboz</td>
			<td style="width:161px;">RS-5158</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Harms Forceps x2</td>
			<td style="width:191px;">Roboz</td>
			<td style="width:161px;">RS-5097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Intracardiac Needle Holder; Extra Delicate; Carbide Jaws; 7&#34; Length</td>
			<td style="width:191px;">Roboz</td>
			<td style="width:161px;">RS-7800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;KL 1500 LED Light Source</td>
			<td style="width:191px;">Leica</td>
			<td style="width:161px;">150-400</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;M205A Dissction Microscope</td>
			<td style="width:191px;">Leica</td>
			<td style="width:161px;">CH 94-35</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Iris Scissors, 11cm, Tungsten Carbide</td>
			<td style="width:191px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:161px;">500216-G</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Metal Clip board</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:167px;">Use with the Mouse Retractor Set&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Mouse Retractor Set</td>
			<td style="width:191px;">Kent</td>
			<td style="width:161px;">SURGI-5001</td>
			<td style="width:167px;">Need 2 short and 1 tall fixators</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:243px;">Mouse Ventilator MiniVent Type 845, 115 V, Power Supply with US Connector</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:161px;">73-0043</td>
			<td style="width:167px;">MiniVent Ventilator for Mice (Model 845), Single Animal, Volume Controlled</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:191px;">Elastase from porcine pancreas</td>
			<td style="width:161px;">E0258-50MG</td>
			<td style="width:167px;">Can be purchased in various size bottles</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:243px;">Small Vessel Cauterizer Kit</td>
			<td style="width:191px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:161px;">18000-00</td>
			<td style="width:167px;">Recommend using rechargable AA batteries</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Spring Scissors, 10.5cm</td>
			<td style="width:191px;">World Precision Instruments</td>
			<td align="right" style="width:161px;">14127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Steril Swabs (Sponges)</td>
			<td style="width:191px;">Sugi</td>
			<td align="right" style="width:161px;">31603</td>
			<td style="width:167px;">Can be cut to size</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Surgi Suite Surgical Platform</td>
			<td style="width:191px;">Kent</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:167px;">Attach to clip board&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Tech IV Isoflurane Vap</td>
			<td style="width:191px;">Jorgensen&#160;Laboratories&#160;</td>
			<td style="width:161px;">J0561A</td>
			<td style="width:167px;">Anesthesia vaporizer&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine surgical model of topical elastase induced descending thoracic aortic aneurysm

Selon le Center for Disease Control, les anévrismes aortiques (AA) ont été considérés comme l'une des principales causes de décès dans toutes les races et les deux sexes de 1999 à 2016. Un anévrisme se forme à la suite de l'affaiblissement progressif et de la dilatation éventuelle de l'aorte, qui peut se rompre ou se déchirer une fois qu'elle atteint un diamètre critique. Les anévrismes de l'aorte descendante dans la poitrine, appelés anévrismes aortiques thoraciques descendants (dTAA), constituent une grande proportion des cas d'anévrisme aux États-Unis. La rupture non confinée de dTAA est presque universellement mortelle, et la réparation élective a un taux élevé de morbidité et de mortalité. Le but de notre modèle est d'étudier dTAA spécifiquement, d'élucider la pathophysiologie de dTAA et de rechercher des cibles moléculaires pour arrêter la croissance ou réduire la taille de dTAA. En ayant un modèle murine pour étudier la pathologie thoracique avec précision, des thérapies ciblées peuvent être développées pour tester spécifiquement dTAA. La méthode est basée sur le placement de l'élastase pancréatique porcine (PPE) directement sur la paroi aortique murine externe après exposition chirurgicale. Cela crée une réaction destructrice et inflammatoire, qui affaiblit la paroi aortique et permet la formation d'anévrisme sur des semaines à des mois. Bien que les modèles murins possèdent des limitations, notre modèle dTAA produit des anévrismes robustes de taille prévisible. En outre, ce modèle peut être utilisé pour tester des cibles génétiques et pharmaceutiques qui peuvent arrêter la croissance dTAA ou prévenir la rupture. Chez les patients humains, des interventions comme celles-ci pourraient aider à éviter la rupture de l'anévrisme, et l'intervention chirurgicale difficile.

L'application de notre protocole se traduit par un dTAA robuste chez la souris par rapport aux contrôles salins. Les AAT développés sont de forme fusiforme et ne se produisent que dans la partie traitée de l'aorte (Figure 1 et Figure 2)11. La figure 2 montre un exemple de mesure vidéo de micrométrie à la récolte des tissus. En utilisant l'équation 1, la dilatation aortique est de 130% dans cet exempl...

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Murine Surgical Model of Topical Elastase Induced Descending Thoracic Aortic Aneurysm

Nous décrivons un protocole chirurgical pour induire uniformément les aneurysms aortiques thoraciques descendants robustes chez les souris. La procédure implique la thoracotomie gauche, l'exposition à l'aorte thoracique, et le placement d'une éponge imbibée d'élastase pancréatique porcine sur la paroi aortique.

Modèle chirurgical murine de l'élastase topique induit descendant l'aneurysm aortique thoracique

According to the Center for Disease Control, aortic aneurysms (AAs) were considered a leading cause of death in all races and both sexes from 1999-2016. ...

Ce protocole est capable de produire des anévrismes aortiques thoraciques robustes de taille et d’emplacement constants chez la souris et sert de guide pour un accès sûr à la poitrine murine. Ce protocole est une méthode simple et cohérente pour produire des anévrismes aortiques thoraciques chez la souris sur une quantité raisonnable de temps par rapport à d’autres modèles. Après avoir confirmé un niveau approprié de sedation chez un mâle de huit à dix semaines c57 noir six souris, placez la souris dans la position latérale droite de decubitus et tapez le bras droit rostrally ainsi la patte avant est en ligne avec le nez.Tirez la queue caudally pour créer une ligne de tension entre le bras droit et la queue, produisant l’extension de la colonne vertébrale, et tapez la jambe gauche dans sa position naturelle. Ensuite, tapez le bras gauche ventrally sur gaze roulée. Avant de commencer l’intervention, utilisez des tondeuses pour raser le flanc gauche de l’épaule gauche à l’abdomen gauche.Utilisez un applicateur à pointe de coton pour brosser d’abord la solution betadyne, puis 70% d’éthanol sur le site chirurgical. Lorsque la peau est sèche, placez un drapé stérile sur l’animal. Faire une incision latérale de deux centimètres au milieu de l’hémothorax et utiliser l’électrocauterie tenue à la main pour diviser les couches musculaires jusqu’à ce que les côtes soient visibles.Sous 10 à 15x grossissement, cautériser directement une partie de deux millimètres entre les côtes et utiliser un applicateur salin mouillé, à pointe de coton fin dans l’espace des côtes afin de disséquer dans l’espace pleural à travers la partie cautérisée. Placez une éponge saline mouillée de trois par deux millimètres dans le thorax pour aider à l’effondrement du poumon. Ensuite, utilisez des ciseaux pour élargir la thoracotomie jusqu’à ce que le diaphragme soit visible ventrally et l’incision est à plusieurs millimètres des muscles paraspinus dorsalement.Pour exposer l’aorte, placez les rétracteurs de nervures dans l’incision thoracotomie et retirez soigneusement l’éponge de la surface du poumon. Couvrez le poumon d’une éponge saline mouillée de six par quatre millimètres avec les extrémités pointant vers rostrally et caudally et placez un rétracteur large et plat de poumon sur l’éponge. Ensuite, faites glisser doucement le rétracteur ventrally jusqu’à ce que l’aorte thoracique descendante soit exposée et utilisez le nombre sept forceps pour disséquer une section d’environ cinq millimètres de tissu conjonctif et de graisse de l’aorte.Pour appliquer l’élastre, d’abord, utilisez une micropipette pour saturer une éponge de 0,5 par millimètre avec 12 microlitres d’élastase pancréatique porcine et placer l’éponge sur la surface exposée de l’aorte. Après trois à cinq minutes, utiliser le numéro sept forceps pour enlever l’éponge d’élasstase et enlever le rétracteur de poumon. Irriguer la cavité thoracique avec environ un demi-millilitre de solution saline stérile.Retirer l’éponge pulmonaire et utiliser un morceau roulé de deux par deux pouces de gaze pour absorber l’irrigation saline restante. Retirez les rétracteurs des côtes et déposez les côtes avec trois sutures interrompues de six oh non absorbables, en lissant un nœud lâche dans chaque suture sans léter les sutures vers le bas. Après avoir regonflé le poumon, attachez les sutures et rééchez les couches musculaires avec une suture tressée absorbable de cinq oh en cours d’exécution.Fermez la peau avec sept à dix sutures interrompues de cinq oh non absorbables. Ensuite, surveillez l’animal jusqu’à la pleine récumbence. Au point d’extrémité expérimental approprié, utilisez des ciseaux pour inciser la peau de façon médiocre du flanc gauche à l’abdomen central, en prenant soin de ne pas entrer dans le péritoine.Incise la peau du flanc gauche dorsal rostrally à l’épaule gauche et faire une incision à un angle de 90 degrés à travers l’axilla au sternum. À l’aide de la cautérisation, disséquer le rabat cutané vers l’aspect ventral de la souris pour exposer l’hémothorax gauche et utiliser des ciseaux pour pénétrer dans l’abdomen le long de la marge costale gauche du ventral à la direction dorsale pour exposer le dessous du diaphragme gauche. Si le bord latéral le plus latéral du diaphragme ne s’ouvre pas, incisez le diaphragme à son bord le plus latéral.En plaçant la pointe de la cautérisation dans ce trou, cautériser le diaphragme de la marge costale au processus xiphoïde et utiliser un applicateur humide à pointe fine à bout de coton pour libérer doucement le poumon de toute adhérence à la paroi thoracique. Tout en s’assurant que le poumon est à l’extérieur, utilisez l’électrocauttérie pour couper à travers les côtes et la paroi thoracique de la marge costale à la première côte, dorsale à la ligne médiane, mais au moins deux millimètres de l’aorte. Couper le long de la marge supérieure de la première côte et de refléter la cage thoracique ventrally pour exposer l’hémothorax.Placez les rétracteurs sur le poumon et tirez médiocrement. Placez un rétracteur ou une gaze saline mouillée sur le diaphragme et dessinez caudally pour exposer autant d’aorte que possible. Utilisez un applicateur sec à bout de coton pour éliminer les adhérences de l’anévrisme aortique et d’un segment distal inchangé et utilisez la micrométrie vidéo pour mesurer le diamètre du segment de contrôle inchangé et la partie la plus large de l’anévrisme traité à l’élasstase.Pour récolter l’aorte, saisissez le navire avec des forceps harmons juste distal au segment traité et utilisez des ciseaux pour couper distal aux forceps. Disséquer l’aorte de la colonne vertébrale et couper le vaisseau proximal au segment traité pour enlever le tissu anévrisme. Ensuite, à l’aide d’une seringue et d’une aiguille de tuberculine, lavez le lumen aortique avec de la solution saline et traiter l’échantillon selon l’analyse expérimentale prévue en aval.Les anévrismes thoraciques développés comme forme fusiforme et se produisent seulement dans la partie traitée sur l’aorte. Dans cette mesure représentative de micrométrie vidéo, la dilatation aortique a été déterminée pour être 130% à la récolte de tissu. En effet, tandis que les souris traitées de type elastase présentent une augmentation significative de la dilatation aortique aux jours trois, sept, 14, et 21 post-traitement avec la dilatation maximale observée au jour 14 comparée à la souris de type sauvage de contrôle.L’analyse histologique révèle que les anévrismes de type sauvage ont des fibres d’élastine minces et fragmentées. Il y a également la coloration moins lisse de cellules de muscle avec une augmentation du macrophage et de l’expression uni-bêta d’interlukin. Le poumon murin est extrêmement délicat, et les blessures sont généralement mortelles.Prenez le plus grand soin avec l’entrée initiale dans la poitrine et ne manipulez le poumon qu’avec des éponges salines mouillées. Ce modèle a aidé à élucider le rôle de l’interlukin un-bêta et interlukin six dans la pathogénie des aneurysms aortiques thoraciques descendants et comment leur blocus pourrait faciliter la gestion non chirurgicale de ces anévrismes.

Research

JoVE Journal

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