Name: murine surgical model of topical elastase induced descending thoracic aortic aneurysm
Uploaded: 2019-08-24T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Murine Surgical Model of Topical Elastase Induced Descending Thoracic Aortic Aneurysm at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av AHA forsker Development Grant 14SDG18730000 (M.S.), NIH K08 HL098560 (G.A.) og RO1 HL081629 (G.R.U.) tilskudd. Dette prosjektet ble støttet av bryst Surgery Foundation for Research and Education (TSFRE) Research Grant (PI: G. Ailawadi). Innholdet er utelukkende ansvaret til forfatterne og representerer ikke nødvendigvis synspunktene til NHLBI eller TSFRE. Vi takker Anthony sild og Cindy Dodson for deres kunnskap og teknisk ekspertise.

Animal protokoller ble godkjent av University of Virginia institusjonelle Animal Care og use Committee (nr. 3634).
1. induksjon av anestesi og intubering
<ol><li>Plasser en 8-10-uke gammel mannlig C57BL/6-mus i et lukket kammer med kontinuerlig strøm av 5% isoflurane og oksygen blanding i 5 minutter, til respirations er synlig redusert. Merk: ulike stammer, kjønn og alder av mus kan brukes avhengig av eksperimentell protokollen. Kvinnelige mus kan være vanskeligere å intubere på grun...

<ol>
	<li>Coady, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+the+appropriate+size+criterion+for+resection+of+thoracic+aortic+aneurysms.">What is the appropriate size criterion for resection of thoracic aortic aneurysms.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 113 (3), 489-491 (1997).</li><li>Aggarwal, S., Qamar, A., Sharma, V., Sharma, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abdominal+aortic+aneurysm:+A+comprehensive+review.">Abdominal aortic aneurysm: A comprehensive review.</a> Experimental and Clinical Cardiology. 16 (1), 11-15 (2011).</li><li>Bickerstaff, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thoracic+aortic+aneurysms:+a+population-based+study.">Thoracic aortic aneurysms: a population-based study.</a> Surgery. 92 (6), 1103-1108 (1982).</li><li>Cheng, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endovascular+aortic+repair+versus+open+surgical+repair+for+descending+thoracic+aortic+disease+a+systematic+review+and+meta-analysis+of+comparative+studies.">Endovascular aortic repair versus open surgical repair for descending thoracic aortic disease a systematic review and meta-analysis of comparative studies.</a> Journal of the American College of Cardiology. 55 (10), 986-1001 (2010).</li><li>Walsh, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endovascular+stenting+versus+open+surgery+for+thoracic+aortic+disease:+systematic+review+and+meta-analysis+of+perioperative+results.">Endovascular stenting versus open surgery for thoracic aortic disease: systematic review and meta-analysis of perioperative results.</a> Journal of Vascular Surgery. 47 (5), 1094-1098 (2008).</li><li>Absi, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+patterns+of+gene+expression+distinguishing+ascending+aortic+aneurysms+from+abdominal+aortic+aneurysms:+complementary+DNA+expression+profiling+in+the+molecular+characterization+of+aortic+disease.">Altered patterns of gene expression distinguishing ascending aortic aneurysms from abdominal aortic aneurysms: complementary DNA expression profiling in the molecular characterization of aortic disease.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 126 (2), 344-357 (2003).</li><li>Ailawadi, G., Eliason, J. L., Upchurch, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+concepts+in+the+pathogenesis+of+abdominal+aortic+aneurysm.">Current concepts in the pathogenesis of abdominal aortic aneurysm.</a> Journal of Vascular Surgery. 38 (3), 584-588 (2003).</li><li>Ikonomidis, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+thoracic+aortic+aneurysms.">A murine model of thoracic aortic aneurysms.</a> Journal of Surgical Research. 115 (1), 157-163 (2003).</li><li>Daugherty, A., Manning, M. W., Cassis, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiotensin+II+promotes+atherosclerotic+lesions+and+aneurysms+in+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Angiotensin II promotes atherosclerotic lesions and aneurysms in apolipoprotein E-deficient mice.</a> Journal of Clinical Investigation. 105 (11), 1605-1612 (2000).</li><li>Trachet, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ascending+Aortic+Aneurysm+in+Angiotensin+II-Infused+Mice:+Formation,+Progression,+and+the+Role+of+Focal+Dissections.">Ascending Aortic Aneurysm in Angiotensin II-Infused Mice: Formation, Progression, and the Role of Focal Dissections.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 36 (4), 673-681 (2016).</li><li>Johnston, W. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+interleukin-1beta+decreases+aneurysm+formation+and+progression+in+a+novel+model+of+thoracic+aortic+aneurysms.">Inhibition of interleukin-1beta decreases aneurysm formation and progression in a novel model of thoracic aortic aneurysms.</a> Circulation. 130 (11), 51-59 (2014).</li><li>Pope, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6+Receptor+Inhibition+Prevents+Descending+Thoracic+Aortic+Aneurysm+Formation.">Interleukin-6 Receptor Inhibition Prevents Descending Thoracic Aortic Aneurysm Formation.</a> Annals of Thoracic Surgery. 100 (5), 1620-1626 (2015).</li><li>Vandivort, T. C., An, D., Parks, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Improved+Method+for+Rapid+Intubation+of+the+Trachea+in+Mice.">An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (108), e53771 (2016).</li><li>Ailawadi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+nonintrinsic+regional+basis+for+increased+infrarenal+aortic+MMP-9+expression+and+activity.">A nonintrinsic regional basis for increased infrarenal aortic MMP-9 expression and activity.</a> Journal of Vascular Surgery. 37 (5), 1059-1066 (2003).</li><li>Ruddy, J. M., Jones, J. A., Spinale, F. G., Ikonomidis, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+heterogeneity+within+the+aorta:+relevance+to+aneurysm+disease.">Regional heterogeneity within the aorta: relevance to aneurysm disease.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 136 (5), 1123-1130 (2008).</li><li>Trigueros-Motos, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryological-origin-dependent+differences+in+homeobox+expression+in+adult+aorta:+role+in+regional+phenotypic+variability+and+regulation+of+NF-kappaB+activity.">Embryological-origin-dependent differences in homeobox expression in adult aorta: role in regional phenotypic variability and regulation of NF-kappaB activity.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 33 (6), 1248-1256 (2013).</li><li>Lu, G. S. G., Davis, J. P., Schaheen, B., Downs, E., Roy, R. J., Ailawadi, G., Upchurch, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+chronic+advanced+staged+abdominal+aortic+aneurysm+murine+model.">A novel chronic advanced staged abdominal aortic aneurysm murine model.</a> Journal of Vascular Surgery. 66 (1), 232-242 (2017).</li></ol>

Bryst og abdominal aorta er cellularly og embryologically distinkte, som er relevant for aneurisme sykdom14,15,16. Derfor er en bestemt dyr modell for å studere TAA nødvendig. Selv om andre murine dTAA modeller har blitt publisert8, er vår den eneste modellen for å skape synkende bryst aorta dilatasjon som kan betraktes som virkelig aneurisme (over 50% utvidelse). Videre er vår modell relativt rask ?...

Formålet med denne metoden er å studere utviklingen, patofysiologi, og strukturelle endringer i murine synkende bryst aorta under dannelse av aorta-blødning. Vår modell tilbyr en reproduserbar og konsistent metode for å indusere bryst aorta aneurismer (dTAA) i mus og dermed muliggjør testing av ulike genetiske og Pharmacologic hemmere. Dette arbeidet kan bidra til å identifisere medikamenter og gen-terapier som kan oversettes til en levedyktig behandlings strategi for mennesker med dTAA sykdom.
dTAAs form når veggen av bryst aorta blir svekket og utvider over tid til å nå en kritisk diameter når rive eller brudd kan da forekomme. Klinisk, dTAA kan utvikle seg i stillhet, øker i størrelse til strukturen av aorta veggen er så forvrengt at det til slutt svikter, med katastrofale konsekvenser. Concerningly, symptomene utvikler seg vanligvis bare når det har nådd en farlig størrelse (100-150% utvidelse) og har høy risiko for disseksjon eller brudd1,2. dTAA brudd er nesten universelt dødelig3, og valgfag kirurgisk reparasjon bærer betydelig sykelighet4,5. Videre bærer de fleste pasientene diagnosen aorta-blødning i ca. 5 år før kirurgisk reparasjon6,7. Dette vinduet representerer en beleilig tid til å gripe inn ikke-kirurgisk. Således, medisinsk behandling for å behandle eller langsom progresjon av dTAA er nødvendig og vil representere en betydelig fremgang til feltet av blødning forskning. Det er for tiden ingen medisinske behandlinger for dTAA tilgjengelig, hovedsakelig på grunn av en ufullstendig forståelse av dTAA patogenesen.
I løpet av de siste 20 årene har flere dTAA dyremodeller blitt utviklet, men hver av disse modellene var adskilt fra vår egen og produserte ikke robuste aneurismer. En murine dTAA-modell som er mest lik vår, ble utviklet av Ikonomidis et al.8, som inkluderer direkte anvendelse av CaCl2 til adventitia av aorta. Selv om vår modell var tilpasset fra mange av teknikkene som er fremsatt av Ikonomidis, er vår modell unik på tre forskjellige måter. Først i vår modell aorta er eksponert for aktuell elastase i 3-5 minutter, sammenlignet med 15 minutter av CaCl2 eksponering. For det andre oppstår aorta-utvidelse i 2 uker, sammenlignet med 16 uker i CaCl2 -modellen. Sist, vår modell konsekvent produserer aneurismer på ca 100% dilatasjon, sammenlignet med aorta dilatations av 20-30% produsert av CaCl2 søknad (som ikke kan virkelig betraktes aneurismer som de er definert som en økning i aorta diameter > 50%). Det er andre ikke-kirurgiske murine modeller av blødning, slik som Apo E knockout mus, som danner robuste aneurismer med infusjon av angiotensin II. Men disse musene utvikle Supra-nyre eller stigende bryst aorta aneurismer snarere enn aneurismer spesielt i synkende bryst aorta9,10.
Den rasjonelle for denne protokollen er å ha en enkel, billig og tid egnet måte å studere dTAA i en murine modell. Musa modellen gir en unik mulighet til å utnytte mange genetiske og celle-spesifikke Knockouts som har blitt funnet å være slagkraftige i andre vaskulære sykdommer. Bruken av vår spesifikke TAA-modell har blitt godt mottatt og eksperimenter som bruker den har blitt publisert i High Impact tidsskrifter11,12. Til dette punktet, har modellen blitt brukt til å undersøke mulige genetiske og Pharmacologic behandlinger som hadde en betydelig effekt i abdominal aorta (AAA) murine modeller; som vår Lab har utvidet bruken av dTAA-modellen, finner vi imidlertid mål som er unike for dTAA-formasjonen, som kan brukes som målrettede terapier hos mennesker.
Denne modellen er mest hensiktsmessig for laboratorier som har murine mikro-kirurgiske evner. Selv om det er teknisk utfordrende, kan det utføres konsekvent selv av forskere uten tidligere kirurgisk erfaring. For en forsker uten murine kirurgisk erfaring modellen kan bli mastret i ca 20 operative sesjoner (eller ca 50 mus). For forskeren med tidligere kirurgisk erfaring, kan modellen bli mastret i 5 operative sesjoner (ca 20 mus). Vi tror med en høy kvalitet video, kan tiden for å mestre bli ytterligere redusert. Etter at ferdigheter er oppnådd, kan prosedyren være ferdig i 35 minutter for kirurgi, og 20 minutter for terminalen innhøsting. Kirurger i laboratoriet vårt kan fullføre 10-12 fulle operasjoner per dag, med en operativ dødelighet på 5-10%. Den vanligste årsaken til dødelighet er lungeskade ved innreise til brystet, bedøvelse toksisitet, eller tåre av aorta under disseksjon. I tillegg til dTAA forskning, fungerer denne modellen også som en guide for sikker og enkel tilgang til bryst aorta og lunge hilum for forskere som studerer andre intervensjoner i brystet.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:761px;" width="760">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Angiocatheter (22G)</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:167px;">Used for ET Tube</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Dumont Tweezers; Pattern #7 x2</td>
			<td style="width:191px;">Roboz</td>
			<td style="width:161px;">RS-4982</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Graefe Tissue Forceps</td>
			<td style="width:191px;">Roboz</td>
			<td style="width:161px;">RS-5158</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Harms Forceps x2</td>
			<td style="width:191px;">Roboz</td>
			<td style="width:161px;">RS-5097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Intracardiac Needle Holder; Extra Delicate; Carbide Jaws; 7&#34; Length</td>
			<td style="width:191px;">Roboz</td>
			<td style="width:161px;">RS-7800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;KL 1500 LED Light Source</td>
			<td style="width:191px;">Leica</td>
			<td style="width:161px;">150-400</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;M205A Dissction Microscope</td>
			<td style="width:191px;">Leica</td>
			<td style="width:161px;">CH 94-35</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Iris Scissors, 11cm, Tungsten Carbide</td>
			<td style="width:191px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:161px;">500216-G</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Metal Clip board</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:167px;">Use with the Mouse Retractor Set&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Mouse Retractor Set</td>
			<td style="width:191px;">Kent</td>
			<td style="width:161px;">SURGI-5001</td>
			<td style="width:167px;">Need 2 short and 1 tall fixators</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:243px;">Mouse Ventilator MiniVent Type 845, 115 V, Power Supply with US Connector</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:161px;">73-0043</td>
			<td style="width:167px;">MiniVent Ventilator for Mice (Model 845), Single Animal, Volume Controlled</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:191px;">Elastase from porcine pancreas</td>
			<td style="width:161px;">E0258-50MG</td>
			<td style="width:167px;">Can be purchased in various size bottles</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:243px;">Small Vessel Cauterizer Kit</td>
			<td style="width:191px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:161px;">18000-00</td>
			<td style="width:167px;">Recommend using rechargable AA batteries</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Spring Scissors, 10.5cm</td>
			<td style="width:191px;">World Precision Instruments</td>
			<td align="right" style="width:161px;">14127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Steril Swabs (Sponges)</td>
			<td style="width:191px;">Sugi</td>
			<td align="right" style="width:161px;">31603</td>
			<td style="width:167px;">Can be cut to size</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Surgi Suite Surgical Platform</td>
			<td style="width:191px;">Kent</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:167px;">Attach to clip board&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Tech IV Isoflurane Vap</td>
			<td style="width:191px;">Jorgensen&#160;Laboratories&#160;</td>
			<td style="width:161px;">J0561A</td>
			<td style="width:167px;">Anesthesia vaporizer&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine surgical model of topical elastase induced descending thoracic aortic aneurysm

I henhold til senter for sykdomskontroll ble aorta aneurismer (AAs) betraktet som en ledende dødsårsak i alle raser og begge kjønn fra 1999-2016. En form for blødning som følge av progressiv svekkelse og eventuell utvidelse av aorta, som kan sprekke eller rive når den når en kritisk diameter. Aneurismer av den synkende aorta i brystet, kalt synkende bryst aorta aneurismer (dTAA), utgjør en stor andel av blødning tilfeller i USA. Uncontained dTAA brudd er nesten universelt dødelig, og valgfag reparasjon har en høy grad av sykelighet og dødelighet. Hensikten med vår modell er å studere dTAA spesielt, å belyse patofysiologi av dTAA og å søke etter molekylære mål å stanse veksten eller redusere størrelsen på dTAA. Ved å ha en murine modell for å studere bryst patologi presist, kan målrettede terapier utvikles til spesielt teste dTAA. Metoden er basert på plassering av svin bukspyttkjertel elastase (PPE) direkte på den ytre murine aorta veggen etter kirurgisk eksponering. Dette skaper en destruktiv og inflammatorisk reaksjon, som svekker aorta veggen og gir mulighet for blødning dannelse over uker til måneder. Selv om murine modeller har begrensninger, produserer vår dTAA-modell en robust aneurismer av forutsigbar størrelse. Videre kan denne modellen brukes til å teste genetiske og farmasøytiske mål som kan arrestere dTAA vekst eller hindre brudd. I menneskelige pasienter, intervensjoner som disse kan bidra til å unngå blødning brudd, og vanskelig kirurgisk inngrep.

Anvendelsen av vår protokoll resulterer i robuste dTAA i mus sammenlignet med saltvann kontroller. TAAs utviklet er fusiform i form og forekommer bare i den behandlede delen av aorta (figur 1 og figur 2)11. Figur 2 viser et eksempel på en video micrometry måling ved vev innhøsting. Ved hjelp av ligning 1 er aorta-utvidelse 130% i dette eksempelet.
Den opprinnelige studien av Jo...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Surgical Model of Topical Elastase Induced Descending Thoracic Aortic Aneurysm at JoVE.com

Murine Surgical Model of Topical Elastase Induced Descending Thoracic Aortic Aneurysm

Vi beskriver en kirurgisk protokoll som konsekvent induserer robuste, nedadgående bryst aorta aneurismer hos mus. Prosedyren innebærer venstre toraktomi, bryst aorta eksponering, og plassering av en svamp dynket i svin bukspyttkjertelen elastase på aorta veggen.

Murine kirurgisk modell av aktuell Elastase indusert synkende bryst aorta-blødning

According to the Center for Disease Control, aortic aneurysms (AAs) were considered a leading cause of death in all races and both sexes from 1999-2016. ...

Denne protokollen er i stand til å produsere robuste thorax aortaaneurisme av konsistent størrelse og plassering hos mus og fungerer som en guide for sikker tilgang til murine brystet. Denne protokollen er en enkel, konsekvent metode for å produsere thorax aortaaneurisme hos mus over en rimelig tid sammenlignet med andre modeller. Etter å ha bekreftet et passende nivå av sedasjon i en åtte til 10-ukers gammel mannlig c57 svart seks mus, plasser musen i høyre lateral decubitus posisjon og tape høyre arm rostrally slik at den fremre poten er på linje med nesen.Trekk halen caudally for å skape en linje av spenning mellom høyre arm og hale, produsere forlengelse av ryggraden, og tape venstre ben i sin naturlige posisjon. Deretter tape venstre arm ventrikt over rullet gasbind. Før du begynner prosedyren, bruk clippers til å barbere venstre flanke fra venstre skulder til venstre mage.Bruk en bomullstippet applikator til å børste første betadyneløsning, deretter 70% etanol over operasjonsstedet. Når huden er tørr, legg en steril drapering over dyret. Lag et to centimeter lateralt snitt på midtpunktet av hemothoraxen og bruk håndholdt elektrocautery for å dele muskellagene til ribbeina er synlige.Under 10 til 15x forstørrelse, direkte cauterize en to millimeter del mellom ribbeina og bruke en saltvann-fuktet, fin bomull-tipped applikator i ribben plass for å dissekere inn i pleural plass gjennom cauterized delen. Plasser en saltvannsfuktet, tre med to millimeter svamp i thoraxen for å kollapse lungene. Deretter bruker du saks for å utvide thoracotomien til membranen er synlig ventrikt og snittet er flere millimeter unna paraspinusmuskulaturen dorsally.For å eksponere aorta, plasser ribbe retractors i thoracotomy snitt og forsiktig fjerne svampen fra overflaten av lungene. Dekk lungen med en saltvannsfuktet, seks med fire millimeter svamp med endene pekende rostrally og caudally og plasser en bred, flat lunge retractor på svampen. Skyv deretter forsiktig retractor ventrally til den synkende thorax aorta er utsatt og bruk nummer syv tang for å dissekere en omtrent fem millimeter del av bindevev og fett fra aorta.For å bruke elastansen, bruk først en mikropipette til å mette en 0,5 med en millimeter svamp med 12 mikroliter svin bukspyttkjerteleeastase og legg svampen på den eksponerte overflaten av aorta. Etter tre til fem minutter, bruk nummer syv tang for å fjerne elase svampen og fjerne lungetraktoren. Vann brysthulen med omtrent halvparten av en milliliter steril saltvann.Fjern lungesvampen og bruk et rullet to-to-tommers stykke gasbind for å absorbere den gjenværende saltvanningen. Fjern ribbeuttrekkerne og avsette ribbeina med tre avbrutte seks oh ikke-absorberbare suturer, binde en løs knute i hver sutur uten å binde suturene ned. Etter å ha oppblåst lungene, bind suturene og reapproximate muskellagene med en løpende fem-oh absorberbar flettet sutur.Lukk huden med syv til 10 avbrutt fem oh ikke-absorberbare suturer. Deretter overvåker dyret til full recumbency. Ved riktig eksperimentelt sluttpunkt, bruk saks for å øke huden medially fra venstre flanke til sentrallivet, og vær forsiktig så du ikke kommer inn i bukhinnen.Incise huden fra den dorsale venstre flanken rostrally til venstre skulder og gjøre et snitt i en 90-graders vinkel gjennom axilla til brystbenet. Ved hjelp av cautery, dissekere hudklaffen mot ventral aspektet av musen for å eksponere venstre hemothorax og bruke saks for å komme inn i magen langs venstre costal margin fra ventral til dorsal retning for å utsette undersiden av venstre membran. Hvis den laterale kanten av membranen ikke åpnes, inkliserer membranen på sin mest laterale kant.Plassere spissen av cautery i dette hullet, cauterize membranen fra costal margin til xiphoid prosessen og bruke en fuktig, fin-tipped bomull-tipped applikator å forsiktig frigjøre lungen fra eventuelle adhesjoner til brystveggen. Mens du sikrer at lungene er ute av veien, bruk elektrocautery å skjære gjennom ribbeina og brystveggen fra kostnadsmarginen til den første ribben, dorsal til midten av aksillær linjen, men minst to millimeter fra aorta. Skjær langs den overlegne marginen på den første ribben og reflekterer ribbeburet ventrikt for å eksponere hemothoraxen.Plasser inntrekkere på lungene og trekk medially. Plasser en retractor eller saltvannsfuktet gasbind på membranen og trekk caudally for å utsette så mye av aorta som mulig. Bruk en tørr, bomullstippet applikator til å fjerne eventuelle adhesjoner fra aortaaneurisme og et upåvirket distal segment og bruke videomikrometri for å måle diameteren på det upåvirkede kontrollsegmentet og den bredeste delen av den elasebehandlede aneurisme.For å høste aorta, ta tak i fartøyet med skader tang bare distal til det behandlede segmentet og bruk saks for å kutte distal til tang. Disseker aorta av ryggraden og kutt fartøyet proksimalt til det behandlede segmentet for å fjerne det aneurysmale vevet. Deretter, ved hjelp av en tuberkulin sprøyte og nål, vask aorta lumen med saltvann og behandle prøven i henhold til den planlagte nedstrøms eksperimentelle analysen.De utviklede thoraxaneurisme som fusiform i form og forekommer bare i den behandlede delen på aorta. I denne representative videomikrometrimålingen ble aortautvidelsen fastslått å være 130% ved vevshøsting. Faktisk, mens type elaastasebehandlede mus viser en signifikant økning i aortautvidelse på dag tre, syv, 14 og 21 etterbehandling med maksimal dilatasjon observert på dag 14 sammenlignet med kontroll av villtypemus.Histologisk analyse avslører at vill type aneurisme har elastinfibre som er tynne og fragmenterte. Det er også mindre glatt muskelcellefarging med en økning i makrofag og interlukin en-beta uttrykk. Murine lungen er ekstremt delikat, og skade er vanligvis dødelig.Ta den største forsiktighet med den første inngangen til brystet og bare manipulere lungen med saltvannsfuktede svamper. Denne modellen har bidratt til å belyse rollen som interlukin en-beta og interlukin seks i patogenesen av synkende thorax aortaaneurisme og hvordan deres blokade kan lette ikke-kirurgisk styring av disse aneurisme.

Research

JoVE Journal

Medicine

A New Murine Model of Endovascular Aortic Aneurysm Repair

En ny murine modell av Endovascular aortaaneurisme Repair

Endovascular aneurysm exclusion is a validated technique to prevent aneurysm rupture. Long-term results highlight technique limitations and new aspects of ...

Reproducable Paraplegia by Thoracic Aortic Occlusion in a Murine Model of Spinal Cord Ischemia-reperfusion

Reproduserbar Paraplegi av Thoracic Aorta Okklusjon i en Muse Model of Spinal Cord iskemi-reperfusjon

Background
Lower extremity paralysis continues to complicate aortic interventions. The lack of understanding of the underlying pathology has hindered ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

En murine modell av myokardiskemi-reperfusjon Injury gjennom Ligation av Left Anterior Synkende Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Surgical Models of Gastroesophageal Reflux with Mice

Kirurgiske modeller av gastroøsofageal refluks med Mus

Multiple surgical procedures have been reported to induce gastroesophageal reflux in animals. Herein, we report three surgical models with mice aiming to ...

Murine Left Anterior Descending (LAD) Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Murine Left Anterior Descending LAD Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Murine venstre fremre synkende (LAD) koronar Binding: en forbedret og forenklet modell for hjerteinfarkt

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by ...

Creation of a Rodent Model of Abdominal Aortic Aneurysm by Blocking Adventitial Vasa Vasorum Perfusion

Etableringen av en gnager modell av abdominalt aortaaneurisme blokkerer Adventitial Vasa Vasorum perfusjon

The adventitial vasa vasorum (VV) provides oxygen and nourishment to the aortic wall. Hypoxia in the aortic wall can cause enlarged abdominal aortic ...

Standardized Technique of Aortic Valve Re-implantation for Valve-sparing Aortic Root Replacement

Standardisert teknikk av Aortaklaff re implantasjon for ventil-sparing aorta roten erstatning

Despite the obvious advantages of the preservation of a normal aortic valve during aortic root replacement, the complexity of valve sparing procedures ...

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Kvantitativ mikro-CT analyse av Aortopathy i en musemodell av β-aminopropionitrile-indusert aortaaneurisme og disseksjon

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...

Ultrasound Imaging of the Thoracic and Abdominal Aorta in Mice to Determine Aneurysm Dimensions

Ultralyd Imaging av Thoracic og Abdominal Aorta i mus å bestemme aneurisme dimensjoner

Contemporary high-resolution ultrasound instruments have sufficient resolution to facilitate the measurement of mouse aortas. These instruments have been ...

Murine Myocardial Infarction Model using Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery

Murine hjerteinfarkt modell bruker permanent ligation av venstre fremre synkende koronar

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine ...