Name: murine surgical model of topical elastase induced descending thoracic aortic aneurysm
Uploaded: 2019-08-24T15:00:00
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Este trabajo fue apoyado por las subvenciones de la Subvención de Desarrollo Científico de la AHA 14SDG18730000 (M.S.), NIH K08 HL098560 (G.A.) y RO1 HL081629 (G.R.U.). Este proyecto fue apoyado por la Beca de Investigación de la Fundación de Cirugía Torácica para la Investigación y la Educación (TSFRE) (PI: G. Ailawadi). El contenido es responsabilidad exclusiva de los autores y no representa necesariamente las opiniones de la NHLBI o del TSFRE. Agradecemos a Anthony Herring y Cindy Dodson por su conocimiento y experiencia técnica.

Los protocolos animales fueron aprobados por el Comité Institucional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de Virginia (núm. 3634).
1. Inducción de anestesia e intubación
<ol><li>Coloque un ratón C57BL/6 macho de 8-10 semanas de edad en una cámara cerrada con flujo continuo de 5% de isoflurano y mezcla de oxígeno durante 5 minutos, hasta que las respiraciones se desaceleren visiblemente. NOTA: Se pueden utilizar diferentes cepas, géneros y edades de los ratones dependiend...

<ol>
	<li>Coady, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+the+appropriate+size+criterion+for+resection+of+thoracic+aortic+aneurysms.">What is the appropriate size criterion for resection of thoracic aortic aneurysms.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 113 (3), 489-491 (1997).</li><li>Aggarwal, S., Qamar, A., Sharma, V., Sharma, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abdominal+aortic+aneurysm:+A+comprehensive+review.">Abdominal aortic aneurysm: A comprehensive review.</a> Experimental and Clinical Cardiology. 16 (1), 11-15 (2011).</li><li>Bickerstaff, L. 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R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endovascular+stenting+versus+open+surgery+for+thoracic+aortic+disease:+systematic+review+and+meta-analysis+of+perioperative+results.">Endovascular stenting versus open surgery for thoracic aortic disease: systematic review and meta-analysis of perioperative results.</a> Journal of Vascular Surgery. 47 (5), 1094-1098 (2008).</li><li>Absi, T. 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R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+concepts+in+the+pathogenesis+of+abdominal+aortic+aneurysm.">Current concepts in the pathogenesis of abdominal aortic aneurysm.</a> Journal of Vascular Surgery. 38 (3), 584-588 (2003).</li><li>Ikonomidis, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+thoracic+aortic+aneurysms.">A murine model of thoracic aortic aneurysms.</a> Journal of Surgical Research. 115 (1), 157-163 (2003).</li><li>Daugherty, A., Manning, M. W., Cassis, L. 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F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+interleukin-1beta+decreases+aneurysm+formation+and+progression+in+a+novel+model+of+thoracic+aortic+aneurysms.">Inhibition of interleukin-1beta decreases aneurysm formation and progression in a novel model of thoracic aortic aneurysms.</a> Circulation. 130 (11), 51-59 (2014).</li><li>Pope, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-6+Receptor+Inhibition+Prevents+Descending+Thoracic+Aortic+Aneurysm+Formation.">Interleukin-6 Receptor Inhibition Prevents Descending Thoracic Aortic Aneurysm Formation.</a> Annals of Thoracic Surgery. 100 (5), 1620-1626 (2015).</li><li>Vandivort, T. C., An, D., Parks, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Improved+Method+for+Rapid+Intubation+of+the+Trachea+in+Mice.">An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (108), e53771 (2016).</li><li>Ailawadi, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+nonintrinsic+regional+basis+for+increased+infrarenal+aortic+MMP-9+expression+and+activity.">A nonintrinsic regional basis for increased infrarenal aortic MMP-9 expression and activity.</a> Journal of Vascular Surgery. 37 (5), 1059-1066 (2003).</li><li>Ruddy, J. M., Jones, J. A., Spinale, F. G., Ikonomidis, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regional+heterogeneity+within+the+aorta:+relevance+to+aneurysm+disease.">Regional heterogeneity within the aorta: relevance to aneurysm disease.</a> Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 136 (5), 1123-1130 (2008).</li><li>Trigueros-Motos, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryological-origin-dependent+differences+in+homeobox+expression+in+adult+aorta:+role+in+regional+phenotypic+variability+and+regulation+of+NF-kappaB+activity.">Embryological-origin-dependent differences in homeobox expression in adult aorta: role in regional phenotypic variability and regulation of NF-kappaB activity.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 33 (6), 1248-1256 (2013).</li><li>Lu, G. S. G., Davis, J. P., Schaheen, B., Downs, E., Roy, R. J., Ailawadi, G., Upchurch, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+chronic+advanced+staged+abdominal+aortic+aneurysm+murine+model.">A novel chronic advanced staged abdominal aortic aneurysm murine model.</a> Journal of Vascular Surgery. 66 (1), 232-242 (2017).</li></ol>

La aorta torácica y abdominal son celular y embrionariamente distintas, lo que es relevante para la enfermedad aneurisma14,15,16. Por lo tanto, se necesita un modelo animal específico para estudiar TAA. Aunque otros modelos de dTAA murinos se han publicado8, el nuestro es el único modelo para crear dilatación aórtica torácica descendente que puede considerarse verdaderamente aneurisma (más del 50% ...

El propósito de este método es estudiar el desarrollo, la fisiopatología y los cambios estructurales en la aorta torácica descendente murina durante la formación del aneurisma aórtico. Nuestro modelo ofrece un método reproducible y consistente para inducir aneurismas de la aorta torácica (dTAA) en ratones permitiendo así la prueba de diversos inhibidores genéticos y farmacológicos. Este trabajo puede ayudar a identificar fármacos y terapias génicas que podrían traducirse en una estrategia de tratamiento viable para los seres humanos con enfermedad de dTAA.
los dTAa se forman cuando la pared de la aorta torácica se debilita y se dilata con el tiempo hasta alcanzar un diámetro crítico al rasgarse o romperse. Clínicamente, dTAA puede progresar en silencio, aumentando de tamaño hasta que la estructura de la pared aórtica está tan distorsionada que finalmente falla, con consecuencias catastróficas. En cuanto a todo, los síntomas generalmente se desarrollan sólo cuando el aneurisma ha alcanzado un tamaño peligroso (100-150% dilatación) y está en alto riesgo de disección o ruptura1,2. la ruptura dTAA escasi universalmente letal 3, y la reparación quirúrgica electiva conlleva una morbilidad significativa4,5. Además, la mayoría de los pacientes llevan el diagnóstico de un aneurisma aórtico durante aproximadamente 5 años antes de la reparación quirúrgica6,7. Esta ventana representa un momento oportuno para intervenir no quirúrgicamente. Por lo tanto, se necesitan terapias médicas para tratar o la progresión lenta de la dTAA y representarían un avance significativo en el campo de la investigación del aneurisma. Actualmente no hay tratamientos médicos para dTAA disponibles, principalmente debido a una comprensión incompleta de la patogénesis dTAA.
En los últimos 20 años, se han desarrollado varios modelos animales dTAA, pero cada uno de estos modelos fueron distintos de los nuestros y no produjeron aneurismas robustos. Un modelo dTAA murino más similar al nuestro fue desarrollado por Ikonomidis et al.8, que incluye la aplicación directa de CaCl2 a la adventitia de la aorta. Aunque nuestro modelo fue adaptado de muchas de las técnicas establecidas por Ikonomidis, nuestro modelo es único en tres maneras separadas. En primer lugar, en nuestro modelo la aorta se expone a la elastasa tópica durante 3-5 minutos, en comparación con 15 minutos de exposición a CaCl 2. En segundo lugar, la dilatación aórtica ocurre en 2 semanas, en comparación con 16 semanas en el modelo CaCl 2. Por último, nuestro modelo produce consistentemente aneurismas de aproximadamente 100% de dilatación, en comparación con las dilataciones aórticas de 20-30% producidas por la aplicación CaCl2 (que no pueden considerarse verdaderamente aneurismas como se definen como un aumento de la aórtica diámetro >50%). Existen otros modelos murinos no quirúrgicos de formación de aneurisma, como el ratón noqueador Apo E, que forman aneurismas robustos con infusión de angiotensina II. Sin embargo, estos ratones desarrollan aneurismas de la aorta torácica suprarrenal o ascendenteen lugar de aneurismas específicamente en la aorta torácica descendente 9,10.
La razón de este protocolo es tener una manera simple, económica y adecuada para estudiar dTAA en un modelo murino. El modelo de ratón proporciona una oportunidad única para utilizar muchos knockouts genéticos y celulares específicos que se han encontrado para ser impactantes en otras enfermedades vasculares. El uso de nuestro modelo TAA específico ha sido bien recibido y los experimentos que lo utilizan se han publicado en revistas de alto impacto11,12. Hasta este punto, el modelo se ha utilizado para investigar posibles tratamientos genéticos y farmacológicos que tuvieron un efecto significativo en los modelos de aneurisma de la aorta abdominal (AAA); sin embargo, a medida que nuestro laboratorio ha ampliado el uso del modelo dTAA, estamos encontrando objetivos únicos para la formación de dTAA que podrían ser utilizados como terapias dirigidas en seres humanos.
Este modelo es más adecuado para laboratorios que tienen capacidades microquirúrgicas murinas. Aunque es técnicamente difícil, puede ser ejecutado consistentemente incluso por investigadores sin experiencia quirúrgica previa. Para un investigador sin experiencia quirúrgica murina, el modelo se puede dominar en aproximadamente 20 sesiones operativas (o aproximadamente 50 ratones). Para el investigador con experiencia quirúrgica previa, el modelo se puede dominar en 5 sesiones operativas (aproximadamente 20 ratones). Creemos que con un vídeo de alta calidad, el tiempo de dominio se puede reducir aún más. Después de la competencia, el procedimiento se puede completar en 35 minutos para la cirugía, y 20 minutos para la cosecha terminal. Los cirujanos de nuestro laboratorio pueden completar entre 10 y 12 cirugías completas por día, con una tasa de mortalidad operativa del 5-10%. La causa más común de mortalidad es la lesión pulmonar al entrar en el pecho, toxicidad anestésica o desgarro de la aorta durante la disección. Además de la investigación dTAA, este modelo también sirve como una guía para un acceso seguro y fácil a la aorta torácica y al hilum pulmonar para los investigadores que estudian otras intervenciones en el pecho.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:761px;" width="760">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Angiocatheter (22G)</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:167px;">Used for ET Tube</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Dumont Tweezers; Pattern #7 x2</td>
			<td style="width:191px;">Roboz</td>
			<td style="width:161px;">RS-4982</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Graefe Tissue Forceps</td>
			<td style="width:191px;">Roboz</td>
			<td style="width:161px;">RS-5158</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Harms Forceps x2</td>
			<td style="width:191px;">Roboz</td>
			<td style="width:161px;">RS-5097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Intracardiac Needle Holder; Extra Delicate; Carbide Jaws; 7&#34; Length</td>
			<td style="width:191px;">Roboz</td>
			<td style="width:161px;">RS-7800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;KL 1500 LED Light Source</td>
			<td style="width:191px;">Leica</td>
			<td style="width:161px;">150-400</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">&#160;M205A Dissction Microscope</td>
			<td style="width:191px;">Leica</td>
			<td style="width:161px;">CH 94-35</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Iris Scissors, 11cm, Tungsten Carbide</td>
			<td style="width:191px;">World Precision Instruments</td>
			<td style="width:161px;">500216-G</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Metal Clip board</td>
			<td style="width:191px;"></td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:167px;">Use with the Mouse Retractor Set&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Mouse Retractor Set</td>
			<td style="width:191px;">Kent</td>
			<td style="width:161px;">SURGI-5001</td>
			<td style="width:167px;">Need 2 short and 1 tall fixators</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:243px;">Mouse Ventilator MiniVent Type 845, 115 V, Power Supply with US Connector</td>
			<td style="width:191px;">Harvard Apparatus</td>
			<td style="width:161px;">73-0043</td>
			<td style="width:167px;">MiniVent Ventilator for Mice (Model 845), Single Animal, Volume Controlled</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:191px;">Elastase from porcine pancreas</td>
			<td style="width:161px;">E0258-50MG</td>
			<td style="width:167px;">Can be purchased in various size bottles</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:243px;">Small Vessel Cauterizer Kit</td>
			<td style="width:191px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:161px;">18000-00</td>
			<td style="width:167px;">Recommend using rechargable AA batteries</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:243px;">Spring Scissors, 10.5cm</td>
			<td style="width:191px;">World Precision Instruments</td>
			<td align="right" style="width:161px;">14127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Steril Swabs (Sponges)</td>
			<td style="width:191px;">Sugi</td>
			<td align="right" style="width:161px;">31603</td>
			<td style="width:167px;">Can be cut to size</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Surgi Suite Surgical Platform</td>
			<td style="width:191px;">Kent</td>
			<td style="width:161px;"></td>
			<td style="width:167px;">Attach to clip board&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:243px;">Tech IV Isoflurane Vap</td>
			<td style="width:191px;">Jorgensen&#160;Laboratories&#160;</td>
			<td style="width:161px;">J0561A</td>
			<td style="width:167px;">Anesthesia vaporizer&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

murine surgical model of topical elastase induced descending thoracic aortic aneurysm

Según el Centro para el Control de Enfermedades, los aneurismas aórticos (AA) fueron considerados una de las principales causas de muerte en todas las razas y ambos sexos de 1999 a 2016. Se forma un aneurisma como resultado del debilitamiento progresivo y la dilatación eventual de la aorta, que puede romperse o desgarrarse una vez que alcanza un diámetro crítico. Los aneurismas de la aorta descendente en el pecho, llamados aneurismas de la aorta torácica descendente (dTAA), conforman una gran proporción de casos de aneurisma en los Estados Unidos. La ruptura dTAA no contenida es casi universalmente letal, y la reparación electiva tiene una alta tasa de morbilidad y mortalidad. El propósito de nuestro modelo es estudiar dTAA específicamente, dilucidar la fisiopatología de dTAA y buscar dianas moleculares para detener el crecimiento o reducir el tamaño de dTAA. Al tener un modelo murino para estudiar la patología torácica con precisión, se pueden desarrollar terapias dirigidas para probar específicamente la dTAA. El método se basa en la colocación de la elastasa pancreática porcina (EPP) directamente en la pared aórtica murinosexterna después de la exposición quirúrgica. Esto crea una reacción destructiva e inflamatoria, que debilita la pared aórtica y permite la formación de aneurisma durante semanas o meses. Aunque los modelos murinos poseen limitaciones, nuestro modelo dTAA produce aneurismas robustos de tamaño predecible. Además, este modelo se puede utilizar para probar objetivos genéticos y farmacéuticos que pueden detener el crecimiento de dTAA o prevenir la ruptura. En pacientes humanos, intervenciones como estas podrían ayudar a evitar la ruptura del aneurisma y la difícil intervención quirúrgica.

La aplicación de nuestro protocolo da como resultado un dTAA robusto en ratones en comparación con los controles salinos. Los TAA desarrollados tienen forma fusiforme y se producen únicamente en la parte tratada de la aorta (Figura1 y Figura 2)11. La Figura 2 muestra un ejemplo de una medición de micrometría de vídeo en la cosecha de tejidos. Usando la Ecuación 1, la dilatación aórtica es 130% en est...

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Murine Surgical Model of Topical Elastase Induced Descending Thoracic Aortic Aneurysm

Describimos un protocolo quirúrgico para inducir consistentemente aneurismas de la aorta torácica descendentes robustos en ratones. El procedimiento consiste en la toracotomía izquierda, la exposición a la aorta torácica y la colocación de una esponja empapada en elastasa pancreática porcina en la pared aórtica.

Modelo Quirúrgico Murino de Aneurisma aórtico torácico descendente fortuito tópico

According to the Center for Disease Control, aortic aneurysms (AAs) were considered a leading cause of death in all races and both sexes from 1999-2016. ...

Este protocolo es capaz de producir aneurismas aórticos torácicos robustos de tamaño y ubicación constantes en ratones y sirve como guía para un acceso seguro al pecho murino. Este protocolo es un método sencillo y consistente para producir aneurismas de la aorta torácica en ratones durante una cantidad razonable de tiempo en comparación con otros modelos. Después de confirmar un nivel adecuado de sedación en un ratón de seis machos de ocho a 10 semanas de edad, coloque el ratón en la posición de decúbito lateral derecho y pegue el brazo derecho rostralmente para que la pata delantera esté alineada con la nariz.Tire de la cola caudalmente para crear una línea de tensión entre el brazo derecho y la cola, produciendo la extensión de la columna vertebral, y pegue la pierna izquierda en su posición natural. A continuación, pegue el brazo izquierdo ventralmente sobre la gasa enrollada. Antes de comenzar el procedimiento, utilice pinzas para afeitar el flanco izquierdo desde el hombro izquierdo hasta el abdomen izquierdo.Utilice un aplicador con punta de algodón para cepillar la primera solución de betadyne, luego 70% de etanol sobre el sitio quirúrgico. Cuando la piel esté seca, coloque una cortina estéril sobre el animal. Haz una incisión lateral de dos centímetros en el punto medio del hemotórax y usa electrocauterización manual para dividir las capas musculares hasta que las costillas sean visibles.Bajo aumento de 10 a 15x, cauterizar directamente una porción de dos milímetros entre las costillas y utilizar un aplicador de punta de algodón fino humedecido con solución salina en el espacio de las costillas con el fin de diseccionar en el espacio pleural a través de la porción cauterizada. Coloca una esponja mojada con solución salina, de tres por dos milímetros en el tórax para ayudar a colapsar el pulmón. Luego, usa tijeras para ensanchar la toracotomía hasta que el diafragma sea visible ventralmente y la incisión esté a varios milímetros de distancia de los músculos paraspinos dorsalmente.Para exponer la aorta, coloque los retractores de las costillas en la incisión de toracotomía y retire cuidadosamente la esponja de la superficie del pulmón. Cubre el pulmón con una esponja de seis por cuatro milímetros humedecida con los extremos apuntando rostral y caudalmente y coloca un retractor pulmonar ancho y plano en la esponja. Luego, deslice suavemente el retractor ventralmente hasta que la aorta torácica descendente esté expuesta y use el número siete fórceps para diseccionar una sección de aproximadamente cinco milímetros del tejido conectivo y la grasa de la aorta.Para aplicar la elastasa, primero, utilice una micropipeta para saturar una esponja de 0,5 por un milímetro con 12 microlitros de elastasa pancreática porcina y coloque la esponja sobre la superficie expuesta de la aorta. Después de tres a cinco minutos, usa el número siete fórceps para extraer la esponja de elastasa y extraer el retractor pulmonar. Irrigar la cavidad torácica con aproximadamente la mitad de un mililitro de solución salina estéril.Retire la esponja pulmonar y utilice una gasa enrollada de dos por dos pulgadas para absorber el riego salino restante. Retire los retractores de las costillas y deponga las costillas con tres suturas interrumpidas de seis ohes no absorbibles, atando un nudo suelto en cada sutura sin atar las suturas hacia abajo. Después de replantear el pulmón, ata las suturas y reaproxima las capas musculares con una sutura trenzada absorbible de cinco oh.Cierre la piel con suturas no absorbibles de cinco a 10 de cinco oh interrumpidas. Luego, monitoree al animal hasta su completa reclinencia. En el punto final experimental apropiado, utilice tijeras para incitar la piel mediamente desde el flanco izquierdo hasta el abdomen central, teniendo cuidado de no entrar en el peritoneo.Incitar la piel desde el flanco dorsal izquierdo rostralmente hasta el hombro izquierdo y hacer una incisión en un ángulo de 90 grados a través de la axila hasta el esternón. Usando cautería, diseccione el colgajo de la piel hacia el aspecto ventral del ratón para exponer el hemotórax izquierdo y use tijeras para entrar en el abdomen a lo largo del margen costal izquierdo desde la dirección ventral a dorsal para exponer la parte inferior del diafragma izquierdo. Si el borde lateral del diafragma no se abre, incíme el diafragma en su borde más lateral.Colocando la punta del cauterme en este agujero, cauterizar el diafragma desde el margen costal hasta el proceso de xifoide y utilizar un aplicador húmedo, punta fina de algodón con puntas finas para liberar suavemente el pulmón de cualquier adherencia a la pared torácica. Mientras se asegura de que el pulmón está fuera del camino, utilice la electrocauterización para cortar a través de las costillas y la pared torácica desde el margen costal hasta la primera costilla, dorsal a la línea media axilar, pero al menos dos milímetros de la aorta. Corte a lo largo del margen superior de la primera costilla y refleje la caja torácica ventralmente para exponer el hemotórax.Coloque los retractores en el pulmón y tire mediamente. Coloque un retractor o una gasa mojada con solución salina en el diafragma y dibuje caudal para exponer la mayor cantidad posible de la aorta. Utilice un aplicador seco con punta de algodón para eliminar cualquier adherencia del aneurisma de la aorta y un segmento distal no afectado y utilice la micrometría de vídeo para medir el diámetro del segmento de control no afectado y la porción más ancha del aneurisma tratado con la elastasa.Para cosechar la aorta, agarre el recipiente con daños fórceps sólo distal al segmento tratado y utilice tijeras para cortar distal a los fórceps. Diseccione la aorta de la columna vertebral y corte el vaso proximal al segmento tratado para extraer el tejido aneurisma. A continuación, utilizando una jeringa de tuberculina y una aguja, lave el lumen aórtico con solución salina y procese la muestra de acuerdo con el análisis experimental descendente planificado.Los aneurismas torácicos desarrollados como fusiformes en forma y se producen sólo en la porción tratada en la aorta. En esta medición representativa de la micrometría de vídeo, se determinó que la dilatación aórtica era del 130% en la cosecha de tejido. De hecho, mientras que los ratones tratados con el tipo de elastasa presentan un aumento significativo en la dilatación aórtica en los días tres, siete, 14 y 21 post-tratamiento con la dilatación máxima observada en el día 14 en comparación con el control de ratones de tipo salvaje.El análisis histológico revela que los aneurismas de tipo salvaje tienen fibras de elastina delgadas y fragmentadas. También hay menos tinción de células musculares lisas con un aumento en el macrófago y la expresión de una beta entrelukin. El pulmón murino es extremadamente delicado, y la lesión suele ser mortal.Tenga el máximo cuidado con la entrada inicial en el pecho y sólo manipule el pulmón con esponjas húmedas con solución salina. Este modelo ha ayudado a dilucidar el papel de la interluquina one-beta y la interluquina seis en la patogénesis de los aneurismas de la aorta torácica descendente y cómo su bloqueo podría facilitar el manejo no quirúrgico de estos aneurismas.

Research

JoVE Journal

Medicine

A New Murine Model of Endovascular Aortic Aneurysm Repair

Un modelo murino Nueva endovascular de aneurismas aórticos

Endovascular aneurysm exclusion is a validated technique to prevent aneurysm rupture. Long-term results highlight technique limitations and new aspects of ...

Investigación

Medicina

Reproducable Paraplegia by Thoracic Aortic Occlusion in a Murine Model of Spinal Cord Ischemia-reperfusion

Paraplejia reproducible por la oclusión de la aorta torácica en un modelo murino de la médula espinal por isquemia-reperfusión

Background
Lower extremity paralysis continues to complicate aortic interventions. The lack of understanding of the underlying pathology has hindered ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Un modelo murino de isquemia-reperfusión miocárdica lesión a través de la ligadura de la arteria descendente anterior

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Surgical Models of Gastroesophageal Reflux with Mice

Modelos quirúrgicos de reflujo gastroesofágico con ratones

Multiple surgical procedures have been reported to induce gastroesophageal reflux in animals. Herein, we report three surgical models with mice aiming to ...

Murine Left Anterior Descending (LAD) Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Murine Left Anterior Descending LAD Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Murino descendente anterior (LAD) ligadura de la arteria coronaria: un modelo mejorado y simplificado para el infarto de miocardio

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by ...

Creation of a Rodent Model of Abdominal Aortic Aneurysm by Blocking Adventitial Vasa Vasorum Perfusion

Creación de un modelo de roedor del Aneurysm aórtico Abdominal bloqueando Adventitial de la Vasa Vasorum de la perfusión

The adventitial vasa vasorum (VV) provides oxygen and nourishment to the aortic wall. Hypoxia in the aortic wall can cause enlarged abdominal aortic ...

Standardized Technique of Aortic Valve Re-implantation for Valve-sparing Aortic Root Replacement

Técnica estandarizada de nueva implantación de válvula aórtica para conservadora de válvula aórtica de la raíz recambio

Despite the obvious advantages of the preservation of a normal aortic valve during aortic root replacement, the complexity of valve sparing procedures ...

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of &#946;-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Quantitative Micro-CT Analysis of Aortopathy in a Mouse Model of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-aminopropionitrile-induced Aortic Aneurysm and Dissection

Análisis de Micro-CT cuantitativa de Aortopathy en un modelo murino de disección y aneurisma de la aorta inducida por β-oxidasa

Aortic aneurysm and dissection is associated with significant morbidity and mortality in the population and can be highly lethal. While animal models of ...

Ultrasound Imaging of the Thoracic and Abdominal Aorta in Mice to Determine Aneurysm Dimensions

Imágenes por ultrasonido de la Aorta torácica y Abdominal en ratones para determinar dimensiones de aneurisma

Contemporary high-resolution ultrasound instruments have sufficient resolution to facilitate the measurement of mouse aortas. These instruments have been ...

Murine Myocardial Infarction Model using Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery

Modelo de infarto de miocardio murino usando ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior izquierda

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine ...