Name: characterizing individual protein aggregates by infrared nanospectroscopy and atomic force microscopy
Uploaded: 2019-09-12T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Characterizing Individual Protein Aggregates by Infrared Nanospectroscopy and Atomic Force Microscopy at JoVE.com

Forfatterne takker Swiss National Foundation for Science (SNF) for den finansielle støtte (tilskudsnummer P2ELP2_162116 og P300P2_171219), Darwin College, Erasmus + program for den finansielle støtte (tilskudsnummer 2018-1-LT01-KA103-046719 -15400-P3) og forskning, som fører til disse resultater, har modtaget støtte fra Det Europæiske Forskningsråd under eu's syvende rammeprogram (FP7/2007-2013) gennem EFR'S Grant Fysprot (aftalenummer 337969), Newman Foundation (T.P.J.K.) og Cambridge Center for Misfoldnings sygdomme (C.G., M.V. og T.P.J.K.).

1. aggregerings analyser på fluorescens plade læsere
Bemærk: den protokol, der er beskrevet her, er et eksempel på, hvordan man studerer aggregeringen af ethvert protein eller peptid med kemiske kinetik. Især beskriver det en optimeret protokol til at studere aggregeringen af Aβ 42 peptid, som er involveret i udbrud og progression af Alzheimers sygdom58,59. En lignende protokol kan justeres og vedtages i retning af at studere aggre...

Det første kritiske trin i denne protokol er fremstilling af monomere proteiner, såsom i tilfælde af Aβ 42 opløsning beskrevet i trin 1,1 og 1,2. Det er vigtigt at indlede aggregerings processen fra en meget ren, monomerisk løsning, da tilstedeværelsen af oligomer eller aggregerede arter kan resultere i ringe reproducerbarhed af aggregerings kinetikken58og inducere artefakter i AFM- målinger (f. eks. vil fibrillar arter være tydelige i de indledende faser af aggregeringen), hvilket kan f?...

Over 40.000.000 mennesker på verdensplan er i øjeblikket ramt af neurodegenerative lidelser, såsom Alzheimers (AD)1 og PARKINSONS (PD)2 sygdomme. Mere generelt er mere end 50 patologier forbundet på molekylær niveau med protein misfoldning og aggregering, en proces, der fører til spredning af uopløselige fibrillar protein aggregater, kendt som amyloid indskud3, 4. den molekylære oprindelse af neurodegeneration og dens forbindelser med protein konformationelle ændringer af proteiner, som fører til amyloid dannelse, er dog fortsat uklar, i vid grad på grund af det høje niveau af heterogenitet, forbigående natur og nanoskala dimensioner af de patologiske aggregater4,5.
Meget vellykkede undersøgelser af proteinstrukturer i de sidste mange årtier har været baseret bredt på brugen af bulk metoder, herunder røntgenkrystallografi, Cryo-elektronmikroskopi og nuklear magnetisk resonansspektroskopi5, 6 , 7 , 8 , 9. inden for denne klasse af teknikker, infrarød (IR) spektroskopi er dukket op som et følsomt analytisk værktøj til at afdække de kemiske egenskaber af biologiske systemer såsom proteiner8. INFRARØDE metoder gør det muligt at kvantificere protein sekundære og kvaternære strukturelle ændringer under deres misfoldning og sammenlægning. Desuden, for yderligere at dechifrere på mikroskopisk niveau de mekanistiske detaljer, der er involveret i den komplekse frie energi landskaber af protein i løbet af deres sammenlægning, et stort fremskridt har været udviklingen af kemiske kinetik værktøjer til at udvide til komplekse selv montage veje, herunder amyloid fibriller dannelse5,6,7,10,11,12. Bulk-spektroskopiske metoder giver dog kun gennemsnitlige oplysninger om det heterogene ensemble af arter, der findes i opløsningen eller er involveret i specifikke mikroskopiske trin, hvilket gør undersøgelsen af de biofysiske egenskaber af individuelle aggregerede arter udfordrende på nanoskala niveau13,14.
Flere mikroskopi teknikker med evnen til at betjene på skalaer mindre end diffraktion grænse for lys er dukket op i de sidste årtier. Denne klasse af metoder omfatter elektronmikroskopi (EM) og atomkraften mikroskopi (AFM). Mens scanning elektronmikroskopi (SEM) og transmission elektronmikroskopi (TEM) giver to-dimensionelle (2D) billeder af en prøve, AFM er dukket op i de sidste årtier som en kraftfuld og alsidig teknik til at studere tredimensionelle (3D) morfologier, som samt de nanomekaniske egenskaber ved en prøve med sub-nanometer opløsning13,14,15,16,17,18,19, 20 , 21 , 22 , 23 , 24 , 25 , 26 , 27. rationalet bag studiet af protein aggregering via AFM er, at denne fremgangsmåde gør det muligt at efterforske morfologien af de enkelte arter, der findes i løsning13,14,16, 17,19,20,21,25,27,28,29,30, 31,32,33,34,35,36,37. Navnlig ved at overvåge stikprøven som en funktion af tid, giver AFM mulighed for at efterforske udviklingen i morfologien af arterne i prøven, hvilket gør det muligt at følge og visualisere vejene for amyloid dannelse23, 25,38,39,40,41,42. Desuden gør AFM det muligt at kvantificere strukturelle parametre såsom tværsnits højder og længder af de enkelte arter, som findes i opløsning13,19,30,31 ,32,33,34,35,36,37,40,43, 44 , 45 , 46 , 47 , 48. studiet af en enkelt biopysisk egenskab, såsom morfologi, er imidlertid ofte ikke tilstrækkeligt til at studere heterogene og komplekse biologiske systemer. AFM, SEM eller TEM Imaging metoder alene ikke umiddelbart afslører de kemiske egenskaber af heterogene arter af amyloid aggregater i nanoskala.
Der er for nylig foretaget et stort fremskridt i analysen af heterogene biologiske prøver i denne størrelsesorden med udvikling og anvendelse inden for protein aggregering af infrarød nanospektroskopi (AFM-IR)24,26, 38,42,49,50,51,52. Denne innovative metode udnytter kombinationen af den rumlige opløsning af AFM (~ 1 − 10 nm) med den kemiske analyse effekt af IR. AFM-IR-teknikken er baseret på målingen af den fototermiske inducerede resonans effekt, der drives af en IR-Laser, og på målingen af den termiske udvidelse af prøven under undersøgelse af AFM-spidsen. Prøven kan belyses af IR-laseren direkte fra toppen eller fra bunden i total intern refleksion, på samme måde som i konventionel infrarød spektroskopi24,42,52,53 . IR laseren kan pulseres med typiske frekvenser i rækkefølgen af hundredvis af kilohertz (1 − 1000 kHz) og tunet over et bredt spektralområde, typisk mellem 1000 − 3300 cm-1. Selvom laserkilden dækker et område med en diameter på ~ 30 μm, bestemmes den rumlige opløsning af AFM-IR-teknikken nominelt af AFM-spids diameteren, som registrerer systemets lokale termiske ekspansion. AFM-IR er velegnet til at studere biologiske prøver, fordi IR-signalet er proportionalt med deres tykkelse op til 1 − 1,5 μm, og den resulterende IR-spektre er generelt i enighed med den tilsvarende ftir-transmission Spectra13,54 ,55. Af denne grund kan der let anvendes etablerede analysemetoder i spektroskopi, såsom undersøgelse af kemiske forskydninger, ændring af båndform og afspænding ved anden derivat analyse52. Samlet set muliggør AFM-IR samtidig erhvervelse af en lang række morfologiske, mekaniske og kemiske egenskaber af en prøve i nanoskalaen ved at kombinere den rumlige opløsning af AFM med den kemiske anerkendelses effekt af IR-spektroskopi.
Her illustrerer vi en protokol for karakterisering af processen med protein aggregering, der udnytter kombinationen af in vitro fluorescens assays, høj opløsning AFM-billeddannelse og nanoskala AFM-IR. Denne kombinerede tilgang har allerede udmærket sig ved at give detaljerede resultater med hensyn til at studere de kemiske og strukturelle egenskaber af individuelle mikro-dråber dannet af protein aggregater, i studiet af flydende-flydende protein faseadskillelse, og i undersøgelse af heterogenitet og biofysiske egenskaber af individuelle aggregerede arter i nanoskala23,26,38,45,50,53, 56af57.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>AFM-IR system</td>
			<td>Anasys Instruments</td>
			<td>nanoIR 2 or 3</td>
			<td>Systems to measure thermal expansion in contact and resonance mode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 96-well Half Area Black/Clear Bottom Polystyrene NBS Microplate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Microplate Aluminium Sealing Tape</td>
			<td>Corning</td>
			<td>6570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double Sided Adhesive Discs</td>
			<td>AGAR Scientific</td>
			<td>AGG3347N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FLUOstar Omega</td>
			<td>BMG Labtech</td>
			<td>415-101</td>
			<td>Platereader</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mica Disc 10mm V1</td>
			<td>AGAR Scientific</td>
			<td>AGF7013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Park NX10 AFM system</td>
			<td>Park Systems</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Atomic Force Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platypus Ultra-Flat Gold Chips</td>
			<td>Platypus Technologies</td>
			<td>AU.1000.SWTSG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PPP-NCHR-10 cantilevers</td>
			<td>Park Systems</td>
			<td>PPP-NCHR-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein LowBind Tubes, 2.0mL</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30108132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon gold coated cantilevers</td>
			<td>Anasys Instruments</td>
			<td>PR-EX-nIR2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPM Specimen Discs 12mm</td>
			<td>AGAR Scientific</td>
			<td>AGF7001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

characterizing individual protein aggregates by infrared nanospectroscopy and atomic force microscopy

Fænomenet protein fejl foldning og aggregering resulterer i dannelsen af meget heterogene protein aggregater, som er forbundet med neurodegenerative lidelser som Alzheimers og Parkinsons sygdomme. Især lavmolekylære aggregater, amyloid oligomerer, har vist sig at besidde generiske cytotoksiske egenskaber og er impliceret som neurotoksiner i mange former for demens. Vi illustrerer brugen af metoder baseret på atomkraften mikroskopi (AFM) til at løse den udfordrende opgave at karakterisere de morfologiske, strukturelle og kemiske egenskaber af disse aggregater, som er vanskelige at studere ved hjælp af konventionelle strukturelle metoder eller bulk biopysiske metoder på grund af deres heterogenitet og forbigående karakter. Scanning sonde mikroskopi tilgange er nu i stand til at undersøge morfologien af amyloid aggregater med sub-nanometer opløsning. Vi viser her, at infrarød (IR) nanospektroskopi (AFM-IR), som samtidig udnytter den høje opløsning af AFM og den kemiske anerkendelse magt IR spektroskopi, kan gå videre og gøre det muligt karakterisering af de strukturelle egenskaber af individuelle protein aggregater, og dermed give indsigt i aggregerings mekanismerne. Da den tilgang, vi beskriver, også kan anvendes på undersøgelser af interaktioner mellem protein samlinger med små molekyler og antistoffer, kan den levere grundlæggende oplysninger til udvikling af nye terapeutiske forbindelser til diagnosticering eller behandling af neurodegenerative lidelser.

Et repræsentativt tidsforløb for Aβ 42-aggregeringen, som målt ved ThT-fluorescens analysen, er vist i figur 1. Aggregerings processen er almindeligvis karakteriseret ved en sigmoidal kurve, hvor en lag fase er oprindeligt observeret, og efterfølges af en stejl vækstfase, før kurven når et plateau, når en ligevægt Steady State er nået6,7 , 58. det er vigtigt at sikre, at en optimeret aggr...

Watch this Scientific Journal Video about Characterizing Individual Protein Aggregates by Infrared Nanospectroscopy and Atomic Force Microscopy at JoVE.com

Characterizing Individual Protein Aggregates by Infrared Nanospectroscopy and Atomic Force Microscopy

Vi beskriver anvendelsen af infrarød nanospektroskopi og høj opløsning atomkraft mikroskopi at visualisere processen med protein selvsamling i oligomer aggregater og amyloid fibrils, som er tæt forbundet med debut og udvikling af en lang række humane neurodegenerative lidelser.

Karakterisering af individuelle protein aggregater ved infrarød Nanospektroskopi og atomkraften mikroskopi

The phenomenon of protein misfolding and aggregation results in the formation of highly heterogeneous protein aggregates, which are associated with ...

Metoder baseret på atomare kraftmikroskopi gør det muligt at karakterisere biomolekylære processer i nanoskala med morfologisk kemisk eller strukturel opløsning, hvilket endelig åbner et nyt frontvindue for observation af biologi. Enkeltmolekyle metoder gør det muligt sondering meget heterogene systemer, en funktion, som er særlig relevant for at forstå protein aggregering. Ved at kombinere enkelte molekyler med tilbage tilgange, kan vi få grundlæggende oplysninger om adfærd proteiner, deres forbindelser med sygdomme hos mennesker og design farmakologiske interventioner, som kan blive en succes.Desuden kan denne metode med held anvendes til at undersøge biomaterialers kemiske og strukturelle egenskaber til levering af lægemidler, anvendelser og andre bioteknologiske formål. Det kan være udfordrende i første omgang at indstille de korrekte AFM parametre for høj opløsning, og det er nemt at oprette din AFM, mens måling din fibrillar aggregater. 30 minutter før AFM-billeddannelsen skal du tænde for AFM-systemet og klikke på opsætning og sonde.Klik på næste i sondeskiftevinduet for at forberede Z-fokusfasen. Sluk for AFM-strålekontakten, hvis den er tændt, og lås svalehalelåsene op. Afbryd hovedet fra systemet, og klik derefter på næste i sondeskiftevinduet.Monter AFM cantilever på sondeholderen. Tilslut hovedet til systemet og lås svalehalelåsene. Tænd for AFM laserstrålen kontakten og i sonden skifte vindue, skal du klikke næste.I pop up-vinduet skal du klikke på nej, hvis den udkragede type ikke blev ændret, og juster de optiske justeringsknapper for at finde den udkragede. Juster fokus på cantilever og klik næste. Klik på ja i pop op-vinduet, hvis der er fokus på den udkragede.Brug detektionslaserstråleknapperne til at placere laserstrålen for enden af cantilever. Brug de afbøjet laserstråleknapper til at maksimere det samlede signal målt med de fire kvadrantfotodiode til mindst én volt. Klik på næste og luk i sondeskiftevinduet.Efter at have ventet 15 minutter for cantilever at nå termisk stabilitet, justere placeringen af den afbøjede laserstråle på positionen følsomme foto diode, hvis det er nødvendigt. Klik på NCM sweep, vælg den ønskede amplitude af svingning, klik brug fase og klik auto. Tune cantilever tæt på det maksimale af sin første gratis resonans af svingning til ca 300 kilohertz for en cantilever med en fjederkonstant på 40 newton per meter.Prøven anbringes på prøveholderen. Klik på scanningsområdet, og angiv opløsningen til mellem 256 gange 256 og 1024 gange 1024 pixel, og angiv derefter scanningsstørrelsen og pixelnummeret. Indstil scanningshastigheden til 0,3 til en hertz for et scanningsområde på en efter en til fem gange fem mikrometer kvadreret.Fokuser den optiske visning på prøven, og klik ind for at nærme prøveoverfladen. Klik derefter på løft 100 mikrometer for at hæve AFM-spidsen 100 mikrometer over prøvens overflade, og klik på udvid på prøvens optiske billede. Klik på fokusfaselinjen for at fokusere visningen på prøvens overflade og bruge pilene til at flytte i området for eksemplet.Klik tilgang til at engagere overfladen og klik linje scanning for at kontrollere, om spidsen følger overfladen godt. Juster det indstillede punkt efter behov. Klik derefter på scanning for at begynde at billedre prøveoverfladen, og opretholde et konstant system af faseændring, der ikke overstiger delta 20 under billeddannelsen, for at undgå en stor billeddannelseskraft og for at opretholde overensstemmelsen mellem uafhængige prøver.For IR nanospektroskopi billeddannelse, 30 til 60 minutter før analysen, tænde AFM IR-systemet og IR laser. Åbn den indbyggede software til at styre instrumentet og klik fil og nye til at åbne en ny nano IR-fil. Klik initialisere for at starte AFM IR-systemet og åbne instrumentdækslet.Monter en silikoneguldbelagt sonde med en nominel radius på 30 nanometer og en fjederkonstant på 0,2 newton pr. meter på AFM IR-systemet for at måle prøven i kontakttilstand. Klik på belastning i AFM-sondesektionen og derefter. Brug fokus på sonde pile til at fokusere kameraet på cantilever og bruge spidsen til trådkors til at placere trådkorset i slutningen af cantilever.Drej knapperne styre placeringen af detektionslaseren til at placere laseren i slutningen af cantilever. Drej laserknapperne for at registrere og maksimere summen målt ved hjælp af den fire kvadrantfotodiode til en værdi, der er større end tre volt. Drej afbøjningsknappen for at justere den udkrøjede afbøjning til minus en volt og klik derefter.Luk derefter instrumentets dæksel. Brug fokus på sondepile til at fokusere kameraet på prøven og spidsen til trådkorspile for at bevæge sig i stikprøvens interesseområde. Klik på næste og engagere.I mikroskopvinduet skal du vælge højde for morfologi, amplitude to for IR-absorptionen og PLL-frekvensen for at kortlægge spidsen for at prøve kontaktresonans. I AFM-scanningssektionen skal du indstille parametrene som vist for AFM-billeddannelsen og klikke på scanning for at få et morfologikort. Når morfologi kortlægningen er færdig, skal du i mikroskopvinduet klikke på højdekortet for at placere sonden øverst på et aggregat.Klik på Start IR i afsnittet nano-infrarøde oplysninger for at belyse prøven med infrarød laser. Hvis du vil fokusere den infrarøde laser på udkrævesen, skal du klikke på Optimere og indtaste 1655 centimeter for bølgetaler. Klik på tilføj og scan for at bestemme den iR laser position og klik på opdatering og okay for at justere sin position med cantilever.I det generelle afsnit skal du angive et bølgetal, hvor der forventes en høj absorbans i det relative felt, og deaktivere indstillingen for båndpassfilteret. Klik på Start IR, og kontroller derefter måleraflæsningen og FFT for det udkragede svar. I FFT-vinduet skal du flytte den grønne markør for at læse den udkrævendes resonansfrekvens.En typisk værdi af FFT af resonans af cantilevers er omkring 200 kilohertz. Angiv den genererede resonansfrekvensværdi i den generelle sektion i frekvenscenterfeltet, og brug et frekvensvindue på 50 kilohertz. Klik laser puls tune vindue for at vælge resonans forbedret tilstand og indstille en puls på 222 kilohertz, en melodi rækkevidde på 50 kilohertz og en laser told cyklus på 5%Klik erhverve at feje pulsen på laseren.Brug markøren til at indstille laserpulsen til frekvensen af den mekaniske reaktion af den termiske udvidelse af prøven, der absorberer IR-lyset. Vælg derefter faselåst løkke for at overvåge kontaktransen mellem prøven og spidsen, og klik på nul. For andre kemiske egenskaber ved nanoskalaen skal kontaktresonansen spores under erhvervelsen af spektre for at sikre, at prøvespektret ikke påvirkes af overophedning og blødgøring.Vælg aktivér for at spore eksemplet for at tippe kontaktens resonans og vælge en integreret gevinst på 0,5 og en proportional gevinst på 10 og derefter klikke på OK. I vinduet Optimer skal du klikke på bølgelængden og scanne for at finde IR-laseren i mindst tre bølgetal svarende til prøvens større absorbansbånd og i mindst ét bølgetal for hver chip i laseren. Klik på værktøjer, IR baggrundskalibrering og nye, og indstil bølgetal til mellem 1200 og 1800 centimeter. Indstil baggrundene til gennemsnittet til en, arbejdscyklussen på 5% og fejehastigheden til 100 centimeter kvadratisk.Klik erhverve at måle IR laser baggrund for normalisering af den målte nano skala lokaliserede spektre, gemme filen og lukke vinduet. I IR-spektreindstillingerne skal du vælge en IR-spektrumopløsning mellem en og fire centimeter og et antal co-gennemsnit på mindst 64 gange. Klik derefter erhverve at måle en nano skala lokaliseret IR spektrum i proteinområdet.Hvis du vil anskaffe et nanoskala-løst kemikaliekort, skal du vælge 1655 centimeter og IR-billeddannelse og klikke på scanning i AFM-scanningsvinduet. Når tilknytningen er fuldført, skal du gemme målingerne. Brug derefter den indbyggede AFM billedbehandling software til at analysere de erhvervede kort over morfologi, kontakt resonans og kemi og nano skala lokaliseret spektre.Det er et kritisk skridt til at opnå en meget ren monomerisk opløsning, da tilstedeværelsen af aggregerede arter kan resultere i dårlig reproducerbarhed af kinetik og indføre artefakter i dine målinger. En grundlæggende faktor for en vellykket undersøgelse af biologiske prøver, som har høj heterogenitet, er den korrekte position af faste substrater. Microfluidic spray deposition kan udnyttes i stedet for manuel en for at bevare prøven arkitektur og heterogenitet.Disse metoder baner vejen for optrævling af den kemiske struktur og egenskaber af de enkelte biomolekyler og deres interaktioner i fysiologiske og indfødte flydende miljø.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Enrichment of Detergent-insoluble Protein Aggregates from Human Postmortem Brain

Berigelse af Detergent-uopløselige Protein aggregater fra Postmortem menneskehjerne

In this study, we describe an abbreviated single-step fractionation protocol for the enrichment of detergent-insoluble protein aggregates from human ...

Protein Film Infrared Electrochemistry Demonstrated for Study of H2 Oxidation by a [NiFe] Hydrogenase

Protein Film Infrared Electrochemistry Demonstrated for Study of H2 Oxidation by a [NiFe] Hydrogenase

Protein Film infrarød elektrokemi demonstrerede for undersøgelse af H2 Oxidation af en [NiFe] Hydrogenase

Understanding the chemistry of redox proteins demands methods that provide precise control over redox centers within the protein. The technique of protein ...

Force Spectroscopy of Single Protein Molecules Using an Atomic Force Microscope

Kraft spektroskopi af enkelt proteinmolekyler ved hjælp af en Atomic Force mikroskop

The determination of the folding process of proteins from their amino acid sequence to their native 3D structure is an important problem in biology. ...

DNA Polymerase Activity Assay Using Near-infrared Fluorescent Labeled DNA Visualized by Acrylamide Gel Electrophoresis

DNA Polymerase aktivitet Assay ved hjælp af nær-infrarødt fluorescerende mærket DNA visualiseret af acrylamid Gel elektroforese

For any enzyme, robust, quantitative methods are required for characterization of both native and engineered enzymes. For DNA polymerases, DNA synthesis ...

Covalent Immobilization of Proteins for the Single Molecule Force Spectroscopy

Kovalente immobilisering af proteiner for enkelt molekyle kraft spektroskopi

In recent years, atomic force microscopy (AFM) based single molecule force spectroscopy (SMFS) extended our understanding of molecular properties and ...

Analysis of &#946;-Amyloid-induced Abnormalities on Fibrin Clot Structure by Spectroscopy and Scanning Electron Microscopy

Analysis of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-Amyloid-induced Abnormalities on Fibrin Clot Structure by Spectroscopy and Scanning Electron Microscopy

Analyse af β-Amyloid-induceret afvigelser Fibrin blodprop strukturen af spektroskopi og Scanning elektronmikroskopi

This article presents methods for generating in vitro fibrin clots and analyzing the effect of beta-amyloid (A&#946;) protein on clot formation and ...

High Sensitivity Measurement of Transcription Factor-DNA Binding Affinities by Competitive Titration Using Fluorescence Microscopy

Høj følsomhed måling af transskription faktor-DNA bindende tilhørsforhold ved konkurrencedygtige titrering med Fluorescens mikroskopi

Accurate quantification of transcription factor (TF)-DNA interactions is essential for understanding the regulation of gene expression. Since existing ...

Probing The Structure And Dynamics Of Nucleosomes Using Atomic Force Microscopy Imaging

Sondering struktur og dynamik af Nucleosomes ved hjælp af Atomic Force mikroskopi Imaging

Chromatin, which is a long chain of nucleosome subunits, is a dynamic system that allows for such critical processes as DNA replication and transcription ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

Analyse af proteinfoldning, Transport og nedbrydning i levende celler af radioaktivt puls Chase

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...