Name: characterizing individual protein aggregates by infrared nanospectroscopy and atomic force microscopy
Uploaded: 2019-09-12T15:00:00
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저자는 재정 지원 (보조금 번호 P2ELP2_162116 및 P300P2_171219), 금융 지원을위한 다윈 대학, 에라스무스 + 프로그램 (보조금 번호 2018-1-LT01-KA103-KA103-046719-15400-P3)에 대한 스위스 국립 과학 재단 (SNF)에 감사드립니다 이러한 결과로 이어지는 연구는 ERC 보조금 PhysProt (계약 번호 337969), 뉴먼 재단 (T.P.J.K.) 및 유럽 연합 (EU)의 일곱 번째 프레임 워크 프로그램 (FP7 / 2007-2013)에 따라 유럽 연구위원회로부터 자금을 받았다 잘못 접는 질병을 위한 캠브리지 센터 (C.G., M.V., 및 T.P.J.K.).

1. 형광 판 판독기에 대한 집계 어설션
참고: 여기에 설명된 프로토콜은 화학 역학에 의한 임의의 단백질 또는 펩티드의 응집을 연구하는 방법의 예이다. 특히, 알츠하이머병58,59의발병 및 진행에 관여하는 Aβ42 펩티드의 응집을 연구하기 위한 최적화된 프로토콜을 설명한다. 유사한 프로토콜은 임의의 단백질 또는 펩티드의 응집을 ?...

이 프로토콜의 제1 중요한 단계는 단계 1.1 및 1.2에 기재된 Aβ42 용액의 경우와 같은 단일성 단백질의 제조이다. 고도로 순수한 단일성 용액에서 응집 과정을 시작하는 것이 필수적입니다, 올리고머 또는 응집 종의 존재는 응집 역학의 가난한 재현성 귀착될 수 있기 때문에58,및 AFM에 있는 유물을 유도하기 위하여 측정 (예를 들어, 섬유종은 집계의 초기 단계에서 분명할 것이며, 이...

전 세계적으로 4천만 명 이상이 현재 알츠하이머(AD)1및 파킨슨병(PD)2질환과 같은 신경퇴행성 질환의 영향을 받고 있습니다. 더 일반적으로, 50개 이상의 병리학은 단백질 오측 및 응집과 분자 수준에서 연관되며, 아밀로이드 침전물로 알려진 불용성 섬유소 단백질 응집체의 증식을 유도하는과정3, 4. 신경 변성의 분자 기원과 아밀로이드 형성으로 이어지는 단백질의 단백질 형태 변화와의 연관성은 이질성, 일시적 성질 및 나노 스케일의 높은 수준 때문에 많은 부분에서 불분명하게 남아 있습니다. 병리학 적 응집체 의 크기4,5.
지난 수십 년 동안 단백질 구조에 대한 매우 성공적인 조사는 X 선 결정학, 극저온 전자 현미경 및 핵 자기 공명 분광법을 포함한 벌크 방법의 사용에 널리 기반을 두고 있습니다5, 6개 , 7명 , 8개 , 9. 이러한 종류의 기술 내에서 적외선 (IR) 분광법은 단백질8과같은 생물학적 시스템의 화학적 특성을 해명하는 민감한 분석 도구로 부상했습니다. IR 방법은 잘못 접고 응집하는 동안 단백질 이차 및 사분의 구조적 변화의 정량화를 허용합니다. 또한, 미세한 수준에서 더 해독하기 위해 그들의 응집 동안 단백질의 복잡한 자유 에너지 풍경에 관여하는 기계적 세부 사항은, 복잡한 으로 확장하는 화학 역학 도구의 개발이 주요 진전되었습니다. 아밀로이드 섬유형성5,6,7,10,11,12를포함한 자가 조립 경로. 그러나 대량 분광 방법은 용액에 존재하거나 특정 현미경 단계에 관여하는 종의 이기종 앙상블에 대한 평균 정보만 제공하므로 개인의 생물 물리학적 특성에 대한 조사가 가능합니다. 나노 규모 수준에서 도전 집계 종13,14.
빛의 회절 한계보다 작은 저울에서 작동 할 수있는 능력을 가진 여러 현미경 기술이 지난 수십 년 동안 등장했습니다. 방법의 이 부류는 전자 현미경 검사법 (EM) 및 원자력 현미경 검사법 (AFM)를 포함합니다. 주사 전자 현미경 (SEM) 및 전송 전자 현미경 검사법 (TEM)은 표본의 2 차원 (2D) 심상을 제공하는 동안, AFM은 3 차원 (3D) 형태를 연구하는 강력하고 다양한 기술로 지난 수십 년 동안 등장했습니다. 뿐만 아니라 하위 나노 미터 해상도13,14,15,16,17,18,19와샘플의 나노 기계적특성으로, 20개 , 21세 , 22세 , 23세 , 24세 , 25개 , 26세 , 27. AFM을 통한 단백질 응집을 연구하는 근거는 이 접근법이 용액13,14,16에존재하는 개별 종의 형태를 조사할 수 있다는 것입니다. 17,19,20,21,25 ,27,28,29,30, 31,32,33,34,35,36,37. 특히, 시료를 시간의 함수로 모니터링함으로써, AFM은 시료 내 종의 형태학적 진화에 대한 조사를 가능하게 하며, 이는 아밀로이드형성(23)의경로를 따르고 시각화할 수 있게한다. 25,38,39,40,41,42. 또한 AFM은 용액13,19,30,31에 존재하는 개별 종의 단면 높이 및 길이와 같은 구조적 파라미터의 정량화를 가능하게 합니다. ,32,33,34,35,36,37,40,43, 44세 , 45세 , 46세 , 47세 , 48. 그러나 형태학과 같은 단일 생물 물리학적 특성에 대한 연구는 종종 이기종적이고 복잡한 생물학적 체계를 연구할 때 충분하지 않다. AFM, SEM 또는 TEM 이미징 방법만으로는 나노 스케일에서 아밀로이드 응집체의 이질적인 종의 화학적 특성을 쉽게 드러내지 않습니다.
이 규모의 이질성 생물학적 시료의 분석을 위한 주요 진전은 최근 적외선 나노스펙트로스프로그(AFM-IR)24,26, 24, 26의단백질 응집 분야에 대한 개발 및 적용으로 이루어졌습니다. 38,42,49,50,51,52. 이 혁신적인 방법은 AFM(~1−10 nm)의 공간 분해능과 IR의 화학적 분석 능력을 결합합니다. AFM-IR 기술은 IR 레이저에 의해 구동되는 광열 유도 공진 효과의 측정및 AFM 팁에 의한 조사 중인 시료의 열 팽창 측정을 기반으로 합니다. 샘플은 기존의 적외선 분광법24,42,52,53과 마찬가지로 총 내부 반사에서 상부 또는 아래에서 직접 IR 레이저에 의해 조명 될 수 있습니다. . IR 레이저는 수백 킬로헤르츠(1-1000 kHz)의 순서로 일반적인 주파수로 펄스할 수 있으며 일반적으로 1000-3300cm-1사이의 넓은 스펙트럼 범위에서 튜닝될 수 있습니다. 레이저 소스가 ~ 30 μm 직경의 영역을 커버하지만, AFM-IR 기술의 공간 해상도는 시스템의 국부적 열 팽창을 감지하는 AFM 팁 직경에 의해 명목상으로 결정됩니다. AFM-IR은 IR 신호가 최대 1-1.5 μm의 두께에 비례하기 때문에 생물학적 샘플을 연구하는 데 적합하며, 생성된 IR 스펙트럼은 일반적으로 해당 FTIR 전송 스펙트럼13,54와 일치합니다. ,55. 이러한 이유로, 분광학에서 확립된 분석 방법은 제2 유도체분석에의한 화학적 변화, 대역 형상 변화 및 탈컨볼에 대한 연구와 같은 용이하게 적용될 수 있다. 전반적으로 AFM의 공간 분해능과 IR 분광법의 화학적 인식 력을 결합한 AFM-IR은 나노 스케일에서 시료의 다양한 형태학적, 기계적 및 화학적 특성을 동시에 수집할 수 있게 합니다.
여기서, 우리는 시험관 내 형광 분석법, 고해상도 AFM 이미징 및 나노 스케일 AFM-IR의 조합을 이용하는 단백질 응집 과정의 특성화를 위한 프로토콜을 설명한다. 이 결합된 접근법은 이미 단백질 응집체에 의해 형성된 개별 미세 방울의 화학적 및 구조적 특성을 연구하고, 액체-액체 단백질 상 분리에 대한 연구에서 상세한 결과를 제공하는 데 탁월했습니다. 나노 규모23,26,38,45,50,53에서개별 집계 종의 이질성 및 생물 물리학적 특성을 조사 56,57.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>AFM-IR system</td>
			<td>Anasys Instruments</td>
			<td>nanoIR 2 or 3</td>
			<td>Systems to measure thermal expansion in contact and resonance mode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 96-well Half Area Black/Clear Bottom Polystyrene NBS Microplate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Microplate Aluminium Sealing Tape</td>
			<td>Corning</td>
			<td>6570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double Sided Adhesive Discs</td>
			<td>AGAR Scientific</td>
			<td>AGG3347N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FLUOstar Omega</td>
			<td>BMG Labtech</td>
			<td>415-101</td>
			<td>Platereader</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mica Disc 10mm V1</td>
			<td>AGAR Scientific</td>
			<td>AGF7013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Park NX10 AFM system</td>
			<td>Park Systems</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Atomic Force Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platypus Ultra-Flat Gold Chips</td>
			<td>Platypus Technologies</td>
			<td>AU.1000.SWTSG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PPP-NCHR-10 cantilevers</td>
			<td>Park Systems</td>
			<td>PPP-NCHR-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein LowBind Tubes, 2.0mL</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30108132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon gold coated cantilevers</td>
			<td>Anasys Instruments</td>
			<td>PR-EX-nIR2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPM Specimen Discs 12mm</td>
			<td>AGAR Scientific</td>
			<td>AGF7001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

characterizing individual protein aggregates by infrared nanospectroscopy and atomic force microscopy

단백질 오접기 및 응집 현상은 알츠하이머병및 파킨슨 병과 같은 신경 퇴행성 조건과 관련된 고이질성 단백질 응집체의 형성을 초래합니다. 특히 낮은 분자량 응집체, 아밀로이드 올리고머는 일반적인 세포 독성 특성을 가지고 있는 것으로 나타났으며 많은 형태의 치매에서 신경 독소로 연루되어 있습니다. 우리는 기존의 구조적 을 사용하여 연구하기 어려운 이러한 응집체의 형태학적, 구조적 및 화학적 특성을 특성화하는 어려운 과제를 해결하기 위해 원자력 현미경 검사법 (AFM)을 기반으로하는 방법의 사용을 설명합니다. 이질성과 일시적인 성질 때문에 방법 또는 대량 생물 물리학적 방법. 스캐닝 프로브 현미경 접근법은 이제 나노미터 이하의 분해능으로 아밀로이드 응집체의 형태를 조사할 수 있습니다. 우리는 동시에 AFM의 높은 해상도와 IR 분광법의 화학 인식 능력을 악용 적외선 (IR) 나노 스펙트로스법 (AFM-IR)이 더 나아가 개인의 구조적 특성의 특성화를 가능하게 할 수 있음을 보여줍니다 따라서 응집 메커니즘에 대한 통찰력을 제공합니다. 우리가 설명하는 접근은 작은 분자 및 항체를 가진 단백질 집합의 상호 작용의 조사에또한 적용될 수 있기 때문에, 진단하거나 취급하기 위하여 새로운 치료 화합물을 개발하기 위하여 근본적인 정보를 제공할 수 있습니다 신경 퇴행성 질환.

ThT 형광 분석에 의해 측정된 Aβ42 응집의 대표적인 시간 과정은 도 1에도시되어 있다. 응집 과정은 일반적으로 시그모이드 곡선을 특징으로하며, 여기서 지연 단계가 처음에 관찰되고, 곡선이 평형 정상 상태에 도달하면 고원에 도달하기 전에 가파른 성장 단계가 뒤따릅니다6,7 , 58. 집계 프로세스<sup class=...

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Characterizing Individual Protein Aggregates by Infrared Nanospectroscopy and Atomic Force Microscopy

우리는 개시 및 발달과 밀접하게 연관되는 올리고머 응집체 및 아밀로이드 섬유로 단백질 자기 조립의 과정을 구상하기 위하여 적외선 나노 스펙트로스카 및 고해상도 원자력 현미경 검사법의 응용을 기술합니다 인간의 신경 퇴행성 질환의 넓은 범위의.

적외선 나노 스펙트로펙트 및 원자력 현미경으로 개별 단백질 응집체 특성화

The phenomenon of protein misfolding and aggregation results in the formation of highly heterogeneous protein aggregates, which are associated with ...

원자력 현미경 검사법을 기반으로 하는 방법은 형태학적 화학 또는 구조적 해상도로 나노 스케일에서 생체 분자 공정을 특성화할 수 있게 하고, 마침내 생물학에 대한 관찰의 새로운 전면 창을 열어주게 한다. 단일 분자 방법은 단백질 응집 이해에 특히 관련이 있는 고이질 시스템을 프로빙할 수 있게 합니다. 단일 분자와 백 접근법을 결합함으로써, 우리는 단백질의 행동, 인간 질병과의 링크 및 성공할 수 있는 약리학적 개입을 설계하는 근본적인 정보를 얻을 수 있습니다.더욱이, 이 방법은 약물 전달, 응용 프로그램 및 기타 생명 공학 목적을 위한 생체 재료의 화학 적 및 구조적 특성을 연구하기 위해 성공적으로 적용될 수 있다. 처음에는 고해상도에 대한 올바른 AFM 매개 변수를 설정하는 것이 어려울 수 있으며 세브릴라 집계를 측정하면서 AFM을 쉽게 설정할 수 있습니다. AFM 이미징 30분 전에 AFM 시스템을 켜고 설정 및 프로브를 클릭합니다.프로브 변경 창에서 다음을 클릭하여 Z 포커스 스테이지를 준비합니다. AFM 빔 스위치가 켜지면 끄고 도브테일 잠금의 잠금을 해제합니다. 시스템에서 헤드를 분리하고 프로브 변경 창에서 다음을 클릭합니다.프로브 홀더에 AFM 캔틸레버를 장착합니다. 헤드를 시스템에 연결하고 도브테일 잠금 장치를 잠급니다. AFM 레이저 빔 스위치를 켜고 프로브 변경 창에서 다음을 클릭합니다.팝업 창에서 캔틸레버 유형이 변경되지 않은 경우 아니오를 클릭하고 광학 정렬 노브를 조정하여 캔틸레버를 찾습니다. 칸틸레버에 초점을 조정하고 다음을 클릭합니다. 팝업 창에서 포커스가 캔틸레버에 있는 경우 예를 클릭합니다.검출 레이저 빔 노브를 사용하여 캔틸레버 끝에 레이저 빔을 배치합니다. 편향된 레이저 빔 노브를 사용하여 4개의 사분면 사진 다이오드에서 측정한 총 신호를 최대화하여 적어도 1볼트보다 큽으로써. 프로브 변경 창에서 다음을 클릭하고 닫습니다.캔틸레버가 열 안정성에 도달할 때까지 15분을 기다린 후 필요한 경우 민감한 사진 다이오드의 편향된 레이저 빔의 위치를 재조정합니다. NCM 스윕을 클릭하고, 진동의 원하는 진폭을 선택하고, 사용 단계를 클릭하고 자동을 클릭합니다. 캔틸레버를 최대 최대 300킬로헤르츠에 맞추어 캔틸레버에 미터당 40뉴턴의 봄 상수와 함께 조정합니다.샘플 홀더에 샘플을 배치합니다. 스캔 영역을 클릭하고 해상도를 256x24x 1024픽셀에서 1024픽셀로 설정한 다음 스캔 크기와 픽셀 번호를 설정합니다. 스캔 속도를 0.3내지 1헤르츠로 설정하여 1내지 5마이크로미터 제곱에 의해 1내지 5의 스캔 영역을 설정합니다.광학 뷰를 샘플에 집중하고 접근 방식을 클릭하여 샘플 표면에 접근합니다. 다음으로, 100 마이크로미터를 클릭하여 샘플 표면 위에 AFM 팁 100 마이크로미터를 올리고 시료의 광학 이미지를 클릭하여 클릭합니다. 포커스 스테이지 막대를 클릭하여 샘플 표면에 뷰를 집중하고 화살표를 사용하여 관심 샘플 영역으로 이동합니다.접근 방식을 클릭하여 서피스를 연결하고 줄 스캔을 클릭하여 팁이 표면을 잘 따르고 있는지 확인합니다. 필요에 따라 세트 점을 조정합니다. 그런 다음 검사를 클릭하여 샘플 표면을 이미징하기 시작하여 이미징 중에 델타 20을 초과하지 않는 상 변화의 일정한 정권을 유지하여 큰 이미징 힘을 피하고 독립적인 샘플 간의 일관성을 유지합니다.IR 나노스펙트로스내피카 이미징의 경우 분석 30~60분 전에 AFM IR 시스템과 IR 레이저를 켭니다. 내장 된 소프트웨어를 열어 계측기를 제어하고 파일을 클릭하고 새 나노 IR 파일을 엽니 다. 초기화를 클릭하여 AFM IR 시스템을 시작하고 계측기 커버를 엽니다.명목 반경 30나노미터의 실리콘 골드 코팅 프로브와 미터당 0.2 뉴턴의 스프링 상수를 AFM IR 시스템에 탑재하여 접촉 모드에서 샘플을 측정합니다. AFM 프로브 섹션 및 다음에서 부하를 클릭합니다. 프로브 화살표에 초점을 사용하여 캔틸레버에 카메라를 집중하고 팁을 사용하여 십자선을 사용하여 캔틸레버 끝에 십자선을 배치합니다.검출 레이저의 위치를 제어하는 노브를 회전하여 캔틸레버 끝에 레이저를 배치합니다. 레이저 노브를 회전시켜 4개의 사분면 사진 다이오드에 의해 측정된 합계를 3볼트보다 큰 값으로 감지하고 최대화합니다. 편향 노브를 회전하여 캔틸레버 편향을 뺀 1볼트로 조정한 다음을 클릭합니다.그런 다음 악기의 덮개를 닫습니다. 프로브 화살표에 초점을 맞추어 카메라를 샘플에 집중하고 팁은 샘플의 관심 영역에서 이동하는 십자선 화살표에 초점을 맞춥니다. 다음을 클릭하고 참여합니다.현미경 창에서, 형태에 대한 높이, IR 흡수에 대한 진폭 2 및 PLL 주파수를 선택하여 접촉 공명을 샘플링하는 팁을 매핑한다. AFM 검사 섹션에서 AFM 이미징에 대해 설명된 대로 매개 변수를 설정하고 스캔을 클릭하여 형태 지도를 획득합니다. 형태 매핑이 완료되면 현미경 창에서 높이 맵을 클릭하여 프로브를 하나의 집계 상단에 배치합니다.나노 IR 섹션에서 IR을 클릭하여 IR 레이저로 샘플을 조명합니다. 캔틸레버에 적외선 레이저를 집중하려면 최적화를 클릭하고 파수에 대해 1655cm를 입력합니다. 추가 및 스캔을 클릭하여 IR 레이저 위치를 결정하고 업데이트를 클릭하고 캔틸레버와 위치를 정렬하려면 괜찮습니다.일반 섹션에서는 상대 필드의 높은 흡광도가 예상되는 파수를 입력하고 대역 패스 필터 옵션을 비활성화합니다. IR을 시작한 다음 미터 판독값과 캔틸레버 응답의 FFT를 확인합니다. FFT 창에서 녹색 커서를 이동하여 캔틸레버의 공진 빈도를 읽습니다.캔틸레버의 공명의 FFT의 전형적인 값은 약 200 킬로 헤르츠입니다. 주파수 중심 필드의 일반 섹션에서 생성된 공진 주파수 값을 입력하고 50킬로헤르츠의 주파수 창을 사용합니다. 레이저 펄스 조정 창을 클릭하여 공명 강화 모드를 선택하고 222 킬로헤르츠의 펄스 속도, 50 킬로헤르츠의 조정 범위 및 레이저 듀티 사이클을 설정하여 레이저의 펄스 속도를 쓸어 버리도록 합니다.커서를 사용하여 레이저 펄스를 IR 광을 흡수하는 시료의 열 팽창의 기계적 반응의 주파수로 조정한다. 그런 다음 단계 잠긴 루프를 선택하여 샘플과 팁 사이의 접촉 공진을 모니터링하고 0을 클릭합니다. 나노 스케일의 다른 화학 적 특성의 경우, 샘플 스펙트럼이 과열 및 연화에 의해 영향을받지 않도록 스펙트럼 수집 중에 접촉 공명을 추적합니다.샘플을 추적하여 접촉 공진을 팁하고 0.5의 일체형 게인과 10의 비례 게인을 선택한 다음 확인을 클릭합니다. 최적화 창에서, 파장 및 스캔을 클릭하여 샘플의 주요 흡광도 대역에 대응하는 적어도 3개의 파수에 대한 IR 레이저를 찾고 레이저의 각 칩에 대해 적어도 하나의 파수에 대해 서있다. 도구, IR 배경 보정 및 새 를 클릭하고 파수를 1200~1800cm 사이로 설정합니다. 배경을 평균 1, 듀티 사이클 5%,스윕 속도를 100cm 제곱으로 설정합니다.획득을 클릭하여 측정된 나노 스케일 국소화 스펙트럼의 정규화를 위해 IR 레이저 배경을 측정하고 파일을 저장하고 창을 닫습니다. IR 스펙트럼 설정에서 1~4센티미터 사이의 IR 스펙트럼 해상도와 최소 64배이상의 공동 평균수를 선택합니다. 그런 다음 획득을 클릭하여 단백질 범위에서 나노 스케일 국소화 된 IR 스펙트럼을 측정합니다.나노 스케일 해결 화학 지도를 획득하려면 1655cm 및 IR 이미징을 선택하고 AFM 스캔 창에서 스캔을 클릭합니다. 매핑이 완료되면 측정값을 저장합니다. 그런 다음 AFM 이미지 처리 소프트웨어에 내장된 것을 사용하여 획득한 형태지도, 접촉 공명 및 화학 및 나노 스케일 국산화 스펙트럼을 분석합니다.응집된 종의 존재로 인해 운동학의 재현성이 저하되고 측정에 유물을 도입할 수 있으므로 매우 순수한 단황 솔루션을 얻는 것이 중요한 단계입니다. 이질성이 높은 생물학적 샘플을 성공적으로 연구하는 근본적인 요소는 고체 기판의 위치를 올바른 것입니다. 미세 유체 분무 증착은 샘플 아키텍처와 이질성을 보존하기 위해 수동 분무 대신 악용될 수 있습니다.이러한 방법은 개별 생체 분자의 화학 구조와 특성및 생리학적 및 토착 액체 환경에서의 상호 작용을 해명하는 길을 열어줍니다.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Enrichment of Detergent-insoluble Protein Aggregates from Human Postmortem Brain

인간의 사후 뇌에서 세제 불용 성 단백질의 농축

In this study, we describe an abbreviated single-step fractionation protocol for the enrichment of detergent-insoluble protein aggregates from human ...

연구

생화학

Protein Film Infrared Electrochemistry Demonstrated for Study of H2 Oxidation by a [NiFe] Hydrogenase

Protein Film Infrared Electrochemistry Demonstrated for Study of H2 Oxidation by a [NiFe] Hydrogenase

단백질 영화 적외선 전기 화학 [NiFe] Hydrogenase에 의해 H2 산화의 연구에 대 한 설명

Understanding the chemistry of redox proteins demands methods that provide precise control over redox centers within the protein. The technique of protein ...

Force Spectroscopy of Single Protein Molecules Using an Atomic Force Microscope

원자 힘 현미경을 사용 하 여 단일 단백질 분자 힘 분광학

The determination of the folding process of proteins from their amino acid sequence to their native 3D structure is an important problem in biology. ...

DNA Polymerase Activity Assay Using Near-infrared Fluorescent Labeled DNA Visualized by Acrylamide Gel Electrophoresis

근 적외선 형광 레이블이 DNA 아크릴 아 미드 젤 전기 이동 법으로 시각을 사용 하 여 DNA 중 합 효소 활동 분석 결과

For any enzyme, robust, quantitative methods are required for characterization of both native and engineered enzymes. For DNA polymerases, DNA synthesis ...

Covalent Immobilization of Proteins for the Single Molecule Force Spectroscopy

단일 분자 힘 분광학에 대 한 단백질의 화학식 동원 정지

In recent years, atomic force microscopy (AFM) based single molecule force spectroscopy (SMFS) extended our understanding of molecular properties and ...

Analysis of &#946;-Amyloid-induced Abnormalities on Fibrin Clot Structure by Spectroscopy and Scanning Electron Microscopy

Analysis of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-Amyloid-induced Abnormalities on Fibrin Clot Structure by Spectroscopy and Scanning Electron Microscopy

분광학 그리고 스캐닝 전자 현미경 검사 법에 의해 섬유 소 혈전 구조에 β 아 밀 로이드 유도 비정상의 분석

This article presents methods for generating in vitro fibrin clots and analyzing the effect of beta-amyloid (A&#946;) protein on clot formation and ...

High Sensitivity Measurement of Transcription Factor-DNA Binding Affinities by Competitive Titration Using Fluorescence Microscopy

경쟁 적정 형광 현미경 검사 법을 사용 하 여 녹음 방송 요인 DNA 바인딩 선호도의 높은 감도 측정

Accurate quantification of transcription factor (TF)-DNA interactions is essential for understanding the regulation of gene expression. Since existing ...

Probing The Structure And Dynamics Of Nucleosomes Using Atomic Force Microscopy Imaging

Chromatin, which is a long chain of nucleosome subunits, is a dynamic system that allows for such critical processes as DNA replication and transcription ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

단백질 폴딩, 전송, 및 방사성 펄스 체이스 하 여 살아있는 세포의 저하의 분석

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...