Name: characterizing individual protein aggregates by infrared nanospectroscopy and atomic force microscopy
Uploaded: 2019-09-12T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Characterizing Individual Protein Aggregates by Infrared Nanospectroscopy and Atomic Force Microscopy at JoVE.com

Forfatterne takker Swiss National Foundation for Science (SNF) for økonomisk støtte (Grant nummer P2ELP2_162116 og P300P2_171219), Darwin College, Erasmus +-programmet for den økonomiske støtten (Grant nummer 2018-1-LT01-KA103-046719 -15400-P3) og forskning som fører til disse resultatene har fått støtte fra European Research Council under EUs syvende rammeprogram (FP7/2007-2013) gjennom ERC gi PhysProt (avtalenummer 337969), Newman Foundation (T.P.J.K.) og The Cambridge Centre for Misfolding sykdommer (C.G., M.V., og T.P.J.K.).

1. aggregering analyser på fluorescens plate lesere
Merk: protokollen beskrevet her er et eksempel på hvordan å studere aggregering av protein eller peptid av kjemiske Kinetics. Spesielt beskriver det en optimalisert protokoll for å studere aggregering av aβ 42 peptid, som er involvert i utbruddet og progresjon av Alzheimers sykdom58,59. En lignende protokoll kan justeres og vedtatt mot studere aggregering av protein eller peptid.</...

Det første kritiske trinnet i denne protokollen er utarbeidelse av monomere proteiner, slik som i tilfelle av Aβ 42 løsning beskrevet i trinn 1,1 og 1,2. Det er viktig å starte aggregering prosessen fra en svært ren, monomere løsning, som tilstedeværelsen av oligomer eller aggregerte arter kan føre til dårlig reproduserbarhet av aggregering Kinetics58, og indusere gjenstander i AFM målinger (f. eks, fibrillær arter vil være tydelig på de innledende stadier av aggregering), som kan fø...

Over 40 000 000 mennesker over hele verden er for tiden påvirket av nevrodegenerative lidelser, slik som Alzheimers (AD)1 og PARKINSONS (PD)2 sykdommer. Mer generelt er mer enn 50 patologi forbundet på molekylnivå med protein misfolding og aggregering, en prosess som fører til spredning av uløselig fibrillær protein aggregater, kjent som amyloid innskudd3, 4. den molekylære opprinnelsen til neurodegeneration og dens forbindelser med protein conformational endringer av proteiner som fører til amyloid dannelse, er imidlertid fortsatt uklart, i stor grad på grunn av det høye nivået av heterogenitet, forbigående natur og nanoskala dimensjoner av patologisk aggregater4,5.
Svært vellykkede undersøkelser av proteinstrukturer i de siste flere ti år har vært basert mye på bruk av bulk metoder, inkludert røntgen crystallography, mikroskopi og kjernefysisk magnetisk resonans spektroskopi5, 6 andre priser , 7 andre er , 8 på alle , 9. innenfor denne klassen av teknikker, infrarød (IR) spektroskopi har dukket opp som en følsom analytisk verktøy for å løse de kjemiske egenskapene til biologiske systemer som proteiner8. IR metoder tillate kvantifisering av protein sekundær og kvartær strukturelle endringer i løpet av deres misfolding og aggregering. I tillegg, for å ytterligere dechiffrere på mikroskopisk nivå mekanistisk detaljer involvert i komplekse gratis energi landskap protein under aggregering deres, en stor forhånd har vært utviklingen av kjemiske Kinetics verktøy for å utvide til komplekse selv montering trasé inkludert amyloid fibrils formasjon5,6,7,10,11,12. Men bulk spektroskopiske metoder gir bare gjennomsnittlig informasjon om den heterogene ensemble av arter til stede i løsning eller involvert i bestemte mikroskopiske skritt, og dermed rendering etterforskningen av Biofysiske egenskapene til individuelle aggregerte arter utfordrende på nanoskala nivå13,14.
Flere mikroskopi teknikker med evne til å operere på skalaer mindre enn den Diffraksjon grensen av lys har dukket opp i de siste ti årene. Denne klassen av metoder inkluderer elektron mikroskopi (EM) og Atomic Force mikroskopi (AFM). Mens skanning elektron mikroskopi (SEM) og overføring elektron mikroskopi (TEM) gir to-dimensjonale (2D) bilder av en prøve, har AFM dukket opp i de siste ti årene som en kraftfull og allsidig teknikk for å studere tredimensjonale (3D) morfologier, som vel som nanomekanikk egenskapene til en prøve med sub-nanometer oppløsning13,14,15,16,17,18,19, 20 priser og , 21 priser og , 22 av , 23 andre , 24 priser og , 25 priser og , 26 i , 27. begrunnelsen bak studere protein aggregering via AFM er at denne tilnærmingen gjør det mulig etterforskning av morfologi av enkelte arter til stede i løsning13,14,16, 17,19,20,21,25,27,28,29,30, 31,32,33,34,35,36,37. Spesielt ved å overvåke prøven som en funksjon av tid, kan AFM etterforskningen av utviklingen av morfologi av artene i prøven, noe som gjør det mulig å følge og visualisere trasé av amyloid formasjon23, 25,38,39,40,41,42. Videre gjør AFM kvantifisering av strukturelle parametre som tverrsnitt høyder og lengder av de enkelte artene som finnes i løsning13,19,30,31 ,32,33,34,35,36,37,40,43, 44 for alle , 45 for alle , 46 for alle , 47 for alle , 48. men studiet av en enkelt Biofysiske eiendom, for eksempel morfologi, er ofte ikke tilstrekkelig når man studerer heterogene og komplekse biologiske systemer. AFM, SEM eller TEM Imaging metoder alene ikke lett avsløre kjemiske egenskaper av heterogene arter av amyloid aggregater på nanoskala.
Et stort forskudd for analyse av heterogene biologiske prøver på denne skalaen har blitt gjort nylig med utvikling og anvendelse på feltet protein aggregering av infrarød nanospectroscopy (AFM-IR)24,26, 38,42,49,50,51,52. Denne innovative metoden utnytter kombinasjonen av romlig oppløsning av AFM (~ 1 − 10 NM) med den kjemiske analyse kraft av IR. Den AFM-IR teknikk er basert på måling av photothermal indusert resonans Effektdrevet av en IR laser, og på måling av termisk ekspansjon av prøven under etterforskning av AFM spissen. Prøven kan være opplyst av IR laser direkte fra toppen eller fra bunnen i total intern refleksjon, på samme måte som i konvensjonell infrarød spektroskopi24,42,52,53 . IR-laseren kan være pulserende med typiske frekvenser i rekkefølgen av hundrevis av kilohertz (1 − 1000 kHz) og innstilt over et bredt Spectral-område, vanligvis mellom 1000 − 3300 cm-1. Selv om laser kilden dekker et område på ~ 30 μm diameter, den romlige oppløsningen av AFM-IR teknikk bestemmes nominelt av AFM spissen diameter, som oppdager den lokale termiske utvidelsen av systemet. AFM-IR er godt egnet til å studere biologiske prøver fordi IR-signalet er proporsjonal med deres tykkelse opp til 1 − 1.5 μm, og den resulterende IR Spectra er generelt enige med den tilsvarende FTIR overføring Spectra13,54 ,55. Av denne grunn, etablerte metoder for analyse i spektroskopi kan lett anvendes, slik som studiet av kjemiske SKIFT, band form endring og de-convolution av andre derivater analyse52. Samlet kombinerer romlig oppløsning av AFM med kjemisk anerkjennelse makt IR spektroskopi, AFM-IR muliggjør samtidig oppkjøp av et bredt spekter av morfologiske, mekaniske og kjemiske egenskaper av en prøve på nanoskala.
Her illustrerer vi en protokoll for karakterisering av prosessen med protein aggregering som utnytter kombinasjonen av in vitro fluorescens analyser, høyoppløselig AFM Imaging og nanoskala AFM-IR. Denne kombinerte tilnærmingen har allerede utmerket seg i å gi detaljerte resultater i å studere de kjemiske og strukturelle egenskapene til individuelle mikro-dråper dannet av protein aggregater, i studiet av væske-flytende protein fase separasjon, og i gransker heterogenitet og Biofysiske egenskaper for individuelle aggregerte arter ved nanoskala23,26,38,45,50,53, 56,57.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>AFM-IR system</td>
			<td>Anasys Instruments</td>
			<td>nanoIR 2 or 3</td>
			<td>Systems to measure thermal expansion in contact and resonance mode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 96-well Half Area Black/Clear Bottom Polystyrene NBS Microplate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Microplate Aluminium Sealing Tape</td>
			<td>Corning</td>
			<td>6570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double Sided Adhesive Discs</td>
			<td>AGAR Scientific</td>
			<td>AGG3347N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FLUOstar Omega</td>
			<td>BMG Labtech</td>
			<td>415-101</td>
			<td>Platereader</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mica Disc 10mm V1</td>
			<td>AGAR Scientific</td>
			<td>AGF7013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Park NX10 AFM system</td>
			<td>Park Systems</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Atomic Force Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platypus Ultra-Flat Gold Chips</td>
			<td>Platypus Technologies</td>
			<td>AU.1000.SWTSG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PPP-NCHR-10 cantilevers</td>
			<td>Park Systems</td>
			<td>PPP-NCHR-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein LowBind Tubes, 2.0mL</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30108132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon gold coated cantilevers</td>
			<td>Anasys Instruments</td>
			<td>PR-EX-nIR2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPM Specimen Discs 12mm</td>
			<td>AGAR Scientific</td>
			<td>AGF7001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

characterizing individual protein aggregates by infrared nanospectroscopy and atomic force microscopy

Fenomenet protein misfolding og aggregering resulterer i dannelsen av svært heterogene protein aggregater, som er forbundet med nevrodegenerative forhold som Alzheimers og Parkinsons sykdommer. Spesielt lav molekylvekt aggregater, amyloid oligomers, har vist å ha generiske cytotoksisk egenskaper og er innblandet som nervegifter i mange former for demens. Vi illustrerer bruken av metoder basert på Atomic Force mikroskopi (AFM) for å ta opp den utfordrende oppgaven med å karakteriserer de morfologiske, strukturelle og kjemiske egenskapene til disse aggregater, som er vanskelig å studere ved hjelp av konvensjonelle strukturelle metoder eller bulk Biofysiske metoder på grunn av deres heterogenitet og forbigående natur. Skanning sonde mikroskopi tilnærminger er nå i stand til å undersøke morfologi av amyloid aggregater med sub-nanometer oppløsning. Vi viser her at infrarød (IR) nanospectroscopy (AFM-IR), som samtidig utnytter den høye oppløsningen av AFM og kjemisk anerkjennelse makt IR spektroskopi, kan gå videre og aktivere karakterisering av de strukturelle egenskapene til individuelle protein aggregater, og dermed gi innsikt i aggregering mekanismer. Siden tilnærmingen som vi beskriver kan brukes også til undersøkelser av interaksjoner av protein forsamlinger med små molekyler og antistoffer, kan det levere grunnleggende informasjon for å utvikle nye terapeutiske forbindelser å diagnostisere eller behandle nevrodegenerative lidelser.

En representativ tid løpet av Aβ 42 aggregering, målt ved ThT fluorescens analysen, er vist i figur 1. Aggregering prosessen er vanligvis preget av en sigmoidal kurve, der en lag fase er i utgangspunktet observert, og etterfølges av en bratt vekstfase, før kurven når et platå når en likevekt steady state er nådd6,7 , 58. det er viktig å sikre at en optimalisert aggregering protokollen bruk...

Watch this Scientific Journal Video about Characterizing Individual Protein Aggregates by Infrared Nanospectroscopy and Atomic Force Microscopy at JoVE.com

Characterizing Individual Protein Aggregates by Infrared Nanospectroscopy and Atomic Force Microscopy

Vi beskriver anvendelsen av infrarød nanospectroscopy og høyoppløselig Atomic Force mikroskopi å visualisere prosessen av protein selv-montering i oligomer aggregater og amyloid fibrils, som er nært knyttet til utbruddet og utvikling av et bredt spekter av menneskelige nevrodegenerative lidelser.

Karakteriserer individuelle protein aggregater av infrarød Nanospectroscopy og Atomic Force mikroskopi

The phenomenon of protein misfolding and aggregation results in the formation of highly heterogeneous protein aggregates, which are associated with ...

Metoder basert på mikroskopi for atomkraft gjør det mulig å karakterisere biomolekylære prosesser på nanoskalaen med morfologisk kjemisk eller strukturell oppløsning, og åpner til slutt et nytt frontvindu for observasjon om biologi. Enkeltmolekylmetoder muliggjør sondering av svært heterogene systemer, en funksjon som er spesielt relevant for å forstå proteinaggregasjon. Ved å kombinere enkeltmolekyler med tilbaketilnærminger, kan vi få grunnleggende informasjon om oppførselen til proteiner, deres forbindelser med menneskelig sykdom og design farmakologiske inngrep som kan lykkes.Videre kan denne metoden brukes til å studere de kjemiske og strukturelle egenskapene til biomaterialer for legemiddellevering, applikasjoner og andre bioteknologiske formål. Det kan være utfordrende i utgangspunktet å angi de riktige AFM-parametrene for høy oppløsning, og det er enkelt å sette opp AFM mens du måler de fibrillar aggregatene dine. 30 minutter før AFM-avbildningen, slå på AFM-systemet og klikk på konfigurering og sonde.I vinduet for endring av sonde klikker du ved siden av klargjøring av Z-fokusfasen. Slå av AFM-strålebryteren hvis den er på, og lås opp svalehalelåsene. Koble hodet fra systemet, og klikk neste i vinduet for sondebytte.Monter AFM-kantilmen på probeholderen. Koble hodet til systemet og lås svalehalelåsene. Slå på AFM laserstrålebryteren og klikk neste i vinduet for probebytte.I popup-vinduet klikker du nei hvis cantilever-typen ikke endret seg, og justerer de optiske justeringsknottene for å finne cantileveren. Juster fokuset på cantilever og klikk neste. I popup-vinduet klikker du ja hvis fokuset er på cantilever.Bruk deteksjonslaserstråleknottene til å plassere laserstrålen på enden av kantileveren. Bruk de avbøyde laserstråleknottene til å maksimere det totale signalet målt ved den fire kvadrantfotodioden til minst større enn ett volt. Klikk på neste og lukk i vinduet for endring av sonde.Etter å ha ventet 15 minutter for cantilever å nå termisk stabilitet, justere plasseringen av den avbøyde laserstrålen på posisjonen følsom fotodiode om nødvendig. Klikk NCM feie, velg ønsket amplitude av oscillasjon, klikk bruk fase og klikk automatisk. Tune cantilever nær det maksimale av sin første frie resonans av oscillasjon til ca 300 kilohertz for en cantilever med en fjær konstant på 40 newtons per meter.Plasser prøven på prøveholderen. Klikk skanneområdet, og angi oppløsningen til mellom 256 og 256 og 1024 og 1024 piksler, og angi deretter skannestørrelsen og pikselnummeret. Sett skannehastigheten til 0,3 til én hertz for et skanneområde på ett til fem av fem mikrometer kvadrert.Fokuser den optiske visningen på prøven og klikk tilnærming for å nærme seg prøveoverflaten. Deretter klikker du løft 100 mikrometer for å heve AFM-spissen 100 mikrometer over overflaten av prøven og klikker på utvid det optiske bildet av prøven. Klikk fokustrinnlinjen for å fokusere visningen på overflaten av prøven, og bruk pilene til å flytte i området for interesseutvalget.Klikk tilnærming for å aktivere overflaten og klikk linje skanning for å sjekke om spissen følger overflaten godt. Juster innstillingspunktet etter behov. Klikk deretter på skanning for å begynne å forestille seg prøveoverflaten, og opprettholde et konstant regime med faseendring som ikke overstiger delta 20 under bildet for å unngå en stor bildekraft og for å opprettholde konsistens mellom uavhengige prøver.For IR nanospektroskopi avbildning, 30 til 60 minutter før analysen, slå på AFM IR-systemet og IR-laseren. Åpne den innebygde programvaren for å styre instrumentet og klikk fil og ny for å åpne en ny nano IR fil. Klikk initialiser for å starte AFM IR-systemet og åpne instrumentdekselet.Monter en silikongullbelagt sonde med en nominell radius på 30 nanometer og en fjærkonstant på 0,2 newton per meter på AFM IR-systemet for å måle prøven i kontaktmodus. Klikk last inn i AFM-sondedelen og neste. Bruk fokus på sondepiler for å fokusere kameraet på cantilever og bruk spissen til trådkors til å plassere trådkorset på enden av cantilever.Drei knottene som styrer posisjonen til deteksjonslaseren for å plassere laseren på enden av kantileveren. Roter laserknottene for å oppdage og maksimere summen målt av den fire kvadrantfotodioden til en verdi som er større enn tre volt. Drei avbøyningsknappen for å justere cantilever-avbøyningen til minus ett volt og klikk neste.Lukk deretter dekselet på instrumentet. Bruk fokus på sondepiler til å fokusere kameraet på prøven og spissen til trådkorspilene for å bevege seg i området av interesse for prøven. Klikk neste og engasjere.I mikroskopvinduet velger du høyde for morfologi, amplitude to for IR-absorpsjonen og PLL-frekvensen for å kartlegge spissen for å prøve kontaktresonans. I AFM-skannedelen angir du parameterne som demonstrert for AFM-avbildningen, og klikker på skanning for å hente et morfologikart. Når morphology-tilordningen er ferdig, klikker du på høydekartet i mikroskopvinduet for å plassere sonden øverst på ett aggregat.I nano IR-delen klikker du på start IR for å belyse prøven med IR-laseren. For å fokusere den infrarøde laseren på cantilever, klikk optimalisere og angi 1655 centimeter for bølgenummeret. Klikk legg til og skann for å bestemme IR laser posisjon og klikk oppdater og greit å justere sin posisjon med cantilever.I den generelle delen angir du et bølgenummer som det forventes høy absorbans i det relative feltet for, og deaktiverer alternativet for båndpassfilter. Klikk start IR og kontroller deretter måleravlesningen og FFT-en til cantilever-svaret. I FFT-vinduet flytter du den grønne markøren for å lese resonansfrekvensen til kantileveren.En typisk verdi av FFT av resonansen til cantilevers er rundt 200 kilohertz. Angi den genererte resonansfrekvensverdien i den generelle delen i frekvenssenterfeltet, og bruk et frekvensvindu på 50 kilohertz. Klikk laser puls melodi vindu for å velge resonans forbedret modus og angi en puls på 222 kilohertz, en melodi rekkevidde på 50 kilohertz og en laser plikt syklus på 5%Klikk skaffe å feie pulsen på laseren.Bruk markøren til å justere laserpulsen til frekvensen av den mekaniske responsen til den termiske utvidelsen av prøven som absorberer IR-lyset. Velg deretter fase låst sløyfe for å overvåke kontaktresonansen mellom prøven og spissen og klikk null. For andre kjemiske egenskaper på nanoskalaen, spor kontaktresonansen under spektraoppkjøpet for å sikre at prøvespekteret ikke påvirkes av overoppheting og mykgjøring.Velg aktiver for å spore eksemplet for å tipse kontaktresonans og velge en integrert gevinst på 0,5 og en proporsjonal gevinst på 10, og klikk deretter OK. I optimaliseringsvinduet klikker du på bølgelengden og skanner for å finne IR-laseren i minst tre bølgenumre som tilsvarer store absorbansbånd i prøven og i minst ett bølgenummer for hver chip av laseren. Klikk verktøy, IR-bakgrunnskalibrering og ny, og sett bølgenumrene til mellom 1200 og 1800 centimeter. Sett bakgrunnene til gjennomsnitt til en, driftssyklusen på 5%og feiehastigheten til 100 centimeter kvadrert.Klikk på hent for å måle IR-laserbakgrunnen for normalisering av den målte nanoskalaen lokaliserte spektraen, lagre filen og lukke vinduet. I IR-spektrainnstillingene velger du en IR-spektrumoppløsning mellom én og fire centimeter og en rekke medgjennomsnitt på minst 64 ganger. Klikk deretter på acquire for å måle et nanoskala lokalisert IR-spektrum i proteinområdet.Hvis du vil anskaffe et nanoskala løst kjemisk kart, velger du 1655 centimeter og IR-bildebehandling og klikker på skanning i AFM-skannevinduet. Når tilordningen er fullført, lagrer du målingene. Bruk deretter den innebygde AFM-bildebehandlingsprogramvaren til å analysere de oppkjøpte kartene over morfologi, kontaktresonans og kjemi og nanoskala lokalisert spektra.Det er et kritisk skritt for å oppnå en svært ren monomersk løsning, da tilstedeværelsen av aggregerte arter kan resultere i dårlig reproduserbarhet av kinetikk og introdusere gjenstander i målingene dine. En grunnleggende faktor for vellykket studier av biologiske prøver som har høy heterogenitet er riktig posisjon av faste substrater. Mikrofluidisk spray deponering kan utnyttes i stedet for manuell en for å bevare prøvearkitektur og heterogenitet.Disse metodene baner vei for å avdekke den kjemiske strukturen og egenskapene til individuelle biomolekyler og deres interaksjoner i fysiologiske og innfødte flytende miljø.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Enrichment of Detergent-insoluble Protein Aggregates from Human Postmortem Brain

Anriking av vaskemiddel-uløselig Protein aggregater fra Postmortem hjernen

In this study, we describe an abbreviated single-step fractionation protocol for the enrichment of detergent-insoluble protein aggregates from human ...

Protein Film Infrared Electrochemistry Demonstrated for Study of H2 Oxidation by a [NiFe] Hydrogenase

Protein Film Infrared Electrochemistry Demonstrated for Study of H2 Oxidation by a [NiFe] Hydrogenase

Protein Film infrarød elektrokjemi demonstrert for studier av H2 oksidasjon av en [NiFe] Hydrogenase

Understanding the chemistry of redox proteins demands methods that provide precise control over redox centers within the protein. The technique of protein ...

Force Spectroscopy of Single Protein Molecules Using an Atomic Force Microscope

Tvinge spektroskopi enkelt Protein molekyler med en Atomic Force mikroskopet

The determination of the folding process of proteins from their amino acid sequence to their native 3D structure is an important problem in biology. ...

DNA Polymerase Activity Assay Using Near-infrared Fluorescent Labeled DNA Visualized by Acrylamide Gel Electrophoresis

DNA Polymerase aktivitet analysen med nær-infrarøde fluorescerende merket DNA visualisert ved akrylamid Gel geleelektroforese

For any enzyme, robust, quantitative methods are required for characterization of both native and engineered enzymes. For DNA polymerases, DNA synthesis ...

Covalent Immobilization of Proteins for the Single Molecule Force Spectroscopy

Kovalente immobilisering av proteiner for ett molekyl Force spektroskopi

In recent years, atomic force microscopy (AFM) based single molecule force spectroscopy (SMFS) extended our understanding of molecular properties and ...

Analysis of &#946;-Amyloid-induced Abnormalities on Fibrin Clot Structure by Spectroscopy and Scanning Electron Microscopy

Analysis of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-Amyloid-induced Abnormalities on Fibrin Clot Structure by Spectroscopy and Scanning Electron Microscopy

Analyse av β-Amyloid-indusert unormalt Fibrin Clot struktur av spektroskopi og skanning elektronmikroskop

This article presents methods for generating in vitro fibrin clots and analyzing the effect of beta-amyloid (A&#946;) protein on clot formation and ...

High Sensitivity Measurement of Transcription Factor-DNA Binding Affinities by Competitive Titration Using Fluorescence Microscopy

Høy følsomhet måling av transkripsjon faktor-DNA Binding slektskap av konkurransedyktige titrering bruker fluorescens mikroskopi

Accurate quantification of transcription factor (TF)-DNA interactions is essential for understanding the regulation of gene expression. Since existing ...

Probing The Structure And Dynamics Of Nucleosomes Using Atomic Force Microscopy Imaging

Verifiserer strukturen og dynamikken i Nucleosomes med Atomic Force mikroskopi Imaging

Chromatin, which is a long chain of nucleosome subunits, is a dynamic system that allows for such critical processes as DNA replication and transcription ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

Analyse av proteinfolding, Transport og nedbrytning i levende celler av radioaktivt puls Chase

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...