Name: characterizing individual protein aggregates by infrared nanospectroscopy and atomic force microscopy
Uploaded: 2019-09-12T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Characterizing Individual Protein Aggregates by Infrared Nanospectroscopy and Atomic Force Microscopy at JoVE.com

Författarna tackar schweiziska National Foundation for Science (SNF) för det ekonomiska stödet (Grant Number P2ELP2_162116 och P300P2_171219), Darwin College, Erasmus + program för ekonomiskt stöd (bidrags nummer 2018-1-beteckningen LT01-KA103-046719 -15400-P3) och forskning som leder till dessa resultat har fått bidrag från Europeiska forskningsrådet inom ramen för Europeiska unionens sjunde ramprogram (FP7/2007-2013) genom ERC Grant PhysProt (avtalsnummer 337969), Newman stiftelsen (T.P.J.K.) och Cambridge centrum för Felfällbara sjukdomar (C.G., M.V., och T.P.J.K.).

1. aggregering analyser på fluorescens plattan läsare
Anmärkning: det protokoll som beskrivs här är ett exempel på hur man studerar aggregering av något protein eller peptid genom kemisk kinetik. I synnerhet, det beskriver ett optimerat protokoll för att studera aggregering av Aβ 42 peptid, som är involverad i uppkomsten och utvecklingen av Alzheimers sjukdom58,59. Ett liknande protokoll kan justeras och antas för att studera ...

Det första kritiska steget i detta protokoll är beredningen av monomerproteiner, såsom i fallet med Aβ 42 lösning som beskrivs i steg 1,1 och 1,2. Det är viktigt att initiera aggregerings processen från en mycket ren, monomerlösning, eftersom närvaron av oligomeriska eller aggregerade arter kan resultera i dålig reproducerbarhet av aggregering kinetik58, och inducera artefakter i AFM mätningar (t. ex. fibrillarter kommer att vara uppenbara i inledningsskedet av aggregeringen), vilket ka...

Över 40 000 000 människor i världen är för närvarande drabbade av neurodegenerativa sjukdomar, såsom Alzheimers (AD)1 och Parkinsons (PD)2 sjukdomar. Mer allmänt, mer än 50 patologier är associerade på molekylär nivå med protein neurodegenerativa och aggregation, en process som leder till spridningen av olösliga fibrillär protein aggregat, känd som amyloid insättningar3, 4. den molekylära ursprunget till neurodegeneration och dess kopplingar till proteinöverensstämmande förändringar av proteiner som leder till amyloid bildas, dock fortfarande oklart, till stor del på grund av den höga graden av heterogenitet, övergående natur och nanoskala dimensionerar av de patologiska aggregaten4,5.
Mycket framgångsrika undersökningar av proteinstrukturer under de senaste decennierna har i stor utsträckning baserats på användningen av bulkmetoder, inklusive röntgenkristallografi, kryoelektronmikroskopi och kärnmagnetisk resonans-spektroskopi5, 6 , 7 , 8 , 9. inom denna klass av tekniker, infraröd (IR) spektroskopi har vuxit fram som ett känsligt analytiskt verktyg för att riva upp de kemiska egenskaperna hos biologiska system såsom proteiner8. IR-metoder möjliggör kvantifiering av protein sekundära och Kvartära strukturella förändringar under deras neurodegenerativa och aggregation. Dessutom, för att ytterligare dechiffrera på mikroskopisk nivå de mekanistiska detaljerna inblandade i den komplexa fria energilandskap av protein under sin aggregering, har ett stort förskott varit utvecklingen av kemisk kinetik verktyg för att utvidga till komplexa själv monterings vägar inklusive amyloid fibriller formation5,6,7,10,11,12. Bulkspektroskopiska metoder ger dock endast genomsnittlig information om den heterogena ensemble av arter som finns i lösningen eller som medverkar i specifika mikroskopiska steg, vilket gör utredningen av de biofysiska egenskaperna hos enskilda aggregerad art som är utmanande på nanoskalan13,14.
Flera mikroskopi tekniker med förmåga att driva på skalor mindre än diffraktion gränsen för ljus har uppstått under de senaste decennierna. Denna klass av metoder omfattar elektronmikroskopi (EM) och atomkraft mikroskopi (AFM). Medan scanning elektronmikroskopi (SEM) och transmissionselektronmikroskopi (TEM) ger tvådimensionella (2D) bilder av ett prov, har AFM vuxit fram under de senaste decennierna som en kraftfull och mångsidig teknik för att studera tredimensionella (3D) morfologier, som samt nanomekaniska egenskaper hos ett prov med subnanometerupplösning13,14,15,16,17,18,19, 20 , 21 , 22 , 23 , 24 , 25 , 26 , 27. logiken bakom att studera protein aggregering via AFM är att denna metod möjliggör utredning av morfologin hos enskilda arter som finns i lösning13,14,16, 17,19,20,21,25,27,28,29,30, 31,32,33,34,35,36,37. I synnerhet genom att övervaka provet som en funktion av tiden, möjliggör AFM utredning av utvecklingen av morfologin hos de arter som ingår i provet, vilket gör det möjligt att följa och visualisera vägar för amyloid formation23, 25,38,39,40,41,42. AFM möjliggör dessutom kvantifiering av strukturella parametrar såsom tvärsnitts höjder och längder för de enskilda arter som finns i lösning13,19,30,31 ,32,33,34,35,36,37,40,43, 44 , 45 , 46 , 47 , 48studiet av en enda biofysisk egenskap, såsom morfologi, är dock ofta inte tillräckligt när man studerar heterogena och komplexa biologiska system. AFM, SEM eller TEM avbildningsmetoder ensamt inte lätt avslöja de kemiska egenskaperna hos heterogena arter av amyloid aggregat i nanoskala.
Ett stort framsteg för analysen av heterogena biologiska prover på denna skala har nyligen gjorts med utveckling och tillämpning på området för protein aggregering av infraröd nanospektroskopi (AFM-IR)24,26, 38,42,49,50,51,52. Denna innovativa metod utnyttjar kombinationen av den rumsliga upplösningen av AFM (~ 1 − 10 nm) med den kemiska analys kraften hos IR. AFM-IR-tekniken baseras på mätningen av den fototermiska inducerade resonans effekten som drivs av en IR-laser, och på mätningen av den termiska expansionen av provet under utredning av AFM-spetsen. Provet kan belysas av IR-lasern direkt från toppen eller från botten i total inre reflektion, på samma sätt som i konventionell infraröd spektroskopi24,42,52,53 . IR-lasern kan pulsas med typiska frekvenser i storleksordningen hundratals kilohertz (1 − 1000 kHz) och stämmas över ett brett spektralområde, typiskt mellan 1000 − 3300 cm-1. Även om laserkällan täcker ett område på ~ 30 μm diameter, är den rumsliga upplösningen av AFM-IR-tekniken bestäms nominellt av AFM spets diameter, som detekterar den lokala termiska expansionen av systemet. AFM-IR lämpar sig väl för att studera biologiska prover eftersom IR-signalen är proportionell mot deras tjocklek upp till 1 − 1,5 μm, och de resulterande IR-spektra är i allmänhet överens med motsvarande FTIR transmissions Spectra13,54 ,55. Av denna anledning, etablerade metoder för analys i spektroskopi kan lätt tillämpas, såsom studier av kemiska förändringar, band formförändring och de-faltning av andra derivat analys52. Sammantaget kombinerar den rumsliga upplösningen av AFM med den kemiska erkännande kraften i IR-spektroskopi, AFM-IR möjliggör samtidig förvärv av ett brett spektrum av morfologiska, mekaniska och kemiska egenskaper hos ett prov i nanoskala.
Här illustrerar vi ett protokoll för karakterisering av processen för protein aggregation som utnyttjar kombinationen av in vitro-fluorescensanalyser, högupplöst AFM-avbildning och nanoskala AFM-IR. Detta kombinerade tillvägagångssätt har redan utmärkt sig för att ge detaljerade resultat i att studera kemiska och strukturella egenskaper hos enskilda mikro-droppar som bildas av protein aggregat, i studien av flytande-flytande protein fasseparation, och i utreda heterogenitet och biofysiska egenskaper hos enskilda aggregerade arter i nanoskalan23,26,38,45,50,53, 56,57.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>AFM-IR system</td>
			<td>Anasys Instruments</td>
			<td>nanoIR 2 or 3</td>
			<td>Systems to measure thermal expansion in contact and resonance mode</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 96-well Half Area Black/Clear Bottom Polystyrene NBS Microplate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3881</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Microplate Aluminium Sealing Tape</td>
			<td>Corning</td>
			<td>6570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double Sided Adhesive Discs</td>
			<td>AGAR Scientific</td>
			<td>AGG3347N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FLUOstar Omega</td>
			<td>BMG Labtech</td>
			<td>415-101</td>
			<td>Platereader</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mica Disc 10mm V1</td>
			<td>AGAR Scientific</td>
			<td>AGF7013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Park NX10 AFM system</td>
			<td>Park Systems</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Atomic Force Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platypus Ultra-Flat Gold Chips</td>
			<td>Platypus Technologies</td>
			<td>AU.1000.SWTSG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PPP-NCHR-10 cantilevers</td>
			<td>Park Systems</td>
			<td>PPP-NCHR-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein LowBind Tubes, 2.0mL</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30108132</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicon gold coated cantilevers</td>
			<td>Anasys Instruments</td>
			<td>PR-EX-nIR2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPM Specimen Discs 12mm</td>
			<td>AGAR Scientific</td>
			<td>AGF7001</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

characterizing individual protein aggregates by infrared nanospectroscopy and atomic force microscopy

Fenomenet med proteinförvrängning och aggregering resulterar i bildandet av mycket heterogena protein aggregat, som är förknippade med neurodegenerativa sjukdomar som Alzheimers och Parkinsons sjukdom. Särskilt låg molekylvikt aggregat, amyloid oligomerer, har visat sig ha generiska cytotoxiska egenskaper och är inblandade som neurotoxiner i många former av demens. Vi illustrerar användningen av metoder baserade på atomkraft mikroskopi (AFM) att ta itu med den utmanande uppgiften att karakterisera de morfologiska, strukturella och kemiska egenskaperna hos dessa aggregat, som är svåra att studera med hjälp av konventionella strukturella metoder eller bulkbiofysiska metoder på grund av deras heterogenitet och övergående natur. Scanning sond mikroskopi metoder nu kan undersöka morfologi av amyloid aggregat med sub-nanometer upplösning. Vi visar här att infraröd (IR) nanospektroskopi (AFM-IR), som samtidigt utnyttjar den höga upplösningen av AFM och den kemiska erkännande kraften i IR-spektroskopi, kan gå vidare och möjliggöra karakterisering av de strukturella egenskaperna hos enskilda protein aggregat, och därmed ge insikter i agg regeringsmekanismerna. Eftersom den metod som vi beskriver kan tillämpas även på utredningar av samspelet mellan protein sammansättningar med små molekyler och antikroppar, det kan leverera grundläggande information för att utveckla nya terapeutiska föreningar för att diagnostisera eller behandla neurodegenerativa sjukdomar.

En representativ tidsperiod för Aβ 42-aggregation, mätt med ThT-fluorescensanalysen, visas i figur 1. Aggregations processen kännetecknas vanligen av en sigmodala kurva, där en eftersläpning fas initialt observeras, och följs av en brant tillväxtfas, innan kurvan når en platå när en jämvikt steady state uppnås6,7 , 58. det är viktigt att se till att ett optimerat agg regeringsprotokoll...

Watch this Scientific Journal Video about Characterizing Individual Protein Aggregates by Infrared Nanospectroscopy and Atomic Force Microscopy at JoVE.com

Characterizing Individual Protein Aggregates by Infrared Nanospectroscopy and Atomic Force Microscopy

Vi beskriver tillämpningen av infraröd nanospektroskopi och högupplöst atomstyrkmikroskopi för att visualisera processen för självmontering av proteiner i oligomeraggregat och amyloid fibriller, som är nära förknippad med uppkomsten och utvecklingen av ett brett spektrum av mänskliga neurodegenerativa sjukdomar.

Karakterisera enskilda protein aggregat med infraröd Nanospektroskopi och atomkraft mikroskopi

The phenomenon of protein misfolding and aggregation results in the formation of highly heterogeneous protein aggregates, which are associated with ...

Metoder baserade på atomkraftmikroskopi gör det möjligt att karakterisera biomolekylära processer på nanoskalan med morfologisk kemisk eller strukturell upplösning, och öppnar slutligen ett nytt framfönster för observation på biologi. Enkelmolekylmetoder möjliggör sondering av mycket heterogena system, en funktion som är särskilt relevant för att förstå proteinaggregering. Genom att kombinera enstaka molekyler med tillbaka metoder, kan vi få grundläggande information om beteendet hos proteiner, deras kopplingar till mänskliga sjukdomar och design farmakologiska insatser som kan lyckas.Vidare kan denna metod med framgång tillämpas för att studera biomaterialens kemiska och strukturella egenskaper för läkemedelsleverans, tillämpningar och andra biotekniska ändamål. Det kan vara utmanande inledningsvis att ställa in rätt AFM parametrar för hög upplösning och det är lätt att ställa in din AFM samtidigt mäta din fibrillar aggregat. 30 minuter före AFM-avbildningen ska du slå på AFM-systemet och klicka på set up and probe.I fönstret för avsökningsbyte klickar du på bredvid för att förbereda Z-fokusstadiet. Stäng av AFM-strålbrytaren om den är på och lås upp dovetaillåsen. Koppla bort huvudet från systemet och i sonden byta fönster, klicka på nästa.Montera AFM-cantilever på sondhållaren. Anslut huvudet till systemet och lås dusvanslåsen. Slå på AFM laserstrålen switch och i sonden byta fönster, klicka på nästa.I fönstret pop up, klicka nej om cantilever typ inte ändras och justera den optiska justeringen rattar för att hitta cantilever. Justera fokus på cantilever och klicka på nästa. I pop up-fönstret klickar du på ja om fokus ligger på den cantilever.Använd detektionslaserstrålens rattar för att placera laserstrålen i änden av den lättredvaro. Använd de avlänkade laserstråleratterna för att maximera den totala signalen som mättes av den fyra kvadrantens fotodiod till minst större än en volt. Klicka på nästa och stäng i fönstret för avsökningsändring.Efter att ha väntat 15 minuter för cantilever att nå termisk stabilitet, justera positionen för den avböjda laserstrålen på positionen känsliga fotodioden om det behövs. Klicka NCM svep, välj önskad amplitud av svängning, klicka på Använd fas och klicka auto. Stämma cantilever nära det maximala av sin första fria resonans av svängning till cirka 300 kilohertz för en cantilever med en fjäderkonstant på 40 newton per meter.Placera provet på provhållaren. Klicka på skanningsområde och ställ in upplösningen på mellan 256 med 256 och 1024 med 1024 pixlar och ställ sedan in skanningsstorleken och pixelnumret. Ställ in skanningshastigheten till 0,3 på en hertz för en skanningsyta på en och en och fem av fem mikrometer i kvadrat.Fokusera den optiska vyn på provet och klicka tillvägagångssätt för att närma sig provytan. Klicka därefter på Lyft 100 mikrometer för att höja AFM-spetsen 100 mikrometer ovanför provets yta och klicka på Expand på den optiska bilden av provet. Klicka på fokusscenraden om du vill fokusera vyn på ytan på provet och använd pilarna för att flytta i området för urvalet av intresse.Klicka tillvägagångssätt för att engagera ytan och klicka på linje scan för att kontrollera om spetsen följer ytan väl. Justera börsen vid behov. Klicka sedan på skanna för att börja avbilda provytan, upprätthålla en konstant regim av fas förändring inte överstiger Delta 20 under bildbehandling för att undvika en stor bildframställning kraft och att upprätthålla överensstämmelse mellan oberoende prover.För IR nanospektroskop avbildning, 30 till 60 minuter före analysen, slå på AFM IR-systemet och IR-lasern. Öppna den inbyggda programvara för att styra instrumentet och klicka på fil och nya för att öppna en ny nano IR-fil. Klicka på initialize för att starta AFM IR-systemet och öppna instrumentluckan.Montera en silikonguldbelagd sond med en nominell radie på 30 nanometer och en fjäderkonstant på 0,2 newton per meter på AFM IR-systemet för att mäta provet i kontaktläge. Klicka på belastning i afm-avsökningssektionen och nästa. Använd fokus på sondpilar för att fokusera kameran på cantilever och använda spetsen till hårkors för att placera hårkorset i slutet av cantilever.Rotera rattarna som styr läget för detekteringslasern för att placera lasern i slutet av cantilever. Rotera laserrattarna för att upptäcka och maximera summan som mättes av de fyra kvadrantfotodioden till ett värde som är större än tre volt. Rotera avböjningsratten för att justera böjningsgraden för cantilever till minus en volt och klicka på nästa.Stäng sedan instrumentets omslag. Använd fokus på sondpilar för att fokusera kameran på provet och spetsen till hårkors pilar för att flytta i regionen av intresse av provet. Klicka på nästa och engagera.I mikroskopfönstret väljer du höjd för morfologi, amplitud två för IR-absorptionen och PLL-frekvensen för att kartlägga spetsen för att provsmaka kontaktresonans. I AFM scan avsnittet, ställa in parametrarna som visat för AFM bildframställning och klicka skanna för att skaffa en morfologi karta. När morfologimappningen är klar klickar du i mikroskopfönstret på höjdkartan för att placera sonden på toppen av ett aggregat.I avsnittet nano IR klickar du på start IR för att belysa provet med IR-lasern. Om du vill fokusera infraröd lasern på den lättredande klickar du på optimera och anger 1655 centimeter för vågnumbern. Klicka på Lägg till och skanna för att bestämma IR laserposition och klicka på uppdatera och okej att anpassa sin position med cantilever.I det allmänna avsnittet anger du ett vågtal för vilket en hög absorbans i det relativa fältet förväntas och inaktivera alternativet med filter för bandpass. Klicka på start IR kontrollera sedan mätaravläsningen och FFT av cantilever svar. I FFT-fönstret flyttar du den gröna markören för att läsa av resonansfrekvensen för den lättförbehållna.Ett typisk värderar av FFTEN av resonansen av cantileversen är omkring 200 kilohertz. Ange det genererade resonansfrekvensvärdet i det allmänna avsnittet i frekvenscentrumfältet och använd ett frekvensfönster på 50 kilohertz. Klicka laser pulse tune fönster för att välja resonans förstärkt läge och ställa in en puls på 222 kilohertz, en tune intervall på 50 kilohertz och en laser plikt cykel på 5%Klicka förvärva att sopa pulsen på lasern.Använd markören för att ställa in laserpulsen till frekvensen av den mekaniska responsen av den termiska expansionen av provet som absorberar IR-ljuset. Välj sedan fas låst slinga för att övervaka kontaktresonans mellan provet och spetsen och klicka på noll. För andra kemiska egenskaper i nanoskalan, spåra kontaktresonansen under spektraförvärvet för att säkerställa att provspektrumet inte påverkas av överhettning och uppmjukning.Välj aktivera för att spåra provet att tippa kontakt resonans och välj en integrerad vinst på 0,5 och en proportionell vinst på 10 klicka sedan på OK. I optimeringsfönstret klickar du på våglängden och skannar för att lokalisera IR-lasern i minst tre vågnumberer som motsvarar större absorbansband av provet och för minst ett vågnummer för varje chip av lasern. Klicka på verktyg, IR-bakgrundskalibrering och ny, och ställ in vågnumrerna på mellan 1 200 och 1800 centimeter. Ställ in bakgrunderna på genomsnitt till en, plikten cykel på 5%och svep hastighet till 100 centimeter i kvadrat.Klicka på förvärva för att mäta IR laser bakgrund för normalisering av den uppmätta nano skala lokaliserade spektra, spara filen och stänga fönstret. I inställningarna för IR-spektra väljer du en IR-spektrumupplösning mellan en och fyra centimeter och ett antal co-genomsnitt på minst 64 gånger. Klicka sedan förvärva för att mäta en nano skala lokaliserade IR spektrum i proteinet området.Om du vill förvärva en nanoskala löst kemikaliekarta, välj 1655 centimeter och IR-avbildning och klicka på scan i AFM-skanningsfönstret. När mappningen är slutförd sparar du mätningarna. Använd sedan den inbyggda AFM bildbehandling programvara för att analysera de förvärvade kartorna över morfologi, kontakt resonans och kemi och nano skala lokaliserade spektra.Det är ett kritiskt steg för att få en mycket ren monomerisk lösning då förekomsten av aggregerade arter kan resultera i dålig reproducerbarhet av kinetik och införa artefakter i dina mätningar. En grundläggande faktor för att framgångsrikt studera biologiska prover som har hög heterogenitet är den korrekta positionen för fasta substrat. Microfluidic sprutdeposition kan utnyttjas i stället för manuell en för att bevara provarkitekturen och heterogeniteten.Dessa metoder bana väg för unraveling den kemiska strukturen och egenskaper för enskilda biomolekyler och deras interaktioner i fysiologiska och inhemska flytande miljö.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Enrichment of Detergent-insoluble Protein Aggregates from Human Postmortem Brain

Anrikning av tvättmedel-olösligt Protein aggregat från människahjärnan efter döden

In this study, we describe an abbreviated single-step fractionation protocol for the enrichment of detergent-insoluble protein aggregates from human ...

Protein Film Infrared Electrochemistry Demonstrated for Study of H2 Oxidation by a [NiFe] Hydrogenase

Protein Film Infrared Electrochemistry Demonstrated for Study of H2 Oxidation by a [NiFe] Hydrogenase

Protein Film infraröd elektrokemi visat för studie av H2 Oxidation av en [NiFe] Hydrogenase

Understanding the chemistry of redox proteins demands methods that provide precise control over redox centers within the protein. The technique of protein ...

Force Spectroscopy of Single Protein Molecules Using an Atomic Force Microscope

Kraft spektroskopi av enda proteinmolekyler genom en Atomic Force Mikroskop

The determination of the folding process of proteins from their amino acid sequence to their native 3D structure is an important problem in biology. ...

DNA Polymerase Activity Assay Using Near-infrared Fluorescent Labeled DNA Visualized by Acrylamide Gel Electrophoresis

DNA-polymeras aktivitet Assay använder infrarött fluorescerande märkt DNA visualiseras med akrylamid gelelektrofores

For any enzyme, robust, quantitative methods are required for characterization of both native and engineered enzymes. For DNA polymerases, DNA synthesis ...

Covalent Immobilization of Proteins for the Single Molecule Force Spectroscopy

Kovalent immobilisering av proteiner för den enda molekyl kraft spektroskopin

In recent years, atomic force microscopy (AFM) based single molecule force spectroscopy (SMFS) extended our understanding of molecular properties and ...

Analysis of &#946;-Amyloid-induced Abnormalities on Fibrin Clot Structure by Spectroscopy and Scanning Electron Microscopy

Analysis of ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-Amyloid-induced Abnormalities on Fibrin Clot Structure by Spectroscopy and Scanning Electron Microscopy

Analys av β-Amyloid-inducerad avvikelser på Fibrin Clot struktur av spektroskopi och svepelektronmikroskopi

This article presents methods for generating in vitro fibrin clots and analyzing the effect of beta-amyloid (A&#946;) protein on clot formation and ...

High Sensitivity Measurement of Transcription Factor-DNA Binding Affinities by Competitive Titration Using Fluorescence Microscopy

Hög känslighet mätning av transkription faktorn-DNA bindande samhörighet genom konkurrenskraftiga titrering med fluorescensmikroskopi

Accurate quantification of transcription factor (TF)-DNA interactions is essential for understanding the regulation of gene expression. Since existing ...

Probing The Structure And Dynamics Of Nucleosomes Using Atomic Force Microscopy Imaging

Sondera strukturen och dynamiken i Nucleosomes med hjälp av Atomic Force Microscopy Imaging

Chromatin, which is a long chain of nucleosome subunits, is a dynamic system that allows for such critical processes as DNA replication and transcription ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

Analys av proteinveckning, Transport och nedbrytning i levande celler av radioaktiva puls Chase

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...