Name: in vivo assessment of alveolar macrophage efferocytosis following ozone exposure
Uploaded: 2019-10-22T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Assessment of Alveolar Macrophage Efferocytosis Following Ozone Exposure at JoVE.com

يتم تمويل هذه الدراسة من قبل معهد الآثار الصحية والتر ا. روزنبليث جائزه و NIEHS R01ES028829 (إلى k. m. G). ونود ان نشكر الدكتورة ديان والترز (قسم فسيولوجيا ، ECU) لمساعدتها في الحصول علي صور تمثيليه من الضامة السنخيه.

وقد تمت الموافقة علي جميع الأساليب من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانية (IACUC) من جامعه ولاية كارولينا الشرقية.
1-الأوزون (O3) والتعرض للهواء المصفي (اليوم الأول)
<ol><li>وضع حد اقصي 12 الإناث C57BL/6J الفئران ، 8-12 أسابيع من العمر ، في قفص من الصلب (مع 12 مقصورات منفصلة) ...

<ol>
	<li>Puttur, F., Gregory, L. G., Lloyd, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Airway+macrophages+as+the+guardians+of+tissue+repair+in+the+lung.">Airway macrophages as the guardians of tissue repair in the lung.</a> Immunology and Cell Biology. , (2019).</li><li>Gregoire, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+efferocytosis+and+neutrophil+extracellular+trap+clearance+by+macrophages+in+ARDS.">Impaired efferocytosis and neutrophil extracellular trap clearance by macrophages in ARDS.</a> European Respiratory Journal. 52 (2), (2018).</li><li>Fan, E. K. Y., Fan, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+alveolar+macrophage+death+in+acute+lung+inflammation.">Regulation of alveolar macrophage death in acute lung inflammation.</a> Respiratory Research. 19 (1), 50 (2018).</li><li>Michlewska, S., McColl, A., Rossi, A. G., Megson, I. L., Dransfield, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clearance+of+dying+cells+and+autoimmunity.">Clearance of dying cells and autoimmunity.</a> Autoimmunity. 40 (4), 267-273 (2007).</li><li>Bhattacharya, J., Westphalen, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage-epithelial+interactions+in+pulmonary+alveoli.">Macrophage-epithelial interactions in pulmonary alveoli.</a> Seminars in Immunopathology. 38 (4), 461-469 (2016).</li><li>Donnelly, L. E., Barnes, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+phagocytosis+in+airways+disease.">Defective phagocytosis in airways disease.</a> Chest. 141 (4), 1055-1062 (2012).</li><li>Morimoto, K., Janssen, W. J., Terada, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+efferocytosis+by+alveolar+macrophages+in+IPF+patients.">Defective efferocytosis by alveolar macrophages in IPF patients.</a> Respiratory Medicine. 106 (12), 1800-1803 (2012).</li><li>Vandivier, R. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dysfunctional+cystic+fibrosis+transmembrane+conductance+regulator+inhibits+phagocytosis+of+apoptotic+cells+with+proinflammatory+consequences.">Dysfunctional cystic fibrosis transmembrane conductance regulator inhibits phagocytosis of apoptotic cells with proinflammatory consequences.</a> American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 297 (4), L677-L686 (2009).</li><li>Grabiec, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diminished+airway+macrophage+expression+of+the+Axl+receptor+tyrosine+kinase+is+associated+with+defective+efferocytosis+in+asthma.">Diminished airway macrophage expression of the Axl receptor tyrosine kinase is associated with defective efferocytosis in asthma.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 140 (4), 1144-1146 (2017).</li><li>Chen, W., Frank, M. E., Jin, W., Wahl, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TGF-beta+released+by+apoptotic+T+cells+contributes+to+an+immunosuppressive+milieu.">TGF-beta released by apoptotic T cells contributes to an immunosuppressive milieu.</a> Immunity. 14 (6), 715-725 (2001).</li><li>Gao, Y., Herndon, J. M., Zhang, H., Griffith, T. S., Ferguson, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiinflammatory+effects+of+CD95+ligand+(FasL)-induced+apoptosis.">Antiinflammatory effects of CD95 ligand (FasL)-induced apoptosis.</a> Journal of Experimental Medicine. 188 (5), 887-896 (1998).</li><li>O'Brien, B. A., Fieldus, W. E., Field, C. J., Finegood, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clearance+of+apoptotic+beta-cells+is+reduced+in+neonatal+autoimmune+diabetes-prone+rats.">Clearance of apoptotic beta-cells is reduced in neonatal autoimmune diabetes-prone rats.</a> Cell Death and Differentiation. 9 (4), 457-464 (2002).</li><li>Shen, Z. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mineralocorticoid+Receptor+Deficiency+in+Macrophages+Inhibits+Atherosclerosis+by+Affecting+Foam+Cell+Formation+and+Efferocytosis.">Mineralocorticoid Receptor Deficiency in Macrophages Inhibits Atherosclerosis by Affecting Foam Cell Formation and Efferocytosis.</a> Journal of Biological Chemistry. 292 (3), 925-935 (2017).</li><li>Allard, B., Panariti, A., Martin, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alveolar+Macrophages+in+the+Resolution+of+Inflammation,+Tissue+Repair,+and+Tolerance+to+Infection.">Alveolar Macrophages in the Resolution of Inflammation, Tissue Repair, and Tolerance to Infection.</a> Frontiers in Immunology. 9, 1777 (2018).</li><li>Hamon, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bushfire+smoke+is+pro-inflammatory+and+suppresses+macrophage+phagocytic+function.">Bushfire smoke is pro-inflammatory and suppresses macrophage phagocytic function.</a> Science Reports. 8 (1), 13424 (2018).</li><li>Angsana, J., Chen, J., Liu, L., Haller, C. A., Chaikof, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efferocytosis+as+a+regulator+of+macrophage+chemokine+receptor+expression+and+polarization.">Efferocytosis as a regulator of macrophage chemokine receptor expression and polarization.</a> European Journal of Immunology. 46 (7), 1592-1599 (2016).</li><li>Karaji, N., Sattentau, Q. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efferocytosis+of+Pathogen-Infected+Cells.">Efferocytosis of Pathogen-Infected Cells.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1863 (2017).</li><li>Brouckaert, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phagocytosis+of+necrotic+cells+by+macrophages+is+phosphatidylserine+dependent+and+does+not+induce+inflammatory+cytokine+production.">Phagocytosis of necrotic cells by macrophages is phosphatidylserine dependent and does not induce inflammatory cytokine production.</a> Molecular Biology of the Cell. 15 (3), 1089-1100 (2004).</li><li>Gonzalez-Guevara, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposure+to+ozone+induces+a+systemic+inflammatory+response:+possible+source+of+the+neurological+alterations+induced+by+this+gas.">Exposure to ozone induces a systemic inflammatory response: possible source of the neurological alterations induced by this gas.</a> Inhalation Toxicology. 26 (8), 485-491 (2014).</li><li>Robertson, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD36+mediates+endothelial+dysfunction+downstream+of+circulating+factors+induced+by+O3+exposure.">CD36 mediates endothelial dysfunction downstream of circulating factors induced by O3 exposure.</a> Toxicological Sciences. 134 (2), 304-311 (2013).</li><li>Kilburg-Basnyat, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specialized+Pro-Resolving+Lipid+Mediators+Regulate+Ozone-Induced+Pulmonary+and+Systemic+Inflammation.">Specialized Pro-Resolving Lipid Mediators Regulate Ozone-Induced Pulmonary and Systemic Inflammation.</a> Toxicological Sciences. 163 (2), 466-477 (2018).</li><li>Jakab, G. J., Spannhake, E. W., Canning, B. J., Kleeberger, S. R., Gilmour, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+ozone+on+immune+function.">The effects of ozone on immune function.</a> Environ Health Perspect. 103 Suppl 2, 77-89 (1995).</li><li>Gilmour, M. I., Hmieleski, R. R., Stafford, E. A., Jakab, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+and+recovery+of+the+alveolar+macrophage+phagocytic+system+during+continuous+exposure+to+0.5+ppm+ozone.">Suppression and recovery of the alveolar macrophage phagocytic system during continuous exposure to 0.5 ppm ozone.</a> Experimental Lung Research. 17 (3), 547-558 (1991).</li><li>Nayak, D. K., Mendez, O., Bowen, S., Mohanakumar, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+In+Vitro+Culture+of+Murine+and+Human+Alveolar+Macrophages.">Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages.</a> Journal of Visualized Experiments. 10 (134), (2018).</li><li>Tao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+SR-BI+mediates+efferocytosis+via+Src/PI3K/Rac1+signaling+and+reduces+atherosclerotic+lesion+necrosis.">Macrophage SR-BI mediates efferocytosis via Src/PI3K/Rac1 signaling and reduces atherosclerotic lesion necrosis.</a> Journal of Lipid Research. 56 (8), 1449-1460 (2015).</li><li>Coe, L. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FGF-23+is+a+negative+regulator+of+prenatal+and+postnatal+erythropoiesis.">FGF-23 is a negative regulator of prenatal and postnatal erythropoiesis.</a> Journal of Biological Chemistry. 289 (14), 9795-9810 (2014).</li><li>Yong, W. K., Abd Malek, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Xanthohumol+induces+growth+inhibition+and+apoptosis+in+ca+ski+human+cervical+cancer+cells.">Xanthohumol induces growth inhibition and apoptosis in ca ski human cervical cancer cells.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. , 921306 (2015).</li><li>Van de Laar, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Yolk+Sac+Macrophages,+Fetal+Liver,+and+Adult+Monocytes+Can+Colonize+an+Empty+Niche+and+Develop+into+Functional+Tissue-Resident+Macrophages.">Yolk Sac Macrophages, Fetal Liver, and Adult Monocytes Can Colonize an Empty Niche and Develop into Functional Tissue-Resident Macrophages.</a> Immunity. 44 (4), 755-768 (2016).</li><li>Lavin, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-resident+macrophage+enhancer+landscapes+are+shaped+by+the+local+microenvironment.">Tissue-resident macrophage enhancer landscapes are shaped by the local microenvironment.</a> Cell. 159 (6), 1312-1326 (2014).</li><li>Beattie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow-derived+and+resident+liver+macrophages+display+unique+transcriptomic+signatures+but+similar+biological+functions.">Bone marrow-derived and resident liver macrophages display unique transcriptomic signatures but similar biological functions.</a> Journal of Hepatology. 65 (4), 758-768 (2016).</li><li>Svedberg, F. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+lung+environment+controls+alveolar+macrophage+metabolism+and+responsiveness+in+type+2+inflammation.">The lung environment controls alveolar macrophage metabolism and responsiveness in type 2 inflammation.</a> Nature Immunology. , (2019).</li><li>Crowther, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulmonary+surfactant+protein+a+inhibits+macrophage+reactive+oxygen+intermediate+production+in+response+to+stimuli+by+reducing+NADPH+oxidase+activity.">Pulmonary surfactant protein a inhibits macrophage reactive oxygen intermediate production in response to stimuli by reducing NADPH oxidase activity.</a> Journal of Immunology. 172 (11), 6866-6874 (2004).</li><li>Silveyra, P., Floros, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+variant+associations+of+human+SP-A+and+SP-D+with+acute+and+chronic+lung+injury.">Genetic variant associations of human SP-A and SP-D with acute and chronic lung injury.</a> Frontiers in Bioscience. 17, 407-429 (2012).</li><li>Schagat, T. L., Wofford, J. A., Wright, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surfactant+protein+A+enhances+alveolar+macrophage+phagocytosis+of+apoptotic+neutrophils.">Surfactant protein A enhances alveolar macrophage phagocytosis of apoptotic neutrophils.</a> Journal of Immunology. 166 (4), 2727-2733 (2001).</li><li>Gomez Perdiguero, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-resident+macrophages+originate+from+yolk-sac-derived+erythro-myeloid+progenitors.">Tissue-resident macrophages originate from yolk-sac-derived erythro-myeloid progenitors.</a> Nature. 518 (7540), 547-551 (2015).</li><li>Nebbioso, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-resolved+analysis+of+DNA-protein+interactions+in+living+cells+by+UV+laser+pulses.">Time-resolved analysis of DNA-protein interactions in living cells by UV laser pulses.</a> Scientific Reports. 7 (1), 11725 (2017).</li><li>Novak, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+different+UV-emitting+light+sources+in+the+induction+of+T-cell+apoptosis.">Efficacy of different UV-emitting light sources in the induction of T-cell apoptosis.</a> Photochemistry and Photobiology. 79 (5), 434-439 (2004).</li><li>Park, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PAI-1+inhibits+neutrophil+efferocytosis.">PAI-1 inhibits neutrophil efferocytosis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (33), 11784-11789 (2008).</li><li>Kleeberger, S. R., Reddy, S., Zhang, L. Y., Jedlicka, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+susceptibility+to+ozone-induced+lung+hyperpermeability:+role+of+toll-like+receptor+4.">Genetic susceptibility to ozone-induced lung hyperpermeability: role of toll-like receptor 4.</a> American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 22 (5), 620-627 (2000).</li><li>Wesselkamper, S. C., Chen, L. C., Kleeberger, S. R., Gordon, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+variability+in+the+development+of+pulmonary+tolerance+to+inhaled+pollutants+in+inbred+mice.">Genetic variability in the development of pulmonary tolerance to inhaled pollutants in inbred mice.</a> American Journal of Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology. 281 (5), L1200-L1209 (2001).</li></ol>

افيروسيتوسيس هو عمليه مضاده للالتهابات التي الضامة واضحة خلايا ابوتوتيك والحطام ، فضلا عن إنتاج متعددة الوسطاء المضادة للالتهابات9،10،11،12،16 ،18. وقد قدمت نماذج متعددة من افيروسيت?...

تتعرض الرئة باستمرار إلى الإهانات البيئية ، بما في ذلك الجسيمات الهوائية ، والفيروسات ، والبكتيريا ، والغازات المؤكسدة التي تؤدي إلى التهاب رئوي1،2،3. هذه الإهانات يمكن ان تضر تبادل الغاز والحثعلي أصابه الانسجه لا رجعه فيه 4,5. الضامة السنخيه ، التي تشكل حوالي 95 ٪ من الخلايا المناعية الموجودة في murine والرئتين البشرية في التوازن ، هي المنظمين الحرجة من التهاب رئوي بعد الإهانات البيئية1،2، 3،4،5. الضامة السنخيه ضرورية خلال الدفاع المضيف عن طريق التخدير والقضاء علي مسببات الامراض. في الاونه الاخيره ، وقد ثبت الضامة السنخيه لتعزيز التوازن الانسجه وحل التهاب من خلال افيروسيتوسيس6،7. افيروسيتوسيس هو عمليه الفاجريه التي تبتلع الضامة والقضاء علي خلايا ابوتوتيك8،9،10. افيروسيتوسيس أيضا نتائج في إنتاج وسطاء (اي ، آيل-10 ، tgf-β ، pge2، وأكسيد النيتريك) التي تزيد من زيادة العملية ، مما ادي إلى حل التهابات9،10،11 و12و16و18. هذه العملية ضرورية لمنع النخر الثانوي وتعزيز التوازن الانسجه12,13,14. وقد ربطت العديد من الدراسات ضعف الافيروسيتوسيس مع مختلف امراض الرئة المزمنة, بما في ذلك الربو, مرض الانسداد الرئوي المزمن, والتليف الرئوي مجهول العلة8,9,15, 16و17.
O3 هو معيار الملوثات الجوية التي تفاقم ويزيد من الاصابه بامراض الرئة المزمنة19،20،21. O3 يستحث التهاب الرئة والاصابه ، ومن المعروف ان يضعف الضامة السنخيه من مسببات الامراض البكتيرية22،23. ومع ذلك ، فمن غير المعروف ما إذا كان O3 يضعف الضامة السنخيه افيروسيتوسيس. التحقيق O3-التي يسببها التعديلات في افيروسيتوسيس الضامة السنخيه سوف توفر البصيرة المحتملة في كيفيه التعرض يمكن ان يؤدي إلى حدوث امراض الرئة المزمنة وتفاقم. ويرد أدناه طريقه بسيطه لتقييم الضامة السنخيه افيروسيتوسيس في رئتي الفئران الإناث بعد التعرض الحاد O3 .
الأسلوب المبينة posseses العديد من المزايا علي بروتوكولات افيروسيتوسيس الأخرى التي يشيع استخدامها في الميدان عن طريق القضاء علي استخدام الاصباغ الفلورية مكلفه, قياسات تدفق واسعه النطاق الخلوي, والتلاعب السابقة الجسم الضام من السنخيه24 ،25. بالاضافه إلى ذلك ، يقيس هذا البروتوكول افيروسيتوسيس الضامة السنخيه في سياق البيئة المجهرية الرئة ، والتي يمكن ان تؤثر علي وظيفة الضامة.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Annexin V-FITC Kit</td>
			<td>Trevigen</td>
			<td>4830-250-K&#160;</td>
			<td>The TACS&#160;Annexin V-FITC Kit allows rapid, specific, and quantitative identification of apoptosis in individual cells when using flow cytometry.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BCL2 Jurkat T Cells&#160;</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>ATCC CRL-2899</td>
			<td>The BCL2 Jurkat cell line was derived by transfecting human Jurkat T cells with the pSFFV-neo mammalian expression vector containing the human BCL-2 ORF insert and a neomycin-resistant gene. Has been for models of measuring efferocytosis.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Countess II Automated Cell Counter</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>AMQAX1000</td>
			<td>It is a benchtop assay platform equipped with state-of-the-art optics, full autofocus, and image analysis software for rapid assessment of cells in suspension. Very easy to use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cytospin 4 Cytocentrifuge</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>A78300003</td>
			<td>Provides economical thin-layer preparations from any liquid matrix, especially hypocellular fluids such as bronchoalveolar lavage fluid.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, qualified, heat inactivated</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>16140071</td>
			<td>Provides Nutrients to cultured cells for them to grow. It is standard for cell culture.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kwik-Diff&#160; Reagent 2, Eosin</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>9990706</td>
			<td>Eosin staining that stains cytoplasm.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kwik-Diff Reagent 1, Fixative</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>9990705</td>
			<td>Fixes cells to be stained by H&#38;E.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kwik-Diff Reagent 3, Methylene Blue</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>9990707</td>
			<td>Methylene Blue staining that stains the nucleus.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Sigma/Aldrich</td>
			<td>P0781-100ML</td>
			<td>Penicillin-Streptomycin is the most commonly used antibiotic solution for culture of mammalian cells. Additionally it is used to maintain sterile conditions during cell culture.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Medium, GlutaMAX Supplement&#160;</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>61870036</td>
			<td>RPMI 1640 Medium (Roswell Park Memorial Institute 1640 Medium) was originally developed to culture human leukemic cells in suspension and as a monolayer. RPMI 1640 medium has since been found suitable for a variety of mammalian cells, including HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocytes, and carcinomas. Helps grow Jurkat T cells fast and efficiently.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stratagene UV Stratalinker 1800 UV Crosslinker</td>
			<td>Cambridge Scientific&#160;</td>
			<td>16659</td>
			<td>The Stratalinker UV crosslinker is designed to induce apoptosis, crosslink DNA or RNA to nylon, nitrocellulose, or nylon-reinforced nitrocellulose membranes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teledyne T400 ultraviolet light photometer&#160;</td>
			<td>Teledyne API</td>
			<td>T400</td>
			<td>The Model T400 UV Absorption analyzer uses a system based on the Beer-Lambert law for measuring low ranges of ozone in ambient air.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teledyne T703 Ozone calibrator</td>
			<td>Teledyne API</td>
			<td>T703</td>
			<td>Provides feedback control of the UV lamp intensity, assuring stable ozone output.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo assessment of alveolar macrophage efferocytosis following ozone exposure

الأوزون (O3) هو معيار ملوث الهواء الذي يفاقم ويزيد من حدوث الامراض الرئوية المزمنة. ومن المعروف O3 التعرض للحث علي التهاب رئوي ، ولكن يعرف القليل بشان كيفيه التعرض يغير العمليات الهامه لحل التهاب. افيروسيتوسيس هو عمليه القرار ، حيث الضامة الخلايا ابوتوتيك. الغرض من هذا البروتوكول هو قياس الضامة السنخيه افيروسيتوسيس بعد O3-الناجمة عن أصابه الرئة والتهاب. وقد وصفت عده طرق لقياس الافيروسيتوسيس ؛ ومع ذلك ، معظم تتطلب التلاعب السابقين الجسم الآخر. وصفت بالتفصيل هنا هو بروتوكول لقياس في الجسم الضام السنخيه افيروسيتوسيس 24 ح بعد O3 التعرض ، الذي يتجنب التلاعب الجسم السابق من الضامة وبمثابه تقنيه بسيطه التي يمكن استخدامها لتمثيل بدقه الاضطرابات في عمليه الحل هذه. البروتوكول هو طريقه غير مكثفه من الناحية الفنية وغير مكلفه نسبيا التي تنطوي علي الجسم كله O3 استنشاق متبوعا بلعوم الطموح من الخلايا ابوتوتيك (اي خلايا T jurkat) بينما تحت التخدير العام. ثم يقاس افيروسيتوسيس الضامة السنخيه بتقييم المجهري الخفيفة من الضامة التي تم جمعها من غسل البرونزية (BAL). يتم قياس افيروسيتوسيس أخيرا عن طريق حساب مؤشر افيروسيتيك. وبشكل جماعي ، فان الطرق المبينة تحدد النشاط افيروسيتيك في الرئة في الجسم المجري بينما تعمل أيضا علي تحليل الآثار الصحية السلبية لل O3 أو الشتائم المستنشقة الأخرى.

O3 التعرض هو معروف للحث علي التهاب الرئة والاصابه ، ومطلوب افيروسيتوسيس للحفاظ علي التوازن الانسجه. C57BL/6J الفئران الإناث تعرضت لتصفيه الهواء (FA) أو 1 جزء في المليون O3 لمده 3 ساعات والانحلال 24 ساعة بعد التعرض لفحص التهاب الرئة والاصابه. O أظهرت الفئران3المكش?...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Assessment of Alveolar Macrophage Efferocytosis Following Ozone Exposure at JoVE.com

In Vivo Assessment of Alveolar Macrophage Efferocytosis Following Ozone Exposure

تصف هذه المخطوطة بروتوكولا لتحديد ما إذا كان التعرض للأوزون ، وهو معيار من ملوثات الهواء ، يضعف الضامة السنخيه الافيروسيتوسيسه في الجسم المجري. يستخدم هذا البروتوكول الكواشف والتقنيات المستخدمة بشكل شائع ويمكن تكييفها مع نماذج متعددة من الإصابات الرئوية لتحديد الآثار علي افيروسيتوسيس الضامة السنخيه.

في تقييم فيفو الضامة السنخيه افيروسيتوسيس بعد التعرض للأوزون

Ozone (O3) is a criteria air pollutant that exacerbates and increases the incidence of chronic pulmonary diseases. O3 exposure is known to induce ...

يقيس البروتوكول الموصوف هنا ترسب الدم الضامة الرئوية بعد التعرض لأوزون ملوث الهواء. وتشير هذه البيانات إلى أن التعرض للأوزون يقلل من التنافر الضام السنخي، وبالتالي يمكن أن يكون آلية للسبب في ارتفاع مستويات الأوزون تزيد من حدوث أمراض الرئة. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هو أنه يسمح في تقييم في الجسم الحي من الجزيئات الضامة الظهارة دون أي التلاعب الجسم الحي السابق من الضامة التي قد تغير نمط الظاهري أو وظيفتها.وقد كشفت هذه التقنية عن آلية جديدة لا يمكن من خلالها للرئة إصلاح نفسها بعد التعرض لتلوث الهواء. بالإضافة إلى ذلك، قد تكشف هذه التقنية عن مسارات جديدة للأهداف التي تغير من فرط الوفيات في الرئة. يمكن تطبيق هذه الطريقة على أي نموذج من إصابات الرئة أو الالتهاب.ومع ذلك، فإن المستخدم بحاجة إلى تحسين عندما يكون من الأفضل لتقييم تليف الدم في الرئة بعد الإصابة. يمكن أن يكون أداء الطموح البلعوم تحديا من الناحية الفنية. أنصح العمل مع موظفي الطب البيطري الخاص بك للتأكد من أن لديك الأمثل الأسلوب الخاص بك لأداء هذا الإجراء.تبدأ بزرع خلايا Jurkat T في ثقافة الخلية القاعدية المتوسطة تكمل وفقا لاتجاهات المخطوطة في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون. خلايا Jurkat T هي خط خلية تعليق يمكن الحفاظ عليه من خلال التمرير إلى وسائل الإعلام الإحتماء قبل الإحترار كل ثلاثة أيام. إعداد الخلايا المبرمجة من خلال النمو لهم إلى 90٪ التقاء الذي يستغرق ثلاثة إلى أربعة أيام بعد passaging.تنمو الخلايا في خمس قارورة T75 للحصول على عدد كاف من الخلايا لهذا البروتوكول. مرة واحدة الخلايا جاهزة، واستنشاق محتويات قارورة حوالي 24 ملليلتر ونقلها إلى أنبوب مخروطي 50 ملليلتر. عد الخلايا باستخدام تلطّخات Trypan Blue ومقياس للهيموسيتات.بيليه الخلايا عن طريق الطرد المركزي في 271 مرات ز لمدة خمس دقائق وتجاهل supernatant. ثم، resuspend الخلايا في وسائل الإعلام للحصول على ثلاثة ملايين خلية لكل ملليلتر. Aliquot الخلايا إلى 100 من 20 ملليمتر أطباق زراعة الأنسجة عن طريق نقل خمسة ملليلتر من الخلايا في الطبق الواحد.إعداد ما يقرب من تسعة أطباق الثقافة. ضعي طبق واحد جانباً كتحكم غير مكشوف وتعرّض الأطباق المتبقية للأشعة فوق البنفسجية. تعيين crosslinker الأشعة فوق البنفسجية إلى مستوى الطاقة الصحيح عن طريق الضغط على زر الطاقة وإدخال 600 مع لوحة الأرقام. تشع جميع الأطباق مع الخلايا باستثناء السيطرة على التأكد من إزالة الغطاء العلوي للطبق ثقافة الأنسجة أثناء التعرض للأشعة فوق البنفسجية.ثم، احتضان جميع الأطباق في حاضنة ثقافة الخلية في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة أربع ساعات. بعد الحضانة، والجمع بين جميع الخلايا المشعة في أنبوب مخروطي 50 ملليلتر و بيليه لهم من قبل الطرد المركزي في 271 مرات ز لمدة خمس دقائق. تجاهل السوبر و resuspend الخلايا في 24 ملليلتر من برنامج تلفزيوني عقيمة.الطرد المركزي الأنبوب مرة أخرى وإزالة فائقة. إعداد الخلايا لجراة الفئران عن طريق إعادة تعليقها في برنامج تلفزيوني في التركيز المناسب. بمجرد تخدير الماوس بشكل صحيح، وضعه في وضعية سوبين شبه مفكك.استخدام سلسلة الجراحية تعادل بين أوتاد على لوحة ورقة الاكريليك مائلة لتعليق الماوس من قبل فواصل maxillary. استخدام زوج من ملقط غير متطاولة حادة للاستيلاء على طفيفة وسحب لسان الماوس وغرس الخلايا المبرمج في تجويف الفم مع ماصة P200. الجرعات الناجحة عندما الفئران جعل الضوضاء طقطقة ثانية أو ثانيتين بعد تلقي الجرعة.بإصبع قفاز، غطي أنف الفأر بلطف حتى يستنشقه أثناء سحب اللسان. حافظ على تغطية الأنف حتى لا يظهر أي سائل في تجويف الفم وقد أخذ الفأر اثنين أو أكثر من الاستنشاق. إزالة الماوس من لوحة التطعيم وإعادته إلى القفص للسماح لها بالتعافي من التخدير مع التأكد من وضع الماوس على ظهره لمنع الحطام من منع nares.بعد أن استيقظ كل من الفئران من التخدير، والانتظار 90 دقيقة للسماح الضامة السنخية لابتلاع تدفق الخلايا المبرمج. لجمع سائل المراحيض، قم بإعداد الفأرة القتل الرحيم وفقًا لاتجاهات المخطوطة. دفع ببطء برنامج تلفزيوني في الرئتين مما يسمح لهم تضخيم، ثم سحب نفس الحجم مرة أخرى من التأكد من برنامج تلفزيوني لا يخرج من الخياشيم.جمع مراحيض تجمعها من كل ماوس في أنبوب 15 ملليلتر. الطرد المركزي لامرج القصبات أو BAL في 610 مرات ز لمدة ست دقائق في أربع درجات مئوية، وجمع عظمى في أنبوب 1.5 ملليلتر، وتجميده في ناقص 80 درجة مئوية. الكريه يمثل الخلايا من الفضاء القصبي.إضافة ملليلتر واحد من ACK الدم الحمراء خلية تحلل العازلة إلى بيليه لإزالة خلايا الدم الحمراء المتبقية. دوامة وlyse لمدة دقيقة واحدة على الجليد، ثم إضافة أربعة ملليلتر من برنامج تلفزيوني لوقف رد فعل تحلل. الطرد المركزي الخلايا في 610 مرات ز لمدة ست دقائق في أربع درجات مئوية وpirmate فائق مع طارد فراغ.ثم، resuspend الخلايا في ملليلتر واحد من برنامج تلفزيوني مع 10٪ FBS وعد الخلايا على مقياس الهيموسيت بدون الأزرق Trypan. أجهزة الطرد المركزي 120 ميكرولترات كل عينة على الشرائح في 12 مرة ز لمدة ثلاث دقائق باستخدام تسارع المتوسطة وrifuge مركزة. اترك الشرائح لتجف طوال الليل.في اليوم التالي، وصمة عار الشرائح مع الهماتكسلين ويوسين من أجل حساب كل من عدد الخلايا التفاضلية والخلايا التفاضلية. ثم، عرض الشرائح تحت إعداد برايتفيلد على المجهر البيولوجي باستخدام هدف 20X أو 40X. حساب مؤشر الحساسية على أساس نسبة الضامة السنخية التي بزغات البلعم الخلايا التائية jurkat إلى الضامة السنخية دون امتصاص الخلايا المبرمج مع التأكد من حساب ما لا يقل عن 200 خلية من كل شريحة.وقد استخدم هذا البروتوكول للتحقيق في تأثير التعرض للأوزون على الالتهاب الرئوي. أظهرت الفئران المكشوفة للأوزون زيادة في الضامة والعدلات في المجال الجوي مقارنة بمجموعة التحكم في الهواء المصفاة وكانت لديها زيادة في بروتين BAL ، وهي علامة على الخلل الظهاري السنخي. قبل القذف الفئران، تم تأكيد المبرمج في الخلايا التى جونكات مع تدفق الخلايا.و 60 ملليمتر الجول التعرض للأشعة فوق البنفسجية مستوى و أربع ساعات حضانة الوقت أدى إلى نتائج متكررة من الخلايا المبرمجة 75٪ تقريبا. تم تحديد الضامة اليفوسية على أنها الضامة التي اجتاحت خلية جوركات تي مقارنة بالعمام السنخية العادية. كان هناك انخفاض كبير في مؤشر الأوزون المعرضة للأوزون مقارنة بضوابط الهواء المصفاة مما يشير إلى أن الالتهاب الرئوي الناجم عن الأوزون يرتبط بانخفاض إزالة الخلايا المبرمج.الاهتمام بالتفاصيل وكتابة أي اختلافات ملحوظة أمر بالغ الأهمية خلال هذا الإجراء. ومن المستحسن أيضا أن تعمي العينات للتحليل ويكون شخصين مختلفين العد الضامة. بعد العزل، يمكن استخدام خلايا BAL لتحليل مرنا، الملطخة لعلامات إضافية عن طريق المناعة، و / أو تشغيلها على جهاز قياس تدفق للتمييز بين التغيرات الظاهرية.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

The Use of Fluorescent Target Arrays for Assessment of T Cell Responses In vivo

استخدام المصابيح الفلورية الهدف صالحة لتقييم T الردود الخليوي<em&gt; في الجسم الحي</em

The ability to monitor T cell responses in vivo is important for the development of our understanding of the immune response and the design of ...

High Throughput Fluorometric Technique for Assessment of Macrophage Phagocytosis and Actin Polymerization

تقنية عالية الإنتاجية فلوروميتريك تقييم بلعم البلعمة وأكتين البلمرة

The goal of fluorometric analysis is to serve as an efficient, cost effective, high throughput method of analyzing phagocytosis and other cellular ...

Intravital Microscopy Imaging of the Liver following Leishmania Infection: An Assessment of Hepatic Hemodynamics

Intravital Microscopy Imaging of the Liver following Leishmania Infection: An Assessment of Hepatic Hemodynamics

حيوي داخلي المجهري التصوير الكبد التالية<em&gt; الليشمانيا</em&gt; العدوى: تقييم كبدي ديناميكا الدم

Intravital microscopy (IVM) is a powerful optical imaging technique that has made possible the visualization, monitoring and quantification of various ...

In Vivo Assessment of Rodent Plasmodium Parasitemia and Merozoite Invasion by Flow Cytometry

In Vivo Assessment of Rodent Plasmodium Parasitemia and Merozoite Invasion by Flow Cytometry

في تقييم فيفو من القوارض المتصورة الطفيل وأقسومة الغزو من قبل التدفق الخلوي

During blood stage infection, malaria parasites invade, mature, and replicate within red blood cells (RBCs). This results in a regular growth cycle and an ...

Flow Cytometric Analysis of Particle-bound Bet v 1 Allergen in PM10

تدفق تحليل Cytometric من متجهة الجسيمات بيت ت 1 مسببات الحساسية في PM10

Flow cytometry is a method widely used to quantify suspended solids such as cells or bacteria in a size range from 0.5 to several tens of micrometers in ...

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

Magnetic Stirrer Method for the Detection of Trichinella Larvae in Muscle Samples

الطريقة النمام المغناطيسي للكشف عن<em&gt; الخيطيات</em&gt; يرقات في عينات العضلات

Trichinellosis is a debilitating disease in humans and is caused by the consumption of raw or undercooked meat of animals infected with the nematode ...

Assessment of Antibody-based Drugs Effects on Murine Bone Marrow and Peritoneal Macrophage Activation

تقييم آثار المخدرات على أساس الأجسام المضادة على موريني نخاع العظام وتنشيط بلعم البريتوني

Macrophages are phagocytic innate immune cells, which initiate immune responses to pathogens and contribute to healing and tissue restitution. Macrophages ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

العزلة والثقافة في المختبر من البلاعم السنخية مورين والبشرية

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Quantification of Efferocytosis by Single-cell Fluorescence Microscopy

التحديد الكمي افيروسيتوسيس بالفحص المجهري Fluorescence خلية واحدة

Studying the regulation of efferocytosis requires methods that are able to accurately quantify the uptake of apoptotic cells and to probe the signaling ...