Name: single synapse indicators of glutamate release and uptake in acute brain slices from normal and huntington mice
Uploaded: 2020-03-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Single Synapse Indicators of Glutamate Release and Uptake in Acute Brain Slices from Normal and Huntington Mice at JoVE.com

تم دعم هذا العمل من قبل CHDI (A-12467) ، ومؤسسة البحوث الألمانية (Exc 257/1 و DFG Project-ID 327654276 - SFB 1315) وصناديق الأبحاث داخل الجدارة التابعة للمؤسسة الخيرية. نشكر ك. توروك، سانت جورج، جامعة لندن، ون هيلاسا، جامعة ليفربول، على iGluu plasmid والعديد من المناقشات المفيدة. وقدم د. بيتانس وأ. شونهير مساعدة تقنية ممتازة.

وقد نُفذت جميع الأعمال وفقاً لتوجيه الاتحاد الأوروبي 2010/63/EU للتجارب على الحيوانات، وتم تسجيلها في مكتب برلين لحماية الصحة والسلامة التقنية (G0233/14 وG0218/17).
ملاحظة: يمكن إجراء تسجيلات من Q175 من النوع البري (WT) والهيتيراجوت (HETs) في أي عمر وجنس. هنا درسنا الذكور والإناث في سن 51 إ...

تتعلق التجارب بمسألة ذات أهمية عامة — عدم الاستقلالية المشبكية وفقدانها المحتمل في سياق التنكس العصبي، ونحن نصف نهجًا جديدًا لتحديد نقاط الاشتباك العصبي المصابة في شرائح الدماغ الحادة من الفئران المسنة (>1 سنة). الاستفادة من الخصائص الحركية المحسنة للاستشعار الغلوتامات أدخلت مؤخرا iGlu...

عادة ما يتم تقييم التأثير النسبي لكل محطة متشابكة تنتمي إلى "اتصال وحدوي" (أي الاتصال بين الخلايا العصبية 2) من خلال تأثيرها على الجزء الأولي من الخلايا العصبية postynaptic1،2. التسجيلات الجسدية و / أو التشجرتيك من الخلايا العصبية postynaptic تمثل الأكثر شيوعا، وحتى الآن، أيضا الوسائل الأكثر إنتاجية لتوضيح معالجة المعلومات تحت منظور من أعلى إلى أسفل أو عمودي3،4،5. ومع ذلك ، فإن وجود الخلايا الفلكية مع مناطقها المنفصلة و (في القوارض) غير المتداخلة قد تساهم في منظور أفقي يستند إلى الآليات المحلية لتبادل الإشارات والتكامل والتزامن في المواقع المتشابكة6،7،8،9،10.
لأنه من المعروف أن astroglia تلعب، بشكل عام، دورا رئيسيا في الإمراض من الأمراض العصبية التنكسية11،12 ، وعلى وجه الخصوص ، دورا في صيانة واللدونة من الغلوتامات العصبية13،14،15،16، فمن المتصور أن التعديلات في أداء متشابك تتطور وفقا لحالة الخلايا الفلكية في المنطقة المستهدفة المشتركة من الألياف المتنوعة مع الأصل ولمواصلة استكشاف الآليات التنظيمية المحلية المستمدة من الأهداف/الأستروغليا في مجال الصحة والمرض، من الضروري تقييم نقاط الاشتباك العصبي الفردية. وقد تم وضع هذا النهج لتقدير نطاق الإفراج الوظيفي الغلوتامات ومؤشرات إزالة وتحديد المعايير التي يمكن استخدامها لتحديد نقاط الاشتباك العصبي المختلة (أو المستردة) في مناطق الدماغ الأكثر ارتباطا ببدء الحركة (أي، أولا وقبل كل شيء في قشرة المحرك والمسح الظهري).
وstriatum يفتقر الخلايا العصبية غلواماترارجي الجوهرية. ولذلك، فمن السهل نسبيا لتحديد afferents الجلوتامات من أصل extrastriatal. هذا الأخير تنشأ في الغالب في المهاد الهيلي وفي قشرة الدماغ (انظر17،18،19،20 لأكثر). تتشكل نقاط الاشتباك العصبي القشرية من محاور عصبية هرمية مترجمة في طبقات القشرية 2/3 و 5. تشكل المحاور ذات الصلة اتصالات ثنائية داخل telencephalic (IT) أو اتصالات ipsilateral عبر نظام الألياف الذي يشكل أكثر caudally الجهاز الهرمي (PT). وقد اقترح كذلك أن تكنولوجيا المعلومات وPT-نوع المحطات الطرفية تختلف في خصائص الإفراج عنها وحجم21،,22. في ضوء هذه البيانات، يمكن للمرء أيضا أن نتوقع بعض الاختلافات في التعامل مع الغلوتامات.
وstriatum هو منطقة الدماغ الأكثر تضررا في مرض هنتنغتون (HD)5. HD الإنسان هو اضطراب التنكس العصبي ة الوراثية الشديدة. نموذج الماوس Q175 يوفر فرصة للتحقيق في الأساس الخلوي للشكل البُدَلي للحرارة من HD، وهي حالة لديها الكثير من القواسم المشتركة مع الشلل الرعاش. ابتداء من سن حوالي 1 سنة، homozygote Q175 الفئران (HOM) تظهر علامات نقص الكينيزيا، كما كشفت عن قياس الوقت الذي يقضيه دون حركة في حقل مفتوح23. أكدت التجارب الحالية مع فئران Heterozygote Q175 (HET) العجز الحركي السابق الذي لوحظ في HOM ، بالإضافة إلى ذلك ، أظهرت أن العجز الحركي الملحوظ كان مصحوبًا بمستوى مخفض من ناقل الأحماض الأمينية الارتسية الارتسية 2 البروتين (EAAT2) في المنطقة المجاورة مباشرة للمحطات المتشابكة القشرية24. ولذلك فقد افترض أن العجز في الغلوتامات الفلكية يمكن أن يؤدي إلى خلل وظيفي أو حتى فقدان نقاط الاشتباك العصبي على حدة25،26.
هنا، ونحن وصف نهج جديد يسمح للمرء أن تقييم إزالة الغلوتامات المشبك واحد بالنسبة لكمية الناقل العصبي صدر. تم التعبير عن مستشعر الغلوتامات الجديد iGluu في الخلايا العصبية الهرمية القشرية. تم تطويره من قبل كاتالين Török27 ويمثل تعديلا للإدخال سابقا عالية تقارب ولكن بطيئة الغلوتامات استشعار iGluSnFR28. كلا المجسات هي مشتقات بروتين الفلورسنت الأخضر المعزز (EGFP). للاطلاع على الخصائص الطيفية والحركية، انظر Helassa et al.27. لفترة وجيزة، iGluu هو جهاز استشعار منخفضة التقارب مع الحركية التنشيط السريع، وبالتالي مناسبة بشكل خاص لدراسة إزالة الغلوتامات في المحطات متشابك الغلوتامات الإفراج. تم تحديد ثابت وقت التفكك من iGluu في جهاز توقف التدفق ، مما جعل Tauقبالة قيمة 2.1 مللي ثانية عند 20 درجة مئوية ، ولكن 0.68 مللي ثانية عند استقراء درجة حرارة 34 درجة مئوية27. المحطات الجانبية Schaffer واحد بحث في 34 درجة مئوية مع ليزر ليزر حلزوني في منطقة CA1 من ثقافات فرس النهر organotypic تحت المجهر 2-فوتون أظهرت متوسط الوقت ثابت من الاضمحلال من 2.7 مللي ثانية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Stereo microsope</td>
			<td>WPI</td>
			<td>PZMIII</td>
			<td>Precision Stereo Zoom Binocular Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotaxic frame</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51500D</td>
			<td>Digital Lab New Standard stereotaxic frame</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High speed drill equipment</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>514439V</td>
			<td>Foredom K1070 cromoter Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection system</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>53311</td>
			<td>Quintessential Stereotaxic Injector (QSI)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe 5 &#181;l</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>87930</td>
			<td>75RN Syr (26s/51/2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser positioning system</td>
			<td>Rapp OptoElectronic</td>
			<td>UGA-40</td>
			<td>UGA-40</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue laser for iGluu excitation</td>
			<td>Rapp OptoElectronic</td>
			<td>DL-473-020-S</td>
			<td>473 nm laser</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichroic mirror for 473 nm</td>
			<td>Rapp OptoElectronic</td>
			<td>ROE TB-355-405-473</td>
			<td>Dichroic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1P upright microscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>000000-1066-600</td>
			<td>Axioskop 2 FS Plus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective 63x/1.0</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>421480-9900</td>
			<td>W Plan-Apochromat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4x objective</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>44-00-20</td>
			<td>Achroplan 4x/0,10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichroic mirror for iGluu</td>
			<td>Omega optical</td>
			<td>XF2030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Emission filter for iGluu</td>
			<td>Omega optical</td>
			<td>XF3086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichroic mirror</td>
			<td>Omega optical</td>
			<td>QMAX_DI580LP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Emission filter for autofluorescence subtr.</td>
			<td>Omega optical</td>
			<td>QMAX EM600-650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sCMOS camera</td>
			<td>Andor</td>
			<td>ZYLA4.2PCL10</td>
			<td>ZYLA 4.2MP Plus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acqusition software</td>
			<td>Andor</td>
			<td>4.30.30034.0</td>
			<td>Solis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AD/DA converter</td>
			<td>HEKA Elektronik</td>
			<td>895035</td>
			<td>InstruTECH LIH8+8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquisition software</td>
			<td>HEKA Elektronik</td>
			<td>895153</td>
			<td>TIDA5.25</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode positioning system</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>MPC-200</td>
			<td>Micromanipulator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical stimulator</td>
			<td>Charite workshops</td>
			<td>STIM-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slicer</td>
			<td>Leica</td>
			<td>VT1200 S</td>
			<td>Vibrotome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brown/Flaming-type puller</td>
			<td>Sutter Instr</td>
			<td>SU-P1000</td>
			<td>P-1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass tubes for injection pipettes</td>
			<td>WPI</td>
			<td>1B100F3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass tubes forstimulation pipettes</td>
			<td>WPI</td>
			<td>R100-F3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetrodotoxin</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab120054</td>
			<td>TTX</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iGluu plasmid</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>106122</td>
			<td>pCI-syn-iGluu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Q175 mice</td>
			<td>Jackson Lab</td>
			<td>27410</td>
			<td>Z-Q175-KI</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

single synapse indicators of glutamate release and uptake in acute brain slices from normal and huntington mice

نقاط الاشتباك العصبي هي وحدات وظيفية مجزأة للغاية تعمل بشكل مستقل على بعضها البعض. في مرض هنتنغتون (HD) وغيرها من الاضطرابات العصبية التنكسية، قد يتعرض هذا الاستقلال للخطر بسبب عدم كفاية إزالة الغلوتامات وما ينتج عن ذلك من آثار الانسكاب والتسرب. وقد تورطت التغطية الفلكية المتغيرة للمحطات الطرفية presynaptic و / أو العمود الفقري التشجرات ، فضلا عن انخفاض حجم مجموعات نقل الغلوتامات في مواقع الإفراج الغلوتامات في الإمراض من الأمراض مما أدى إلى أعراض dys -/hyperkinesia. ومع ذلك ، فإن الآليات التي تؤدي إلى خلل في نقاط الاشتباك العصبي الجلوتامات في HD ليست مفهومة جيدا. تحسين وتطبيق التصوير المشبك حصلنا على بيانات تسليط ضوء جديد على الآليات التي تعوق بدء الحركات. هنا، ونحن نصف العناصر الرئيسية لنهج غير مكلفة نسبيا لتحقيق قرار واحد المشبك باستخدام جديدة مشفرة وراثيا ultrafast الغلوتامات الاستشعار iGluش،البصريات واسعة المجال، وCMOS العلمية (sCMOS) الكاميرا، ليزر 473 نانومتر ونظام تحديد المواقع بالليزر لتقييم حالة المشابك القشرية في شرائح حادة من العمر مناسبة الفئران صحية أو المريضة. تم بناء العابرين الغلوتامات من بكسل واحد أو متعددة للحصول على تقديرات ط) الإفراج الغلوتامات على أساس الارتفاع الأقصى لتركيز الغلوتامات [غلو] بجانب المنطقة النشطة وii) الغلوتامات المنعكسة في الوقت الثابت من الاضمحلال (TauD) من perisynaptic [Glu]. الاختلافات في حجم النوبة يستريح وأنماط متناقضة من اللدونة على المدى القصير بمثابة معايير لتحديد المحطات القشرية على أنها تنتمي إلى داخل telencephalic (IT) أو مسار المسار الهرمي (PT). باستخدام هذه الأساليب، اكتشفنا أن في الفئران HD أعراض ~ 40٪ من نقاط الاشتباك العصبي الكورتيكوستريا من نوع PT أظهرت إزالة الغلوتامات غير كافية، مما يشير إلى أن هذه نقاط الاشتباك العصبي قد تكون في خطر للضرر excitotoxic. النتائج تؤكد فائدة TauD كعلامة بيولوجية من نقاط الاشتباك العصبي المختلة في الفئران هنتنغتون مع النمط الظاهري نقص الحركة.

تحديد نوعين من الدوالي الجلوتاميتراتي القشرية تنشأ تكنولوجيا المعلومات وPT afferents في الطبقة 2/3 و 5 ، على التوالي ، وتظهر تشعبات تفاضلية وأنماط إنهاء في مخطط ipsilateral وcontralateral (محطات تكنولوجيا المعلومات فقط). لا يزال لا يعرف سوى القليل عن خصائص الإفراج عن الغلوتامات وإزالة في ظل ظروف ا...

Watch this Scientific Journal Video about Single Synapse Indicators of Glutamate Release and Uptake in Acute Brain Slices from Normal and Huntington Mice at JoVE.com

Single Synapse Indicators of Glutamate Release and Uptake in Acute Brain Slices from Normal and Huntington Mice

نقدم بروتوكولا لتقييم التوازن بين الإفراج عن الغلوتامات وإزالة في المشابك الجلوتامات القشرية واحدة في شرائح حادة من الفئران البالغة. يستخدم هذا البروتوكول مستشعر الفلورسنت iGluu للكشف عن الغلوتامات ، وكاميرا sCMOS للحصول على الإشارة وجهاز لإضاءة الليزر البؤري.

مؤشرات سينابس واحدة من الإفراج عن الغلوتامات والابوجدافي في شرائح الدماغ الحادة من الفئران العادية وهنتنغتون

Synapses are highly compartmentalized functional units that operate independently on each other. In Huntington&#39;s disease (HD) and other ...

التصوير عالي الدقة من نقاط الاشتباك العصبي واحد التعبير عن جهاز استشعار الغلوتامات سريع يسمح للكشف عن عدم التطابق المحلي بين إطلاق المرسل والإقبال. في حالة المرض ، يمكن استخدام هذه الطريقة لتحديد نقاط الاشتباك العصبي المختلة. لتصحيح autofluorescence ، أولا ، ضع شريحة الدماغ من فأر الفائدة في غرفة التسجيل من مجهر فوتون واحد.غمر الشريحة في السائل النخاعي الأوكسيجيني الاصطناعي واستخدام هدف غمر الماء 20x لتحديد موقع المخطط الظهري. إصلاح الشرائح مع شبكة النايلون على القيثارة البلاتين للحد من حركة الأنسجة، والتبديل إلى الهدف 63x المياه الغمر. باستخدام مرشح تمريرة عالية في 510 نانومتر، والحصول على صورة من الهياكل الإيجابية استشعار الفلورسنت والغلوتامات معا.باستخدام مرشح تمريرة عالية في 600 نانومتر، والحصول على صورة ثانية من هياكل autofluorescent وحدها. لتحديد النطاق، استخدم الشدات الوسطية لـ 10 بكسلات ألمع و10 أحلك بكسلات لتوسيع نطاق الصور الحمراء والصفراء. ثم قم بإجراء طرح الصورة الصفراء ناقص أحمر ثم إعادة قياس الصورة المطروحة لإنشاء ملف TIFF 8 بت القياسية لتصور مناسب من bouton من الفائدة.لإجراء البحث عن ألواح الاستجابة، تحتاج إلى ميكروبليت زجاجي مناسب للتحفيز الكهربائي. استخدام جرة ميكروبيبيت لإنتاج ماصات التحفيز من الشعيرات الدموية الزجاج بوروزيليكات مع أطراف تلميح الداخلية من حوالي ميكرومتر واحد. للتحقيق في العمل الإفراج التبعي المحتملة للغلوتامات من مجموعة من المرشحة boutons، حدد التكبير 63x ومرشح انبعاث نانومتر 510.قم بتحميل الصورة المطروحة للسماح بوضع قطب تحفيز الزجاج بجوار دوالي فلوري، وتجنب القرب من محاور إضافية. في ما varicosities المرتبطة بتشعب الحد الأقصى أو التخصيص داخل جزء أعمق من الشريحة. وضع القطب التحفيز بالقرب من بوتون من الفائدة وإيقاف الضوء، كما يجب أن يتم تنفيذ التسجيلات في الظلام الظام.ثم, تشغيل نظام تطبيق الحمام متعدد القنوات, مع قناة واحدة تقديم حل الحمام القياسية والقنوات الأخرى تقديم حاصرات اللازمة من القنوات أيون, الناقلين, أو مستقبلات الغشاء, بما في ذلك tetrototoxin لمنع توليد العمل المحتملة. التحكم في تدفق في موقع تسجيل وتشغيل محفز لتقديم البقول الحالية depolarizing من اثنين إلى 10 ميكرومبير إلى ماصة التحفيز. يتم تنشيط الإصدار الآن عن طريق تدفق الكالسيوم المباشر من خلال القنوات المسور الجهد.لتصور الافراج عن الغلوتامات في إزالة، وذلك باستخدام المجهر X، محركات Y، وضع اختبار الغلوتامات استشعار إيجابية بوتون على مقربة من مركز viewfield. بعد إيقاف عملية الاستحواذ، انقر على الصورة مع زر الماوس الأيسر لتحديد X، موقف Y من مركز بوتون يستريح. سيتم عرض إحداثيات X و Y للمؤشر المجموعة.باستخدام بيانات المعايرة، حساب إحداثيات الموقع حيث يجب إرسال شعاع الليزر لإثارة الفلورس الاستشعار الغلوتامات باستخدام الصيغ على النحو المشار إليه. لإنشاء تسلسل نقطة واحدة في برنامج التحكم بالليزر، حدد نقطة في مربع الإضافة إلى التسلسل في صفحة تسلسل برامج التحكم بالليزر وقم بتعيين التأخير في التشغيل واللتشغيل إلى الصفر، والتسلسل لتشغيله في TLL. ثم انقر فوق تسلسل البدء.في برنامج التحكم بالكاميرا، حدد معلمات التصوير المناسبة وحدد بدء التشغيل الخارجي لوضع المشغل. انقر فوق أخذ إشارة في برنامج التحكم في الكاميرا. ثم، الشروع في البروتوكول التجريبي المنصوص عليها لجهاز الزناد، وتنفيذ تجربة بروتوكول التجريبية مع الجدول الزمني المناسب، بحيث الكاميرا سوف تحصل على 400 إطار مع تردد 2.48 كيلوهرتز خلال تجربة واحدة، مع 0.1 هرتز أو انخفاض تردد التكرار.لتحديد نقاط الاشتباك العصبي المرضية، قم بتشغيل إجراءات الارتفاع وحساب شدة الفلورسينت، المتوسط والانحراف المعياري للمنطقة المختارة ذات الاهتمام عند الراحة. تحديد ومربع المنطقة التي تشغلها بكسل مع كثافة الفلوريس في بقية أكبر من المتوسط زائد ثلاثة انحرافات معيارية، وتحديد القطر الظاهري في ميكرون على افتراض شكل دائري من المنطقة عتبة فوق. رسم كثافة fluorescence ضد الزمن، والفرق بين قيمة كثافة الفلوريسين الفعلية وقيمة كثافة الفلوريسين في بقية مقسومة على قيمة كثافة الفلوريسين في بقية.تحديد ذروة اتساع استجابة الفلوريسنس. تنفيذ تركيب أحادية الاضاءة لاضمحلال من ذروة الاستجابة fluorescence، وتحديد ثابت الوقت من الاضمحلال، TauD. لتقدير السعة القصوى في المشبك معين، حدد بكسل مع أعلى تغيير في كثافة الفلور، والذي هو أفضل مؤشر من تحميل الغلوتامات المقدمة إلى آلات إزالة المشبك.يمكن استخدام التصوير المشبكى الواحد لتحديد فئتين من نقاط الاشتباك العصبي الكورتيكوستريا باستخدام معايير الحجم ونسبة النبض المقترنة. على فترات التحفيز من 20 إلى 50 مللي ثانية، تكون المحطات الطرفية الصغيرة بين الأطراف عرضة لاكتئاب النبض المقترن، في حين أظهرت محطات القناة الهرمية الأكبر تسهيلات نبض مقترنة. الاختبارات على السلوك الحركي التي أجريت على الفئران والفئران من النوع البري التي تعبر عن نمط ظاهري هنتنغتون ، تكشف عن وجود تشوهات إيجابية كبيرة بين النتائج التي تم الحصول عليها للمسير الكلي الذي يتم تشغيله في الحقل المفتوح ، والخطوة على الكمون.وعلاوة على ذلك، يظهر تصوير الغلوتامات المشبك واحد أن أعراض هنتنغتون الفئران أظهرت عجزا في سرعة تسوس الغلوتامات juxtasynpatic كما ينعكس في قيم تاود من الردود الغلوتامات لتحفيز المشبك واحد. في الحيوانات من النوع البري ، لوحظ هذا الإطالة فقط بعد تطبيق مثبط انتقائي وغير قابل للنقل من امتصاص الغلوتامات. تقييم احتمال حدوث قيمة تاود معينة في شرائح من الفئران من النوع البري، والفئران التي تعبر عن أعراض مرض هنتنغتون، وكشف أنه في الحيوانات البرية من النوع، TauD لا يتجاوز أبدا 15 مللي ثانية.في مرض هنتنغتون أعراض ومع ذلك، 40٪ من نقاط الاشتباك العصبي يحمل قيم تاود بين 16 و 58 مللي ثانية، على الرغم من وجود ميل للحد من كمية الغلوتامات صدر. لذلك، قد ينظر إلى تاود على أنه علامة بيولوجية لعلامات الاشتباك العصبي المختلة في مرض هنتنغتون، ويمكن استخدامها كذلك للتحقق من الانتعاش الوظيفي في التجارب التي تستهدف نقل الغلوتامات الفلكية. قد يساعد هذا البروتوكول لرصد الغلوتامات في نقاط الاشتباك العصبي الكورتيكوسترياال الفردية في توضيح دور نقص امتصاص الغلوتامات في التسبب في مرض التنكس العصبي.التصوير المشبك واحد مفيد بشكل خاص لاستكشاف مواقع ما قبل السينوائية من نقاط الاشتباك العصبي مثير.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

إعداد شرائح الحصين الحادة من الجرذان والفئران المعدلة وراثيا لدراسة التعديلات متشابك وامراض الشيخوخة خلال اميلويد

The rodent hippocampal slice preparation is perhaps the most broadly used tool for investigating mammalian synaptic function and plasticity. The ...

GABA-activated Single-channel and Tonic Currents in Rat Brain Slices

GABA تنشيط التيارات قناة واحدة وتونيك في شرائح الدماغ الجرذ

The GABAA channels are present in all neurons and are located both at synapses and outside of synapses where they generate phasic and tonic currents, ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

تسجيلات الكهربية المزدوجة للSynaptically-استجابات Astroglial والخلايا العصبية في الحصين شرائح الحاد

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

في الجسم الحي بعد الولادة التثقيب الكهربائي والوقت الفاصل بين التصوير من أرومة عصبية الهجرة في الدماغ الحادة ماوس شرائح

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Electrophysiological and Morphological Characterization of Neuronal Microcircuits in Acute Brain Slices Using Paired Patch-Clamp Recordings

الكهربية والمورفولوجية توصيف العصبية الحادة رقائق في الدماغ عن طريق شرائح الموثوقة التصحيح، المشبك التسجيلات

The combination of patch clamp recordings from two (or more) synaptically coupled neurons (paired recordings) in acute brain slice preparations with ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

إعداد شرائح الدماغ الحادة باستخدام محسن N-الميثيل-د-أسلوب استرداد واقية جلوكاميني

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

تسجيل اللدونة متشابك في شرائح هيبوكامبال الحاد تحتفظ في صغيرة الحجم-إعادة التدوير، ونضح-، وغمر من نوع نظام الدائرة

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Evaluation of Synapse Density in Hippocampal Rodent Brain Slices

تقييم كثافة المشبك في الدماغ القوارض هيبوكامبال شرائح

In the brain, synapses are specialized junctions between neurons, determining the strength and spread of neuronal signaling. The number of synapses is ...

Whole-cell Currents Induced by Puff Application of GABA in Brain Slices

كامل الخلية التيارات الناجمة عن تطبيق نفخة GABA في الدماغ شرائح

Pharmacological administration is commonly used when conducting whole-cell patch-clamp recording in brain slices. One of the best methods of drug ...

Evaluation of Hemisphere Lateralization with Bilateral Local Field Potential Recording in Secondary Motor Cortex of Mice

تقييم التجانب في نصف الكرة الأرضية مع التسجيل الميداني المحلي الثنائي المحتمل في القشرة الحركية الثانوية للفئران

This article demonstrates complete, detailed procedures for both in vivo bilateral recording and analysis of local field potential (LFP) in the cortical ...