Name: single synapse indicators of glutamate release and uptake in acute brain slices from normal and huntington mice
Uploaded: 2020-03-11T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Single Synapse Indicators of Glutamate Release and Uptake in Acute Brain Slices from Normal and Huntington Mice at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af CHDI (A-12467), den tyske forskningsfond (Exc 257/1 og DFG Project-ID 327654276 – SFB 1315) og intramural Research Funds of the Charité. Vi takker K. Török, St. George's, University of London, og N. Helassa, University of Liverpool, for iGluu plasmid og mange nyttige diskussioner. D. Betances og A. Schönherr ydede fremragende teknisk bistand.

Alt arbejde er udført i overensstemmelse med EU-direktiv 2010/63/EU for dyreforsøg og blev registreret på Kontoret for Sundhedsbeskyttelse og Teknisk Sikkerhed i Berlin (G0233/14 og G0218/17).
BEMÆRK: Optagelser fra Q175 wild-type (WT) og heterozygoter (HETs) kan udføres i alle aldre og køn. Her studerede vi mænd og kvinder i en alder af 51 til 76 uger.
1. Injektion af glutamatsensoren iGluu for udtryk i korticostriatal axoner
<...

Forsøgene vedrører et spørgsmål af almen interesse — synapse uafhængighed og dens mulige tab i løbet af neurodegeneration, og vi beskriver en ny tilgang til at identificere berørte synapser i akutte hjerneskiver fra alderen (>1 år) mus. Drage fordel af de forbedrede kinetiske egenskaber af den nyligt indførte glutamat sensor iGluu eksperimenterne belyse forholdet mellem synaptisk glutamat frigivelse og optagelse på en måde, der ikke har været muligt før.
Indflydelsen ...

Den relative virkning af hver synaptisk terminal, der tilhører en "enhedsforbindelse" (dvs. forbindelsen mellem 2 nerveceller) vurderes typisk ved dens indflydelse på det oprindelige segment af den postsynaptiske neuron1,2. Somatiske og/eller dendritiske optagelser fra postsynaptiske neuroner udgør de mest almindelige og indtil nu også de mest produktive midler til at afklare informationsbehandling under et top-down eller vertikalt perspektiv3,4,5. Tilstedeværelsen af astrocytter med deres diskrete og (i gnavere) ikke-overlappende områder kan imidlertid bidrage med et horisontalt perspektiv , der er baseret på lokale mekanismer for signaludveksling, integration og synkronisering på synaptiske steder6,7,8,9,10.
Fordi det er kendt, at astroglia spiller, i almindelighed, en stor rolle i patogenesen af neurodegenerative sygdomme11,12 og især en rolle i vedligeholdelse og plasticitet af glutamatergic synapser13,14,15,16, er det tænkeligt, at ændringer i synaptiske ydeevne udvikler sig i overensstemmelse med tilstanden af astrocytter i det fælles målområde af ferente fibre med forskellig oprindelse. For yderligere at undersøge de mål-/astroglia-afledte lokale reguleringsmekanismer inden for sundhed og sygdom er det nødvendigt at evaluere individuelle synapser. Denne tilgang blev udarbejdet for at vurdere rækken af funktionelle glutamat frigivelse og clearance indikatorer og til at definere kriterier, der kan anvendes til at identificere dysfunktionelle (eller genvundne) synapser i hjernen områder tættest relateret til bevægelse indledning (dvs. først og fremmest i den motoriske cortex og dorsale striatum).
Striatum mangler iboende glutamatergic neuroner. Derfor er det relativt let at identificere glutamatergic afferents af extrastriatal oprindelse. Sidstnævnte stammer for det meste i den mediale thalamus og i hjernebarken (se17,18,19,20 for mere). Korticostriatal synapser dannes af axoner af pyramideformede neuroner lokaliseret i kortikale lag 2/3 og 5. De respektive axoner danner bilaterale intra-telencephalic (IT) forbindelser eller ipsilaterale forbindelser via et fibersystem, der mere caudally udgør den pyramideformede tarmkanalen (PT). Det er endvidere blevet foreslået , at it- og PT-typeterminaler er forskellige med hensyn til deres frigivelseskarakteristika og størrelse21,22. I lyset af disse data kunne man også forvente visse forskelle i håndteringen af glutamat.
Striatum er det hårdest ramte hjerneområde ved Huntingtons Sygdom (HS)5. Human HS er en alvorlig genetisk arvelig neurodegenerativ lidelse. Q175-musemodellen giver mulighed for at undersøge det cellulære grundlag af den hypokinetiske stive form for HS, en tilstand, der har meget til fælles med parkinsonisme. Starter i en alder af omkring 1 år, homozygote Q175 mus (HOM) udviser tegn på hypokinesi, som det fremgår ved at måle den tid, der bruges uden bevægelse i et åbent felt23. De nuværende forsøg med heterozygote Q175-mus (HET) bekræftede de tidligere motoriske underskud, der blev observeret i HOM, og viste desuden, at de observerede motoriske underskud var ledsaget af et reduceret niveau af den astrocytiske eksterionsyretransportør 2 protein (EAAT2) i umiddelbar nærhed af korticostiriatal synaptiske terminaler24. Det har derfor været en hypotese , at et underskud i udbredelsen af astrocytisk glutamat kan føre til dysfunktion eller endog tab af respektive synapser25,26.
Her beskriver vi en ny tilgang, der gør det muligt at evaluere enkelt synapse glutamat clearance i forhold til mængden af den frigivne neurotransmitter. Den nye glutamat sensor iGluu blev udtrykt i korticostriatal pyramideformede neuroner. Det blev udviklet af Katalin Török27 og repræsenterer en ændring af den tidligere indførte høj-affinitet, men langsom glutamat sensor iGluSnFR28. Begge sensorer er derivater af det forbedrede grønne fluorescerende protein (EGFP). For spektrale og kinetiske egenskaber, se Helassa et al.27. Kort, iGluu er en lav-affinitet sensor med hurtig de-aktivering kinetik og derfor særligt velegnet til at studere glutamat clearance på glutamat-releasing synaptiske terminaler. Dissociationstidskonstanten for iGluu blev bestemt i en stop-flow-anordning, som afgjorde enTau-offværdi på 2,1 ms ved 20 °C, men 0,68 ms, når den ekstrapoleres til en temperatur på 34 °C27. Enkelt Schaffer sikkerhedsstillelse terminaler undersøgt ved 34 °C med spiral laserscanning i CA1 regionen organotypic hippocampal kulturer under en 2-foton mikroskop udstillet en gennemsnitlig tid konstant af henfald på 2,7 ms.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Stereo microsope</td>
			<td>WPI</td>
			<td>PZMIII</td>
			<td>Precision Stereo Zoom Binocular Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereotaxic frame</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51500D</td>
			<td>Digital Lab New Standard stereotaxic frame</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High speed drill equipment</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>514439V</td>
			<td>Foredom K1070 cromoter Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Injection system</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>53311</td>
			<td>Quintessential Stereotaxic Injector (QSI)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe 5 &#181;l</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>87930</td>
			<td>75RN Syr (26s/51/2)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser positioning system</td>
			<td>Rapp OptoElectronic</td>
			<td>UGA-40</td>
			<td>UGA-40</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blue laser for iGluu excitation</td>
			<td>Rapp OptoElectronic</td>
			<td>DL-473-020-S</td>
			<td>473 nm laser</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichroic mirror for 473 nm</td>
			<td>Rapp OptoElectronic</td>
			<td>ROE TB-355-405-473</td>
			<td>Dichroic</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1P upright microscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>000000-1066-600</td>
			<td>Axioskop 2 FS Plus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective 63x/1.0</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>421480-9900</td>
			<td>W Plan-Apochromat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4x objective</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td>44-00-20</td>
			<td>Achroplan 4x/0,10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichroic mirror for iGluu</td>
			<td>Omega optical</td>
			<td>XF2030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Emission filter for iGluu</td>
			<td>Omega optical</td>
			<td>XF3086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichroic mirror</td>
			<td>Omega optical</td>
			<td>QMAX_DI580LP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Emission filter for autofluorescence subtr.</td>
			<td>Omega optical</td>
			<td>QMAX EM600-650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sCMOS camera</td>
			<td>Andor</td>
			<td>ZYLA4.2PCL10</td>
			<td>ZYLA 4.2MP Plus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acqusition software</td>
			<td>Andor</td>
			<td>4.30.30034.0</td>
			<td>Solis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AD/DA converter</td>
			<td>HEKA Elektronik</td>
			<td>895035</td>
			<td>InstruTECH LIH8+8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aquisition software</td>
			<td>HEKA Elektronik</td>
			<td>895153</td>
			<td>TIDA5.25</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode positioning system</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>MPC-200</td>
			<td>Micromanipulator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical stimulator</td>
			<td>Charite workshops</td>
			<td>STIM-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slicer</td>
			<td>Leica</td>
			<td>VT1200 S</td>
			<td>Vibrotome</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brown/Flaming-type puller</td>
			<td>Sutter Instr</td>
			<td>SU-P1000</td>
			<td>P-1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass tubes for injection pipettes</td>
			<td>WPI</td>
			<td>1B100F3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass tubes forstimulation pipettes</td>
			<td>WPI</td>
			<td>R100-F3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetrodotoxin</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab120054</td>
			<td>TTX</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>iGluu plasmid</td>
			<td>Addgene</td>
			<td>106122</td>
			<td>pCI-syn-iGluu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Q175 mice</td>
			<td>Jackson Lab</td>
			<td>27410</td>
			<td>Z-Q175-KI</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

single synapse indicators of glutamate release and uptake in acute brain slices from normal and huntington mice

Synapser er stærkt opdelte funktionelle enheder, der fungerer uafhængigt på hinanden. Ved Huntingtons Sygdom (HS) og andre neurodegenerative lidelser kan denne uafhængighed blive kompromitteret på grund af utilstrækkelig glutamatclearance og de deraf følgende udslips- og udslipseffekter. Ændret astrocytisk dækning af de presynaptiske terminaler og/eller dendritiske pigge samt en reduceret størrelse af glutamattransporterklynger på glutamatfrigivelsessteder har været involveret i patogenesen af sygdomme, der resulterer i symptomer på dys-/hyperkinesi. Men de mekanismer, der fører til dysfunktion af glutamatergic synapser i HS, er ikke godt forstået. Forbedring og anvendelse synapse imaging vi har fået data kaste nyt lys over de mekanismer, der hindrer indledningen af bevægelser. Her beskriver vi de vigtigste elementer i en relativt billig tilgang til at opnå en enkelt synapse opløsning ved hjælp af den nye genetisk kodede ultrahurtige glutamat sensor iGluu, wide-field optik, en videnskabelig CMOS (sCMOS) kamera, en 473 nm laser og en laser positionering system til at vurdere tilstanden af korticostriatal synapser i akutte skiver fra alder passende sunde eller syge mus. Glutamattransienter blev konstrueret ud fra enkelte eller flere pixels for at opnå skøn over i) glutamatfrigivelse baseret på den maksimale højde af glutamatkoncentrationen [Glu] ved siden af den aktive zone og ii) glutamatoptagelse som afspejlet i tidskonstanten af henfald (TauD) af perisyaptisk [Glu]. Forskelle i hvilebouton størrelse og kontrasterende mønstre af kortsigtede plasticitet tjente som kriterier for identifikation af korticostital terminaler som tilhører intratelencephalic (IT) eller pyramideformede tarmkanalen (PT) vej. Ved hjælp af disse metoder opdagede vi, at i symptomatiske HS-mus ~ 40% af PT-type korticostriatal synapser udviste utilstrækkelig glutamat clearance, hvilket tyder på, at disse synapser kan være i risiko for excitotoksiske skader. Resultaterne understreger nytten af TauD som en biomarkør for dysfunktionelle synapser hos HS-mus med en hypokinetisk fænotype.

Identifikation af to typer korticostital glutamaterge varicosities IT og PT afferentes stammer fra henholdsvis lag 2/3 og 5 og udviser differensforgrenings- og termineringsmønstre i det ipsilaterale og kontralaterale (kun IT-terminaler) striatum. Der vides stadig kun lidt om egenskaberne af glutamatfrigivelse og clearance under gentagne aktiveringsbetingelser som observeret under påbegyndelse af bevægelser, men det er veldokumenteret, at de respektive glutamat-releasing varicosities varierer i stø...

Watch this Scientific Journal Video about Single Synapse Indicators of Glutamate Release and Uptake in Acute Brain Slices from Normal and Huntington Mice at JoVE.com

Single Synapse Indicators of Glutamate Release and Uptake in Acute Brain Slices from Normal and Huntington Mice

Vi præsenterer en protokol til at evaluere balancen mellem glutamat frigivelse og clearance på enkelt korticostriatal glutamatergic synapser i akutte skiver fra voksne mus. Denne protokol bruger fluorescerende sensor iGluu til glutamat detektion, en sCMOS kamera til signal erhvervelse og en enhed til fokal laser belysning.

Enkelt synapse indikatorer for glutamat frigivelse og optagelse i akut hjerne skiver fra normal og Huntington Mus

Synapses are highly compartmentalized functional units that operate independently on each other. In Huntington&#39;s disease (HD) and other ...

Høj opløsning billeddannelse af enkelte synapser udtrykke en hurtig glutamat sensor giver mulighed for en påvisning af lokale uoverensstemmelser mellem sender frigivelse og optagelse. I tilfælde af sygdom, denne metode kan bruges til at identificere dysfunktionelle synapser. For autofluorescens korrektion, først, placere en hjerne skive fra musen af interesse i optagelsen kammer af en en-foton mikroskop.Nedsænk skiven i iltet, kunstig cerebrospinalvæske og bruge 20x vand-nedsænkning mål at finde dorsal striatum. Fastgør skiverne med et nylongitter på en platinharpe for at minimere vævsbevægelsen, og skift til 63x vandnedsænkningsmålet. Ved hjælp af en høj pass filter på 510 nanometer, erhverve et billede af autofluorescerende og glutamat sensor positive strukturer sammen.Ved hjælp af en høj pass filter på 600 nanometer, erhverve et andet billede af autofluorescerende strukturer alene. Hvis du vil definere området, skal du bruge de gennemsnitlige intensiteter af de 10 lyseste og 10 mørkeste pixel til at skalere de røde og gule billeder. Derefter udføre en subtraktion af det gule minus røde billede og skalere det fratrerede billede igen for at generere en standard 8-bit TIFF-fil for bekvem visualisering af den interesse, der er af interesse.For at udføre en søgning efter responsive boutons, du har brug for en passende glas mikropipette til elektrisk stimulation. Brug en mikropipette puller til at producere stimulation pipetter fra borosilikat glas kapillærer med interne spids diametre på omkring en mikrometer. Hvis du vil sonde for handling potentiel afhængig frigivelse af glutamat fra et sæt af kandidat boutons, skal du vælge en 63x forstørrelse og en 510 nanometer emission filter.Indlæs det fratrukket billede for at muliggøre placeringen af en glasstimuleringselekdronning ved siden af en fluorescerende varicositet, så du undgår nærhed af yderligere axoner. I hvilke varicositeter forbundet med en maksimal bifurcation eller fordeling inden for dybere del af skiven. Angulationselektroden i nærheden af den bouton, der er af interesse, og sluk lyset, da optagelserne skal udføres i komplet mørke.Tænd derefter for multikanalsbadeapplikationssystemet, hvor den ene kanal leverer standardbadeopløsningen, og de andre kanaler leverer de nødvendige blokkere af ionkanaler, transportører eller membranreceptorer, herunder tetrotototoksin for at blokere for handlingspotentialegenerering. Styr strømmen på registreringsstedet, og tænd for stimulatoren for at levere depolarerende strømimpulser på to til 10 mikroampere til stimuleringspipetten. Frigivelsen aktiveres nu ved direkte calciumtilstrømning gennem spændingsgatede kanaler.For at visualisere glutamat frigivelse i clearance, ved hjælp af mikroskop X, Y drev, placere den testede glutamat sensor positiv bouton tæt på viewfield center. Efter at have stoppet erhvervelsen, skal du klikke på billedet med venstre museknap for at bestemme X, Y position af hvile bouton center. X-, Y-koordinaterne for den indstillede markør vises.Ved hjælp af kalibreringsdataene beregnes koordinaterne for det sted, hvor laserstrålen skal sendes til excitation af glutamatsensorfluorescensen ved hjælp af formlerne som angivet. Hvis du vil oprette en sekvens med ét punkt i laserstyringssoftwaren, skal du vælge punkt i feltet føj til sekvens på sekvenssiden i laserstyringssoftwaren og indstille kørslerne og kørselsforsinkelsen til nul og den rækkefølge, der skal køres på TLL. Klik derefter på startsekvens.Vælg de relevante billedparametre i kamerastyringssoftwaren, og vælg ekstern start for udløsertilstanden. Klik på tag signal i kameraet kontrol software. Derefter indlede den eksperimentelle protokol, der er fastsat for trigger enhed, og gennemføre den eksperimentelle protokol forsøg med den relevante tidslinje, således at kameraet vil erhverve 400 billeder med en 2,48 kilohertz frekvens under et forsøg, med en 0,1 hertz eller lavere gentagelse frekvens.For at identificere patologiske synapser skal du tænde for elevationsrutinerne og beregne fluorescensintensiteten, middelværdien og standardafvigelsen for den valgte interesseregion i hvile. Bestemme og boks det område, der er besat af pixels med en fluorescensintensitet ved hvile større end gennemsnittet plus tre standardafvigelser, og bestemme en virtuel diameter i mikron under forudsætning af en cirkulær form af overliggende tærskelområde. Fluorescensintensiteten afbildes mod tiden, da forskellen mellem den faktiske fluorescensintensitetsværdi og fluorescensintensitetsværdien ved hvile divideres med fluorescensintensitetsværdien i hvile.Den maksimale amplitude af fluorescensresponsen bestemmes. Udfør en monoexponential montering for henfald fra toppen af fluorescens respons, og bestemme tiden konstant af forfald, TauD. For at estimere den maksimale amplitude ved en given synapse skal du vælge den pixel, der har den højeste ændring i fluorescensintensiteten, som er den bedste indikator for glutamatbelastningen, der præsenteres for synapsens frigangsmaskiner.Enkelt synapse billeddannelse kan bruges til at identificere to klasser af kortikostriatal synapser ved hjælp af størrelse og parret puls ratio kriterier. Med stimulusintervaller på 20 til 50 millisekunder er de mindre interenterochephalic terminaler tilbøjelige til parrede pulsdepression, mens de større pyramideformede tarmkanalterminaler viste parrede pulsfacade. Test af motorisk adfærd udført på vilde mus og mus, der udtrykker en Huntington fænotype, afslører en signifikant positiv coorelation mellem de opnåede resultater for den samlede stiløb i det åbne felt og trinnet over ventetid.Endvidere viser enkelt synapse glutamat-billeddannelse, at symptomatiske Huntington-mus udviste et underskud i hastigheden af sammenfaldende glutamatforfald som afspejlet i TauD-værdierne i glutamatresponserne på enkelt synapsestimulering. Hos vilde dyr blev en sådan forlængelse først observeret efter anvendelse af en selektiv, ikke-transportabel hæmmer af glutamatoptagelse. En vurdering af sandsynligheden for forekomst af en given TauD-værdi i skiver fra vilde mus og mus, der udtrykker symptomerne på Huntingtons Sygdom, viste, at TauD hos vilde dyr aldrig overstiger 15 millisekunder.Ved symptomatisk Huntingtons Sygdom udviser 40% af synapserne dog TauD-værdier mellem 16 og 58 millisekunder, på trods af en tendens til en reduktion i mængden af frigivet glutamat. TauD kan derfor betragtes som en biomarkør for dysfunktionelle synapser ved Huntingtons Sygdom og kan yderligere anvendes til at verificere funktionel helbredelse i eksperimenter rettet mod astrocytisk glutamattransport. Denne protokol for glutamat overvågning på de enkelte kortikostriatal synapser kan bidrage til at afklare den rolle, glutamat optagelse mangel i patogenes af neurodegenerative sygdom.Enkelt synapse billeddannelse er især nyttig til at udforske præ-synaptikatiske steder af excitatoriske synapser.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology

The rodent hippocampal slice preparation is perhaps the most broadly used tool for investigating mammalian synaptic function and plasticity. The ...

GABA-activated Single-channel and Tonic Currents in Rat Brain Slices

The GABAA channels are present in all neurons and are located both at synapses and outside of synapses where they generate phasic and tonic currents, ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

Dobbelte Elektrofysiologiske Optagelser af synaptisk-evoked astrogliale og Neuronal respons i Akut hippocampusskiver

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Postnatal Electroporation and Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Mouse Acute Brain Slices

In vivo Fødselsdepression Elektroporation og Time-lapse Imaging af neuroblast Migration i Mouse Akut hjerneskiver

The subventricular zone (SVZ) is one of the main neurogenic niches in the postnatal brain. Here, neural progenitors proliferate and give rise to ...

Electrophysiological and Morphological Characterization of Neuronal Microcircuits in Acute Brain Slices Using Paired Patch-Clamp Recordings

Elektrofysiologiske og morfologiske karakterisering af neuronal Mikrokredsløb i akut Brain Skiver Brug parrede Patch-clamp optagelser

The combination of patch clamp recordings from two (or more) synaptically coupled neurons (paired recordings) in acute brain slice preparations with ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Forberedelse af akut hjernen skiver bruger en optimeret N-Methyl-D-glucamine beskyttende genoprettelsesmetode

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Optagelse synaptisk plasticitet i akut hippocampus skiver vedligeholdes i en lille-volumen genanvendelse - Perfusion- og neddykning-type kammer System

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Evaluation of Synapse Density in Hippocampal Rodent Brain Slices

Evaluering af Synapse tæthed i hippocampus gnaver hjernen skiver

In the brain, synapses are specialized junctions between neurons, determining the strength and spread of neuronal signaling. The number of synapses is ...

Whole-cell Currents Induced by Puff Application of GABA in Brain Slices

Hele-celle strømninger induceret af Puff anvendelse af GABA i hjernen skiver

Pharmacological administration is commonly used when conducting whole-cell patch-clamp recording in brain slices. One of the best methods of drug ...

Evaluation of Hemisphere Lateralization with Bilateral Local Field Potential Recording in Secondary Motor Cortex of Mice

Evaluering af halvkugle Lateralisering med bilateral lokal felt potentiel optagelse i sekundær motor cortex af mus

This article demonstrates complete, detailed procedures for both in vivo bilateral recording and analysis of local field potential (LFP) in the cortical ...