Name: human adipose tissue micro-fragmentation for cell phenotyping and secretome characterization
Uploaded: 2019-10-20T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Human Adipose Tissue Micro-fragmentation for Cell Phenotyping and Secretome Characterization at JoVE.com

Yazarlar Edinburgh Üniversitesi'nden Claire Cryer ve Fiona Rossi'ye akış sitometrisi konusunda uzman yardımları için teşekkür etmek istiyorlar. Ayrıca doku örnekleri sağlayarak katkıda bulunan Murrayfield hastanesi personeline de teşekkür ederiz.
Bu çalışma, İngiliz Kalp Vakfı ve Lipogems'in yağ doku işleme kitleri sağlayan bağışları ile desteklenmiştir. İnsan erişkin doku örnekleri Güney Doğu İskoçya Araştırma Etik Komitesi'nin tam etik izni ile temin edilmiştir (referans: 16/SS/0103).

Bu araştırmada insan dokularının kullanımına etik onay Güney Doğu İskoçya Araştırma Etik Komitesi'nden alınmıştır (referans: 16/SS/0103).
1. Subkutan Abdominal Yağ Dokusu Koleksiyonu
NOT: Manuel lipo aspirasyon prosedüründe kullanılan tüm aletler mikro parçalanma cihazının üreticisi tarafından sağlanır.
<ol><li>Deney boyunca tüm sıvılar, konteynerler, aletler ve çalışma alanı için steriliteyi koruyun.</li>
	<li>...

<ol>
	<li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multilineage+cells+from+human+adipose+tissue:+implications+for+cell-based+therapies.">Multilineage cells from human adipose tissue: implications for cell-based therapies.</a> Tissue Engineering Journal. 7 (2), 211-228 (2001).</li><li>Sch&#228;ffler, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concise+review:+Adipose+tissue-derived+stromal+cells-basic+and+clinical+implications+for+novel+cell-based+therapies.">Concise review: Adipose tissue-derived stromal cells-basic and clinical implications for novel cell-based therapies.</a> Stem Cells. 25 (4), 818-827 (2007).</li><li>Bianchi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+non+enzymatic+method+and+device+to+obtain+a+fat+tissue+derivative+highly+enriched+in+pericyte-like+elements+by+mild+mechanical+forces+from+human+lipoaspirates.">A new non enzymatic method and device to obtain a fat tissue derivative highly enriched in pericyte-like elements by mild mechanical forces from human lipoaspirates.</a> Cell Transplantation. 2, 2063-2077 (2013).</li><li>Raffaini, M., Tremolada, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micro+fractured+and+purified+adipose+tissue+graft+(Lipogems)+can+improve+the+orthognathic+surgery+outcomes+both+aesthetically+and+in+postoperative+healing.">Micro fractured and purified adipose tissue graft (Lipogems) can improve the orthognathic surgery outcomes both aesthetically and in postoperative healing.</a> CellR4. 2 (4), (2014).</li><li>Cestaro, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intersphincteric+anal+lipofilling+with+micro-fragmented+fat+tissue+for+the+treatment+of+faecal+incontinence:+preliminary+results+of+three+patients.">Intersphincteric anal lipofilling with micro-fragmented fat tissue for the treatment of faecal incontinence: preliminary results of three patients.</a> Wideochir Inne Tech Maloinwazyjne. 10 (2), 337-341 (2015).</li><li>Fantasia, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfractured+and+purified+adipose+tissue+(Lipogems+system)+injections+for+treatment+of+atrophic+vaginitis.">Microfractured and purified adipose tissue (Lipogems system) injections for treatment of atrophic vaginitis.</a> Journal of Urology Research. 3 (7), 1073-1075 (2016).</li><li>Saibene, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transnasal+endoscopic+microfractured+fat+injection+in+glottic+insufficiency.">Transnasal endoscopic microfractured fat injection in glottic insufficiency.</a> B-ENT. 11 (3), 229-234 (2015).</li><li>Giori, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recovery+of+function+in+anal+incontinence+after+micro-fragmented+fat+graft+(Lipogems)+injection:+two+years+follow+up+of+the+first+5+cases.">Recovery of function in anal incontinence after micro-fragmented fat graft (Lipogems) injection: two years follow up of the first 5 cases.</a> CellR4. 3 (2), (2015).</li><li>Tremolada, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adipose+mesenchymal+stem+cells+and+regenerative+adipose+tissue+graft+(Lipogems)+for+musculoskeletal+regeneration.">Adipose mesenchymal stem cells and regenerative adipose tissue graft (Lipogems) for musculoskeletal regeneration.</a> European Journal of Muscoloskeletal Diseases. 3 (2), 57-67 (2014).</li><li>Striano, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-responsive+knee+pain+with+osteoarthritis+and+concurrent+meniscal+disease+treated+with+autologous+micro-fragmented+adipose+tissue+under+continuous+ultrasound+guidance.">Non-responsive knee pain with osteoarthritis and concurrent meniscal disease treated with autologous micro-fragmented adipose tissue under continuous ultrasound guidance.</a> CellR4. 3 (5), (2015).</li><li>Randelli, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipogems+product+treatment+increases+the+proliferation+rate+of+human+tendon+stem+cells+without+affecting+their+stemness+and+differentiation+capability.">Lipogems product treatment increases the proliferation rate of human tendon stem cells without affecting their stemness and differentiation capability.</a> Stem Cells International. 2016, (2016).</li><li>Bianchi, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipogems,+a+new+modality+off+at+tissue+handling+to+enhance+tissue+repair+in+chronic+hind+limb+ischemia.">Lipogems, a new modality off at tissue handling to enhance tissue repair in chronic hind limb ischemia.</a> CellR4. 2 (6), (2014).</li><li>Benzi, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfractured+lipoaspirate+may+help+oral+bone+and+soft+tissue+regeneration:+a+case+report.">Microfractured lipoaspirate may help oral bone and soft tissue regeneration: a case report.</a> CellR4. 3 (3), (2015).</li><li>Crisan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+perivascular+origin+for+mesenchymal+stem+cells+in+multiple+human+organs.">A perivascular origin for mesenchymal stem cells in multiple human organs.</a> Cell Stem Cell. 3, 301-313 (2008).</li><li>Vezzani, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Higher+pericyte+content+and+secretory+activity+of+micro-fragmented+human+adipose+tissue+compared+to+enzymatically+derived+stromal+vascular+fraction.">Higher pericyte content and secretory activity of micro-fragmented human adipose tissue compared to enzymatically derived stromal vascular fraction.</a> Stem Cells Translational Medicine. 7 (12), 876-886 (2018).</li><li>Coleman, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+fat+grafting:+more+than+a+permanent+filler.">Structural fat grafting: more than a permanent filler.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 118 (3), 108S-120S (2006).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Editorial:+An+update+on+organoid+research.">Editorial: An update on organoid research.</a> Nature Cell Biology. 20 (6), 633 (2018).</li></ol>

Bu yazı, normal yağ dokusu mikroanatomi gösteren küçük kümeler halinde insan yağ dokusukapalı bir sistem cihazı kullanarak, fiziksel fraksiyonu açıklar.
Elle emişli insan deri altı yağ dokusu ve tuzlu çözelti, cihazın güçlü manuel sallayarak üzerine, alt milimetre içine yağ yırtmak büyük langırt tarzı metalik küreler içeren şeffaf bir plastik silindir içine yüklenir Parça. Ekli filtreler ve priz enkaz ortadan kaldırılması na izin, kan ve serbest lipidler v...

Adipoz doku, uzun rekonstrüktif ve kozmetik cerrahi bir dolgu olarak kullanılan, son zamanlarda daha popüler bir kez mezenkimal kök hücreler için bir kaynak olarak tanınan rejeneratif tıp haline gelmiştir (MSCs)1. Lipoaspirates tek hücreli süspansiyonlar içine enzimatik ayrıştırılmış hastada değiştirilmeden kullanılan bir adiposit içermeyen stromal vasküler fraksiyonu (SVF) verim veya daha yaygın olarak, MSCs içine birkaç hafta kültürlü2.
Ancak, enzim dissosiasyonu doku mikroortamlarını yırtar, in vitro kültür tarafından önemli ölçüde modifiye edilen varsayımsal rejeneratif hücrelerden komşu düzenleyici hücrelerden göz lerden uzaktır. Bu tür deneysel eserler ve sonuç fonksiyonel değişiklikler önlemek için, girişimleri mümkün olduğunca bozulmamış olarak doğal yapılandırma korurken terapötik kullanım için yağ dokusu işlemek için yapılmıştır3,4. Özellikle mekanik doku bozulması enzimatik dissosilasyonun yerini almaya başlamıştır. Bu amaçla, tam daldırma kapalı sistem mikro-parçaları lipoaspirates içine milimetre, kan- ve yağsız doku kümeleri (örneğin, Lipogems) elek filtrasyon ve çelik mermer indüklenen bozulma bir dizi aracılığıyla3. Mikro parçalı yağ dokusunun otolog transplantasyonu, bu kapalı sistem teknolojisini kullanarak, kozmetik, ortopedi, proktoloji ve jinekoloji4,5 , 6,7,8,9,10,11,12,13.
Kapalı sistem cihazı ve izojenik SVF ile elde edilen insan mikro-parçalanmış yağ dokusu (MAT) arasında yapılan karşılaştırmada, kültürde vasküler/stromal hücre dağılımı ve salgı aktivitesi açısından MAT'ın daha fazla perisit içerdiğini ortaya koymuştur. presumptive MSCs14, ve büyüme faktörleri ve sitokinler15daha yüksek miktarlarda salgılar .
Bu makalede, kapalı bir sistem cihazı kullanılarak insan deri altı yağ dokusunun enzimsiz mikro-parçalanması ve in vitro kültür, immünohistokimya ve FACS analizi için bu mikronize edilmiş yağ dokusunun daha fazla işlenmesi, mevcut hücre tiplerini ve salgılanan çözünür faktörleri belirlemek için (Şekil 1). Açıklanan yöntem, daha fazla uygulama ve çalışmalar için uygun olan, sağlam bir niş içinde canlı yağ dokusu hücre popülasyonları içeren yağ türetilmiş milimetre-altı organoidler güvenli bir şekilde üretir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4% Buffered paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>VWR chemicals</td>
			<td>9317.901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.9% NaCl Solution</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>3KB7127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AlexaFluor 555 goat anti-mouse IgG&#160;</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A21422</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AlexaFluor 647 goat anti-Rabbit IgG</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>&#160;A21245</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium chloride</td>
			<td>fisher chemicals</td>
			<td>1158868</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antigent Diluent</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>3218</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Mouse Ig, &#954;/Negative Control (BSA) Compensation Plus</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560497</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avidin/Biotin Blocking Kit</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>4303</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD LSR Fortessa 5-laser flow cytometer&#160;</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td>Laser 405nm (violet)/375nm (UV) &#8211; filter V450/50 for DAPI and V450 antibodies; Laser 561nm (Yellow-green) &#8211; filter YG582/15 for PE antibodies; Laser 405nm (violet)/375nm (UV) &#8211; filter V710/50 for BV711 antibodies&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biotinylated Ulex europaeus lectin</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>Vector-B1065</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BV711 Mouse IgG1, k Isotype Control</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>563044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD146-BV711</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>563186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD31-V450</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>561653</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD34-PE</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555822</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45-V450</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560367</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>D1306</td>
			<td>stock concentration: 5mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable liposuction cannula (LGI 13Gx185 mm &#8211; AR 13/18) &#160;</td>
			<td>Lipogems&#160;</td>
			<td></td>
			<td>provided in the Lipogems surgical kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diva software 306 (v.6.0)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose, GlutaMAX without sodium pyruvate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>61965026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGMTM-2 Endothelial Cell Growth Medium-2 BulletKitTM</td>
			<td>Lonza&#160;</td>
			<td>CC-3156</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Calf Serum (FCS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F2442</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo (v.10.0)</td>
			<td>FlowJo</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoromount G</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>0100-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>410870025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipogems Surgical Kit</td>
			<td>Lipogems&#160;</td>
			<td>LG SK 60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti human- NG2</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>554275</td>
			<td>stock concentration: 0.5 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Mouse IgG1, &#954; Isotype Control</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555749</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4333</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8537</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystirene round bottom 5 mL tube with cell strainer snap cap&#160;</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>352235, 25/Pack</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polystyrene round bottom 5 mL tubes</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>352003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti human - PDGFRb</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>32570</td>
			<td>stock concentration: 0.15 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptavidin conjugated-488</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>&#160;S32354</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>84100-5kg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue infiltration cannula (17GX185 mm-VG 17/18)&#160;</td>
			<td>Lipogems&#160;</td>
			<td></td>
			<td>provided in the Lipogems surgical kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris base</td>
			<td>fisher chemicals</td>
			<td>BP152-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Type- II Collagenase</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17101-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>V450 Mouse IgG1, &#954; Isotype Control</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560373</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Widefield Zeiss observer</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Objective used: Plan-Apo 20x/0.8</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Colibri7 LED light source ( LEDs: 385, 475, 555, 590, 630 nm)</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>DAPI: UV, excitation 385nm; 488: Blue, excitation 475nm;&#160; 555: Green, excitation 555nm;&#160; 647:Red, excitation 630nm&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

human adipose tissue micro-fragmentation for cell phenotyping and secretome characterization

Son on yılda, yağ dokusu nakli yaygın doku repletion ve / veya rejenerasyon geliştirmek için plastik cerrahi ve ortopedi de kullanılmıştır. Buna göre, insan yağ dokusunun hasat ve işleme teknikleri, büyük miktarda dokuyu hızlı ve verimli bir şekilde elde etmek için gelişmiştir. Bunlar arasında, kapalı sistem teknolojisi, rafine yağ dokusunun kısa sürede ve aynı müdahalede (intra-operatif) hasat, işleme ve yeniden enjekte edilen yenilikçi ve kullanımı kolay bir sistemi temsil eder. Adipoz dokusu liposuction ile toplanır, yıkanır, emülsifiye edilir, durulanır ve mekanik olarak 0,3 ila 0,8 mm hücre kümelerine doğrlanır. Mekanik olarak parçalanmış yağ dokusunun otolog transplantasyonu farklı terapötik terapide dikkate değer bir etkinlik göstermiştir estetik tıp ve cerrahi, ortopedik ve genel cerrahi gibi endikasyonlar. Mikro-parçalanmış yağ dokusunun karakterizasyonu, adiposit kümeleri içinde bozulmamış küçük damarların varlığını ortaya; bu nedenle, perivasküler niş tedirgin bırakılır. Bu kümeler perivasküler hücrelerde zenginleştirilmiştir (yani, mezenkimal kök hücre (MSC) ataları) ve in vitro analizler enzimatik olarak elde edilen MSC'lere kıyasla, doku onarımı ve rejenerasyonunda rol oynayan büyüme faktörlerinin ve sitokinlerin salınımını artırdı. Bu mikroparçalanmış yağ dokusunun üstün terapötik potansiyeli varsayımsal MSCs ve gelişmiş salgı aktivitesi daha yüksek bir sıklıkta açıklanır düşündürmektedir. Bu eklenen perisitlerin doğrudan daha yüksek büyüme faktörüne ve sitokin üretimine katkıda bulunup bulunmadığı bilinmemektedir. Klinik olarak onaylanmış bu prosedür, genişleme ve/veya enzimatik tedaviye gerek kalmadan, GMP kılavuzlarının gerekliliklerini atlayarak ve hücre bazlı tedavilerin maliyetlerini azaltarak, varsayımsal MSC'lerin nakline olanak sağlar.

Manuel lipoaspire'lerin mekanik ayrışması, mikrovasküler ağı saran bir adiposit toplamından oluşan mikro parçalı yağ dokusunun (MAT) üretimine yol açmıştır (Şekil 3). Jelatin gömülü ve kriyofixed MAT'ın immünfloresans analizi bu yapıyı vurgular, endotel hücre belirteci Ulex europaeus agglutinin 1 (UEA-1) reseptörü ile işaretlenmiş vasküler ağı gösterirken esas olarak küçük, kılcal damarlardan oluşur ( <strong class="xfig"...

Watch this Scientific Journal Video about Human Adipose Tissue Micro-fragmentation for Cell Phenotyping and Secretome Characterization at JoVE.com

Human Adipose Tissue Micro-fragmentation for Cell Phenotyping and Secretome Characterization

Burada, kapalı bir sistem cihazı kullanarak insan yağ dokusu enzimsiz mikro-parçalanma sıyoruz. Bu yeni yöntem, in vivo transplantasyon, in vitro kültür ve daha fazla hücre izolasyonu ve karakterizasyonu için uygun yağ dokusunun milimetre altı kümelerinin elde edilmesine olanak sağlar.

Hücre Fenotimi ve Sekretom Karakterizasyonu için İnsan Yağ Dokusu Mikro-parçalanma

In the past decade, adipose tissue transplants have been widely used in plastic surgery and orthopaedics to enhance tissue repletion and/or regeneration. ...

Bu sistemi kullanarak, insan yağ dokusunun milimetre altı kümelerini toplayabiliriz, rejeneratif hücrelerin tüm mikro ortamının sağlam olduğu. Tüm mikrovasküler sistem de sağlam, ve bu yüzden in-vitro kültür için in-vivo transplantasyon ve daha fazla karakterizasyon için hücre izolasyonu için mikro organları n için bu tür kullanabilirsiniz. Araştırma laboratuvarında sistemin kullanımıiçin temel gerekçe sürecin tamamen enzimsiz olmasıdır, ve bu nedenle bir mikro-mimari korurken insan yağ dokusunun hızlı ve verimli işlenmesine olanak sağlar ve tamamen bozulmamış doku mikrovaskülatür olacaktır.Ve böylece doğrudan klinikte zaten çok yararlı olduğu kanıtlanmıştır bir hücre tedavisi ürün üzerinde çalışabilirsiniz. Bu kapalı sistem teknolojisi hasat, işleme ve re-enjeksiyon rafine yağ dokusu intra-operatif için kullanımı kolay bir tekniktir ve başarıyla kozmetik ortopedi, proktoloji ve aynı zamanda jinekoloji uygulanabilir. Bu yöntem doku rejenerasyonu yağ etkisi nin daha fazla çalışma sağlar.Prosedür bianca Vezzani, bir doktora sonrası adam ve Mario Gomez-Salazar, bir doktora öğrencisi tarafından gösterilecek. Hasattan sonraki 16 saat içinde aseptik koşullar altında çalışarak, abdominoplasti örneğini deri yukarı bakacak şekilde cerrahi bir bezin üzerine yerleştirin. Deri altı yağ dokusuna 50 ila 100 mililitre 37 santigrat derece sodyum klorür çözeltisi enjekte etmek için tek kullanımlık doku infiltrasyon kanülkullanın.Tek kullanımlık liposuction kanüle 10 mililitrelik Luer kilit şırıngası bağlayın ve numunenin kenarına yakın kutanöz bölgede numuneyi tutarak, kanülü yağ dokusuna dikkatlice tanıtın. Kanül doku içinde olduğunda, piston ayıklayın ve yağ dokusu örneği içinde radially kanül hareket ettirin. Lipo-aspirasyon sırasında yağ dokusunu sıkıca işlemek önemlidir.Yeterli yağ toplanır değilse, ek bir tuzlu enjeksiyon gerçekleştirmeyi düşünün. Şırınga lipo-aspire dolu olduğunda, kanülü dikkatlice dokudan çıkarın ve toplam 60 mililitre aspire hasat edilene kadar tam şırıngayı yeni bir boş şırınga ile değiştirin. Lipo-aspirenin mikro parçalanması için cihazı paketten çıkarın ve ana ünitenin atık torbasına bağlı olduğunu doğrulayın.Atık toplama torbasını yere yerleştirin ve vanaların proses ünitesi kapaklarına sabitolduğundan emin olun. Giriş hattının terminal ani kısmını tuzlu torbaya bağlamak için çanta bağlantı bağlantı noktasını delin ve tuzlu çantayı işleme ünitesinden daha yükseğe yerleştirin. Devrelerin tüplerine bağlı beş kelepçenin de açık olduğunu doğrulayın, işlem ünitesini dikey konuma yerleştirin, tuzlu çözeltinin işlem ünitesini doldurmasına izin verin ve akışın atık torbasına ulaştığını doğrulayın.Herhangi bir hava kabarcıkları kaldırmak için işleme ünitesi sallayın ve mavi kapak yukarı bakacak şekilde dikey bir pozisyonda birim yerleştirin. Giriş hattının yanındaki kelepçeyi kapatın ve lipo-aspire enjekte etmeye başlamak için mavi giriş kapağının kendi kendini tıkayan vanasına lipo-aspire bir şırınga bağlayın. İşlem ünitesini dikey tutarak, lipo-aspireedilenin tamamı üniteye aktarılana kadar şırınga pistonuna yavaşça bastırın.Tüm lipo-aspire enjekte edildiğinde, tuzlu akışı geri yüklemek için giriş kıskacı açın ve en az iki dakika boyunca işleme ünitesini şiddetle sallayın, düzenli olarak atık torbasına tuzlu çözelti akışını kontrol edin. İşlem birimindeki tuzlu çözelti saydam olduğunda, üniteyi gri kapaklı yukarı yerleştirin ve drenajda bulunan kelepçeleri hem mavi hem de gri kapakların yakınına kapatın. İşlenmiş doku en üstte yüzecek.Daha sonra, 10 mililitrelik Luer kilidi şırıngını tuzlu çözeltiyle doldurun ve şırıngayı mavi kapağın yükleme vanasına bağlayın. Boş bir 10 mililitrelik Luer kilit şırıngasını, gri kapağın vanasına tamamen takılı olan pistonla bağlayın. Sıkıca mavi kapaktan işlem ünitesiiçine tuzlu enjekte, gri kapak bağlı şırınga dolayısıyla işlenmiş doku ile dolduruluyor olup olmadığını kontrol.Tüm tuzlu su enjekte edildiğinde, dikkatlice her iki şırınga çıkarın ve tüm işlenmiş doku toplanana kadar tuzlu infüzyon tekrarlayın. İşlemin sonunda, tüm şırıngaları çıkarın, tüm kelepçeleri kapatın, tuzlu torbayı çıkarın ve cihazı yerel protokollere göre imha edin. İşlenmiş dokunun tamamı toplandığında, mikro-parçalanmış yağ dokusunu steril bir kap içine aktarın ve konteynere eşit hacimli sindirim ortamı ekleyin.Kapalı kabı, kuluçka sonunda eşit hacimde bloklama çözeltisi ile sindirimi durdurarak, dakikada 120 dönüşe ayarlanmış 37 derece santigrat derece sallayarak su banyosuna yerleştirin. Numuneyi sırayla filtreleyin, önce 100 mikrometrelik bir hücre süzgecinden geçirin ve ardından 70 mikrometrelik bir hücre süzgecinden geçirin ve filtrelenmiş süspansiyonu 200 kez beş dakika santrifüj edin. Oda sıcaklığında yaklaşık 5 mililitre eritrosit lysis tamponu içinde peleti 15 dakika süreyle askıya alıyoruz.Eşit hacimli blokaj çözeltisi ile lysis'i durdurun ve çözeltiyi 40 mikrometrelik bir hücre süzgecinden geçirin. Daha sonra mikro-parçalanmış yağ dokusu hücrelerini santrifüj ile toplayın ve taze blokaj çözeltisi içinde pele'yi saymak için un karıştırma ile askıya alıyoruz. Dissosilasyon ve antikor boyama sonra, mikro-parçalanmış yağ hücreleri hücre analizi ve / veya sıralama için akış sitometre alınabilir.Manuel lipo-aspirates mekanik ayrışma bir mikrovasküler ağ saran adipositler bir toplam oluşan mikro-parçalanmış yağ dokusu üretimi ile sonuçlanır. Kriyofixed mikro-parçalanmış yağ dokusuna gömülü jelatinin immünfloresans analizi, endotel hücre belirteci Ulex Europaeus Agglutinin 1 reseptörü ile işaretlenmiş ve esas olarak küçük kılcal damarlardan oluşan vasküler ağı gösteren yapıyı vurgular. Özellikle, nöron-glial antijen ifade perisitler 2 veya trombosit türetilmiş büyüme faktörü reseptör beta normalde dağıtılır, endotel hücreleri ensheathing.CD31 pozitif endotel ve CD45 pozitif hematopoetik hücreler hariç tutularak, CD146 pozitif CD34 negatif perisitler ve CD146 negatif ve CD34 pozitif adventif hücrelerin varlığı MAT içinde tespit edilebilir. Mikro-parçalanmış yağ dokusu daha fazla immünohistokimyasal boyama, in vitro kültür veya sekretasyon analizi ile yağ dokusu biyolojisi içine daha derin bir fikir elde etmek için işlenebilir.Bu teknik, farelerde nakledilecek ya da uzun süreli kültürde muhafaza edilecek kadar küçük olan küçük organoidler bir tür olarak doğal, yerli, üç boyutlu düzenleme içinde çeşitli dokuların çalışma sağlar. Ve bu sistemi esas olarak farklı organa özgü mikroortamlara deneysel olarak yaklaşmak için kullanıyoruz. Bizim yağ dokusu donörleri geçirilebilir enfeksiyonların taşıyıcıları olarak bilinmemektedir.Ancak daha fazla tarama yapılmadığında, tüm insan dokuları potansiyel olarak kontamine olmuş ve buna göre ele alınmalıdır.

Research

JoVE Journal

Biology

Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin

Aktin Co-Sedimantasyon Testi; F-Aktin Bağlayıcı Protein Analizi

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

Isolation of Mitochondria from Minimal Quantities of Mouse Skeletal Muscle for High Throughput Microplate Respiratory Measurements

Yüksek Verimli Mikroplate Solunum Ölçümler için Fare İskelet Kası Minimal Miktarları gelen Mitokondri İzolasyonu

Dysfunctional skeletal muscle mitochondria play a role in altered metabolism observed with aging, obesity and Type II diabetes. Mitochondrial ...

Adipo-Clear: A Tissue Clearing Method for Three-Dimensional Imaging of Adipose Tissue

Adipo-Clear: Bir doku Yöntem yağ dokusu üç boyutlu görüntüleme için temizlenmesi

Adipose tissue plays a central role in energy homeostasis and thermoregulation. It is composed of different types of adipocytes, as well as adipocyte ...

Visualization of 3D White Adipose Tissue Structure Using Whole-mount Staining

Bütün Dağı boyama kullanarak 3D beyaz yağ doku yapısı görselleştirme

Adipose tissue is an important metabolic organ with high plasticity and is responsive to environmental stimuli and nutrient status. As such, various ...

Y-27632 Enriches the Yield of Human Melanocytes from Adult Skin Tissues

Y-27632 Yetişkin Cilt Dokularından İnsan Melanositlerin Verimini Zenginleştirir

The isolation and culture of primary melanocytes from skin tissues is very important for biological research and has been widely used for clinical ...

Exploring Adipose Tissue Structure by Methylsalicylate Clearing and 3D Imaging

Metiyatisilin Temizleme ve 3D Görüntüleme ile Yağ Dokusu Yapısının Araştırılması

Obesity is a major worldwide public health issue that increases the risk to develop cardiovascular diseases, type-2 diabetes, and liver diseases. Obesity ...

Isolation, Characterization, and Therapeutic Application of Extracellular Vesicles from Cultured Human Mesenchymal Stem Cells

Kültürlenmiş İnsan Mezenkimal Kök Hücrelerinden Hücre Dışı Veziküllerin İzolasyonu, Karakterizasyonu ve Terapötik Uygulaması

Extracellular vesicles (EVs) are heterogeneous membrane nanoparticles released by most cell types, and they are increasingly recognized as physiological ...

Adipose Tissue-Derived Stem Cell Isolation and Characterization

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats

Isolation and Identification of Mesenchymal Stem Cells Derived from Adipose Tissue of Sprague Dawley Rats (Video) | JoVE 

Sprague Dawley Sıçanlarının Yağ Dokusundan Elde Edilen Mezenkimal Kök Hücrelerin İzolasyonu ve Tanımlanması

Adult mesenchymal cells have revolutionized molecular and cell biology in recent decades. They can differentiate into different specialized cell types, in ...

Semi-Automated Isolation of Murine White Adipose Tissue

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator

Semi-Automated Isolation of the Stromal Vascular Fraction from Murine White Adipose Tissue Using a Tissue Dissociator (Video) | JoVE 

Bir Doku Dissosiyatör Kullanarak Stromal Vasküler Fraksiyonun Murin Beyaz Yağ Dokusundan Yarı Otomatik İzolasyonu

The in vitro study of white, brown, and beige adipocyte differentiation enables the investigation of cell-autonomous functions of adipocytes and their ...