Name: a ferret model of inflammation-sensitized late preterm hypoxic-ischemic brain injury
Uploaded: 2019-11-19T12:30:00
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L'élaboration du modèle a été financée par la Fondation Bill et Melinda Gates, ainsi que par la subvention 5R21NS093154-02 (NICHD).

Les procédures ont été effectuées conformément au Guide des NIH pour le soin et l'utilisation des animaux de laboratoire et dans le cadre d'un protocole approuvé par le Comité institutionnel de soins et d'utilisation des animaux de l'Université de Washington.
1. Préparation et administration LPS
REMARQUE: Reportez-vous à la figure 1 pour une chronologie des procédures.
<ol><li>Avant de commencer la procédu...

<ol>
	<li>Martin, J. A., Hamilton, B. E., Osterman, M. J. K., Driscoll, A. K., Drake, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Births:+Final+Data+for+2017.">Births: Final Data for 2017.</a> National Vital Statistics Report. 67 (8), 1-49 (2018).</li><li>Vanhaesebrouck, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EPIBEL+study:+outcomes+to+discharge+from+hospital+for+extremely+preterm+infants+in+Belgium.">The EPIBEL study: outcomes to discharge from hospital for extremely preterm infants in Belgium.</a> Pediatrics. 114 (3), 663-675 (2004).</li><li>Raju, T. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-Term+Healthcare+Outcomes+of+Preterm+Birth:+An+Executive+Summary+of+a+Conference+Sponsored+by+the+National+Institutes+of+Health.">Long-Term Healthcare Outcomes of Preterm Birth: An Executive Summary of a Conference Sponsored by the National Institutes of Health.</a> Journal of Pediatrics. , (2016).</li><li>Raju, T. N. K., Buist, A. S., Blaisdell, C. J., Moxey-Mims, M., Saigal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adults+born+preterm:+a+review+of+general+health+and+system-specific+outcomes.">Adults born preterm: a review of general health and system-specific outcomes.</a> Acta Paediatrica. 106 (9), 1409-1437 (2017).</li><li>Bennet, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+inflammation+and+impaired+development+of+the+preterm+brain.">Chronic inflammation and impaired development of the preterm brain.</a> Journal of Reproductive Immunology. 125, 45-55 (2018).</li><li>Reich, B., Hoeber, D., Bendix, I., Felderhoff-Mueser, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperoxia+and+the+Immature+Brain.">Hyperoxia and the Immature Brain.</a> Developmental Neuroscience. 38 (5), 311-330 (2016).</li><li>Galinsky, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+interactions+between+hypoxia-ischemia+and+inflammation+in+preterm+brain+injury.">Complex interactions between hypoxia-ischemia and inflammation in preterm brain injury.</a> Developmental Medicine &amp; Child Neurology. 60 (2), 126-133 (2018).</li><li>Empie, K., Rangarajan, V., Juul, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+the+ferret+a+suitable+species+for+studying+perinatal+brain+injury.">Is the ferret a suitable species for studying perinatal brain injury.</a> International Journal of Developlemental Neuroscience. 45, 2-10 (2015).</li><li>Snyder, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+of+white+matter,+toll-like+receptor+expression,+and+motor+skills+in+the+neonatal+ferret.">Ontogeny of white matter, toll-like receptor expression, and motor skills in the neonatal ferret.</a> International Journal of Developlemental Neuroscience. , (2018).</li><li>Schwerin, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progression+of+histopathological+and+behavioral+abnormalities+following+mild+traumatic+brain+injury+in+the+male+ferret.">Progression of histopathological and behavioral abnormalities following mild traumatic brain injury in the male ferret.</a> Journal of Neuroscience Research. 96 (4), 556-572 (2018).</li><li>Rafaels, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+injury+risk+from+primary+blast.">Brain injury risk from primary blast.</a> Journal of Trauma and Acute Care Surgery. 73 (4), 895-901 (2012).</li><li>Wood, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Ferret+Model+of+Encephalopathy+of+Prematurity.">A Ferret Model of Encephalopathy of Prematurity.</a> Developlemental Neuroscience. , (2019).</li><li>Barnette, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Brain+Development+in+the+Ferret+via+Magnetic+Resonance+Imaging.">Characterization of Brain Development in the Ferret via Magnetic Resonance Imaging.</a> Pediatric Research. 66 (1), 80-84 (2009).</li><li>Kroenke, C. D., Mills, B. D., Olavarria, J. F., Neil, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology and Diseases of the Ferret. , (2014).</li><li>Eklind, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+endotoxin+sensitizes+the+immature+brain+to+hypoxic--ischaemic+injury.">Bacterial endotoxin sensitizes the immature brain to hypoxic--ischaemic injury.</a> European Journal of Neuroscience. 13 (6), 1101-1106 (2001).</li><li>Falck, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Systemic+Inflammation+Induces+Inflammatory+Reactions+and+Brain+Apoptosis+in+a+Pathogen-Specific+Manner.">Neonatal Systemic Inflammation Induces Inflammatory Reactions and Brain Apoptosis in a Pathogen-Specific Manner.</a> Neonatology. 113 (3), 212-220 (2018).</li><li>Osredkar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermia+Does+Not+Reverse+Cellular+Responses+Caused+by+Lipopolysaccharide+in+Neonatal+Hypoxic-Ischaemic+Brain+Injury.">Hypothermia Does Not Reverse Cellular Responses Caused by Lipopolysaccharide in Neonatal Hypoxic-Ischaemic Brain Injury.</a> Developmental Neuroscience. 37 (4-5), 390-397 (2015).</li><li>Nakata, M., Itou, T., Sakai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+inflammatory+cytokines+expression+in+peripheral+blood+mononuclear+cells+of+the+ferret+(Mustela+putorius+furo)+using+real-time+PCR.">Quantitative analysis of inflammatory cytokines expression in peripheral blood mononuclear cells of the ferret (Mustela putorius furo) using real-time PCR.</a> Veterinary Immunology and Immunopathology. 130 (1-2), 88-91 (2009).</li><li>Christensson, M., Garwicz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+postnatal+motor+development+in+ferrets:+ontogenetic+and+comparative+perspectives.">Time course of postnatal motor development in ferrets: ontogenetic and comparative perspectives.</a> Behavioral Brain Research. 158 (2), 231-242 (2005).</li><li>Li, Y., Dugyala, S. R., Ptacek, T. S., Gilmore, J. H., Frohlich, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+Immune+Activation+Alters+Adult+Behavior,+Gut+Microbiome+and+Juvenile+Brain+Oscillations+in+Ferrets.">Maternal Immune Activation Alters Adult Behavior, Gut Microbiome and Juvenile Brain Oscillations in Ferrets.</a> eNeuro. 5 (5), (2018).</li><li>Rice, J. E., Vannucci, R. C., Brierley, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+immaturity+on+hypoxic-ischemic+brain+damage+in+the+rat.">The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat.</a> Annals of Neurolology. 9 (2), 131-141 (1981).</li></ol>

En raison des similitudes physiques et développementales partagées entre le cerveau du furet et le cerveau humain, le furet est de plus en plus utilisé pour modéliser les lésions cérébrales adultes et développementales. 8,9,10,11,12. Cependant, la recherche à ce jour suggère que le cerveau de furet est résistant aux dommages initiaux aussi bien que ...

Il existe un besoin continu de grands modèles animaux qui reflètent la physiopathologie de la prématurité et de l'hypoxie-ischémie périnatale dans lesquelles des interventions thérapeutiques pour les nourrissons peuvent être testées. En 2017, 9,93 % des 382 726 nourrissons nés aux États-Unis sont nés prématurément, et 84 % de ces nourrissons sont nés entre 32 et 36 semaines de gestation1. Chez les prématurés, l'exposition périnatale à l'infection ou à l'inflammation est courante, où l'activation immunitaire maternelle due à des agents pathogènes viraux ou bactériens peut initier un travail prématuré. Après la naissance, les nouveau-nés prématurés sont à risque élevé de septicémie précoce ou tardive2. Les enfants en bas âge prématurés éprouvent également fréquemment des périodes d'hypoxie, d'hypotension, et d'hyperoxia dues à leur système cardiorespiratoire immature, tension élevée d'oxygène dans l'atmosphère relative à ceux éprouvés in utero, et expositions iatrogenic. En outre, chez les nouveau-nés prématurés, les défenses antioxydantes sont immatures3 et les facteurs pro-apoptotiques sont naturellement upregulated4. Le stress oxydatif et la mort cellulaire conduisent à l'activation du système immunitaire et à la neuroinflammation. Ces facteurs combinés sont pensés pour contribuer à la vulnérabilité développementale et physiologique du cerveau, et ont comme conséquence ou exacerber l'encéphalopathie liée aux résultats développementaux pauvres dans les enfants en bas âge prématurés5,6,7.
En raison des similitudes physiques et développementales que le cerveau du furet partage avec le cerveau humain, le furet est une espèce attrayante dans laquelle modéliser les lésions cérébrales8,9,10,11,12. Les furets sont également des candidats idéaux pour modéliser le cerveau humain prématuré, car ils sont nés lissencephalic et développent des cerveaux gyrencephalic postnatally, qui fournit une fenêtre dans laquelle exposer le cerveau en développement aux insultes qui imitent ceux éprouvés par les enfants en bas âge prématurément. À la naissance, le développement du cerveau du furet est semblable à un fœtus humain de 13 semaines, avec 17 trousses postnatales (P) considérées comme équivalentes à celles d'un nourrisson à 32 à 36 semaines de gestation13.
Notre groupe a récemment publié un modèle de lésions cérébrales extrêmement prématurées (28 semaines de gestation) chez le furet P10 en combinant la sensibilisation inflammatoire avec escherichia coli lipopolysaccharide (LPS) avec une exposition ultérieure à l'hypoxie et à l'hyperoxie12. Dans le protocole suivant, nous décrivons maintenant un modèle prématuré en retard dans le furet de P17, où la sensibilisation de LPS est suivie par l'ischémie cérébrale bilatérale, l'hypoxie, et l'hyperoxia. Il en résulte des blessures plus graves chez un sous-ensemble d'animaux, et modélise plus étroitement l'interaction complexe de l'inflammation prolongée, de l'ischémie, de l'hypoxie, et du stress oxydatif éprouvé dans un certain nombre de nouveau-nés prématurés qui développent des dommages de cerveau.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:775px;" width="775">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">80% Oxygen</td>
			<td style="width:196px;">Praxair</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">9% Oxygen</td>
			<td>Praxair</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Absorbent benchtop protector</td>
			<td style="width:196px;">Kimtech</td>
			<td align="right" style="width:136px;">7546</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Automated catwalk</td>
			<td style="width:196px;">Noldus</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Betadine surgical scrub</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bupivacaine</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-888-9382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Buprenorphine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Calipers</td>
			<td style="width:196px;">SRA Measurement Products</td>
			<td style="width:136px;">ME-CAL-FP-200</td>
			<td>200mm range, .01 mm resolution</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cotton Gauze Sponge</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22028556</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Curved fine hemostat</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Curved forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Curved suture-tying hemostat</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethovision tracking software</td>
			<td style="width:196px;">Noldus</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Eye Lubricant</td>
			<td>Rugby</td>
			<td>NDC 0536-1970-72</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ferrets (Mustela putorius furo)</td>
			<td style="width:196px;">Marshall Biosciences</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td>Outbred (no specific strain)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Formalin</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:136px;">SF100-4</td>
			<td>10% (Phosphate Buffer/Certified)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hair Clippers</td>
			<td>Conair</td>
			<td>GMT175N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Insulin Syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>329461</td>
			<td>0.3 cc 3 mm 31G</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Isoflurane</td>
			<td>Piramal</td>
			<td>66794-017-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Lidocaine</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-808-8202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">LPS</td>
			<td>List Biological</td>
			<td>LPS Ultrapure #423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Oxygen sensor</td>
			<td>BW Gas Alert</td>
			<td>GAXT-X-DL-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pentobarbital</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Plastic chamber</td>
			<td>Tellfresh</td>
			<td align="right">1960</td>
			<td>10L; 373x270x135mm</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Saline Solution, 0.9%</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>RL-4492</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Scalpel blade</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Scalpel handle</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500236</td>
			<td>#3, 13cm</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sterile suture</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18020-50</td>
			<td>Braided Silk, 5/0</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical clip applicator</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12020-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical clip remover</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12023-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical drapes</td>
			<td>Medline Unidrape</td>
			<td>VET3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical gloves</td>
			<td>Ansell Perry Inc</td>
			<td>5785004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surigical clips</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12022-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Thermometer (rectal)</td>
			<td>YSI</td>
			<td>Precision 4000A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Thermometer (water)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-648-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Umbilical tape</td>
			<td>Grafco</td>
			<td>3031</td>
			<td>Sterile</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Water bath</td>
			<td style="width:196px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:136px;">TSCOL19</td>
			<td>19L</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a ferret model of inflammation-sensitized late preterm hypoxic-ischemic brain injury

Il existe un besoin continu de modèles cliniquement pertinents d'infection périnatale et d'hypoxie-ischémie (HI) dans lesquels tester des interventions thérapeutiques pour les nourrissons atteints de la séquelle neurologique de la prématurité. Les furets sont des candidats idéaux pour modéliser le cerveau humain prématuré, car ils naissent lissencephalic et développent des cerveaux gyrencephalic postnatally. À la naissance, le développement du cerveau du furet est semblable à un fœtus humain de 13 semaines, avec 17 trousses postnatales (P) considérées comme équivalentes à celles d'un nourrisson à 32 à 36 semaines de gestation. Nous décrivons un modèle de blessure dans le furet de P17, où l'administration de lipopolysaccharide est suivie par l'ischémie cérébrale bilatérale, l'hypoxie, et l'hyperoxia. Ceci simule l'interaction complexe de l'inflammation prolongée, de l'ischémie, de l'hypoxie, et du stress oxydatif éprouvé dans un certain nombre de nouveau-nés qui développent des dommages de cerveau. Les animaux blessés présentent une gamme de sévérité brute de blessure, avec des changements morphologiques dans le cerveau comprenant le rétrécissement du gyri cortical multiple et du sulci associé. Les animaux blessés montrent également un développement réflexe ralenti, une vitesse de locomotion plus lente et plus variable dans une passerelle automatisée, et une diminution de l'exploration dans un champ ouvert. Ce modèle fournit une plate-forme dans laquelle tester les thérapies putatives pour les nourrissons atteints d'encéphalopathie néonatale associée à l'inflammation et à l'HI, les mécanismes d'étude des blessures qui affectent le développement cortical, et d'étudier les voies qui fournissent la résilience dans animaux non affectés.

Sur 34 animaux (n ' 18 mâles, n ' 16 femelles) de six portées exposées à l'insulte, huit animaux (24 %; n ' 4 mâles, n ' 4 femelles) dans le groupe blessé sont morts au cours de la deuxième période d'hypoxie (n - 5), pendant la gestion de la température (n ' 2), ou pendant la nuit après l'insulte (n - 1). Dans le groupe des blessés, neuf des 26 survivants (35 %) a eu un préjudice grave visible. Cinq animaux (n et 5 mâles) ont subi des blessures modérées, et quatre animaux (n 2 mâles, n et 2 femelles) ont ...

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A Ferret Model of Inflammation-sensitized Late Preterm Hypoxic-ischemic Brain Injury

La méthode décrit les dommages hypoxiques-ischémiques et hyperoxiques hypoxiques et hyperoxic inflammation-sensibilités de cerveau dans le furet de P17 pour modeler l'interaction complexe entre l'inflammation prolongée et les dommages de cerveau oxydants éprouvés dans un certain nombre de enfants en bas âge prématurés en retard.

Un modèle de furet de l'inflammation-sensibilisée dommages du cerveau hypoxique-ischémique sténomique s'est

There is an ongoing need for clinically relevant models of perinatal infection and hypoxia-ischemia (HI) in which to test therapeutic interventions for ...

Ce protocole est significatif parce qu’il offre le premier modèle de lésion cérébrale prématurée sensibilisée par inflammation dans les furets qui a comme résultat des dommages significatifs et soutenus. Cette technique implique une insulte prolongée qui intègre de nombreux déclencheurs et mécanismes biochimiques pensés pour contribuer aux types de lésions cérébrales observées chez les prématurés. Kylie Corry, chercheuse dans notre laboratoire, et Olivia White, étudiante de premier cycle, feront la démonstration de la procédure de mesure du cerveau.Trente minutes avant de commencer la chirurgie, administrer trois milligrammes par kilogramme ip LPS à des kits dans le groupe des blessures et un volume équivalent de saline stérile de trois microlitres par gramme pour contrôler les animaux. Avant de commencer la procédure, utilisez de petites tondeuses pour animaux pour enlever tous les cheveux sur la région ventrale du cou du furet dans un modèle rectangulaire, en prenant soin d’éviter de entailler la peau ou de générer une éruption thermique. Administrer l’anesthésie locale à la zone rasée et désinfecter la peau avec trois écouvillons alternatifs d’iode povidone et soixante-dix pour cent d’éthanol.Après avoir confirmé un niveau approprié de sédation par pincement des pieds, couvrez l’animal de rideaux stériles et jetables découpés qui exposent la région du cou. Pour la ligature bilatérale d’artère carotide, utilisez un numéro d’utilisation simple dix lame de scalpel pour faire une incision médiane de 1,5 centimètre au centre du cou et employer les hemostats fins et les forceps incurvés pour disséquer sans ambages vers le bas à l’artère carotide gauche. Disséquer l’artère exposée loin du faisceau neurovasculaire associé.Et utilisez une paire de forceps fins incurvés pour passer une longueur en boucle de dix centimètres de suture stérile de soie 5/0 sous l’artère. Couper la suture en deux et attacher solidement les deux longueurs de suture pour ligate l’artère, en laissant au moins deux millimètres entre les noeuds. Transecter l’artère carotide gauche entre les sutures, en prenant soin de laisser le nerf intact et répéter la dissection sur la droite.Ligate inverséement l’artère carotide droite avec une seule cravate ombilicale stérile de 1/8 pouce. Et fermez la plaie avec des pinces chirurgicales de peau. Ensuite, laissez l’animal récupérer dans un bain d’eau à température contrôlée pendant au moins trente minutes avec surveillance avant hypoxie.Pour le traitement séquentiel d’hypoxie, d’hyperoxie et d’hypoxie, placez les animaux dans le groupe de blessure dans une chambre hermétique dans un bain d’eau. Surveillez en permanence la concentration d’oxygène à l’intérieur de la chambre, ainsi que la température rectale chez au moins un animal sentinelle. Rincer la chambre avec de l’oxygène humidifié de neuf pour cent et 91 pour cent d’azote et maintenir un débit de trois à cinq litres par minute, selon la taille de la chambre.Une fois que la concentration d’oxygène dans la chambre a atteint neuf pour cent, continuer la livraison pendant trente minutes. À la fin du traitement par hypoxie, passer l’approvisionnement en gaz à 80 pour cent d’oxygène humidifié et 20 pour cent d’azote. Après trente minutes d’hyperoxie, ouvrez la chambre pour lui permettre d’atteindre plus rapidement la normoxie, en équilibrant avec de l’air de pièce, avant de sceller la chambre et de rincer à nouveau avec de l’oxygène humidifié à neuf pour cent.Surveillez en permanence tous les animaux au cours de cette deuxième série d’hypoxie, en prenant note de tous les animaux qui présentent la bradypnée. Une fois que la concentration d’oxygène dans la chambre a atteint neuf pour cent, continuer le traitement hypoxie pendant trente minutes. À la fin du traitement, a utilisé des forceps incurvés pour identifier et détacher le ruban ombilical de l’artère carotide droite.Refermer la plaie avec des pinces chirurgicales de la peau. Ensuite, retournez tous les kits aux jills pendant 60 minutes pour les soins infirmiers et la récupération. À la fin de la période de rétablissement, remettre les animaux blessés aux bains d’eau à 37 à 40 degrés Celsius pendant six heures, en ajustant la température de l’eau au besoin, afin de maintenir des températures rectales de 36 à 37 degrés Celsius.Ensuite, retournez les kits à leurs jills à nouveau. Après la récolte et la fixation du cerveau au point de terminaison expérimental approprié, placez les pointes d’un étrier électronique sur les aspects dorsal et ventral de chaque cerveau pour mesurer la hauteur de chaque cerveau blessé et non blessé. Placez les extrémités de l’étrier aux parties les plus latérales des lobes temporels pour mesurer la largeur de chaque cerveau et peser chaque cerveau.Utilisez l’étrier pour mesurer la fissure longitudinale, tous les sulci du début et de la fin de la partie la plus distincte du sulcus correspondant, et tout le gyri de l’aspect le plus large de chaque gyrus correspondant. Ensuite, placez une pointe de l’étrier au point le plus postérieur de la fissure longitudinale et l’autre extrémité de l’étrier à la partie la plus postérieure du cervelet pour mesurer la quantité de cervelet exposé. Sur les 34 animaux de six portées exposés à l’insulte dans cette étude, cinq animaux ont subi des blessures modérées et quatre animaux ont subi de graves blessures.Avec des dommages croissants, le rétrécissement du gyri dans les lobes temporels et/ou occipital est observé, avec un raccourcissement et un élargissement sulcul associés de la fissure longitudinale et de plus grandes zones de perte de tissu cystique chez les animaux les plus gravement blessés. Au cours de la période d’essai réflexe, les animaux blessés affichent un temps plus lent pour tourner dans la tâche géotaxis négative. Un temps plus lent pour tourner loin du bord dans la tâche Cliff Aversion et un temps plus lent à droite.Sur la passerelle, les animaux blessés démontrent une vitesse moyenne similaire aux commandes, mais affichent un degré significativement plus élevé de variation de vitesse à chaque course. La distance ajustée en poids entre les pattes et les pattes postérieures est significativement plus grande chez les animaux blessés, avec moins de pression exercée par zone de patte unitaire, à travers les quatre pattes. En plein champ, les animaux blessés couvrent moins de distance totale, s’arrêtent plus fréquemment et passent beaucoup plus de temps au centre du champ et moins de temps dans les coins.Ici, des cartes thermiques représentatives des animaux témoins et blessés peuvent être observées. Prenez soin de disséquer l’artère du nerf qui l’accompagne et de prévoir le maximum de temps d’hypoxie possible. Ces mesures permettront à la majorité des animaux de survivre, tout en subissant des blessures.Après cette procédure, tous les résultats biochimiques, pathologiques ou comportementaux peuvent être évalués, y compris les évaluations qui sont normalement limitées aux modèles de rongeurs de lésions cérébrales.

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