Name: a ferret model of inflammation-sensitized late preterm hypoxic-ischemic brain injury
Uploaded: 2019-11-19T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Ferret Model of Inflammation-sensitized Late Preterm Hypoxic-ischemic Brain Injury at JoVE.com

פיתוח המודל היה ממומן על ידי ביל ומלינדה גייטס, כמו גם על ידי NIH גרנט 5R21NS093154-02.

הליכים בוצעו בהתאם למדריך NIH לטיפול ולשימוש בבעלי חיים מעבדתיים וכחלק מפרוטוקול מאושר על ידי הוועדה המייעצת לטיפול בבעלי חיים מוסדיים באוניברסיטת וושינגטון.
1. הכנה ומינהל LPS
הערה: התייחס לאיור 1 עבור ציר זמן של ההליכים.
<ol><li>לפני תחי...

<ol>
	<li>Martin, J. A., Hamilton, B. E., Osterman, M. J. K., Driscoll, A. K., Drake, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Births:+Final+Data+for+2017.">Births: Final Data for 2017.</a> National Vital Statistics Report. 67 (8), 1-49 (2018).</li><li>Vanhaesebrouck, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EPIBEL+study:+outcomes+to+discharge+from+hospital+for+extremely+preterm+infants+in+Belgium.">The EPIBEL study: outcomes to discharge from hospital for extremely preterm infants in Belgium.</a> Pediatrics. 114 (3), 663-675 (2004).</li><li>Raju, T. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-Term+Healthcare+Outcomes+of+Preterm+Birth:+An+Executive+Summary+of+a+Conference+Sponsored+by+the+National+Institutes+of+Health.">Long-Term Healthcare Outcomes of Preterm Birth: An Executive Summary of a Conference Sponsored by the National Institutes of Health.</a> Journal of Pediatrics. , (2016).</li><li>Raju, T. N. K., Buist, A. S., Blaisdell, C. J., Moxey-Mims, M., Saigal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adults+born+preterm:+a+review+of+general+health+and+system-specific+outcomes.">Adults born preterm: a review of general health and system-specific outcomes.</a> Acta Paediatrica. 106 (9), 1409-1437 (2017).</li><li>Bennet, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+inflammation+and+impaired+development+of+the+preterm+brain.">Chronic inflammation and impaired development of the preterm brain.</a> Journal of Reproductive Immunology. 125, 45-55 (2018).</li><li>Reich, B., Hoeber, D., Bendix, I., Felderhoff-Mueser, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperoxia+and+the+Immature+Brain.">Hyperoxia and the Immature Brain.</a> Developmental Neuroscience. 38 (5), 311-330 (2016).</li><li>Galinsky, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+interactions+between+hypoxia-ischemia+and+inflammation+in+preterm+brain+injury.">Complex interactions between hypoxia-ischemia and inflammation in preterm brain injury.</a> Developmental Medicine &amp; Child Neurology. 60 (2), 126-133 (2018).</li><li>Empie, K., Rangarajan, V., Juul, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+the+ferret+a+suitable+species+for+studying+perinatal+brain+injury.">Is the ferret a suitable species for studying perinatal brain injury.</a> International Journal of Developlemental Neuroscience. 45, 2-10 (2015).</li><li>Snyder, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+of+white+matter,+toll-like+receptor+expression,+and+motor+skills+in+the+neonatal+ferret.">Ontogeny of white matter, toll-like receptor expression, and motor skills in the neonatal ferret.</a> International Journal of Developlemental Neuroscience. , (2018).</li><li>Schwerin, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progression+of+histopathological+and+behavioral+abnormalities+following+mild+traumatic+brain+injury+in+the+male+ferret.">Progression of histopathological and behavioral abnormalities following mild traumatic brain injury in the male ferret.</a> Journal of Neuroscience Research. 96 (4), 556-572 (2018).</li><li>Rafaels, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+injury+risk+from+primary+blast.">Brain injury risk from primary blast.</a> Journal of Trauma and Acute Care Surgery. 73 (4), 895-901 (2012).</li><li>Wood, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Ferret+Model+of+Encephalopathy+of+Prematurity.">A Ferret Model of Encephalopathy of Prematurity.</a> Developlemental Neuroscience. , (2019).</li><li>Barnette, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Brain+Development+in+the+Ferret+via+Magnetic+Resonance+Imaging.">Characterization of Brain Development in the Ferret via Magnetic Resonance Imaging.</a> Pediatric Research. 66 (1), 80-84 (2009).</li><li>Kroenke, C. D., Mills, B. D., Olavarria, J. F., Neil, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology and Diseases of the Ferret. , (2014).</li><li>Eklind, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+endotoxin+sensitizes+the+immature+brain+to+hypoxic--ischaemic+injury.">Bacterial endotoxin sensitizes the immature brain to hypoxic--ischaemic injury.</a> European Journal of Neuroscience. 13 (6), 1101-1106 (2001).</li><li>Falck, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Systemic+Inflammation+Induces+Inflammatory+Reactions+and+Brain+Apoptosis+in+a+Pathogen-Specific+Manner.">Neonatal Systemic Inflammation Induces Inflammatory Reactions and Brain Apoptosis in a Pathogen-Specific Manner.</a> Neonatology. 113 (3), 212-220 (2018).</li><li>Osredkar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermia+Does+Not+Reverse+Cellular+Responses+Caused+by+Lipopolysaccharide+in+Neonatal+Hypoxic-Ischaemic+Brain+Injury.">Hypothermia Does Not Reverse Cellular Responses Caused by Lipopolysaccharide in Neonatal Hypoxic-Ischaemic Brain Injury.</a> Developmental Neuroscience. 37 (4-5), 390-397 (2015).</li><li>Nakata, M., Itou, T., Sakai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+inflammatory+cytokines+expression+in+peripheral+blood+mononuclear+cells+of+the+ferret+(Mustela+putorius+furo)+using+real-time+PCR.">Quantitative analysis of inflammatory cytokines expression in peripheral blood mononuclear cells of the ferret (Mustela putorius furo) using real-time PCR.</a> Veterinary Immunology and Immunopathology. 130 (1-2), 88-91 (2009).</li><li>Christensson, M., Garwicz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+postnatal+motor+development+in+ferrets:+ontogenetic+and+comparative+perspectives.">Time course of postnatal motor development in ferrets: ontogenetic and comparative perspectives.</a> Behavioral Brain Research. 158 (2), 231-242 (2005).</li><li>Li, Y., Dugyala, S. R., Ptacek, T. S., Gilmore, J. H., Frohlich, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+Immune+Activation+Alters+Adult+Behavior,+Gut+Microbiome+and+Juvenile+Brain+Oscillations+in+Ferrets.">Maternal Immune Activation Alters Adult Behavior, Gut Microbiome and Juvenile Brain Oscillations in Ferrets.</a> eNeuro. 5 (5), (2018).</li><li>Rice, J. E., Vannucci, R. C., Brierley, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+immaturity+on+hypoxic-ischemic+brain+damage+in+the+rat.">The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat.</a> Annals of Neurolology. 9 (2), 131-141 (1981).</li></ol>

בשל קווי הדמיון הפיזיים וההתפתחותיים בין המוח החמוס למוח האנושי, החמוס משמש יותר ויותר למודל של פגיעה מוחית מבוגרת והתפתחותית. . שמונה,תשע,עשר,11,12 עם זאת, מחקר עד היום מרמז כי המוח החמוס הוא גם עמיד בפנ...

יש צורך מתמשך של מודלים בעלי חיים גדולים המשקפים את הפתופסולוגיה של טרום בגרות ולאחר ההיפוקסיה-איסכמיה שבה התערבויות טיפוליות לתינוקות יכולים להיבדק. ב 2017, 9.93% מתוך 382,726 תינוקות שנולדו בארצות הברית נולדו לטווח, ו 84% של תינוקות אלה נולדו בין 32 ו-36 שבועות של הריון1. בזמן התינוקות מוקדם, החשיפה לזיהום או דלקת היא נפוצה, שם הפעלה החיסונית אימהית בשל פתוגנים נגיפי או חיידקי יכול ליזום העבודה טרום לטווח. Postnatally, תינוקות טרום לטווח נמצאים בסיכון גבוה של מוקדם או מאוחר התפרצות אלח דם2. תינוקות preterm גם לעתים קרובות חווים תקופות של היפוקסיה, לחץ דם, ו עידות בשל מערכת הקרדיוכלתית הילדותית שלהם, מתח חמצן מוגבר באטמוספירה יחסית לאלה מנוסים ברחם, והחשיפות האיגניים. בנוסף, בתינוקות טרום לטווח, הגנות נוגד חמצון הם בלתי בוגרים3 ו-pro-האפוטוטיים גורמים הם באופן טבעי upregulated4. מתח חמצוני ומוות תאים להוביל הפעלה של מערכת החיסון ודלקות ניווניות. גורמים אלה משולבים נחשבים לתרום לפגיעות התפתחותית ופיזיולוגית של המוח, ולגרום או להחריף את האנצפלופתיה הקשורים בתוצאות התפתחותיות עניות בתינוקות טרום לטווח5,6,7.
בשל הדמיון הפיזי וההתפתחותי כי המוח החמוס מניות עם המוח האנושי, החמוס הוא זן אטרקטיבי שבו למודל פגיעה במוח8,9,10,11,12. חמוסים הם גם מועמדים אידיאליים כדי לדגמן את המוח האנושי לטווח הארוך, כפי שהם נולדים lissencephalic ולפתח מוחות באופן שוטף, אשר מספק חלון שבו כדי לחשוף את המוח המתפתח עלבונות כי לחקות את אלה מנוסים על ידי תינוקות נולד לטווח. בלידה, התפתחות המוח החמוס דומה העובר 13 שבוע האדם, עם postnatal יום (P) 17 ערכות נחשב שווה ערך לתינוק ב 32 – 36 שבועות של ההריון13.
הקבוצה שלנו פרסמה לאחרונה מודל של טרום לטווח (< 28 שבועות הריון) פגיעה במוח P10 חמוס על ידי שילוב של רגישות דלקתית עם es chia coli ליפופוליד (lps) עם חשיפה בעקבות היפוקסיה ו עידות12. בפרוטוקול הבא, אנו מתארים כעת מודל טרום לטווח מאוחר ב P17 חמוס, שם הרגישות LPS הוא אחריו בעקבות איסכמיה מוחית דו צדדית, היפוקסיה, ו hyperoxia. התוצאה היא פציעה חמורה יותר בקבוצת משנה של בעלי חיים, ומודלים הדוק יותר את האינטראקציה המורכבת של דלקת ממושכת, איסכמיה, היפוקסיה, ומתח חמצוני מנוסים מספר תינוקות טרום לטווח המפתחים פציעה במוח.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:775px;" width="775">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">80% Oxygen</td>
			<td style="width:196px;">Praxair</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">9% Oxygen</td>
			<td>Praxair</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Absorbent benchtop protector</td>
			<td style="width:196px;">Kimtech</td>
			<td align="right" style="width:136px;">7546</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Automated catwalk</td>
			<td style="width:196px;">Noldus</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Betadine surgical scrub</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bupivacaine</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-888-9382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Buprenorphine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Calipers</td>
			<td style="width:196px;">SRA Measurement Products</td>
			<td style="width:136px;">ME-CAL-FP-200</td>
			<td>200mm range, .01 mm resolution</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cotton Gauze Sponge</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22028556</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Curved fine hemostat</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Curved forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Curved suture-tying hemostat</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethovision tracking software</td>
			<td style="width:196px;">Noldus</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Eye Lubricant</td>
			<td>Rugby</td>
			<td>NDC 0536-1970-72</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ferrets (Mustela putorius furo)</td>
			<td style="width:196px;">Marshall Biosciences</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td>Outbred (no specific strain)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Formalin</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:136px;">SF100-4</td>
			<td>10% (Phosphate Buffer/Certified)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hair Clippers</td>
			<td>Conair</td>
			<td>GMT175N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Insulin Syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>329461</td>
			<td>0.3 cc 3 mm 31G</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Isoflurane</td>
			<td>Piramal</td>
			<td>66794-017-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Lidocaine</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-808-8202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">LPS</td>
			<td>List Biological</td>
			<td>LPS Ultrapure #423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Oxygen sensor</td>
			<td>BW Gas Alert</td>
			<td>GAXT-X-DL-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pentobarbital</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Plastic chamber</td>
			<td>Tellfresh</td>
			<td align="right">1960</td>
			<td>10L; 373x270x135mm</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Saline Solution, 0.9%</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>RL-4492</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Scalpel blade</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Scalpel handle</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500236</td>
			<td>#3, 13cm</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sterile suture</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18020-50</td>
			<td>Braided Silk, 5/0</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical clip applicator</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12020-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical clip remover</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12023-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical drapes</td>
			<td>Medline Unidrape</td>
			<td>VET3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical gloves</td>
			<td>Ansell Perry Inc</td>
			<td>5785004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surigical clips</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12022-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Thermometer (rectal)</td>
			<td>YSI</td>
			<td>Precision 4000A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Thermometer (water)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-648-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Umbilical tape</td>
			<td>Grafco</td>
			<td>3031</td>
			<td>Sterile</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Water bath</td>
			<td style="width:196px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:136px;">TSCOL19</td>
			<td>19L</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a ferret model of inflammation-sensitized late preterm hypoxic-ischemic brain injury

יש צורך מתמשך מודלים רלוונטיים קלינית של זיהום היפואטאטאל, hypoxia-איסכמיה (HI) שבו לבדוק התערבויות טיפוליות לתינוקות עם הרצף הנוירולוגי של טרום בגרות. חמוסים הם מועמדים אידיאליים למידול המוח האנושי הטרום-לטווח, כפי שהם נולדים lissencephalic ולפתח מוחות מוחיים באופן מוחי. בלידה, התפתחות המוח החמוס דומה לעובר האנושי של 13 שבועות, עם postnatal יום (P) 17 ערכות נחשב להיות שווה ערך לתינוק ב 32-36 שבועות הריון. אנו מתארים מודל פציעה ב P17 חמוס, שם הממשל ליפופוליל מלווה באיסכמיה מוחית דו צדדית, היפוקסיה, ו hyperoxia. זה מדמה את האינטראקציה המורכבת של דלקת ממושכת, איסכמיה, היפוקסיה, ומתח חמצוני מנוסים במספר neonates המפתחים פציעה במוח. בעלי חיים פצועים להציג מגוון של חומרת הפציעה ברוטו, עם שינויים מורפולוגיים במוח כולל היצרות של מספר מודורי הקורטיתיים ו sulci הקשורים. בעלי חיים פצועים גם מראים פיתוח רפלקס איטי, מהירות איטית יותר ומשתנה יותר של תנועה במסלול הדוגמנות אוטומטי, והירידה בחיפושי בשדה פתוח. מודל זה מספק פלטפורמה שבה לבחון את הטיפולים לתינוקות עם אנצפלופתיה התינוק הקשורים בדלקת ושלום, מנגנוני המחקר של פציעה המשפיעים על פיתוח קליפת הגוף, ולחקור מסלולים המספקים עמידות חיות לא מושפעות.

של 34 (n = 18 זכרים, n = 16 נקבות) בעלי חיים משישה לוחמים חשופים לעלבון, שמונה בעלי חיים (24%; n = 4 זכרים, n = 4 נקבות) בקבוצה הפצועה מתו בתקופת ההיפוקסיה השנייה (n = 5), במהלך ניהול הטמפרטורה (n = 2), או לילה לאחר העלבון ( בקבוצה הפצועה, תשעה מתוך 26 ניצולים (35%) היתה פציעה מגעילה בלתי נראית. חמשבעליחיים (...

Watch this Scientific Journal Video about A Ferret Model of Inflammation-sensitized Late Preterm Hypoxic-ischemic Brain Injury at JoVE.com

A Ferret Model of Inflammation-sensitized Late Preterm Hypoxic-ischemic Brain Injury

השיטה מתארת דלקת-רגישות ארוי-איסכמי ופגיעה המוח hyperoxic ב P17 חמוס למודל האינטראקציה המורכבת בין דלקת ממושכת ופגיעה המוח חמצוני מנוסה במספר תינוקות טרום לטווח מאוחר.

מודל של החמוס של דלקת-מארוי מאוחר לטווח קדם-הסכמי פגיעה במוח

There is an ongoing need for clinically relevant models of perinatal infection and hypoxia-ischemia (HI) in which to test therapeutic interventions for ...

פרוטוקול זה הוא משמעותי משום שהוא מציע את המודל הראשון של דלקת רגישה פגיעה מוחית מוקדמת החמוסים שתוצר פגיעה משמעותית ומתמשכת. טכניקה זו כרוכה בעלבונות ממושכים המשלבים רבים מהטריגרים והמנגנונים הביוכימיים שנחשבים לתרום לסוגי הפציעות המוחיות שנראות אצל תינוקות אנושיים מוקדמים. הדגימה של הליך מדידת המוח תהיה קיילי קורי, מדענית מחקר במעבדה שלנו ואוליביה ווייט, סטודנטית לתואר ראשון.שלושים דקות לפני תחילת הניתוח, לנהל שלושה מיליגרם לקילוגרם LPS IP ערכות בקבוצת הפציעה נפח שווה ערך של מלוחים סטריליים של שלושה microliters לגרם כדי לשלוט בבעלי חיים. לפני תחילת ההליך, השתמש קוצץ בעלי חיים קטנים כדי להסיר את כל השיער על אזור הצוואר הגחוני של החמוס בתבנית מלבנית, דואג למנוע פגיעה בעור או יצירת פריחה בחום. לנהל הרדמה מקומית לאזור מגולח ולחטא את העור עם שלוש ספוגיות לסירוגין של יוד povidone ו70 אחוז אתנול.לאחר אישור רמה מתאימה של הרדמה על ידי קמצוץ בוהן, לכסות את החיה עם סטרילי, חד פעמי לחתוך וילונות החושפים את אזור הצוואר. עבור קשירה עורק התרדמה הדו-צדדית, השתמש בלהב אזמל מספר עשר לשימוש יחיד כדי לבצע חתך של 1.5 ס"מ במרכז הצוואר ולהשתמש בהמוסטטים עדין ומטחנים מעוגלים כדי לנתח בבוטות עד העורק הראשי השמאלי. לנתח את העורק החשוף הרחק מהחבילה הנוירו-וסקולרית הקשורה.ולהשתמש בזוג מלקחיים עדין מעוקל לעבור לולאה אורך עשרה סנטימטרים של תפר משי סטרילי 5/0 מתחת לעורק. חותכים את התפר לשניים ולקשור בבטחה את שני אורכי התפר כדי לקשור את העורק, משאיר לפחות שני מילימטרים בין הקשרים. חוצים את העורק הראשי השמאלי בין התפרים, דואגים להשאיר את העצב שלם ולחזור על הניתוח בצד ימין.ליטוש הפיכה העורק הראשי הימני עם עניבת טבור סטרילית אחת 1/8 אינץ '. ולסגור את הפצע עם קליפי עור כירורגיים. לאחר מכן, לאפשר את החיה להתאושש באמבט מים מבוקר טמפרטורה לפחות שלושים דקות עם ניטור לפני היפוקסיה.עבור היפוקסיה רציפה, היפרוקסיה וטיפול היפוקסיה, למקם את בעלי החיים בקבוצת הפציעה בתא אטום בתוך אמבט מים. נטר ברציפות את ריכוז החמצן בתוך התא, כמו גם את הטמפרטורה רקטלי לפחות חיית סנטינל אחת. לשטוף את התא עם חמצן לח תשעה אחוזים ו 91 אחוז חנקן ולשמור על קצב זרימה של שלושה עד חמישה ליטר לדקה, בהתאם לגודל התא.לאחר ריכוז החמצן בתא הגיע תשעה אחוזים, להמשיך את המסירה במשך שלושים דקות. בסוף הטיפול בהיפוקסיה, העבר את אספקת הגז ל-80 אחוז חמצן לח ו-20 אחוז חנקן. לאחר שלושים דקות של היפרוקסיה, פתח את התא כדי לאפשר לו להגיע במהירות רבה יותר לנורמוקסיה, על ידי שיווי משקל עם אוויר החדר, לפני איטום התא ושטיפת עם תשעה אחוזים חמצן לח שוב.ניטור רציף של כל בעלי החיים במהלך הסיבוב השני של היפוקסיה, לשים לב לכל בעלי החיים המציגים bradypnea. לאחר ריכוז החמצן בתא הגיע תשעה אחוזים, להמשיך את הטיפול היפוקסיה במשך שלושים דקות. בסוף הטיפול, השתמשו במקלות מעוגלים כדי לזהות ולשחרר את הקלטת הטבורה מהעורק הראשי הימני.לתבודד את הפצע עם קליפים עור כירורגיים. ואז להחזיר את כל הערכות לג'יל במשך 60 דקות לסיעוד והתאוששות. בתום תקופת ההחלמה, החזירו את בעלי החיים הפצועים לאמבטיות המים בטמפרטורה של 37 עד 40 מעלות צלזיוס למשך שש שעות, והתאמת טמפרטורת המים לפי הצורך, כדי לשמור על טמפרטורות רקטליות של 36 עד 37 מעלות צלזיוס.לאחר מכן, להחזיר ערכות לג'יל שלהם שוב. לאחר קציר המוח וקיביעה בנקודת הקצה הניסיונית המתאימה, מניחים את קצות הקליפר האלקטרוני על ההיבטים הגביים והגחוניים של כל מוח כדי למדוד את הגובה של כל מוח פצוע ולא פצוע. מניחים את קצות הקליפר בחלקים הרוחביים ביותר של האונות הרקתיות כדי למדוד את הרוחב של כל מוח ולשקול כל מוח.השתמש בקאליפר כדי למדוד את סדק האורך, את כל sulci מההתחלה והסוף של החלק המובהק ביותר של סולקוס המתאים, ואת כל gyri מההיבט הרחב ביותר של כל gyrus המתאים. לאחר מכן, מניחים קצה אחד של הקליפר בנקודה האחורית ביותר של סדק האורך ואת הקצה השני של caliper בחלק האחורי ביותר של המוח הקטן כדי למדוד את כמות המוח הקטן חשוף. מתוך 34 בעלי חיים מששת המלטה שנחשפו לעלבון במחקר זה, חמישה בעלי חיים נפצעו באורח בינוני וארבעה בעלי חיים נפצעו באורח קשה.עם פציעה גוברת, צמצום של gyri באונות הרקתיות ו / או העורפית נצפתה, עם קיצור זועף הקשורים והרחבת הסקור האורך ואת האזורים הגדולים יותר של אובדן רקמת סיסטיק בבעלי החיים שנפגעו קשה ביותר. במהלך תקופת בדיקת הרפלקס, בעלי החיים הפצועים מציגים זמן איטי יותר להסתובב במשימה הגיאוטקסית השלילית. זמן איטי יותר להסתובב הרחק מהקצה במשימה סלידה מצוק קצת יותר זמן ימינה.על המסלול, בעלי חיים פצועים להפגין מהירות ממוצעת דומה פקדים אבל להציג מידה גדולה יותר באופן משמעותי של וריאציה מהירות במהלך כל ריצה. המרחק המותאם למשקל בין כפות הרגליים לכפות הרגליים האחוריות גדול משמעותית בבעלי חיים פצועים, עם פחות לחץ המופעל לכל אזור כפות רגליים יחידה, דרך ארבע כפות הרגליים. בשטח הפתוח, בעלי החיים הפצועים מכסים מרחק פחות מוחלט, עוצרים בתדירות גבוהה יותר ומבלים זמן רב יותר במרכז השדה ופחות זמן בפינות.כאן, ניתן לצפות במפות חום מייצגות של שליטה ובעלי חיים פצועים. יש לדאוג לנתח את העורק מן העצב הנלווה ולאפשר את הזמן המרבי האפשרי היפוקסיה. צעדים אלה יבטיחו שרוב בעלי החיים ישרדו, וגם יסבלו מפציעה.בעקבות הליך זה, ניתן להעריך כל תוצאות ביוכימיות, פתולוגיות או התנהגותיות, כולל הערכות המוגבלות בדרך כלל למודלים של מכרסמים של פגיעה מוחית.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Lateral Fluid Percussion: Model of Traumatic Brain Injury in Mice

נוזל הקשה Lateral: דגם של פגיעה מוחית טראומטית של עכברים

Traumatic brain injury (TBI) research has attained renewed momentum due to the increasing awareness of head injuries, which result in morbidity and ...

Preterm EEG: A Multimodal Neurophysiological Protocol

מוקדמת EEG: פרוטוקול נוירופיזיולוגי multimodal

Since its introduction in early 1950s, electroencephalography (EEG) has been widely used in the neonatal intensive care units (NICU) for assessment and ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

<em&gt; Ex Vivo</em&gt; חוט השדרה מושרה לייזר הפגיעה דגם להערכת מנגנוני axonal הניוון בזמן אמת

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

שיטה לגרום סגור ראש הפגיעה מוחית טראומטית ב<em&gt; דרוזופילה</em

Traumatic brain injury (TBI) affects millions of people each year, causing impairment of physical, cognitive, and behavioral functions and death. Studies ...

Dorsal Root Ganglion Injection and Dorsal Root Crush Injury as a Model for Sensory Axon Regeneration

הזרקת גנגליון שורש הגבה ו שורש הגבה Crush פגיעה כמודל להתחדשות החושית אקסון

Achieving axon regeneration after nervous system injury is a challenging task. As different parts of the central nervous system (CNS) differ from each ...

Neurobehavioral Assessments in a Mouse Model of Neonatal Hypoxic-ischemic Brain Injury

Neurobehavioral הערכות במודל של עכברים של פגיעה מוחית לפציעה Hypoxic-איסכמי Neonatal

We performed unilateral carotid artery occlusion on CD-1 mice to create a neonatal hypoxic-ischemic (HI) model and investigated the effects of neonatal HI ...

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

מודל הרומן במבחנה של פגיעה מוחית טראומטית הפיצוץ

Traumatic brain injury is a leading cause of death and disability in military and civilian populations. Blast traumatic brain injury results from the ...

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

השפעות הפיצוץ-induced Neurotrauma על מכרסם מווסת המזרח התיכון העורקים המוחיים

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

Murine Model of Controlled Cortical Impact for the Induction of Traumatic Brain Injury

מודל מורנה של השפעה בקליפת המוח הנשלטת על אינדוקציה של פגיעה מוחית טראומטית

The Centers for Disease Control and Injury Prevention estimate that almost 2 million people sustain a traumatic brain injury (TBI) every year in the ...

Electromagnetic Controlled Closed-Head Model of Mild Traumatic Brain Injury in Mice

מודל ראש סגור מבוקר אלקטרומגנטי של פגיעה מוחית טראומטית קלה בעכברים

Highly reproducible animal models of traumatic brain injury (TBI), with well-defined pathologies, are needed for testing therapeutic interventions and ...