Name: a ferret model of inflammation-sensitized late preterm hypoxic-ischemic brain injury
Uploaded: 2019-11-19T12:30:00
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모델의 개발은 빌과 멜린다 게이츠 재단뿐만 아니라 NIH 보조금 5R21NS093154-02 (NICHD)에 의해 지원되었다.

절차는 실험실 동물의 배려 그리고 사용을 위한 NIH 가이드에 따라 그리고 워싱턴 대학 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인된 프로토콜의 한 부분으로 수행되었습니다.
1. 준비 및 LPS 관리
참고: 절차의 타임라인은 그림 1을 참조하십시오.
<ol><li>절차를 시작되기 전에 모든 수술 기구 및 수술 용 커튼을 밀봉, 살?...

<ol>
	<li>Martin, J. A., Hamilton, B. E., Osterman, M. J. K., Driscoll, A. K., Drake, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Births:+Final+Data+for+2017.">Births: Final Data for 2017.</a> National Vital Statistics Report. 67 (8), 1-49 (2018).</li><li>Vanhaesebrouck, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EPIBEL+study:+outcomes+to+discharge+from+hospital+for+extremely+preterm+infants+in+Belgium.">The EPIBEL study: outcomes to discharge from hospital for extremely preterm infants in Belgium.</a> Pediatrics. 114 (3), 663-675 (2004).</li><li>Raju, T. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-Term+Healthcare+Outcomes+of+Preterm+Birth:+An+Executive+Summary+of+a+Conference+Sponsored+by+the+National+Institutes+of+Health.">Long-Term Healthcare Outcomes of Preterm Birth: An Executive Summary of a Conference Sponsored by the National Institutes of Health.</a> Journal of Pediatrics. , (2016).</li><li>Raju, T. N. K., Buist, A. S., Blaisdell, C. J., Moxey-Mims, M., Saigal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adults+born+preterm:+a+review+of+general+health+and+system-specific+outcomes.">Adults born preterm: a review of general health and system-specific outcomes.</a> Acta Paediatrica. 106 (9), 1409-1437 (2017).</li><li>Bennet, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+inflammation+and+impaired+development+of+the+preterm+brain.">Chronic inflammation and impaired development of the preterm brain.</a> Journal of Reproductive Immunology. 125, 45-55 (2018).</li><li>Reich, B., Hoeber, D., Bendix, I., Felderhoff-Mueser, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperoxia+and+the+Immature+Brain.">Hyperoxia and the Immature Brain.</a> Developmental Neuroscience. 38 (5), 311-330 (2016).</li><li>Galinsky, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+interactions+between+hypoxia-ischemia+and+inflammation+in+preterm+brain+injury.">Complex interactions between hypoxia-ischemia and inflammation in preterm brain injury.</a> Developmental Medicine &amp; Child Neurology. 60 (2), 126-133 (2018).</li><li>Empie, K., Rangarajan, V., Juul, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+the+ferret+a+suitable+species+for+studying+perinatal+brain+injury.">Is the ferret a suitable species for studying perinatal brain injury.</a> International Journal of Developlemental Neuroscience. 45, 2-10 (2015).</li><li>Snyder, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+of+white+matter,+toll-like+receptor+expression,+and+motor+skills+in+the+neonatal+ferret.">Ontogeny of white matter, toll-like receptor expression, and motor skills in the neonatal ferret.</a> International Journal of Developlemental Neuroscience. , (2018).</li><li>Schwerin, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progression+of+histopathological+and+behavioral+abnormalities+following+mild+traumatic+brain+injury+in+the+male+ferret.">Progression of histopathological and behavioral abnormalities following mild traumatic brain injury in the male ferret.</a> Journal of Neuroscience Research. 96 (4), 556-572 (2018).</li><li>Rafaels, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+injury+risk+from+primary+blast.">Brain injury risk from primary blast.</a> Journal of Trauma and Acute Care Surgery. 73 (4), 895-901 (2012).</li><li>Wood, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Ferret+Model+of+Encephalopathy+of+Prematurity.">A Ferret Model of Encephalopathy of Prematurity.</a> Developlemental Neuroscience. , (2019).</li><li>Barnette, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Brain+Development+in+the+Ferret+via+Magnetic+Resonance+Imaging.">Characterization of Brain Development in the Ferret via Magnetic Resonance Imaging.</a> Pediatric Research. 66 (1), 80-84 (2009).</li><li>Kroenke, C. D., Mills, B. D., Olavarria, J. F., Neil, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology and Diseases of the Ferret. , (2014).</li><li>Eklind, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+endotoxin+sensitizes+the+immature+brain+to+hypoxic--ischaemic+injury.">Bacterial endotoxin sensitizes the immature brain to hypoxic--ischaemic injury.</a> European Journal of Neuroscience. 13 (6), 1101-1106 (2001).</li><li>Falck, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Systemic+Inflammation+Induces+Inflammatory+Reactions+and+Brain+Apoptosis+in+a+Pathogen-Specific+Manner.">Neonatal Systemic Inflammation Induces Inflammatory Reactions and Brain Apoptosis in a Pathogen-Specific Manner.</a> Neonatology. 113 (3), 212-220 (2018).</li><li>Osredkar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermia+Does+Not+Reverse+Cellular+Responses+Caused+by+Lipopolysaccharide+in+Neonatal+Hypoxic-Ischaemic+Brain+Injury.">Hypothermia Does Not Reverse Cellular Responses Caused by Lipopolysaccharide in Neonatal Hypoxic-Ischaemic Brain Injury.</a> Developmental Neuroscience. 37 (4-5), 390-397 (2015).</li><li>Nakata, M., Itou, T., Sakai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+inflammatory+cytokines+expression+in+peripheral+blood+mononuclear+cells+of+the+ferret+(Mustela+putorius+furo)+using+real-time+PCR.">Quantitative analysis of inflammatory cytokines expression in peripheral blood mononuclear cells of the ferret (Mustela putorius furo) using real-time PCR.</a> Veterinary Immunology and Immunopathology. 130 (1-2), 88-91 (2009).</li><li>Christensson, M., Garwicz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+postnatal+motor+development+in+ferrets:+ontogenetic+and+comparative+perspectives.">Time course of postnatal motor development in ferrets: ontogenetic and comparative perspectives.</a> Behavioral Brain Research. 158 (2), 231-242 (2005).</li><li>Li, Y., Dugyala, S. R., Ptacek, T. S., Gilmore, J. H., Frohlich, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+Immune+Activation+Alters+Adult+Behavior,+Gut+Microbiome+and+Juvenile+Brain+Oscillations+in+Ferrets.">Maternal Immune Activation Alters Adult Behavior, Gut Microbiome and Juvenile Brain Oscillations in Ferrets.</a> eNeuro. 5 (5), (2018).</li><li>Rice, J. E., Vannucci, R. C., Brierley, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+immaturity+on+hypoxic-ischemic+brain+damage+in+the+rat.">The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat.</a> Annals of Neurolology. 9 (2), 131-141 (1981).</li></ol>

페렛 뇌와 인간의 뇌 사이에 공유되는 물리적 및 발달 적 유사성으로 인해 페렛은 성인 및 발달 뇌 손상을 모델링하는 데 점점 더 사용되고 있습니다. 8,9,10,11,12. 그러나, 현재까지의 연구는 페렛 뇌가 눈에 보이는 병리학 적상해10,12의<...

유아를 위한 치료 내정간섭을 시험될 수 있는 미숙아및 주산기 저산소증-허혈의 병리생리학을 반영하는 큰 동물 모형을 위한 지속적인 필요가 있습니다. 2017년에, 미국에서 태어난 382,726명의 유아의 9.93%는 조산아로 태어났으며, 이들 유아의 84%는 임신1의32그리고 36주 사이에서 태어났습니다. 미숙아에서는, 감염 또는 염증에 주산기 노출은 바이러스성 또는 세균성 병원체 때문에 모계 면역 활성화가 preterm 노동을 시작할 수 있는 일반적인 입니다. 산후, 조산아는 초기 또는 늦은 개시 패혈증의 고위험에2. 조산아는 또한 미성숙 한 심폐 시스템으로 인해 저산소증, 저혈압 및 고혈압의 기간을 자주 경험하며, 자궁에서 경험한 것과 비교하여 대기중의 산소 긴장이 높아지고, 과민성 노출이 발생합니다. 추가적으로, preterm 유아에서는, 항 산화 방어는 미성숙3 및 pro-apoptotic 요인은 자연적으로 upregulated4. 산화 스트레스와 세포 사멸은 면역 체계와 신경 염증의 활성화로 이어진다. 이러한 결합된 인자는 뇌의 발달 및 생리학적 취약성에 기여하고, 조산아5,6,7의발달불량과 관련된 뇌질환을 초래하거나 악화시킬 것으로 생각된다.
페렛 뇌가 인간의 뇌와 공유하는 물리적 및 발달 적 유사성으로 인해 페렛은 뇌 손상을 모델링하는 매력적인 종입니다8,9,10,11,12. 페렛은 또한 조산기 인간 두뇌를 모델링하는 이상적인 후보입니다, 그들은 lissencephalic 태어난 으로 산후 자뇌 뇌를 개발, 이는 조산아태어난 유아에 의해 경험 된 모욕에 개발 뇌를 노출하는 창을 제공하는. 출생시, 페렛 두뇌 발달은 출생 일 (P) 17키트임신13의32-36 주에 유아와 동등한 것으로 여겨지는 13 주 인간 태아와 유사합니다.
우리 그룹은 최근 염증성 감작과 대장균 지질학 (LPS)과 저산소증 및 hyperoxia12에대한 후속 노출을 결합하여 P10 페렛에서 매우 조산 (&28 주 임신) 뇌 손상의 모델을 발표했다. 다음 프로토콜에서, 우리는 지금 LPS 감작이 양측 대뇌 허혈, 저산소증 및 hyperoxia에 선행되는 P17 페렛에 있는 늦은 preterm 모형을 기술합니다. 이 동물의 하위 집합에 더 심각한 부상 결과, 그리고 더 밀접 하 게 장기간된 염증의 복잡 한 상호 작용을 모델, 허 혈, 저 산소 증, 그리고 뇌 손상을 개발 하는 preterm 유아의 수에서 경험 하는 산화 스트레스.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:775px;" width="775">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">80% Oxygen</td>
			<td style="width:196px;">Praxair</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">9% Oxygen</td>
			<td>Praxair</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Absorbent benchtop protector</td>
			<td style="width:196px;">Kimtech</td>
			<td align="right" style="width:136px;">7546</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Automated catwalk</td>
			<td style="width:196px;">Noldus</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Betadine surgical scrub</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bupivacaine</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-888-9382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Buprenorphine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Calipers</td>
			<td style="width:196px;">SRA Measurement Products</td>
			<td style="width:136px;">ME-CAL-FP-200</td>
			<td>200mm range, .01 mm resolution</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cotton Gauze Sponge</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22028556</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Curved fine hemostat</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Curved forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Curved suture-tying hemostat</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethovision tracking software</td>
			<td style="width:196px;">Noldus</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Eye Lubricant</td>
			<td>Rugby</td>
			<td>NDC 0536-1970-72</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ferrets (Mustela putorius furo)</td>
			<td style="width:196px;">Marshall Biosciences</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td>Outbred (no specific strain)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Formalin</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:136px;">SF100-4</td>
			<td>10% (Phosphate Buffer/Certified)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hair Clippers</td>
			<td>Conair</td>
			<td>GMT175N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Insulin Syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>329461</td>
			<td>0.3 cc 3 mm 31G</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Isoflurane</td>
			<td>Piramal</td>
			<td>66794-017-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Lidocaine</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-808-8202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">LPS</td>
			<td>List Biological</td>
			<td>LPS Ultrapure #423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Oxygen sensor</td>
			<td>BW Gas Alert</td>
			<td>GAXT-X-DL-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pentobarbital</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Plastic chamber</td>
			<td>Tellfresh</td>
			<td align="right">1960</td>
			<td>10L; 373x270x135mm</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Saline Solution, 0.9%</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>RL-4492</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Scalpel blade</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Scalpel handle</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500236</td>
			<td>#3, 13cm</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sterile suture</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18020-50</td>
			<td>Braided Silk, 5/0</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical clip applicator</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12020-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical clip remover</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12023-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical drapes</td>
			<td>Medline Unidrape</td>
			<td>VET3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical gloves</td>
			<td>Ansell Perry Inc</td>
			<td>5785004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surigical clips</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12022-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Thermometer (rectal)</td>
			<td>YSI</td>
			<td>Precision 4000A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Thermometer (water)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-648-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Umbilical tape</td>
			<td>Grafco</td>
			<td>3031</td>
			<td>Sterile</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Water bath</td>
			<td style="width:196px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:136px;">TSCOL19</td>
			<td>19L</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a ferret model of inflammation-sensitized late preterm hypoxic-ischemic brain injury

미숙아의 신경학적 후유증을 가진 유아를 위한 치료 내정간섭을 시험하기 위하여 주산기 감염 과 저산소증 허혈 (HI)의 임상적으로 관련있는 모형을 위한 지속적인 필요가 있습니다. 페레트는 중추증으로 태어나고 산후 의 뇌를 개발하기 때문에 조산 인간의 뇌를 모델링하기위한 이상적인 후보입니다. 출생시, 페렛 두뇌 발달은 산후 일 (P) 17 키트가 32-36 주 임신에 유아와 동등한 것으로 여겨지는 13 주 인간 태아와 유사합니다. 우리는 P17 페렛에 있는 상해 모형을 기술합니다, 여기서 lipopolysaccharide 관리는 양측 대뇌 허혈, 저산소증 및 hyperoxia에 선행됩니다. 이것은 머리말을 붙인 염증의 복잡한 상호 작용을 시뮬레이션합니다, 허혈, 저산소증, 뇌 손상을 개발 하는 신생아의 숫자에서 경험 하는 산화 스트레스. 부상당한 동물은 여러 피질 자이리와 관련 황치의 축소를 포함하여 뇌의 형태학적 변화와 함께 총 상해 심각도의 범위를 표시합니다. 부상당한 동물은 또한 느린 반사 발달을 보여주고, 자동화 된 좁은 통로에서 운동의 느리고 가변적인 속도를 보여주며, 열린 필드에서 의 탐사를 감소시킵니다. 이 모형은 염증과 HI와 관련되었던 신생아 뇌병증을 가진 유아를 위한 putative 치료를 시험하고, 피질 발달에 영향을 미치는 상해의 연구 기계장치를, 및 탄력성을 제공하는 통로를 조사하는 플래트홈을 제공합니다 영향을 받지 않는 동물.

34마리(n=18마리, n=16암컷) 동물중 모욕에 노출된 6마리의 동물, 8마리의 동물(24%; 4마리, 4마리의 암컷) 중 2차 저산소증 기간(n=5), 온도 관리(n=2) 동안, 또는 모욕 후 하룻밤 동안 사망한 동물(n=1). 부상당한 그룹에서, 26 명의 생존자 중 9 명 (35 %) 눈에 띄는 부상을 입었습니다. 5마리의 동물(n=5마리)은 중등도의 부상을 입었으며, 4마리의 동물(n=2마리, n=2암컷)은 각각 2-5 및 6-9의 총 병리학 점수로 정의된 ...

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A Ferret Model of Inflammation-sensitized Late Preterm Hypoxic-ischemic Brain Injury

이 방법은 P17 페렛에서 염증 과민성 허혈성 및 고산소 뇌 손상을 설명하여 여러 후기 조산아에서 경험한 장기간 염증과 산화 뇌 손상 사이의 복잡한 상호 작용을 모델링합니다.

염증 과민성 후기 조저산소-허혈성 뇌 손상의 페렛 모델

There is an ongoing need for clinically relevant models of perinatal infection and hypoxia-ischemia (HI) in which to test therapeutic interventions for ...

이 프로토콜은 중요하고 지속적인 부상을 초래하는 페렛에서 염증 민감 조기 뇌 손상의 첫 번째 모델을 제공하기 때문에 중요합니다. 이 기술은 조기 인간 유아에서 본 뇌 손상의 종류에 기여 하기 위해 생각 트리거 및 생화 확 적인 메커니즘의 많은 통합 하는 장기간 된 모욕을 포함. 뇌 측정 절차를 시연하는 것은 우리의 실험실에서 연구 과학자 인 카일리 코리와 학부 생 올리비아 화이트가 될 것입니다.수술을 시작하기 30 분 전에, 부상 그룹의 키트에 킬로그램 LPS IP 당 3 밀리그램과 동물을 제어하기 위해 그램 당 세 마이크로 리터의 멸균 식염수의 동등한 볼륨을 관리 할 수 있습니다. 절차를 시작하기 전에 작은 동물 클리퍼를 사용하여 페렛의 복부 목 부위의 모든 머리카락을 직사각형 패턴으로 제거하고 피부를 염색하거나 열 발진을 일으키지 않도록주의하십시오. 면도 부위에 국소 마취를 투여하고 포비도네 요오드와 70%의 에탄올을 번갈아 가며 피부를 소독합니다.발가락 핀치에 의해 적절한 수준의 진정을 확인한 후, 목 부위를 노출시키는 멸균, 일회용 컷 드레이프로 동물을 덮습니다. 양측 경동맥 결찰의 경우, 10번의 메스 블레이드를 사용하여 목 중앙에 1.5센티미터 의 중간선 절개를 하고 미세한 헤모스트와 곡선포스를 사용하여 왼쪽 경동맥까지 무뚝뚝하게 해부합니다. 관련 신경 혈관 번들에서 노출 된 동맥을 해부합니다.그리고 곡선 미세 집게 한 켤레를 사용하여 동맥 아래에 멸균 5/0 실크 봉합사의 루프 10 센티미터 길이를 전달합니다. 봉합사를 반으로 자르고 두 길이의 봉합사를 단단히 묶어 동맥을 리게이트하고 매듭 사이에 적어도 2 밀리미터를 남깁니다. 봉합사 사이에 왼쪽 경동맥을 옮기고 신경을 그대로 두고 오른쪽의 해부를 반복하는 데 주의를 기울입니다.오른쪽 경동맥을 멸균 1/8 인치 배꼽 넥타이로 뒤집을 수 있습니다. 그리고 수술 피부 클립으로 상처를 닫습니다. 그런 다음, 동물이 저산소증 전에 모니터링을 통해 적어도 30 분 동안 온도 조절 수조에서 회복할 수 있도록 하십시오.순차저산소증, 아옥시아 및 저산소증 치료를 위해, 수조 내의 밀폐 챔버에 부상 그룹에 동물을 배치합니다. 챔버 내의 산소 농도뿐만 아니라 적어도 하나의 센티넬 동물의 직장 온도를 지속적으로 모니터링합니다. 가습된 산소와 91%의 질소로 챔버를 플러시하고 챔버 크기에 따라 분당 3~5리터의 유량을 유지합니다.챔버의 산소 농도가 9%에 도달하면 30분 동안 계속 전달됩니다. 저산소증 처리의 끝에, 가스 공급을 80% 가습산소및 20%의 질소로 전환합니다. 30분 동안 의아옥증을 마십후, 챔버를 밀봉하고 다시 9 %의 가습 산소로 플러시하기 전에, 실내 공기와 평형하여, 노목시에 더 빨리 도달 할 수 있도록 챔버를 엽니 다.저산소증의 이 두 번째 라운드 동안 모든 동물을 지속적으로 모니터링하여 최면을 표시하는 동물을 기록합니다. 일단 챔버에 있는 산소의 농도가 9%에 도달하면, 30 분 동안 저산소증 처리를 계속합니다. 처리의 끝에서, 오른쪽 경동맥에서 배꼽 테이프를 확인하고 풀어 곡선 포셉을 사용했습니다.수술 용 피부 클립으로 상처를 다시 닫습니다. 그런 다음 간호 및 회복을 위해 60 분 동안 모든 키트를 질에 반환하십시오. 회복 기간이 끝나면 부상당한 동물을 6시간 동안 37~40도의 수조에 반환하여 필요에 따라 수온을 조정하여 섭씨 36~37도의 직장 온도를 유지합니다.그런 다음 키트를 다시 질로 돌려보십시오. 적절한 실험 적 끝점에서 뇌 수확 및 고정 후, 각 뇌의 등쪽 및 복부 측면에 전자 캘리퍼의 팁을 배치하여 각 부상과 부상이없는 뇌의 높이를 측정합니다. 각 뇌의 폭을 측정하고 각 뇌의 무게를 측두엽의 가장 측면 부분에 캘리퍼의 팁을 배치합니다.칼리퍼를 사용하여 종방향 균열, 해당 황액의 가장 뚜렷한 부분의 시작과 끝에서 모든 설시를 측정하고, 각 해당 자이루스의 가장 넓은 양상에서 모든 자이를 측정한다. 그런 다음, 칼리퍼의 한 끝을 소뇌의 가장 후방 부분에 종방향 균열의 가장 후방 지점에 놓고 캘리퍼의 다른 끝을 소뇌의 가장 후방 부분에 놓아 노출 된 소뇌의 양을 측정합니다. 이 연구에서 모욕에 노출된 6마리의 쓰레기중 34마리의 동물 중 5마리가 중상을 입었으며 4마리의 동물이 심한 부상을 입었습니다.부상이 증가함에 따라, 현세 및/또는 후두 엽에서 자리의 협항이 관찰되며, 가장 심각한 부상을 입은 동물에서 세로 균열 및 낭포 조직 손실의 더 큰 영역의 관련 황골 단축 및 확대가 관찰됩니다. 반사 테스트 기간 동안 부상당한 동물은 부정적인 지질 택시 작업에서 회전하는 속도가 느립니다. 절벽 우회 작업의 가장자리에서 회전하는 속도가 느리고 오른쪽으로 느린 시간입니다.좁은 통로에서 부상당한 동물은 컨트롤과 비슷한 평균 속도를 보여주지만 각 달리기 동안 속도 변화가 훨씬 큽합니다. 발과 뒷발 사이의 무게 조정 거리는 부상당한 동물에서 훨씬 더 크며, 4개의 발을 통해 유닛 발 영역당 압력이 적습니다. 오픈 필드에서 부상당한 동물은 총 거리를 줄이고, 더 자주 멈추고, 필드의 중앙에서 훨씬 더 많은 시간을 보내고 코너에서 보내는 시간을 줄입니다.여기서, 제어 및 부상당한 동물의 대표적인 열지도를 관찰 할 수 있습니다. 동반 신경에서 동맥을 해부하고 가능한 저산소시간을 최대한 허용하십시오. 이 단계는 또한 상해를 유지하면서 동물의 대다수가 살아남을 수 있도록 합니다.이 절차에 따라, 모든 생화학, 병리학 또는 행동 결과 평가될 수 있습니다., 일반적으로 뇌 손상의 설치류 모델로 제한 되는 평가를 포함 하 여.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Lateral Fluid Percussion: Model of Traumatic Brain Injury in Mice

측면 유체 타악기 : 마우스의 외상성 뇌 손상 모델

Traumatic brain injury (TBI) research has attained renewed momentum due to the increasing awareness of head injuries, which result in morbidity and ...

연구

신경과학

Preterm EEG: A Multimodal Neurophysiological Protocol

Preterm EEG : Multimodal Neurophysiological 프로토콜

Since its introduction in early 1950s, electroencephalography (EEG) has been widely used in the neonatal intensive care units (NICU) for assessment and ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

<em&gt; 전의 VIVO</em&gt; 레이저에 의한 척수 손상 모델은 실시간으로 축삭 변성의 메커니즘을 평가하기 위해

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

폐쇄 머리 외상성 뇌 손상을 입힐 수있는 방법<em&gt; 초파리</em

Traumatic brain injury (TBI) affects millions of people each year, causing impairment of physical, cognitive, and behavioral functions and death. Studies ...

Dorsal Root Ganglion Injection and Dorsal Root Crush Injury as a Model for Sensory Axon Regeneration

등쪽 뿌리 신경절 사출 및 지느러미 루트 감각 축삭의 재생을위한 모델로 부상 크러시

Achieving axon regeneration after nervous system injury is a challenging task. As different parts of the central nervous system (CNS) differ from each ...

Neurobehavioral Assessments in a Mouse Model of Neonatal Hypoxic-ischemic Brain Injury

신생아 Hypoxic-허 혈 성 뇌 손상의 마우스 모델에서 Neurobehavioral 평가

We performed unilateral carotid artery occlusion on CD-1 mice to create a neonatal hypoxic-ischemic (HI) model and investigated the effects of neonatal HI ...

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

모델을 새로운 시험관에 폭발 외상 성 뇌 손상의

Traumatic brain injury is a leading cause of death and disability in military and civilian populations. Blast traumatic brain injury results from the ...

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

가압된 설치류에 폭발을 이용한 Neurotrauma의 효과 중간 대뇌 동맥

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

Murine Model of Controlled Cortical Impact for the Induction of Traumatic Brain Injury

외상성 뇌 손상의 유도에 대한 제어 피질 영향의 뮤린 모델

The Centers for Disease Control and Injury Prevention estimate that almost 2 million people sustain a traumatic brain injury (TBI) every year in the ...

Electromagnetic Controlled Closed-Head Model of Mild Traumatic Brain Injury in Mice

생쥐의 경미한 외상성 뇌 손상에 대한 전자기 제어 폐쇄 머리 모델

Highly reproducible animal models of traumatic brain injury (TBI), with well-defined pathologies, are needed for testing therapeutic interventions and ...