Name: a ferret model of inflammation-sensitized late preterm hypoxic-ischemic brain injury
Uploaded: 2019-11-19T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Ferret Model of Inflammation-sensitized Late Preterm Hypoxic-ischemic Brain Injury at JoVE.com

Разработка модели финансировалась Фондом Билла и Мелинды Гейтс, а также грантом NIH 5R21NS093154-02 (NICHD).

Процедуры проводились в соответствии с Руководством NIH по уходу и использованию лабораторных животных и в рамках утвержденного протокола Институциональным комитетом по уходу и использованию животных Университета Вашингтона.
1. Администрация подготовки и LPS
<p class="jove_cont...

<ol>
	<li>Martin, J. A., Hamilton, B. E., Osterman, M. J. K., Driscoll, A. K., Drake, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Births:+Final+Data+for+2017.">Births: Final Data for 2017.</a> National Vital Statistics Report. 67 (8), 1-49 (2018).</li><li>Vanhaesebrouck, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EPIBEL+study:+outcomes+to+discharge+from+hospital+for+extremely+preterm+infants+in+Belgium.">The EPIBEL study: outcomes to discharge from hospital for extremely preterm infants in Belgium.</a> Pediatrics. 114 (3), 663-675 (2004).</li><li>Raju, T. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-Term+Healthcare+Outcomes+of+Preterm+Birth:+An+Executive+Summary+of+a+Conference+Sponsored+by+the+National+Institutes+of+Health.">Long-Term Healthcare Outcomes of Preterm Birth: An Executive Summary of a Conference Sponsored by the National Institutes of Health.</a> Journal of Pediatrics. , (2016).</li><li>Raju, T. N. K., Buist, A. S., Blaisdell, C. J., Moxey-Mims, M., Saigal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adults+born+preterm:+a+review+of+general+health+and+system-specific+outcomes.">Adults born preterm: a review of general health and system-specific outcomes.</a> Acta Paediatrica. 106 (9), 1409-1437 (2017).</li><li>Bennet, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+inflammation+and+impaired+development+of+the+preterm+brain.">Chronic inflammation and impaired development of the preterm brain.</a> Journal of Reproductive Immunology. 125, 45-55 (2018).</li><li>Reich, B., Hoeber, D., Bendix, I., Felderhoff-Mueser, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperoxia+and+the+Immature+Brain.">Hyperoxia and the Immature Brain.</a> Developmental Neuroscience. 38 (5), 311-330 (2016).</li><li>Galinsky, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+interactions+between+hypoxia-ischemia+and+inflammation+in+preterm+brain+injury.">Complex interactions between hypoxia-ischemia and inflammation in preterm brain injury.</a> Developmental Medicine &amp; Child Neurology. 60 (2), 126-133 (2018).</li><li>Empie, K., Rangarajan, V., Juul, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+the+ferret+a+suitable+species+for+studying+perinatal+brain+injury.">Is the ferret a suitable species for studying perinatal brain injury.</a> International Journal of Developlemental Neuroscience. 45, 2-10 (2015).</li><li>Snyder, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+of+white+matter,+toll-like+receptor+expression,+and+motor+skills+in+the+neonatal+ferret.">Ontogeny of white matter, toll-like receptor expression, and motor skills in the neonatal ferret.</a> International Journal of Developlemental Neuroscience. , (2018).</li><li>Schwerin, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progression+of+histopathological+and+behavioral+abnormalities+following+mild+traumatic+brain+injury+in+the+male+ferret.">Progression of histopathological and behavioral abnormalities following mild traumatic brain injury in the male ferret.</a> Journal of Neuroscience Research. 96 (4), 556-572 (2018).</li><li>Rafaels, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+injury+risk+from+primary+blast.">Brain injury risk from primary blast.</a> Journal of Trauma and Acute Care Surgery. 73 (4), 895-901 (2012).</li><li>Wood, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Ferret+Model+of+Encephalopathy+of+Prematurity.">A Ferret Model of Encephalopathy of Prematurity.</a> Developlemental Neuroscience. , (2019).</li><li>Barnette, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Brain+Development+in+the+Ferret+via+Magnetic+Resonance+Imaging.">Characterization of Brain Development in the Ferret via Magnetic Resonance Imaging.</a> Pediatric Research. 66 (1), 80-84 (2009).</li><li>Kroenke, C. D., Mills, B. D., Olavarria, J. F., Neil, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology and Diseases of the Ferret. , (2014).</li><li>Eklind, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+endotoxin+sensitizes+the+immature+brain+to+hypoxic--ischaemic+injury.">Bacterial endotoxin sensitizes the immature brain to hypoxic--ischaemic injury.</a> European Journal of Neuroscience. 13 (6), 1101-1106 (2001).</li><li>Falck, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Systemic+Inflammation+Induces+Inflammatory+Reactions+and+Brain+Apoptosis+in+a+Pathogen-Specific+Manner.">Neonatal Systemic Inflammation Induces Inflammatory Reactions and Brain Apoptosis in a Pathogen-Specific Manner.</a> Neonatology. 113 (3), 212-220 (2018).</li><li>Osredkar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermia+Does+Not+Reverse+Cellular+Responses+Caused+by+Lipopolysaccharide+in+Neonatal+Hypoxic-Ischaemic+Brain+Injury.">Hypothermia Does Not Reverse Cellular Responses Caused by Lipopolysaccharide in Neonatal Hypoxic-Ischaemic Brain Injury.</a> Developmental Neuroscience. 37 (4-5), 390-397 (2015).</li><li>Nakata, M., Itou, T., Sakai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+inflammatory+cytokines+expression+in+peripheral+blood+mononuclear+cells+of+the+ferret+(Mustela+putorius+furo)+using+real-time+PCR.">Quantitative analysis of inflammatory cytokines expression in peripheral blood mononuclear cells of the ferret (Mustela putorius furo) using real-time PCR.</a> Veterinary Immunology and Immunopathology. 130 (1-2), 88-91 (2009).</li><li>Christensson, M., Garwicz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+postnatal+motor+development+in+ferrets:+ontogenetic+and+comparative+perspectives.">Time course of postnatal motor development in ferrets: ontogenetic and comparative perspectives.</a> Behavioral Brain Research. 158 (2), 231-242 (2005).</li><li>Li, Y., Dugyala, S. R., Ptacek, T. S., Gilmore, J. H., Frohlich, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+Immune+Activation+Alters+Adult+Behavior,+Gut+Microbiome+and+Juvenile+Brain+Oscillations+in+Ferrets.">Maternal Immune Activation Alters Adult Behavior, Gut Microbiome and Juvenile Brain Oscillations in Ferrets.</a> eNeuro. 5 (5), (2018).</li><li>Rice, J. E., Vannucci, R. C., Brierley, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+immaturity+on+hypoxic-ischemic+brain+damage+in+the+rat.">The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat.</a> Annals of Neurolology. 9 (2), 131-141 (1981).</li></ol>

Из-за физического и развития сходства разделяют между хорька мозга и человеческого мозга, хорек все чаще используется для моделирования как взрослых, так и развития мозга травмы. 8,9,10,11,12. Тем не мен?...

Существует постоянная потребность в крупных животных моделей, которые отражают патофизиологию недоношенных и перинатальной гипоксии-ишемии, в которой терапевтические вмешательства для младенцев могут быть проверены. В 2017 году 9,93% из 382 726 младенцев, родившихся в Соединенных Штатах, родились недоношенными, и 84% из этих детей родились между 32 и 36 неделями беременности1. У недоношенных детей, перинатальное воздействие инфекции или воспаления является общим, где материнская иммунная активация из-за вирусных или бактериальных патогенов может инициировать преждевременные роды. Послеродовой, недоношенные дети подвергаются высокому риску раннего или позднего начала сепсиса2. Недоношенные младенцы также часто испытывают периоды гипоксии, гипотонии и гипероксии из-за их незрелой кардиореспираторной системы, повышенного кислородного напряжения в атмосфере по сравнению с теми, которые испытывают внутриутробно, и ятрогенных воздействий. Кроме того, у недоношенных детей антиоксидантная защита незрелая3, а проапоптотические факторы естественным образом регулируются4. Оксидативный стресс и клеточная смерть приводят к активации иммунной системы и нейровоспаления. Эти комбинированные факторы, как полагают, способствуют развитию и физиологической уязвимости мозга, и привести или усугубить энцефалопатию, связанную с плохими исходами развития у недоношенных детей5,6,7.
Из-за физического и развития сходства, что хорек мозга разделяет с человеческим мозгом, хорек является привлекательным видом, в котором моделировать черепно-мозговую травму8,9,10,11,12. Хорьки также являются идеальными кандидатами для моделирования недоношенного человеческого мозга, так как они рождаются лиссенцефалическими и развивают гиренцефалический мозг послеродового, что обеспечивает окно, в котором подвергать развивающийся мозг оскорблениям, которые имитируют те, с которыми сталкиваются младенцы, рожденные недоношенными. При рождении, развитие мозга хорька похож на 13 недель плода человека, с послеродового дня (P) 17 комплекты считаются эквивалентными младенцу на 32-36 недель беременности13.
Наша группа недавно опубликовала модель чрезвычайно преждевременных (Злт;28 недель беременности) черепно-мозговой травмы в P10 хорька путем объединения воспалительных сенсибилизации с Escherichia coli липополисахарида (LPS) с последующим воздействием гипоксии и гипероксии12. В следующем протоколе мы описываем позднюю преждевременную модель в хорьке P17, где за сенсибилизацизацией ЛПС следует двусторонняя церебральная ишемия, гипоксия и гипероксия. Это приводит к более тяжелой травмы в подмножество животных, и более тесно модели сложного взаимодействия длительного воспаления, ишемии, гипоксии и окислительного стресса опытных в ряде недоношенных младенцев, которые развиваются черепно-мозговой травмы.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:775px;" width="775">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">80% Oxygen</td>
			<td style="width:196px;">Praxair</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">9% Oxygen</td>
			<td>Praxair</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Absorbent benchtop protector</td>
			<td style="width:196px;">Kimtech</td>
			<td align="right" style="width:136px;">7546</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Automated catwalk</td>
			<td style="width:196px;">Noldus</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Betadine surgical scrub</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bupivacaine</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-888-9382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Buprenorphine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Calipers</td>
			<td style="width:196px;">SRA Measurement Products</td>
			<td style="width:136px;">ME-CAL-FP-200</td>
			<td>200mm range, .01 mm resolution</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cotton Gauze Sponge</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22028556</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Curved fine hemostat</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Curved forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Curved suture-tying hemostat</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethovision tracking software</td>
			<td style="width:196px;">Noldus</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Eye Lubricant</td>
			<td>Rugby</td>
			<td>NDC 0536-1970-72</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ferrets (Mustela putorius furo)</td>
			<td style="width:196px;">Marshall Biosciences</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td>Outbred (no specific strain)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Formalin</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:136px;">SF100-4</td>
			<td>10% (Phosphate Buffer/Certified)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hair Clippers</td>
			<td>Conair</td>
			<td>GMT175N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Insulin Syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>329461</td>
			<td>0.3 cc 3 mm 31G</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Isoflurane</td>
			<td>Piramal</td>
			<td>66794-017-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Lidocaine</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-808-8202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">LPS</td>
			<td>List Biological</td>
			<td>LPS Ultrapure #423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Oxygen sensor</td>
			<td>BW Gas Alert</td>
			<td>GAXT-X-DL-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pentobarbital</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Plastic chamber</td>
			<td>Tellfresh</td>
			<td align="right">1960</td>
			<td>10L; 373x270x135mm</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Saline Solution, 0.9%</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>RL-4492</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Scalpel blade</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Scalpel handle</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500236</td>
			<td>#3, 13cm</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sterile suture</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18020-50</td>
			<td>Braided Silk, 5/0</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical clip applicator</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12020-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical clip remover</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12023-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical drapes</td>
			<td>Medline Unidrape</td>
			<td>VET3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical gloves</td>
			<td>Ansell Perry Inc</td>
			<td>5785004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surigical clips</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12022-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Thermometer (rectal)</td>
			<td>YSI</td>
			<td>Precision 4000A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Thermometer (water)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-648-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Umbilical tape</td>
			<td>Grafco</td>
			<td>3031</td>
			<td>Sterile</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Water bath</td>
			<td style="width:196px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:136px;">TSCOL19</td>
			<td>19L</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a ferret model of inflammation-sensitized late preterm hypoxic-ischemic brain injury

Существует постоянная потребность в клинически значимых моделях перинатальной инфекции и гипоксии-ишемии (HI), в которых для тестирования терапевтических вмешательств для младенцев с неврологической сиквелой недоношенных. Хорьки являются идеальными кандидатами для моделирования недоношенного человеческого мозга, так как они рождаются лиссенцефалическими и развивают гиренцефалический мозг послеродового. При рождении, развитие мозга хорька похож на 13 недель человеческого плода, с послеродового дня (P) 17 комплектов считается эквивалентным младенца на 32-36 недель беременности. Мы описываем модель травмы в хорьке P17, где за липополисахаридом следует двусторонняя ишемия головного мозга, гипоксия и гипероксия. Это имитирует сложное взаимодействие длительного воспаления, ишемии, гипоксии и окислительного стресса, испытываемого у ряда новорожденных, у которых развивается черепно-мозговая травма. Раненые животные отображают ряд грубых тяжестей травмы, с морфологическими изменениями в головном мозге, включая сужение нескольких корковых гиров и связанных с ними сульци. Травмированные животные также показывают замедление рефлекторной разработки, более медленный и более переменной скорости передвижения в автоматизированном подиуме, а также снижение разведки в открытом поле. Эта модель обеспечивает платформу, в которой для тестирования putative терапии для младенцев с неонатальной энцефалопатии, связанные с воспалением и HI, изучение механизмов травмы, которые влияют на развитие корки, и исследовать пути, которые обеспечивают устойчивость в не затронутых животных.

Из 34 (n No 18 самцов, n - 16 самок) животных из шести пометов, подвергшихся воздействию оскорбления, восемь животных (24%; n no 4 самцы, n и 4 самки) в пострадавшей группе умерли во время второго периода гипоксии (n no 5), во время управления температурой (n no 2), или на ночь после оскорбления (n no 1). В пострад...

Watch this Scientific Journal Video about A Ferret Model of Inflammation-sensitized Late Preterm Hypoxic-ischemic Brain Injury at JoVE.com

A Ferret Model of Inflammation-sensitized Late Preterm Hypoxic-ischemic Brain Injury

Метод описывает воспаление-сенсибилизированных гипоксико-ишемической и гипероксической черепно-мозговой травмы в хорька P17 для моделирования сложного взаимодействия между длительным воспалением и окислительной травмы головного мозга опытных в ряде поздних недоношенных младенцев.

Ферре модель воспаления-сенсибилизированных поздней преждевременных гипоксико-ишемической травмы головного мозга

There is an ongoing need for clinically relevant models of perinatal infection and hypoxia-ischemia (HI) in which to test therapeutic interventions for ...

Этот протокол имеет важное значение, поскольку он предлагает первую модель воспаления сенсибилизированной преждевременной черепно-мозговой травмы у хорьков, что приводит к значительным и устойчивым травмам. Этот метод включает в себя длительные оскорбления, которая включает в себя многие из триггеров и биохимических механизмов, как полагают, способствуют типы травм головного мозга видели у недоношенных человеческих младенцев. Демонстрация процедуры измерения мозга будет Кайли Корри, научный сотрудник в нашей лаборатории и Оливия Уайт, студент.За тридцать минут до начала операции ввемите три миллиграмма на килограмм LPS IP для комплектов в группе травм и эквивалентный объем стерильного солевого раствора в три микролитера на грамм для контроля животных. Перед началом процедуры используйте небольшие ножницы животных, чтобы удалить все волосы на брюшной области шеи хорька в прямоугольном рисунке, заботясь, чтобы избежать nicking кожи или генерации тепловой сыпи. Администрирование местной анестезии в бритой области и дезинфицировать кожу с тремя чередующихся тампонов йода повидоне и семьдесят процентов этанола.После подтверждения соответствующего уровня сережки на ног щепотку, покрыть животное стерильными, одноразовые вырезать шторы, которые подвергают области шеи. Для двусторонней перевязки сонной артерии, используйте одно использование номер десять скальпель лезвие, чтобы сделать 1,5 сантиметра средней линии разреза в центре шеи и использовать тонкие гемостаты и изогнутые миппы, чтобы тупо вскрыть до левой сонной артерии. Рассекаете открытые артерии от связанного нервно-мышечного пучка.И использовать пару изогнутых тонких типсов пройти петли десять сантиметров длиной стерильных 5/0 шелковый шов под артерией. Разрежьте шов пополам и надежно связать обе длины шва, чтобы лигат артерии, оставив по крайней мере два миллиметра между узлами. Перережь левую соонную артерию между швами, заботясь о том, чтобы оставить нерв нетронутым и повторить вскрытие справа.Реверсивно ligate правой сонной артерии с одной стерильной 1 / 8 дюймов пуповины галстук. И закройте рану хирургическими зажимами для кожи. Затем, позвольте животному восстановиться в температуре контролируемой водяной бане, по крайней мере тридцать минут с мониторингом до гипоксии.Для последовательной гипоксии, гипероксии и гипоксии лечения, поместите животных в травму группы в герметичной камере в водяной бане. Постоянно следите за концентрацией кислорода в камере, а также за температурой прямой кишки по крайней мере у одного дозорного животного. Промыть камеру с увлажненным девять процентов кислорода и 91 процентов азота и поддерживать скорость потока от трех до пяти литров в минуту, в зависимости от размера камеры.После того, как концентрация кислорода в камере достигла девяти процентов, продолжить доставку в течение тридцати минут. В конце лечения гипоксии, переключить газоснабжение на 80 процентов увлажненной кислорода и 20 процентов азота. После тридцати минут гипероксии, откройте камеру, чтобы позволить ему быстрее достичь нормоксии, путем равномерности с комнатным воздухом, прежде чем запечатать камеру и промывки с девятью процентами увлажненной кислорода снова.Постоянно следить за всеми животными во время этого второго раунда гипоксии, принимая к сведению любых животных, которые отображают bradypnea. После того, как концентрация кислорода в камере достигла девяти процентов, продолжить лечение гипоксии в течение тридцати минут. В конце лечения, используется изогнутые типсы для выявления и развязать пуповинной лентой из правой сонной артерии.Закрываем рану хирургическими зажимами для кожи. Затем верните все комплекты в джиллс в течение 60 минут для ухода и восстановления. В конце восстановительного периода, вернуть раненых животных в ванну при температуре от 37 до 40 градусов по Цельсию в течение шести часов, регулируя температуру воды по мере необходимости, для поддержания ректальной температуры от 36 до 37 градусов по Цельсию.Затем, вернуть комплекты для их jills снова. После сбора и фиксации мозга в соответствующей экспериментальной конечной точке, поместите кончики электронного калипера на спинные и желудонные аспекты каждого мозга, чтобы измерить высоту каждого раненого и неповоротного мозга. Поместите кончики калипера в самые боковой части височных долей, чтобы измерить ширину каждого мозга и взвесить каждый мозг.Используйте калипер для измерения продольной трещины, все sulci от начала и конца наиболее отчетливые части соответствующего sulcus, и все гири из самого широкого аспекта каждого соответствующего извилины. Затем поместите один кончик калипера в самой задней точке продольной трещины, а другой кончик калипера в самой задней части мозжечка для измерения количества открытого мозжечка. Из 34 животных из шести пометов, подвергшихся оскорблению в этом исследовании, пять животных имели травмы средней тяжести и четыре животных были тяжелые травмы.С увеличением травмы наблюдается сужение гири в височной и/или затылочной долей, связанное с сокращением и расширением продольной трещины и более крупных участков кистозной ткани у наиболее тяжелораненых животных. В течение периода рефлекторного тестирования, раненые животные отображают более медленное время, чтобы вращаться в отрицательной задаче геотаксиса. Более медленное время для вращения от края в задаче отвращения Скалы и более медленное время вправо.На подиуме раненые животные демонстрируют аналогичную среднюю скорость управления, но демонстрируют значительно большую степень изменения скорости во время каждого бега. Вес скорректированное расстояние между лапами и задними лапами значительно больше у раненых животных, с меньшим давлением, оказываемого на единицу области лапы, через четыре лапы. В открытом поле раненые животные покрывают меньше общего расстояния, останавливаются чаще и проводят значительно больше времени в центре поля и меньше времени в углах.Здесь можно наблюдать репрезентативные тепловые карты управления и раненых животных. Позаботьтесь, чтобы вскрыть артерию от сопутствующего нерва и дать максимально возможное время гипоксии. Эти шаги обеспечат выживание большинства животных, а также травму.После этой процедуры можно оценить любые биохимические, патологические или поведенческие исходы, включая оценки, которые обычно ограничиваются моделями грызунов с черепно-мозговой травмой.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Lateral Fluid Percussion: Model of Traumatic Brain Injury in Mice

Боковые ударные жидкости: Модель черепно-мозговой травмой у мышей

Traumatic brain injury (TBI) research has attained renewed momentum due to the increasing awareness of head injuries, which result in morbidity and ...

Preterm EEG: A Multimodal Neurophysiological Protocol

Преждевременные ЭЭГ: Мультимодальные Нейрофизиологические протокола

Since its introduction in early 1950s, electroencephalography (EEG) has been widely used in the neonatal intensive care units (NICU) for assessment and ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Лазерно-индуцированное Травма спинного мозга модель для оценки Механизмы дегенерации аксонов в режиме реального времени

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

Метод Нанесение Закрытое Глава травматическое повреждение мозга в<em&gt; Drosophila</em

Traumatic brain injury (TBI) affects millions of people each year, causing impairment of physical, cognitive, and behavioral functions and death. Studies ...

Dorsal Root Ganglion Injection and Dorsal Root Crush Injury as a Model for Sensory Axon Regeneration

Спинальный ганглий Injection и дорсальных корешков размозжение как модель для регенерации Сенсорное Axon

Achieving axon regeneration after nervous system injury is a challenging task. As different parts of the central nervous system (CNS) differ from each ...

Neurobehavioral Assessments in a Mouse Model of Neonatal Hypoxic-ischemic Brain Injury

Нейроповеденческих оценок в мышиной модели неонатальная гипоксически ишемического черепно-мозговой травмы

We performed unilateral carotid artery occlusion on CD-1 mice to create a neonatal hypoxic-ischemic (HI) model and investigated the effects of neonatal HI ...

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

Роман в Vitro модель взрыва черепно-мозговой травмы

Traumatic brain injury is a leading cause of death and disability in military and civilian populations. Blast traumatic brain injury results from the ...

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

Последствия взрыва индуцированной нейротравма под давлением грызунов средней мозговой артерии

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

Murine Model of Controlled Cortical Impact for the Induction of Traumatic Brain Injury

Модель Murine контролируемого кортикического воздействия для индукции травматического повреждения головного мозга

The Centers for Disease Control and Injury Prevention estimate that almost 2 million people sustain a traumatic brain injury (TBI) every year in the ...

Electromagnetic Controlled Closed-Head Model of Mild Traumatic Brain Injury in Mice

Электромагнитно-управляемая модель легкой черепно-мозговой травмы у мышей с закрытой головой

Highly reproducible animal models of traumatic brain injury (TBI), with well-defined pathologies, are needed for testing therapeutic interventions and ...