Name: a ferret model of inflammation-sensitized late preterm hypoxic-ischemic brain injury
Uploaded: 2019-11-19T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Ferret Model of Inflammation-sensitized Late Preterm Hypoxic-ischemic Brain Injury at JoVE.com

Modelin geliştirilmesi Bill ve Melinda Gates Vakfı yanı sıra NIH hibe 5R21NS093154-02 (NICHD) tarafından finanse edildi.

Prosedürler, NIH Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Rehberi'ne uygun olarak ve Washington Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmış bir protokol kapsamında gerçekleştirilmiştir.
1. Hazırlık ve LPS İdaresi
NOT: Yordamların zaman çizelgesi için Şekil 1'e bakın.
<ol><li>İşleme başlamadan önce tüm cerrahi aletleri ve cerrahi perdeleri mühürleyi...

<ol>
	<li>Martin, J. A., Hamilton, B. E., Osterman, M. J. K., Driscoll, A. K., Drake, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Births:+Final+Data+for+2017.">Births: Final Data for 2017.</a> National Vital Statistics Report. 67 (8), 1-49 (2018).</li><li>Vanhaesebrouck, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+EPIBEL+study:+outcomes+to+discharge+from+hospital+for+extremely+preterm+infants+in+Belgium.">The EPIBEL study: outcomes to discharge from hospital for extremely preterm infants in Belgium.</a> Pediatrics. 114 (3), 663-675 (2004).</li><li>Raju, T. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-Term+Healthcare+Outcomes+of+Preterm+Birth:+An+Executive+Summary+of+a+Conference+Sponsored+by+the+National+Institutes+of+Health.">Long-Term Healthcare Outcomes of Preterm Birth: An Executive Summary of a Conference Sponsored by the National Institutes of Health.</a> Journal of Pediatrics. , (2016).</li><li>Raju, T. N. K., Buist, A. S., Blaisdell, C. J., Moxey-Mims, M., Saigal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adults+born+preterm:+a+review+of+general+health+and+system-specific+outcomes.">Adults born preterm: a review of general health and system-specific outcomes.</a> Acta Paediatrica. 106 (9), 1409-1437 (2017).</li><li>Bennet, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+inflammation+and+impaired+development+of+the+preterm+brain.">Chronic inflammation and impaired development of the preterm brain.</a> Journal of Reproductive Immunology. 125, 45-55 (2018).</li><li>Reich, B., Hoeber, D., Bendix, I., Felderhoff-Mueser, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyperoxia+and+the+Immature+Brain.">Hyperoxia and the Immature Brain.</a> Developmental Neuroscience. 38 (5), 311-330 (2016).</li><li>Galinsky, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complex+interactions+between+hypoxia-ischemia+and+inflammation+in+preterm+brain+injury.">Complex interactions between hypoxia-ischemia and inflammation in preterm brain injury.</a> Developmental Medicine &amp; Child Neurology. 60 (2), 126-133 (2018).</li><li>Empie, K., Rangarajan, V., Juul, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+the+ferret+a+suitable+species+for+studying+perinatal+brain+injury.">Is the ferret a suitable species for studying perinatal brain injury.</a> International Journal of Developlemental Neuroscience. 45, 2-10 (2015).</li><li>Snyder, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+of+white+matter,+toll-like+receptor+expression,+and+motor+skills+in+the+neonatal+ferret.">Ontogeny of white matter, toll-like receptor expression, and motor skills in the neonatal ferret.</a> International Journal of Developlemental Neuroscience. , (2018).</li><li>Schwerin, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progression+of+histopathological+and+behavioral+abnormalities+following+mild+traumatic+brain+injury+in+the+male+ferret.">Progression of histopathological and behavioral abnormalities following mild traumatic brain injury in the male ferret.</a> Journal of Neuroscience Research. 96 (4), 556-572 (2018).</li><li>Rafaels, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+injury+risk+from+primary+blast.">Brain injury risk from primary blast.</a> Journal of Trauma and Acute Care Surgery. 73 (4), 895-901 (2012).</li><li>Wood, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Ferret+Model+of+Encephalopathy+of+Prematurity.">A Ferret Model of Encephalopathy of Prematurity.</a> Developlemental Neuroscience. , (2019).</li><li>Barnette, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Brain+Development+in+the+Ferret+via+Magnetic+Resonance+Imaging.">Characterization of Brain Development in the Ferret via Magnetic Resonance Imaging.</a> Pediatric Research. 66 (1), 80-84 (2009).</li><li>Kroenke, C. D., Mills, B. D., Olavarria, J. F., Neil, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Biology and Diseases of the Ferret. , (2014).</li><li>Eklind, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+endotoxin+sensitizes+the+immature+brain+to+hypoxic--ischaemic+injury.">Bacterial endotoxin sensitizes the immature brain to hypoxic--ischaemic injury.</a> European Journal of Neuroscience. 13 (6), 1101-1106 (2001).</li><li>Falck, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neonatal+Systemic+Inflammation+Induces+Inflammatory+Reactions+and+Brain+Apoptosis+in+a+Pathogen-Specific+Manner.">Neonatal Systemic Inflammation Induces Inflammatory Reactions and Brain Apoptosis in a Pathogen-Specific Manner.</a> Neonatology. 113 (3), 212-220 (2018).</li><li>Osredkar, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermia+Does+Not+Reverse+Cellular+Responses+Caused+by+Lipopolysaccharide+in+Neonatal+Hypoxic-Ischaemic+Brain+Injury.">Hypothermia Does Not Reverse Cellular Responses Caused by Lipopolysaccharide in Neonatal Hypoxic-Ischaemic Brain Injury.</a> Developmental Neuroscience. 37 (4-5), 390-397 (2015).</li><li>Nakata, M., Itou, T., Sakai, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+analysis+of+inflammatory+cytokines+expression+in+peripheral+blood+mononuclear+cells+of+the+ferret+(Mustela+putorius+furo)+using+real-time+PCR.">Quantitative analysis of inflammatory cytokines expression in peripheral blood mononuclear cells of the ferret (Mustela putorius furo) using real-time PCR.</a> Veterinary Immunology and Immunopathology. 130 (1-2), 88-91 (2009).</li><li>Christensson, M., Garwicz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+course+of+postnatal+motor+development+in+ferrets:+ontogenetic+and+comparative+perspectives.">Time course of postnatal motor development in ferrets: ontogenetic and comparative perspectives.</a> Behavioral Brain Research. 158 (2), 231-242 (2005).</li><li>Li, Y., Dugyala, S. R., Ptacek, T. S., Gilmore, J. H., Frohlich, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maternal+Immune+Activation+Alters+Adult+Behavior,+Gut+Microbiome+and+Juvenile+Brain+Oscillations+in+Ferrets.">Maternal Immune Activation Alters Adult Behavior, Gut Microbiome and Juvenile Brain Oscillations in Ferrets.</a> eNeuro. 5 (5), (2018).</li><li>Rice, J. E., Vannucci, R. C., Brierley, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+influence+of+immaturity+on+hypoxic-ischemic+brain+damage+in+the+rat.">The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat.</a> Annals of Neurolology. 9 (2), 131-141 (1981).</li></ol>

Gelincik beyni ve insan beyni arasında paylaşılan fiziksel ve gelişimsel benzerlikler nedeniyle, gelincik giderek hem yetişkin hem de gelişimsel beyin hasarı modellemek için kullanılmaktadır. 8,9,10,11,12. Ancak, bugüne kadar yapılan araştırmalar gelincik beyninin hem ilk yaralanmaya hem de yüksek plastiklere karşı dirençli olduğunu ve davra...

Bebekleriçin terapötik müdahalelerin test edilebildiği prematürite ve perinatal hipoksi-iskemi patofizyolojisini yansıtan büyük hayvan modellerine ihtiyaç vardır. 2017 yılında, ABD'de doğan 382.726 bebeğin %9.93'ü preterm, bu bebeklerin %84'ü ise 32-36 haftalık gebelik1. Prematüre bebeklerde, viral veya bakteriyel patojenlere bağlı maternal immün aktivasyonun erken doğumu başlatabildiği, enfeksiyon veya inflamasyona perinatal maruziyet yaygındır. Postnatal olarak, preterm bebekler erken veya geç başlangıçlı sepsis yüksek risk altındadır2. Preterm bebekler de sık sık hipoksi dönemleri deneyim, hipotansiyon, ve hiperoksi onların olgunlaşmamış kardiyorespiratuar sistem nedeniyle, rahim deneyimli olanlara göre atmosferde yüksek oksijen gerginliği, ve iyatrojenik maruzkalma. Ayrıca, preterm bebeklerde, antioksidan savunma olgunlaşmamış3 ve pro-apoptotic faktörler doğal olarak upregulated4. Oksidatif stres ve hücre ölümü bağışıklık sistemi ve nöroinflamasyon aktivasyonuyol açar. Bu kombine faktörler beynin gelişimsel ve fizyolojik kırılganlık katkıda bulunduğu düşünülmektedir, ve sonuç veya preterm bebeklerde kötü gelişimsel sonuçlar ile ilişkili ensefalopati şiddetlendirmek5,6,7.
Gelincik beyninin insan beyniyle paylaştığı fiziksel ve gelişimsel benzerlikler nedeniyle gelincik, beyin hasarı nın8,9, 10,11,12modelini modellediği çekici bir türdür. Gelincikler aynı zamanda preterm insan beynini modellemek için ideal adaylardır, çünkü lissensefalik olarak doğarlar ve doğum sonrası jirensefalik beyinler geliştirirler, bu da gelişmekte olan beyni erken doğan bebeklerin yaşadıklarını taklit eden hakaretlere maruz bırakmak için bir pencere sağlar. Doğumda, gelincik beyin gelişimi 13 haftalık insan fetusbenzer, doğum sonrası gün ile (P) 17 kitleri gebelik 32-36 hafta bir bebeğe eşdeğer olarak kabul13.
Grubumuz son derece erken bir model yayınladı (<28 hafta' gebelik) P10 gelincik beyin hasarı escherichia coli lipokolokarit ile inflamatuar sensitizasyon birleştirerek (LPS) hipoksi ve hiperoksia sonraki maruz kalma ile12. Aşağıdaki protokolde, LPS sensitizasyonunun bilateral serebral iskemi, hipoksi ve hiperoksia tarafından takip edildiği P17 gelinciğinde geç bir preterm modeli tanımladık. Bu hayvanların bir alt kümesinde daha ciddi yaralanma ile sonuçlanır, ve daha yakından uzun süreli inflamasyon karmaşık etkileşimmodelleri, iskemi, hipoksi, ve oksidatif stres beyin hasarı geliştirmek preterm bebeklerin bir dizi deneyimli.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:775px;" width="775">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">80% Oxygen</td>
			<td style="width:196px;">Praxair</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td style="width:227px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">9% Oxygen</td>
			<td>Praxair</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Absorbent benchtop protector</td>
			<td style="width:196px;">Kimtech</td>
			<td align="right" style="width:136px;">7546</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Automated catwalk</td>
			<td style="width:196px;">Noldus</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Betadine surgical scrub</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Bupivacaine</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-888-9382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Buprenorphine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Calipers</td>
			<td style="width:196px;">SRA Measurement Products</td>
			<td style="width:136px;">ME-CAL-FP-200</td>
			<td>200mm range, .01 mm resolution</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Cotton Gauze Sponge</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22028556</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Curved fine hemostat</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Curved forceps</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>501215</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Curved suture-tying hemostat</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-7111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ethovision tracking software</td>
			<td style="width:196px;">Noldus</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Eye Lubricant</td>
			<td>Rugby</td>
			<td>NDC 0536-1970-72</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Ferrets (Mustela putorius furo)</td>
			<td style="width:196px;">Marshall Biosciences</td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td>Outbred (no specific strain)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Formalin</td>
			<td style="width:196px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:136px;">SF100-4</td>
			<td>10% (Phosphate Buffer/Certified)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Hair Clippers</td>
			<td>Conair</td>
			<td>GMT175N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Insulin Syringes</td>
			<td>BD</td>
			<td>329461</td>
			<td>0.3 cc 3 mm 31G</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Isoflurane</td>
			<td>Piramal</td>
			<td>66794-017-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Lidocaine</td>
			<td>Patterson Veterinary</td>
			<td>07-808-8202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">LPS</td>
			<td>List Biological</td>
			<td>LPS Ultrapure #423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Oxygen sensor</td>
			<td>BW Gas Alert</td>
			<td>GAXT-X-DL-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pentobarbital</td>
			<td style="width:196px;"></td>
			<td style="width:136px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Plastic chamber</td>
			<td>Tellfresh</td>
			<td align="right">1960</td>
			<td>10L; 373x270x135mm</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Saline Solution, 0.9%</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>RL-4492</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Scalpel blade</td>
			<td>Integra Miltex</td>
			<td>297</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Scalpel handle</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>500236</td>
			<td>#3, 13cm</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Sterile suture</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>18020-50</td>
			<td>Braided Silk, 5/0</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical clip applicator</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12020-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical clip remover</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12023-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical drapes</td>
			<td>Medline Unidrape</td>
			<td>VET3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surgical gloves</td>
			<td>Ansell Perry Inc</td>
			<td>5785004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Surigical clips</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>12022-09</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Thermometer (rectal)</td>
			<td>YSI</td>
			<td>Precision 4000A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Thermometer (water)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-648-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Umbilical tape</td>
			<td>Grafco</td>
			<td>3031</td>
			<td>Sterile</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Water bath</td>
			<td style="width:196px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:136px;">TSCOL19</td>
			<td>19L</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a ferret model of inflammation-sensitized late preterm hypoxic-ischemic brain injury

Prematüritenin nörolojik sekeli olan bebeklerde terapötik müdahalelerin test edilebilen perinatal enfeksiyon ve hipoksi-iskemi (HI) klinik olarak ilgili modellere ihtiyaç vardır. Gelincikler erken insan beynini modellemek için ideal adaylardır, çünkü lissensefalik olarak doğarlar ve doğum sonrası jirensefalik beyinler geliştirirler. Doğumda gelincik beyin gelişimi 13 haftalık insan fetüsine benzer, doğum sonrası gün (P) 17 kitleri 32-36 haftalık gebelikte bir bebeğe eşdeğer olduğu kabul edilir. Biz P17 gelincik bir yaralanma modeli tarif, lipopolisakkarit uygulaması ikili serebral iskemi takip nerede, hipoksi, ve hiperoksi. Bu uzun süreli inflamasyon karmaşık etkileşimi simüle, iskemi, hipoksi, ve oksidatif stres beyin hasarı geliştirmek neonates bir dizi deneyimli. Yaralı hayvanlar, birden fazla kortikal jirik ve ilişkili sulci daralma da dahil olmak üzere beyinde morfolojik değişiklikler ile, brüt yaralanma şiddeti bir dizi görüntüler. Yaralı hayvanlar da otomatik bir podyumda yavaş refleks gelişimi, yavaş ve daha değişken hareket hızı göstermek ve açık bir alanda keşif azalmış. Bu model, inflamasyon ve HI ile ilişkili neonatal ensefalopatisi olan bebekler için putatif tedavileri test etmek, kortikal gelişimi etkileyen yaralanma mekanizmaları çalışma ve esneklik sağlayan yolları araştırmak için bir platform sağlar etkilenmemiş hayvanlar.

34 (n = 18 erkek, n = 16 dişi) hayvan altı çöpten hakarete maruz kalan, sekiz hayvan (%24; n = 4 erkek, n = 4 kadın) yaralı grupta ikinci hipoksi döneminde (n = 5), sıcaklık yönetimi sırasında (n = 2) veya bir gece boyunca hakaretten sonra (n = 1). Yaralı grupta, 26 kurtulandan dokuzu (%35) görünür brüt yaralanma vardı. Beş hayvan (n = 5 erkek) orta derecede yaralanmış, dört hayvan (n = 2 erkek, n = 2 dişi) sırasıyla brüt patoloji skorları olarak tanımlanan ağır yaralanmalara sahipti (<stron...

Watch this Scientific Journal Video about A Ferret Model of Inflammation-sensitized Late Preterm Hypoxic-ischemic Brain Injury at JoVE.com

A Ferret Model of Inflammation-sensitized Late Preterm Hypoxic-ischemic Brain Injury

Yöntem, p17 gelincik iltihabı duyarlı hipoksik-iskemik ve hiperoksik beyin hasarı uzun süreli inflamasyon ve oksidatif beyin hasarı geç preterm bebeklerin bir dizi deneyimli arasındaki karmaşık etkileşimi modellemek için açıklar.

İnflamasyon duyarlıgeç Preterm Hipoksik-iskemik Beyin Hasarı Bir Gelincik Modeli

There is an ongoing need for clinically relevant models of perinatal infection and hypoxia-ischemia (HI) in which to test therapeutic interventions for ...

Bu protokol önemli ve sürekli yaralanma ile sonuçlanan gelinciklerde inflamasyon duyarlı erken beyin hasarı ilk modelini sunuyor çünkü önemlidir. Bu teknik, prematüre insan bebeklerde görülen beyin yaralanmaları nın türlerine katkıda olduğu düşünülen tetikleyiciler ve biyokimyasal mekanizmaların çoğunu içeren uzun süreli hakaretler içerir. Beyin ölçüm prosedürünü gösteren Kylie Corry, laboratuarımızda bir araştırma bilim adamı ve Olivia White, bir lisans öğrencisi olacaktır.Ameliyata başlamadan otuz dakika önce, yaralanma grubundaki kitlere kilogram başına üç miligram LPS IP ve hayvanları kontrol etmek için gram başına üç mikrolitre lik eşdeğer bir steril tuzluluk hacmi uygulayın. İşleme başlamadan önce, küçük hayvan makası kullanarak gelinciğin ventral boyun bölgesindeki tüm tüyleri dikdörtgen bir desenle temizleyerek, cildin çentiklenmesini veya ısı döküntüsü oluşturmasını önlemeye özen göstermektedir. Tıraş bölgesine lokal anestezi uygulayın ve üç alternatif povison iyot ve yüzde yetmiş etanol ile cildi dezenfekte edin.Ayak çimdik tarafından sedasyon uygun bir düzeyde doğruladıktan sonra, boyun bölgesi ortaya steril, tek kullanımlık kesilmiş perdeler ile hayvan kapağı. Bilateral karotis arter ligasyonu için, boyun merkezinde 1,5 santimetrelik orta hat kesiyapmak için tek bir kullanım numarası on neşter bıçak kullanın ve sol karotid artere kadar ince hemostatlar ve kavisli forseps kullanın. Açığa çıkan arteri ilişkili nörovasküler paketten uzaklaştırın.Ve arter altında steril 5 / 0 ipek dikiş döngülü on santimetre uzunluğunda geçmek için kavisli ince çifenerler bir çift kullanın. Dikişleri ikiye bölün ve atardamarı inkâr etmek için her iki dikiş uzunluğunu güvenli bir şekilde bağlayın ve düğümler arasında en az iki milimetre bırakın. Dikişler arasında sol karotis arter transect, sinir bozulmadan bırakmak ve sağda diseksiyon tekrar dikkat.Tek bir steril 1/8 inç göbek bağı ile sağ karotis arteri ters çevirin. Ve yarayı cerrahi deri klipleriyle kapatın. Daha sonra, hipoksi önce izleme ile en az otuz dakika boyunca bir sıcaklık kontrollü su banyosunda kurtarmak için hayvan sağlar.Sıralı hipoksi, hiperoksi ve hipoksi tedavisi için, bir su banyosu içinde hava geçirmez bir odada yaralanma grubunda hayvanları yerleştirin. En az bir nöbetçi hayvandaki rektal sıcaklığın yanı sıra oda içindeki oksijen konsantrasyonu sürekli olarak izleyin. Odayı nemlendirilmiş yüzde dokuz oksijen ve yüzde 91 azot ile temizleyin ve oda büyüklüğüne bağlı olarak dakikada 3-5 litre lik bir akış hızı koruyun.Odadaki oksijen konsantrasyonu %9'a ulaştığında, otuz dakika boyunca teslimata devam edin. Hipoksi tedavisinin sonunda, gaz arzını yüzde 80 nemlendirilmiş oksijene ve yüzde 20 nitrojene çevirin. Hiperoksia otuz dakika sonra, daha hızlı normoksia ulaşmak için oda havası ile dengelemek için, oda mühürleme ve tekrar yüzde dokuz nemlendirilmiş oksijen ile yıkama önce oda açmak için oda açın.Hipoksinin bu ikinci turunda tüm hayvanları sürekli olarak takip edin, bradikipne gösteren tüm hayvanları not alın. Odadaki oksijen konsantrasyonu %9'a ulaştığında hipoksi tedavisine otuz dakika devam edin. Tedavinin sonunda, sağ karotid arterden göbek bandı tanımlamak ve açmak için kavisli forceps kullanılır.Yarayı cerrahi deri klipsleriyle tekrar kapatın. Sonra hemşirelik ve kurtarma için 60 dakika jills için tüm kitleri geri dönün. İyileşme süresinin sonunda, yaralı hayvanları 36 ila 37 santigrat derecerek rektal sıcaklıkları korumak için, gerektiği gibi su sıcaklığını ayarlayarak, altı saat boyunca 37 ila 40 santigrat derecedesu su banyolarına geri getirin.Sonra, tekrar onların jills kitleri dönün. Uygun deneysel bitiş noktasında beyin hasat ve fiksasyon sonra, her yaralı ve yaralanmamış beynin yüksekliğini ölçmek için her beynin dorsal ve ventral yönlerini bir elektronik kaliper ipuçları yerleştirin. Her beynin genişliğini ölçmek ve her beyin tartmak için temporal lobların en lateral bölümlerinde kaliper ipuçlarıyerleştirin.Uzunlamasına fissür ölçmek için kaliper kullanın, ilgili sulkus en belirgin bölümünün başından ve sonundan itibaren sulci tüm, ve her karşılık gelen girus en geniş açıdan gyri tüm. Daha sonra kaliperin bir ucunu uzunlamasına fissürün en arka noktasına, diğer ucunu ise serebellumun en arka kısmına yerleştirin. Bu çalışmada hakarete maruz kalan altı çöpten 34 hayvandan beşi orta derecede yaralanmış, dört hayvan ağır yaralanmış.Artan yaralanma ile, temporal ve / veya oksipital loblarda gyri daralma gözlenir, ilişkili bir sulkül kısalma ve uzunlamasına çatlak ve en ağır yaralı hayvanlarda kistik doku kaybı daha büyük alanlarda genişleyen. Refleks test süresi boyunca, yaralı hayvanlar olumsuz geotaksis görev döndürmek için daha yavaş bir zaman görüntüler. Cliff Kaçınma görevinde kenardan uzaklaşmak için daha yavaş bir zaman ve sağa doğru daha yavaş bir zaman.Podyumda, yaralı hayvanlar kontrollere benzer bir ortalama hız gösterirler ancak her koşu sırasında önemli ölçüde daha fazla hız değişimi gösterirler. Pençeleri ve arka pençeleri arasındaki ağırlık ayarlanmış mesafe, dört pençeleri aracılığıyla, birim pençe alanı başına uygulanan daha az basınç ile, yaralı hayvanlarda önemli ölçüde daha fazladır. Açık alanda, yaralı hayvanlar daha az toplam mesafe yi kaplar, daha sık durur ve alanın merkezinde önemli ölçüde daha fazla, köşelerde daha az zaman geçirirler.Burada kontrol ve yaralı hayvanların temsili ısı haritaları görülebilir. Eşlik eden sinir arter uzak incelemek ve mümkün olan maksimum hipoksi süresi izin dikkat edin. Bu adımlar hayvanların çoğunun hayatta kalmasını sağlarken, aynı zamanda bir yaralanmaya da devam edecektir.Bu prosedürü takiben, herhangi bir biyokimyasal, patolojik veya davranışsal sonuçlar değerlendirilebilir, normalde beyin hasarı kemirgen modelleri ile sınırlı değerlendirmeler de dahil olmak üzere.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Lateral Fluid Percussion: Model of Traumatic Brain Injury in Mice

Yanal Akışkan Perküsyon: Travmatik Beyin Hasarı Farelerde Modeli

Traumatic brain injury (TBI) research has attained renewed momentum due to the increasing awareness of head injuries, which result in morbidity and ...

Preterm EEG: A Multimodal Neurophysiological Protocol

Erken EEG: A Multimodal Nörofizyolojik Protokolü

Since its introduction in early 1950s, electroencephalography (EEG) has been widely used in the neonatal intensive care units (NICU) for assessment and ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

Bir<em&gt; Ex vivo</em&gt; Lazer kaynaklı Omurilik Felçlileri Modeli Gerçek zamanlı aksonal Dejenerasyon mekanizmaları değerlendirmek için

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

A Method to Inflict Closed Head Traumatic Brain Injury in Drosophila

Kapalı Başkanı Travmatik Beyin yaralayabilecek Bir Yöntem<em&gt; Drosophila</em

Traumatic brain injury (TBI) affects millions of people each year, causing impairment of physical, cognitive, and behavioral functions and death. Studies ...

Dorsal Root Ganglion Injection and Dorsal Root Crush Injury as a Model for Sensory Axon Regeneration

Sırt kök ganglion Enjeksiyon ve Dorsal Kök Duyusal Axon Rejenerasyon Modeli Olarak Ezilme Yaralanması

Achieving axon regeneration after nervous system injury is a challenging task. As different parts of the central nervous system (CNS) differ from each ...

Neurobehavioral Assessments in a Mouse Model of Neonatal Hypoxic-ischemic Brain Injury

Yenidoğan hipoksik-iskemik beyin hasarı, fare modeli neurobehavioral değerlendirmesi

We performed unilateral carotid artery occlusion on CD-1 mice to create a neonatal hypoxic-ischemic (HI) model and investigated the effects of neonatal HI ...

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

A Novel In Vitro Model of Blast Traumatic Brain Injury

Patlama travmatik beyin hasarı roman Vitro modeli

Traumatic brain injury is a leading cause of death and disability in military and civilian populations. Blast traumatic brain injury results from the ...

Effects of Blast-induced Neurotrauma on Pressurized Rodent Middle Cerebral Arteries

Serebral arterler patlama kaynaklı Neurotrauma etkilerini basınçlı kemirgen orta

Though there have been studies on the histopathological and behavioral effects of blast exposure, fewer have been dedicated to blast&#39;s cerebral ...

Murine Model of Controlled Cortical Impact for the Induction of Traumatic Brain Injury

Travmatik Beyin Hasarı İndüksiyonu için Kontrollü Kortikal Etki Murine Modeli

The Centers for Disease Control and Injury Prevention estimate that almost 2 million people sustain a traumatic brain injury (TBI) every year in the ...

Electromagnetic Controlled Closed-Head Model of Mild Traumatic Brain Injury in Mice

Farelerde Hafif Travmatik Beyin Hasarının Elektromanyetik Kontrollü Kapalı Kafa Modeli

Highly reproducible animal models of traumatic brain injury (TBI), with well-defined pathologies, are needed for testing therapeutic interventions and ...