Name: immunohistochemistry test for the lyssavirus antigen detection from formalin-fixed tissues
Uploaded: 2021-10-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Immunohistochemistry Test for the Lyssavirus Antigen Detection from Formalin-Fixed Tissues at JoVE.com

Vi takker de laboralister, epidemiologer og datterselskaber med folkesundhed afdelinger for prøve indlæg til Centers for Disease Control og Forebyggelse. Resultaterne og konklusionerne i denne rapport er forfatternes og repræsenterer ikke nødvendigvis den officielle holdning hos Centers for Disease Control and Prevention. Brug af handelsnavne og kommercielle kilder er kun til identifikation og indebærer ikke godkendelse af Centers for Disease Control and Prevention.

Mens IHC-protokollen blev udført på formalinfast væv, som inaktiverer RABV, hvis den er til stede, bør passende biosikkerhedsprotokoller følges korrekt. Alle biosikkerhedsprocedurer er beskrevet i biosikkerhed i mikrobiologiske og biomedicinske laboratorier (BMBL) 5th Edition (https://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/index.htm), herunder brug af ordentlige personlige værnemidler (PPE) og vaccinationskrav som beskrevet12. Derudover bør der følges korrekt indeslutning og håndtering ...

<ol>
	<li>Rupprecht, C., Kuzmin, I., Meslin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssaviruses+and+rabies:+current+conundrums,+concerns,+contradictions+and+controversies.">Lyssaviruses and rabies: current conundrums, concerns, contradictions and controversies.</a> F1000Research. 6, 184 (2017).</li><li>Fooks, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+status+of+rabies+and+prospects+for+elimination.">Current status of rabies and prospects for elimination.</a> Lancet. 384 (9951), 1389-1399 (2014).</li><li>Finke, S., Brzozka, K., Conzelmann, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+fluorescence-labeled+rabies+virus:+enhanced+green+fluorescent+protein-tagged+phosphoprotein+P+supports+virus+gene+expression+and+formation+of+infectious+particles.">Tracking fluorescence-labeled rabies virus: enhanced green fluorescent protein-tagged phosphoprotein P supports virus gene expression and formation of infectious particles.</a> Journal of Virology. 78 (22), 12333-12343 (2004).</li><li>WHO. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WHO+Expert+Consulation+on+Rabies,+Third+Report.">WHO Expert Consulation on Rabies, Third Report.</a> WHO Technical Report Series. 1012, 1 (2018).</li><li>Goldwasser, R. A., Kissling, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+antibody+staining+of+street+and+fixed+rabies+virus+antigens.">Fluorescent antibody staining of street and fixed rabies virus antigens.</a> Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine. 98 (2), 219-223 (1958).</li><li>Lembo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+direct,+rapid+immunohistochemical+test+for+rabies+diagnosis.">Evaluation of a direct, rapid immunohistochemical test for rabies diagnosis.</a> Emerging Infectious Diseases. 12 (2), 310-313 (2006).</li><li>Fekadu, M., Greer, P. W., Chandler, F. W., Sanderlin, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+avidin-biotin+peroxidase+system+to+detect+rabies+antigen+in+formalin-fixed+paraffin-embedded+tissues.">Use of the avidin-biotin peroxidase system to detect rabies antigen in formalin-fixed paraffin-embedded tissues.</a> Journal of Virological Methods. 19 (2), 91-96 (1988).</li><li>Hamir, A. N., Moser, G., Rupprecht, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+five+year+(1985-1989)+retrospective+study+of+equine+neurological+diseases+with+special+reference+to+rabies.">A five year (1985-1989) retrospective study of equine neurological diseases with special reference to rabies.</a> Journal of Comparative Pathology. 106 (4), 411-421 (1992).</li><li>Inoue, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-reactive+antigenicity+of+nucleoproteins+of+lyssaviruses+recognized+by+a+monospecific+antirabies+virus+nucleoprotein+antiserum+on+paraffin+sections+of+formalin-fixed+tissues.">Cross-reactive antigenicity of nucleoproteins of lyssaviruses recognized by a monospecific antirabies virus nucleoprotein antiserum on paraffin sections of formalin-fixed tissues.</a> Pathology International. 53 (8), 525-533 (2003).</li><li>Webster, J. D., Miller, M. A., Dusold, D., Ramos-Vara, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+prolonged+formalin+fixation+on+diagnostic+immunohistochemistry+in+domestic+animals.">Effects of prolonged formalin fixation on diagnostic immunohistochemistry in domestic animals.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 57 (8), 753-761 (2009).</li><li>Feiden, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+staining+of+rabies+virus+antigen+with+monoclonal+and+polyclonal+antibodies+in+paraffin+tissue+sections.">Immunohistochemical staining of rabies virus antigen with monoclonal and polyclonal antibodies in paraffin tissue sections.</a> Zentralblatt fur Veterinarmedizin Reihe B. 35 (4), 247-255 (1988).</li><li>Manning, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+rabies+prevention--United+States,+2008:+recommendations+of+the+Advisory+Committee+on+Immunization+Practices.">Human rabies prevention--United States, 2008: recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices.</a> Morbidity and Mortality Weekly Reports Recommendations and Reports. 57, 1-28 (2008).</li><li>WHO. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Laboratory techniques in rabies. 1, 67-72 (2018).</li><li>Patrick, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+Rabies+Surveillance+Using+a+Direct+Rapid+Immunohistochemical+Test.">Enhanced Rabies Surveillance Using a Direct Rapid Immunohistochemical Test.</a> Journal of Visualized Experiments. (146), (2019).</li><li>Whitfield, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+study+of+the+fluorescent+antibody+test+for+rabies+diagnosis+in+fresh+and+formalin-fixed+brain+tissue+specimens.">A comparative study of the fluorescent antibody test for rabies diagnosis in fresh and formalin-fixed brain tissue specimens.</a> Journal of Virology Methods. 95 (1-2), 145-151 (2001).</li><li>WHO. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Diagnostic procedures for antigen detection. , (2016).</li><li>Jarvis, J. A., Franke, M. A., Davis, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+direct+fluorescent+antibody+test+does+not+inactivate+rabies+or+eastern+equine+encephalitis+viruses.">Rabies direct fluorescent antibody test does not inactivate rabies or eastern equine encephalitis viruses.</a> Journal of Virology Methods. 234, 52-53 (2016).</li></ol>

På grund af den høje dødelighed af rabies efter symptomdebut er diagnosen af mistænkte dyr for RABV-infektion yderst kritisk for en passende profylaktisk behandling efter eksponering. Rabiesdiagnose afhænger primært af DFA, DRIT og PCR-baserede teknikker ved hjælp af frisk eller frossen væv. Til test af formalinfast væv giver IHC-testen en alternativ metode til følsom og specifik påvisning af RABV-antigen. Mens væv fastgjort i formalin har proteiner stabiliseret på grund af modifikation af sidekæder som kry...

Rabies er en akut progressiv encephalitis forårsaget af den negative følelse RNA-vira, der tilhører slægten lyssavirus1. Næsten 99% af alle dødsfald hos mennesker forårsaget af infektion med rabiesvirus (RABV), typen medlem af slægten, overføres af hunde2. Rabies diagnose af mistænkte dyr er afhængig af påvisning af antigen (primært viral kodet nukleoprotein, N protein) i kompleks med genomisk RNA (ribonucleoprotein kompleks, RNP) ihjernevævet 3. Antigendetektering ved den direkte fluorescerende antistoftest (DFA) betragtes som guldstandarden forrabiesdiagnose 4. Metoden anvender frisk eller frisk frossen hjerne materiale, et touch indtryk på et dias, fiksering i acetone, farvning ved hjælp af kommercielt tilgængelige fluorescerende isothiocyanat (FITC) mærket monoklonale eller polyklonale antistoffer (mAbs / pAbs) og læses af fluorescens mikroskopi5. DFA-testen er hurtig, følsom og specifik for påvisning af rabiesantigen i frisk hjernevæv. For nylig blev en direkte hurtig immunohistokemisk test (DRIT), modificeret immunohistochemistry (IHC) teknik, demonstreret for at udvise lignende følsomhed over for DFA, men giver fordelen ved lysmikroskopi til visualisering6. Mens detektionsmetoden, der anvendes i DRIT, ligner IHC, bruger det første trin frisk eller frossen væv til at generere berøringsindtryk af prøven efterfulgt af fiksering i formalin.
IHC er en meget anvendt teknik til at bestemme histologiske ændringer og påvisning af proteiner ved hjælp af specifikke antistoffer i formalin-faste væv indlejret i paraffin blokke. IHC er en etableret alternativ test for påvisning af rabiesantigen i vævsafsnit7. IHC er især blevet brugt til diagnosticering af retrospektive tilfælde, der udviste neurologiske sygdomme til at bestemme byrden af rabies8. Paraffin-indlejret formalinfast væv bevarer proteinerne til detektion, selv efter flere år, når de opbevares ved omgivelsestemperatur9. Formalin behandling ændrer proteiner ved at krydskælle og ændre aminosyre sidekæder, hvilket kan gøre epitoperne ikke længere reaktive mod antistoffer10. Mens IHC-testen for påvisning af rabiesantigen involverer enten mAbs eller pAbs, er sidstnævnte fordelagtig, da flere epitoper og divergerende lyssavirus kan påvises11.
De standardtrin, der er involveret i IHC, er formalinfiksering af væv, indlejring i paraffinblokke, opdeling af væv, deparaffinisering og hydrering, epitopgendannelse, reaktivitet mod primære og sekundære antistoffer og udvikling ved hjælp af kromogene substrater. Dette manuskript beskriver en detaljeret redegørelse for protokollen for rabiesdiagnose. For rabies antigen påvisning, mus serum immuniseret med RABV (pAbs) genereret på den amerikanske Centers for Disease Control and Prevention (CDC) Atlanta, Georgia, i kombination med biotinylerede anti-mus sekundære antistoffer udnyttes. Biotinylerede Abs detekteres ved tilsætning af streptavidin-peberrod peroxidase (HRP) kompleks efterfulgt af farveudviklingen med amino-ethylcarbazol substrat.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3% hydrogen peroxide</td>
			<td>Pharamacy brands</td>
			<td></td>
			<td>Off the shelf 3% H2O2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-Amino-9-ethylcarbazole (AEC)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>A6926</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetate Buffer pH 5.2</td>
			<td>Poly Scientific R&#38;D Corp.</td>
			<td>s140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buffered Formalin 10% Phosphate Buffered</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SF100-4</td>
			<td>Certified</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slips Corning</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-553-471</td>
			<td>24 X 50 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 190 Proof</td>
			<td>Pharmco-AAPER</td>
			<td>111000190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 200 Proof</td>
			<td>Pharmco-AAPER</td>
			<td>111000200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gill&#39;s hematoxylin formulation #2</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>CS401-1D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoMark Biotin-Streptavidin Peroxidase Kit</td>
			<td>seracare</td>
			<td>71-00-18</td>
			<td>Mouse Primary Antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmunoHistoMount</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>i1161</td>
			<td>Mounting media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N,N, Dimethyl formamide GR</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>D119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline&#160;</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>RR14440.01</td>
			<td>01M, pH 7.2 (pH 7.2-7.6)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plan-APOCHROMAT 40X/0.95 Objective</td>
			<td>Multiple vendors</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plan-APOCHROMATIC 20X/0.75 Objective</td>
			<td>Multiple vendors</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pronase</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>53702</td>
			<td>Protease, Streptomyces griseus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scott&#39;s Tap Water&#160;</td>
			<td>Poly Scientific R&#38;D Corp.</td>
			<td>s1887</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Slide stain set</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-294-72</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TWEEN-80&#160;</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>P1754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>X3S-4</td>
			<td>Histological Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Axioplan 2 imaging - microscope</td>
			<td>Multiple vendors</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

immunohistochemistry test for the lyssavirus antigen detection from formalin-fixed tissues

En af de primære diagnostiske metoder for rabies er påvisning af viral ribonucleoprotein (RNP) kompleks (antigen) i de inficerede vævsprøver. Mens den direkte fluorescerende antistof (DFA) test eller direkte hurtig immunohistokemisk test (DRIT) er mest almindeligt anvendt til antigen påvisning, begge tests kræver friske og / eller frosne væv for indtryk på dias før antigen detektion ved hjælp af antistoffer. Hvis prøverne indsamles og fikses i formalin, er ingen af testene optimale til antigendetektering, men test kan udføres af konventionel immunhistochemistry (IHC) efter indlejring i paraffinblokke og afsnit. Med denne IHC-metode farves væv med anti-rabies antistoffer, sektioner er deparaffinerede, antigen hentet ved delvis proteolyse eller andre metoder og inkuberes med primære og sekundære antistoffer. Antigener er plettet ved hjælp af peberrod peroxidase / amino ethyl carbazole og counterstained med hæmatoxylin til visualisering ved hjælp af et let mikroskop. Ud over den specifikke antigendetektering giver formalinfikation andre fordele som bestemmelse af histologiske ændringer, lempede betingelser for opbevaring og transport af prøver (under omgivelsestemperaturer), evne til at teste retrospektive tilfælde og forbedret biologisk sikkerhed gennem inaktivering af infektiøse agenser.

Figur 2 viser repræsentative IHC farvningsresultater af positive og negative kontrolprøver i forskellige testede hjernevæv. Figur 2A,D,G repræsenterer positive prøver ved henholdsvis 200x, mens figur 2B,E,H svarer til henholdsvis 400x forstørrelse. Figur 2A-C svarer til hjernestammen; Figur 2</...

Watch this Scientific Journal Video about Immunohistochemistry Test for the Lyssavirus Antigen Detection from Formalin-Fixed Tissues at JoVE.com

Immunohistochemistry Test for the Lyssavirus Antigen Detection from Formalin-Fixed Tissues

Her præsenterer vi en immunohistochemistry testprotokol til påvisning af rabiesvirusantigen som en alternativ diagnostisk test for formalin-faste væv.

Immunohistochemistry Test for Lyssavirus Antigen Detection fra Formalin-Fixed Tissues

One of the primary diagnostic modalities for rabies is the detection of viral ribonucleoprotein (RNP) complex (antigen) in the infected tissue samples. ...

Væv, der anvendes til immunohistochemistry og til diagnostisk histopatologi er rutinemæssigt fastsat i 10% fosfat buffer formalin. Påvisning af rabiesvirusantigen i hjernevæv, der er blevet fastsat i formalin, udgør en unik udfordring, og IHC-testen har vist sig at være en følsom og specifik metode til påvisning af rabiesvirusantigen. Den primære fordel ved biopsi eller andre detektionsmetoder er, at antigener kan påvises i forhold til væv og cellulær morfologi.Med IHC, lokalisering af rabies antigen i hjernen og ikke-hjernevæv, give yderligere oplysninger, der ikke kunne opnås gennem rutinemæssige Hematoxylin og Eosin plet sektioner. Rabies diagnostisk testning er vigtig for initiering af post-eksponering profylakse hos mennesker udsat for rabiesvirus. IHC er en af de mest almindeligt udførte analyser på formalin-fast væv.Med specifikke antistoffer kan det bruges til påvisning af respektive patogener. For at begynde denne procedure skal du placere tre til fem millimeter stykker hjernevæv, indsamlet efter obduktion, i en 10% buffered formalinopløsning i 24 til 72 timer. Registrer den omtrentlige vævsvægt, vævstype og mængden af formalin.Placer væv i 70% ethanol for længere væv opbevaring efter formalin fiksering, og før forarbejdning. Efter prøvefikseringen dissekerer dissekerer vævet til at omfatte de vigtige hjerneområder, såsom tværsnit af hjernestammen, lillebellummet eller hippocampus. Hver, skåret til en tykkelse mellem tre og fem millimeter.Læg vævene i behandlingskassetter. Behandl vævskassetterne til paraffinvoksinfiltration. Integrer dem i paraffinblokke og del dem på en mikrotom.Først oprettet farvning parabol som skitseret i figur 1 i tekstprotokollen. Fyld hver skål med 250 milliliter af den forberedte opløsning. For at forberede AEC substrat lageropløsning, bruge en glas pipette til at opløse en 20 milligram tablet af AEC i 5 milliliter af N, N-Dimethylformamide.For at forberede proteaselageropløsningen opløses 7 milligram protease i 200 milliliter PBS. For at forberede skyllebufferen tilsættes 100 milliliter mellem 80 og 990 milliliter PBS og blandes godt for at danne en homogen opløsning af PBT-T. Brug en mikrotom, lav en fem mikrometer paraffin sektion.Læg sektionen på et vandbad ved 38 grader Celsius og saml den på glasrutschebaner. Mærk diasene med en reagensresistent pen. Placer dias på en bakke og smelte i en ovn ved 55 til 60 grader Celsius i en time.Fjern derefter diasene fra ovnen og for at deparaffinere dem straks ved hjælp af 3 på hinanden følgende xylenskylninger på 5 minutter hver. Derefter rehydreres sektionerne på diaset ved sekventiel nedsænkning i faldende fortyndinger af ethanol til deioniseret vand, som skitseret i tekstprotokollen. Behandl diasene med protease i 30 minutter for proteolytisk antigenudtagning, skyl derefter diasene i PBS-T i 10 minutter, og behandl dem med 3% hydrogenperoxid i 10 minutter.Derefter vaskes diasene igen med PBS-T i 10 minutter. Til at begynde med skal du fjerne et dias fra bufferen og sørge for kun at håndtere et dias ad gangen, mens de andre forbliver nedsænket, og bruge et køkkenrulle til at fjerne overskydende buffer fra omkring vævssektionen. Placer rutsjebanerne i et fugtighedskammer og inkuber med normalt gedeserum ved stuetemperatur i 15 minutter.Dernæst inkuberes diasene i fugtighedskammeret med det optimale forudbestemte fortyndings primære anti-rabies antistof og negative kontrolantistoffer ved stuetemperatur i 60 minutter uden vasker imellem. Derefter vaskes diasene med PBS-T i 10 minutter og inkuberes i et fugtighedskammer med det biotinylerede antistof ved stuetemperatur i 15 minutter. Vask rutsjebanerne igen med PBS-T i 10 minutter.Inkuber dias og fugtighedskammeret med strimlerkel og HRB-kompleks ved stuetemperatur i 15 minutter og vask PBS-T i 10 minutter. Inkuber derefter med AEC i et fugtighedskammer ved stuetemperatur i 10 minutter. Vask diasene i deioniseret vand i 10 minutter og counterstain med Gill's Hematoxilyn, fortyndet en til to med deioniseret vand i to minutter.Derefter skylles den overskydende hæmatoxylin af ved at skylle rutsjebanerne i deioniseret vand. Skyl lysbillederne i Scotts vand fra hanen i 30 sekunder, og vask demioniseret vand i 10 minutter. Fjern rutsjebanerne en ad gangen og monter dem med vandopløseligt monteringsmedium.Brug derefter et let mikroskop til at læse diasene. I denne undersøgelse, en immunocytisk kemi test er påvist til påvisning af rabies virus antigen som en alternativ diagnostisk test for formalin-fast væv. En repræsentativ immunocytisk kemi farvning resultat af positive og negative kontrol prøver i forskellige hjernevæv er vist her, herunder hjernestammen, lillehjernen og purkinje celler, og hippocampus.Den magentarøde farvning, som angiver farveudviklingen ved hjælp af AEC-substrat mod den blå kontraplettede baggrund, skyldes reaktiviteten af antistoffer mod rabiesantigen. Et positivt resultat i immunohistochemistry svarer til magentarød farvning i vævssektionerne. Farvning af cytoplasmaiske indeslutninger og granulære indeslutninger af varierende størrelse er tegn på prøver, der er positive for RABV-infektioner.Prøver anses for negative, hvis der ikke blev observeret nogen specifik rød farvning eller kun den blå baggrund på grund af hæmatoxylin. Ud over den positive farvning kan fordelingen af indeslutninger give indirekte kvantificering af niveauet af rabiesantigen i stikprøven, hvilket kan svare til vævsprøvens virusbelastning. Uanset distributionsniveauerne vil enhver specifik farvning klassificere prøven som positiv for RABV-antigendetektering.Væv bør fastgøres tilstrækkeligt i formalin, og undgå at fryse væv under denne proces. Rabiesantigen opdages af IHC, derefter kan molekylære teknikker udføres på paraffin sektioner for at bestemme Lyssavirus variant baseret på RNA sekvens oplysninger. Reagenser som xylen og formalin skal håndteres i røghætter.Der skal udvises forsigtighed under håndtering af AEC, da det er kræftfremkaldende.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Detection of Infectious Virus from Field-collected Mosquitoes by Vero Cell Culture Assay

Mosquitoes transmit a number of distinct viruses including important human pathogens such as West Nile virus, dengue virus, and chickungunya virus. Many ...

Diagnosing Pulmonary Tuberculosis with the Xpert MTB/RIF Test

Diagnosticering lungetuberkulose med Xpert MTB / RIF Test

Tuberculosis (TB) due to Mycobacterium tuberculosis (MTB) remains a major public health issue: the infection affects up to one third of the world ...

A Novel Microdissection Approach to Recovering Mycobacterium tuberculosis Specific Transcripts from Formalin Fixed Paraffin Embedded Lung Granulomas

A Novel Microdissection Approach to Recovering Mycobacterium tuberculosis Specific Transcripts from Formalin Fixed Paraffin Embedded Lung Granulomas

A Novel microdissection tilgang til Recovering<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; Specifikke Udskrifter fra Formalin Fixed Paraffin Embedded Lung Granulomer

Microdissection has been used for the examination of tissues at DNA, RNA, and protein levels for over a decade. Laser capture microscopy (LCM) is the most ...

Detection of Human Leukocyte Antigen Biomarkers in Breast Cancer Utilizing Label-free Biosensor Technology

Påvisning af humant leukocyt antigen Biomarkører i Breast Cancer hjælp Label-fri biosensorteknologi

According to the American Cancer Society, more than 200,000 women will be diagnosed with invasive breast cancer each year and approximately 40,000 will ...

Isolation of Leukocytes from the Murine Tissues at the Maternal-Fetal Interface

Isolering af leukocytter fra det murine væv på maternel-føtal grænseflade

Immune tolerance in pregnancy requires that the immune system of the mother undergoes distinctive changes in order to accept and nurture the developing ...

Nasal Wipes for Influenza A Virus Detection and Isolation from Swine

Nasal Wipes for influenza A-virus Detection og Isolering fra svin

Surveillance for influenza A viruses in swine is critical to human and animal health because influenza A virus rapidly evolves in swine populations and ...

Generation of Two-color Antigen Microarrays for the Simultaneous Detection of IgG and IgM Autoantibodies

Generation af tofarvede Antigen Microarrays til samtidig påvisning af IgG og IgM-autoantistoffer

Autoantibodies, which are antibodies against self-antigens, are present in many disease states and can serve as markers for disease activity. The levels ...

Detection and Enrichment of Rare Antigen-specific B Cells for Analysis of Phenotype and Function

Detektion og berigelse af Rare Antigen-specifikke B-Celler til analyse af fænotype og funktion

B cells reactive with a specific antigen usually occur at a frequency of &lt;0.05% of lymphocytes. For decades researchers have sought methods to isolate ...

Isolation, Characterization, and Purification of Macrophages from Tissues Affected by Obesity-related Inflammation

Isolation, karakterisering og rensning af makrofager fra væv ramt af fedme-relaterede Inflammation

Obesity promotes a chronic inflammatory state that is largely mediated by tissue-resident macrophages as well as monocyte-derived macrophages. ...

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Assay til påvisning af Antigen-specifikke T-celle cytolytisk funktion ved hjælp af en Vaccination Model

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol ...