Name: immunohistochemistry test for the lyssavirus antigen detection from formalin-fixed tissues
Uploaded: 2021-10-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Immunohistochemistry Test for the Lyssavirus Antigen Detection from Formalin-Fixed Tissues at JoVE.com

Мы благодарим лаборантов, эпидемиологов и филиалы департаментов общественного здравоохранения за представление образцов в Центры по контролю и профилактике заболеваний. Выводы и заключения в этом докладе являются выводами авторов и не обязательно отражают официальную позицию Центров по контролю и профилактике заболеваний. Использование фирменных наименований и коммерческих источников предназначено только для идентификации и не подразумевает одобрения со стороны Центров по контролю и профилактике заболеваний.

В то время как протокол IHC был выполнен на формалин-фиксированных тканях, которые инактивируют RABV, если они присутствуют, соответствующие протоколы биобезопасности должны соблюдаться должным образом. Все процедуры биобезопасности описаны в 5-м издании (https://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/index.htm) ...

<ol>
	<li>Rupprecht, C., Kuzmin, I., Meslin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lyssaviruses+and+rabies:+current+conundrums,+concerns,+contradictions+and+controversies.">Lyssaviruses and rabies: current conundrums, concerns, contradictions and controversies.</a> F1000Research. 6, 184 (2017).</li><li>Fooks, A. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+status+of+rabies+and+prospects+for+elimination.">Current status of rabies and prospects for elimination.</a> Lancet. 384 (9951), 1389-1399 (2014).</li><li>Finke, S., Brzozka, K., Conzelmann, K. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tracking+fluorescence-labeled+rabies+virus:+enhanced+green+fluorescent+protein-tagged+phosphoprotein+P+supports+virus+gene+expression+and+formation+of+infectious+particles.">Tracking fluorescence-labeled rabies virus: enhanced green fluorescent protein-tagged phosphoprotein P supports virus gene expression and formation of infectious particles.</a> Journal of Virology. 78 (22), 12333-12343 (2004).</li><li>WHO. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WHO+Expert+Consulation+on+Rabies,+Third+Report.">WHO Expert Consulation on Rabies, Third Report.</a> WHO Technical Report Series. 1012, 1 (2018).</li><li>Goldwasser, R. A., Kissling, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+antibody+staining+of+street+and+fixed+rabies+virus+antigens.">Fluorescent antibody staining of street and fixed rabies virus antigens.</a> Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine. 98 (2), 219-223 (1958).</li><li>Lembo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+a+direct,+rapid+immunohistochemical+test+for+rabies+diagnosis.">Evaluation of a direct, rapid immunohistochemical test for rabies diagnosis.</a> Emerging Infectious Diseases. 12 (2), 310-313 (2006).</li><li>Fekadu, M., Greer, P. W., Chandler, F. W., Sanderlin, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+the+avidin-biotin+peroxidase+system+to+detect+rabies+antigen+in+formalin-fixed+paraffin-embedded+tissues.">Use of the avidin-biotin peroxidase system to detect rabies antigen in formalin-fixed paraffin-embedded tissues.</a> Journal of Virological Methods. 19 (2), 91-96 (1988).</li><li>Hamir, A. N., Moser, G., Rupprecht, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+five+year+(1985-1989)+retrospective+study+of+equine+neurological+diseases+with+special+reference+to+rabies.">A five year (1985-1989) retrospective study of equine neurological diseases with special reference to rabies.</a> Journal of Comparative Pathology. 106 (4), 411-421 (1992).</li><li>Inoue, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-reactive+antigenicity+of+nucleoproteins+of+lyssaviruses+recognized+by+a+monospecific+antirabies+virus+nucleoprotein+antiserum+on+paraffin+sections+of+formalin-fixed+tissues.">Cross-reactive antigenicity of nucleoproteins of lyssaviruses recognized by a monospecific antirabies virus nucleoprotein antiserum on paraffin sections of formalin-fixed tissues.</a> Pathology International. 53 (8), 525-533 (2003).</li><li>Webster, J. D., Miller, M. A., Dusold, D., Ramos-Vara, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+prolonged+formalin+fixation+on+diagnostic+immunohistochemistry+in+domestic+animals.">Effects of prolonged formalin fixation on diagnostic immunohistochemistry in domestic animals.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 57 (8), 753-761 (2009).</li><li>Feiden, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+staining+of+rabies+virus+antigen+with+monoclonal+and+polyclonal+antibodies+in+paraffin+tissue+sections.">Immunohistochemical staining of rabies virus antigen with monoclonal and polyclonal antibodies in paraffin tissue sections.</a> Zentralblatt fur Veterinarmedizin Reihe B. 35 (4), 247-255 (1988).</li><li>Manning, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+rabies+prevention--United+States,+2008:+recommendations+of+the+Advisory+Committee+on+Immunization+Practices.">Human rabies prevention--United States, 2008: recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices.</a> Morbidity and Mortality Weekly Reports Recommendations and Reports. 57, 1-28 (2008).</li><li>WHO. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Laboratory techniques in rabies. 1, 67-72 (2018).</li><li>Patrick, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+Rabies+Surveillance+Using+a+Direct+Rapid+Immunohistochemical+Test.">Enhanced Rabies Surveillance Using a Direct Rapid Immunohistochemical Test.</a> Journal of Visualized Experiments. (146), (2019).</li><li>Whitfield, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+study+of+the+fluorescent+antibody+test+for+rabies+diagnosis+in+fresh+and+formalin-fixed+brain+tissue+specimens.">A comparative study of the fluorescent antibody test for rabies diagnosis in fresh and formalin-fixed brain tissue specimens.</a> Journal of Virology Methods. 95 (1-2), 145-151 (2001).</li><li>WHO. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Diagnostic procedures for antigen detection. , (2016).</li><li>Jarvis, J. A., Franke, M. A., Davis, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rabies+direct+fluorescent+antibody+test+does+not+inactivate+rabies+or+eastern+equine+encephalitis+viruses.">Rabies direct fluorescent antibody test does not inactivate rabies or eastern equine encephalitis viruses.</a> Journal of Virology Methods. 234, 52-53 (2016).</li></ol>

Из-за высокого уровня смертности от бешенства после появления симптомов диагностика подозреваемых животных на инфекцию RABV чрезвычайно важна для соответствующего постэкспозиционного профилактического лечения. Диагностика бешенства в первую очередь зависит от методов DFA, DRIT и ПЦР с и?...

Бешенство – острый прогрессирующий энцефалит, вызываемый отрицательным чувством РНК-вирусов, относящихся к роду lyssavirus1. Почти 99% всех человеческих смертей, вызванных инфекцией вирусом бешенства (RABV), типовым членом рода, передается собаками2. Диагностика бешенства подозреваемых животных основывается на обнаружении антигена (в первую очередь вируснокодируемого нуклеопротеина, N-белка) в комплексе с геномной РНК (рибонуклеопротеиновый комплекс, RNP) в ткани головного мозга3. Обнаружение антигена с помощью теста на прямые флуоресцентные антитела (DFA) считается золотым стандартом для диагностики бешенства4. Способ использует свежий или свежезамороженный материал мозга, сенсорное оттиск на слайде, фиксацию в ацетоне, окрашивание с использованием коммерчески доступного флуоресцентного изотиоцианата (FITC), меченого моноклональными или поликлональными антителами (mAbs/pAbs) и считываемого флуоресцентной микроскопией5. Тест DFA является быстрым, чувствительным и специфическим для обнаружения антигена бешенства в свежей ткани мозга. Недавно было продемонстрировано, что прямой экспресс-иммуногистохимический тест (DRIT), модифицированный метод иммуногистохимии (IHC), демонстрирует аналогичную чувствительность к DFA, но предлагает преимущество световой микроскопии для визуализации6. Хотя метод обнаружения, используемый в DRIT, аналогичен IHC, на начальном этапе используются свежие или замороженные ткани для создания сенсорных отпечатков образца с последующей фиксацией в формалине.
IHC является широко используемым методом для определения гистологических изменений и обнаружения белков с использованием специфических антител в формалин-фиксированных тканях, встроенных в парафиновые блоки. IHC является установленным альтернативным тестом для обнаружения антигена бешенства в тканевых секциях7. IHC был особенно использован для диагностики ретроспективных случаев, в течение которого проявились неврологические заболевания, для определения бремени бешенства8. Парафин-внедренные формалин-фиксированные ткани сохраняют белки для обнаружения даже через несколько лет при хранении при температуре окружающей среды9. Лечение формалином модифицирует белки путем сшивания и изменения боковых цепей аминокислот, что может привести к тому, что эпитопы больше не будут реагировать против антител10. В то время как тест IHC для обнаружения антигена бешенства включает либо mAbs, либо pAbs, последний является выгодным, поскольку можно обнаружить несколько эпитопов и расходящихся лиссавирусов11.
Стандартными этапами, участвующими в IHC, являются фиксация тканей формалином, встраивание в парафиновые блоки, сечение тканей, депарафинизация и гидратация, восстановление эпитопов, реактивность против первичных и вторичных антител и развитие с использованием хромогенных субстратов. В этой рукописи подробно описан протокол диагностики бешенства. Для обнаружения антигена бешенства используется сыворотка мыши, иммунизированная RABV (pAbs), полученная в Центрах США по контролю и профилактике заболеваний (CDC) Атланты, штат Джорджия, в сочетании с биотинилированными антимышечные вторичными антителами. Биотинилированные АБС обнаруживаются добавлением комплекса стрептавидин-пероксидазы хрена (HRP) с последующим развитием цвета с аминоэтилкарбазоловым субстратом.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3% hydrogen peroxide</td>
			<td>Pharamacy brands</td>
			<td></td>
			<td>Off the shelf 3% H2O2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-Amino-9-ethylcarbazole (AEC)</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>A6926</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetate Buffer pH 5.2</td>
			<td>Poly Scientific R&#38;D Corp.</td>
			<td>s140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buffered Formalin 10% Phosphate Buffered</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SF100-4</td>
			<td>Certified</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover slips Corning</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-553-471</td>
			<td>24 X 50 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 190 Proof</td>
			<td>Pharmco-AAPER</td>
			<td>111000190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol 200 Proof</td>
			<td>Pharmco-AAPER</td>
			<td>111000200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gill&#39;s hematoxylin formulation #2</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>CS401-1D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HistoMark Biotin-Streptavidin Peroxidase Kit</td>
			<td>seracare</td>
			<td>71-00-18</td>
			<td>Mouse Primary Antibody&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImmunoHistoMount</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>i1161</td>
			<td>Mounting media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N,N, Dimethyl formamide GR</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>D119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline&#160;</td>
			<td>HyClone</td>
			<td>RR14440.01</td>
			<td>01M, pH 7.2 (pH 7.2-7.6)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plan-APOCHROMAT 40X/0.95 Objective</td>
			<td>Multiple vendors</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plan-APOCHROMATIC 20X/0.75 Objective</td>
			<td>Multiple vendors</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pronase</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>53702</td>
			<td>Protease, Streptomyces griseus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scott&#39;s Tap Water&#160;</td>
			<td>Poly Scientific R&#38;D Corp.</td>
			<td>s1887</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue-Tek Slide stain set</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-294-72</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TWEEN-80&#160;</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>P1754</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>X3S-4</td>
			<td>Histological Grade</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Axioplan 2 imaging - microscope</td>
			<td>Multiple vendors</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

immunohistochemistry test for the lyssavirus antigen detection from formalin-fixed tissues

Одним из основных диагностических методов борьбы с бешенством является обнаружение вирусного рибонуклеопротеинового (RNP) комплекса (антигена) в инфицированных образцах тканей. В то время как тест на прямые флуоресцентные антитела (DFA) или прямой экспресс-иммуногистохимический тест (DRIT) чаще всего используются для обнаружения антигена, оба теста требуют свежих и / или замороженных тканей для отпечатков на слайдах до обнаружения антигена с использованием антител. Если образцы собраны и зафиксированы в формалине, ни один из тестов не является оптимальным для обнаружения антигена, однако тестирование может быть выполнено с помощью обычной иммуногистохимии (IHC) после встраивания в парафиновые блоки и секционирования. При этом методе IHC ткани окрашивают антирабильскими антителами, срезы депарафинизируют, антиген извлекают частичным протеолизом или другими методами и инкубируют с первичными и вторичными антителами. Антигены окрашивают пероксидазой хрена/аминоэтилкарбазолом и контрапятнистами гематоксилином для визуализации с помощью светового микроскопа. В дополнение к обнаружению специфического антигена, фиксация формалина предлагает другие преимущества, такие как определение гистологических изменений, расслабленные условия хранения и транспортировки образцов (при температуре окружающей среды), возможность тестирования ретроспективных случаев и повышение биологической безопасности за счет инактивации инфекционных агентов.

Рисунок 2 демонстрирует репрезентативные результаты окрашивания IHC положительных и отрицательных контрольных образцов в различных протестированных тканях мозга. Рисунки 2A,D,G представляют положительные образцы в 200x, в то врем...

Watch this Scientific Journal Video about Immunohistochemistry Test for the Lyssavirus Antigen Detection from Formalin-Fixed Tissues at JoVE.com

Immunohistochemistry Test for the Lyssavirus Antigen Detection from Formalin-Fixed Tissues

Здесь мы представляем протокол иммуногистохимического теста для обнаружения антигена вируса бешенства в качестве альтернативного диагностического теста для тканей, фиксированных формалином.

Иммуногистохимический тест для обнаружения лиссавирусного антигена из формалин-фиксированных тканей

One of the primary diagnostic modalities for rabies is the detection of viral ribonucleoprotein (RNP) complex (antigen) in the infected tissue samples. ...

Ткани, используемые для иммуногистохимии и диагностической гистопатологии, обычно фиксируются в 10% фосфатном буферном формалине. Обнаружение антигена вируса бешенства в ткани мозга, который был зафиксирован в формалине, представляет собой уникальную проблему, и тест IHC оказался чувствительным и специфическим методом обнаружения антигена вируса бешенства. Основным преимуществом биопсии или других методов обнаружения является то, что антигены могут быть обнаружены по отношению к морфологии тканей и клеток.С IHC локализация антигена бешенства в мозговых и немозговых тканях, обеспечивает дополнительную информацию, которую нельзя было получить с помощью рутинных пятен гематоксилина и эозина. Диагностическое тестирование на бешенство имеет важное значение для начала постэкспозиционной профилактики у людей, подвергшихся воздействию вируса бешенства. IHC является одним из наиболее часто выполняемых анализов на формалин-фиксированных тканях.Со специфическими антителами его можно использовать для обнаружения соответствующих патогенов. Чтобы начать эту процедуру, поместите от трех до пяти миллиметров кусочков мозговой ткани, собранных после некропсии, в 10% буферный раствор формалина на 24-72 часа. Запишите приблизительный вес ткани, тип ткани и объем формалина.Поместите ткани в 70% этанол для более длительного хранения тканей после фиксации формалина и перед обработкой. После фиксации образца рассекните ткань, чтобы включить важные области мозга, такие как поперечные сечения ствола мозга, мозжечок или гиппокамп. Каждый из них разрезают до толщины от трех до пяти миллиметров.Поместите ткани в кассеты для обработки. Обработать тканевые кассеты для инфильтрации парафиновым воском. Вставьте их в парафиновые блоки и разделите на микротом.Сначала настройте окрашивающую посуду, как показано на рисунке 1 текстового протокола. Наполните каждое блюдо 250 миллилитрами приготовленного раствора. Для приготовления раствора субстрата AEC используют стеклянную пипетку, чтобы растворить одну 20-миллиграммовую таблетку AEC в 5 миллилитрах N,N-диметилформамида.Для приготовления раствора протеазы растворите 7 миллиграммов протеазы в 200 миллилитрах PBS. Чтобы подготовить буфер промывки, добавьте 100 миллилитров Tween от 80 до 990 миллилитров PBS и хорошо перемешайте, чтобы образовался однородный раствор PBT-T. Используя микротом, сделайте пятимикрометровое парафиновое сечение.Загрузите секцию на водяную баню при 38 градусах Цельсия и соберите ее на стеклянные горки. Пометьте слайды ручкой, устойчивой к реагентам. Поместите горки на лоток и расплавите в духовке при температуре от 55 до 60 градусов Цельсия в течение одного часа.Затем достаньте слайды из духовки и сразу же депарафинизируйте их, используя 3 последовательных ксилоловых ополаскивающих по 5 минут каждая. После этого регидратируют участки на слайде путем последовательного погружения в уменьшающееся разбавление этанола в деионизированную воду, как указано в тексте протокола. Обработайте слайды протеазой в течение 30 минут для извлечения протеолитического антигена, затем промойте слайды в PBS-T в течение 10 минут и обработайте их 3% перекисью водорода в течение 10 минут.После этого снова помойте слайды PBS-T в течение 10 минут. Для начала удалите один слайд из буфера, убедившись, что обрабатывается только один слайд за раз, в то время как другие остаются погруженными, и используйте бумажное полотенце, чтобы смыть лишний буфер с участка ткани. Поместите горки в камеру влажности и инкубировать с обычной козьей сывороткой при комнатной температуре в течение 15 минут.Затем инкубируют слайды в камере влажности с оптимальным предопределенным разведением первичных антирабовых антител и отрицательных контрольных антител при комнатной температуре в течение 60 минут без стирок между ними. После этого промыть горки PBS-T в течение 10 минут и инкубировать в камере влажности с биотинилированным антителом при комнатной температуре в течение 15 минут. Снова вымойте слайды PBS-T в течение 10 минут.Инкубировать горки и влагообойку с разделителем полос и комплексом HRB при комнатной температуре в течение 15 минут и промыть PBS-T в течение 10 минут. Затем инкубировать с AEC в камере влажности при комнатной температуре в течение 10 минут. Промыть горки в деионизированной воде в течение 10 минут и смазывать гематосилином Гилла, разбавляя один-два деионизированной водой в течение двух минут.После этого смойте избыток гематоксилина, окунув горки в деионизированную воду. Промойте горки в водопроводной воде Скотта в течение 30 секунд и промойте в деионизированной воде в течение 10 минут. Снимите горки по одному и установите их водорастворимым монтажным носителем.Затем используйте световой микроскоп для чтения слайдов. В этом исследовании продемонстрирован иммуноцитарный химический тест для обнаружения антигена вируса бешенства в качестве альтернативного диагностического теста для тканей, фиксированных формалином. Здесь показан репрезентативный результат окрашивания иммуноцитарной химии положительных и отрицательных контрольных образцов в различных тканях мозга, включая ствол мозга, клетки мозжечка и пуркинье, а также гиппокамп.Пурпурно-красное окрашивание, которое указывает на развитие цвета при использовании субстрата AEC на синем контрокрашенном фоне, обусловлено реактивностью антител против антигена бешенства. Положительный результат в иммуногистохимии соответствует пурпурно-красному окрашиванию в срезах тканей. Окрашивание цитоплазматических включений и зернистых включений различного размера свидетельствует о положительных образцах на RABV-инфекции.Образцы считаются отрицательными, если не наблюдалось специфического красного окрашивания или только синий фон из-за гематоксилина. В дополнение к положительному окрашиванию, распределение включений может обеспечить косвенную количественную оценку уровней антигена бешенства в образце, что может соответствовать вирусной нагрузке образца ткани. Независимо от уровней распределения, любое конкретное окрашивание будет классифицировать образец как положительный для обнаружения антигена RABV.Ткани должны быть адекватно зафиксированы в формалине, и избегать замораживания тканей во время этого процесса. Антиген бешенства обнаруживается IHC, затем молекулярные методы могут быть выполнены на парафиновых участках для определения варианта лиссавируса на основе информации о последовательности РНК. Реагенты, такие как ксилол и формалин, должны обрабатываться в вытяжных вытяжках.Следует проявлять осторожность при обращении с AEC, так как это канцероген.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Detection of Infectious Virus from Field-collected Mosquitoes by Vero Cell Culture Assay

Выявление инфекционных Касперского с поля, собранные Комары от Vero Пробирной культуры клеток

Mosquitoes transmit a number of distinct viruses including important human pathogens such as West Nile virus, dengue virus, and chickungunya virus. Many ...

Diagnosing Pulmonary Tuberculosis with the Xpert MTB/RIF Test

Диагностика туберкулеза легких с Xpert MTB / RIF испытаний

Tuberculosis (TB) due to Mycobacterium tuberculosis (MTB) remains a major public health issue: the infection affects up to one third of the world ...

A Novel Microdissection Approach to Recovering Mycobacterium tuberculosis Specific Transcripts from Formalin Fixed Paraffin Embedded Lung Granulomas

A Novel Microdissection Approach to Recovering Mycobacterium tuberculosis Specific Transcripts from Formalin Fixed Paraffin Embedded Lung Granulomas

Роман микродиссекция подход к Восстановление<em&gt; Микобактерии туберкулеза</em&gt; Конкретные Стенограммы из фиксированных формалином и залитые парафином легких гранулемы

Microdissection has been used for the examination of tissues at DNA, RNA, and protein levels for over a decade. Laser capture microscopy (LCM) is the most ...

Detection of Human Leukocyte Antigen Biomarkers in Breast Cancer Utilizing Label-free Biosensor Technology

Обнаружение человека антиген лейкоцитов биомаркеров при раке молочной железы Используя без наклеек технологии биосенсоров

According to the American Cancer Society, more than 200,000 women will be diagnosed with invasive breast cancer each year and approximately 40,000 will ...

Isolation of Leukocytes from the Murine Tissues at the Maternal-Fetal Interface

Выделение лейкоцитов из мышиного тканей на матери и плода интерфейс

Immune tolerance in pregnancy requires that the immune system of the mother undergoes distinctive changes in order to accept and nurture the developing ...

Nasal Wipes for Influenza A Virus Detection and Isolation from Swine

Носовые салфетки для гриппа обнаружения вируса и изоляции от свиного

Surveillance for influenza A viruses in swine is critical to human and animal health because influenza A virus rapidly evolves in swine populations and ...

Generation of Two-color Antigen Microarrays for the Simultaneous Detection of IgG and IgM Autoantibodies

Генерация двухцветного Antigen микрочипов для одновременного определения IgG и IgM Аутоантитела

Autoantibodies, which are antibodies against self-antigens, are present in many disease states and can serve as markers for disease activity. The levels ...

Detection and Enrichment of Rare Antigen-specific B Cells for Analysis of Phenotype and Function

Обнаружение и обогащение редких антиген-специфических B Клетки для анализа фенотипа и функции

B cells reactive with a specific antigen usually occur at a frequency of &lt;0.05% of lymphocytes. For decades researchers have sought methods to isolate ...

Isolation, Characterization, and Purification of Macrophages from Tissues Affected by Obesity-related Inflammation

Изоляция, характеристика и очистки макрофагов из пострадавших от связанных с ожирением воспаление тканей

Obesity promotes a chronic inflammatory state that is largely mediated by tissue-resident macrophages as well as monocyte-derived macrophages. ...

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

In Vivo Assay for Detection of Antigen-specific T-cell Cytolytic Function Using a Vaccination Model

В естественных условиях Assay для обнаружения антиген специфические Т-лимфоцитов цитолитического функции с помощью вакцинации модели

Current methodologies for antigen-specific killing are limited to in vitro use or utilized in infectious disease models. However, there is not a protocol ...