Name: nest building behavior as an early indicator of behavioral deficits in mice
Uploaded: 2019-10-19T14:00:00
Duration: 6 min 11 s
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我们要感谢凯文·昆特、马里奥·马丁内斯和埃德温·波蒂略的得分巢穴，雷切尔·巴基协助准备拍摄，斯蒂芬·里皮和黛博拉·尼利校对这份手稿。我们还要感谢心理学系为这项实验支付笼子的费用，并感谢Krasnow研究所动物设施管理员的支持。

所有程序均获得乔治梅森大学动物护理和使用委员会的批准，并符合实验室动物护理评估和认证所规定的准则。
1. 评估前的动物和注意事项
<ol><li>对于此协议，使用成人，9 - 12 个月大的 C57BL/6J （n = 10） （股票 # 000664） 野生型小鼠和 APOE e4 小鼠（n = 11） 从半胱氨酸 J20 （股票#006293） x 同源性 APOE e4 （股票#012307） 交叉。</li>
	<li>在住房室里，群屋老鼠与同性杂物适当富集（例如，对于这个协议，老鼠被提供了一个运行轮，冰屋和一个小尼龙咀嚼玩具）。组屋 4 - 6 雌性小鼠和 4 雄性在 356 毫米 L x 485 毫米 W x 218 毫米 H 家庭笼。 注：研究人员可以考虑在筑巢之前和/或之后实施策略，以避免在筑巢试验后小鼠重新引入时发生笼友攻击。这种策略可以包括但不限于行为测试前的日常处理，以更好地适应小鼠在行为测试期间的处理，研究人员和畜牧工作人员19，分离和单独安置攻击性小鼠，或减少家笼20的老鼠数量，视乎笼内搏斗的严重程度，观察伤口21等。</li>
</ol>2. 房间和嵌套设置
<ol><li>确保每只鼠标完成四次试验（每次试验 1 个材料）。随机化每只鼠标的嵌套材质的顺序，以避免顺序效果。</li>
	<li>在单独的测试室准备笼子。记录环境条件（例如，22.2 – 22.3°C，45-47% 湿度，上午 9：00 至晚上 9：00 的照明），以便它们在整个试验中一致且与外壳相同。提供食物和水。<ol>
<li>为每个鼠标分配一个随机标识 （ID） 编号或字母。将随机标识符卡连接到 29.2 x 18.4 厘米的保持架上。</li>
		<li>将原始动物ID/标签和其他必要的身份证明记录在殖民地记录中，以确保助理和畜牧工作人员对条件视而不见。</li>
	</ol>
</li>
	<li>随机排列在测试室中的笼子放置，使野生型小鼠和转基因小鼠不会被不当分离（即，在房间的对面，在单独的架子上，等等）。</li>
	<li>通过充分覆盖笼子底部来准备嵌套材料。使用约 100 g 干重的玉米棒床上用品进行方形、扭曲和切碎的纸张试验，以及约 100 g 的软棒床上用品进行软棒试验。</li>
	<li>如果使用烧杯来分散嵌套材料，则用玉米棒床上用品或软棒床上用品填充烧杯不超过 100 mL。</li>
	<li>在将鼠标引入笼子之前，将第一个嵌套材料放入序列中。该协议使用 （1） 单压棉方形，（2） 单纸张扭曲，（3） 100g 软焦布床上用品（即，没有添加额外的床上用品或嵌套材料），和 （4） 2.5 g 清洁（无墨水），切碎的白色打印机纸张切成 5 × 7 厘米条。分散嵌套材料，如图1所示（基线）。</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60139/60139fig1v3.jpg"> 图1：每种材料的笼子设置。所有小鼠完成一项试验，每种类型的材料共四次试验。玉米被子在笼子的整个底部衬里，里面装着纸扭曲、压棉方形和碎纸。软棒床上用品均匀地分散在笼子里，以鼓励老鼠将小棉方块从玉米棒中分离出来。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60139/60139fig1v3large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图的较大版本。</a>
3. 嵌套试验
<ol><li>在光周期开始时（例如，上午 9：00）的同一时间开始第一个嵌套试验。</li>
	<li>把装有老鼠的家笼带进测试室。将每只鼠标从家庭笼中取出，并将其放入其指定的嵌套笼中，并将材料放入笼子中。把家里的笼子还到房里。</li>
	<li>让小鼠完成1次试验，24小时不受干扰。</li>
	<li>第一次试验开始后24小时，返回测试室。</li>
	<li>小心地取下笼子的盖子，拍摄每只老鼠的巢穴，在照片中捕获分配的 ID，并尽量减少笼子外任何材料的外观。 注： 等待鼠标移出网箱，然后再尝试将其从笼子中取出。强烈建议在鼠标在笼子里但离开鸟巢时拍摄鸟巢。在拍摄前尝试将鼠标从笼子中取出可能会导致鼠标被吓了一步，从而在嵌套材料的顶部移动并分散。</li>
	<li>轻轻地将鼠标从嵌套笼中取出，并将其放入临时保持笼中。处置床上用品和任何嵌套材料，替换床上用品，在序列中提供下一个嵌套材料，并将鼠标返回到嵌套保持架。</li>
	<li>根据需要重复，以获得所有 4 项试验的分数。建议使用切碎的纸张和随附的评分标准，尽管研究人员可能有兴趣使用本协议中讨论的替代材料。</li>
	<li>当所有试验完成后，将老鼠送回其家的笼子。观察小鼠是否有任何潜在的攻击行为。侵略可能发生在较老的野生型雄性。 注：就本协议而言，小鼠在大约9~12个月大时进行了一次测试。筑巢应在几个年龄进行（即，在较早的年龄，取决于选择的菌株，在出现型型特征之前），以记录筑巢能力随时间而下降，并证明神经退化的可能致病作用。</li>
</ol>4. 评分和评估评审员之间的可靠性
<ol><li>向至少2名对研究视而不见的人提供每个嵌套材料的基线图像。虽然不是必需的，但请确保评分员熟悉嵌套的概念。训练记分器时，提供一系列示例嵌套（例如，粉碎纸的图 2），以便记分员熟悉每种类型的材料（如果适用）和评分标准。<ol>
<li>使用以下比例信息（改编自 Deacon，2006 ） 以 1 + 5 的比例评估每个巢。参见图 2，作为使用切碎的纸张进行评分的示例。</li>
		<li>当碎纸或小方块散落在笼子里，或棉方或扭曲未动时，分配1分;</li>
		<li>当某些材料被构造成巢时，分配 2 的分数，但超过 50% 的材料未用于筑巢（即保持零散或大部分原始材料未受影响）;</li>
		<li>当构造一个明显的巢时，分配 3 的分数，但几个部分仍然分散;</li>
		<li>当几乎所有的材料都用于鸟巢时，分配4分，但很少有材料仍然分散或靠近鸟巢;</li>
		<li>当所有材料都用于创建可识别的嵌套时，分配 5 的分数。 注：记分员应休息并重温基线照片，以避免在评分过程中出现疲劳和偏见。得分手不应相互讨论分数以避免偏见。得分者应在评分完成后讨论分数，或者如果需要进一步讨论以更改分数，这有可能解决与类内关联 （ICC） 有关的问题。类内关联将使用第 4.2 节中列出的步骤进行。</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60139/60139fig2.jpg"> 图2：使用切碎纸的标准进行评分的示例，这是首选材料。从左到右：1 = 切碎的纸张保持不变;2 – 一些纸张被建成一个巢，但大多数碎片仍然散落;3 = 建造了一个明显的巢穴，但几块仍然散落着;4 = 大多数碎片用于鸟巢，但有些碎片散落在鸟巢附近;5 = 所有部分都用于制造巢穴。请注意，在照片中，显示动物的指定编号以避免无盲。卡片的颜色是随机的。研究人员应该允许老鼠留在笼子里，以避免老鼠惊异，因为老鼠可能会分散巢穴。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60139/60139fig2large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图的较大版本。</a>
<ol start="2"><li>收集和输入分数并格式化数据文件，以便每个材料的每个评分的分数都位于单独的列中。 注：如果使用补充文件1，请注意，此分析的编码脚本需要免费的开源软件（例如，RStudio 中的irr软件包）22、23。该脚本删除标头和主题变量（即顶行和动物代码），以执行类内关联 （ICC）。运行脚本以执行双向协议、平均度量 ICC，方法是突出显示代码的已分界部分并点击 Ctrl_Enter 或命令 +Enter。</li>
	<li>将国际商会与现行准则24、25、26作比较。通常，高于 0.80 的 ICC 值对应于强大的评分者间可靠性，证明分数在给定时间点（补充文件 2） 中求平均值是合理的。</li>
	<li>对内部评分者可靠性使用相同的 ICC 标准，对于首次进行评分的人可能有兴趣。 注意：记分员应在初步评估后的一周内对相同的照片巢穴进行评分。当 ICC 低时，请谨慎使用平均数据，因为这可能会扭曲数据或生成无效结果。如果 ICC 值较低，则 （1） 可能需要为记分者进行额外培训，（2） 记分者可能需要讨论其对巢分数的推理，（3） 可能需要另一个独立审查员对分数做出判断，或 （4） 内部评分员可靠性可能需要评估。如果内部评分员的可靠性较差，则可能需要额外培训或不同的评分器。</li>
</ol>5. 统计考虑因素
<ol><li>酌情进行统计分析。对于不违反正常性假设但为每个鼠标使用多个材料的数据（即主体内效应），请使用方差混合分析 （ANOVA）。<ol>
<li>如果使用作为补充文件提供的代码，请下载脚本27、28、29、30中指定的其他加载项包。</li>
		<li>如果使用提供的脚本执行混合 ANOVA，请运行脚本以将任何宽格式数据文件转换为长格式（即，而不是跨列重复的变量，将单元格转换为跨行重复）。此手稿中包含一个示例数据文件，以演示如何将数据文件从宽格式转换为长格式。</li>
		<li>执行脚本中指定的混合方差分析。请注意，如果 Mauchly 的 Sphericity 测试被违反，则实施修正因子，如温室-盖瑟校正。</li>
		<li>执行编码脚本中指定的任何必要的后量测试，以检查具有 2 个以上级别的因素之间的差异。在此示例中，执行 Bonferroni 后点位测试以比较不同类型的嵌套材料。 注： 如果仅使用一个嵌套材质，则不合并主题内因子。但是，如果在多个时间点收集数据，则将这些重复度量与主体内因子的级别一样纳入其中。 注：在某些情况下，野生型小鼠可能有完美的分数，因此将表现出天花板效应，导致非正态分布2。在分析数据时，请考虑适当的统计测试（例如，具有中央趋势和分散的替代度量的非参数检验）、规范化方法或稳健方法（重复度量的混合效果建模）。</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
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作者没有什么可透露的。

筑巢是一种进化重要的啮齿动物行为，已用于评估小鼠的日常生活和一般福祉的活动。测试的简便性、可靠性和面部有效性使得嵌套成为许多行为测试（如洞穴、昼夜节律和梳理）的实际补充。但是，随着嵌套在实验室中越来越普遍使用，进行、量化和解释嵌套的各种组合增加。因此，需要进一步的研究，以探索最佳的方法和实际健全的嵌套程序，以便检测的有效性和可靠性不会牺牲成本、测试时间以及减少测试负担的其他程序.
鸟巢建筑质量确实对提供的床上用品类型和基因型非常敏感。总体而言，野生型小鼠与APOE e4小鼠相比，无论筑巢材料如何，都建造了明显更好的巢;然而，与其他三种筑巢材料相比，野生型和APOE e4小鼠用碎纸建造出质量更高的巢穴。其他研究提供了有关切碎的纸的佐证证据：老鼠用碎纸条建造了比压棉方块、纸巾和白杨床上用品33更复杂的巢穴。此外，用碎纸条建造的巢穴被定性地评价为比其他材料制成的更"自然"，这些材料的特点是巢本身的形状和巢腔周围壁的高度。以形成圆顶6，33。因此，为这种测定选择合适的材料对于在相对受控的环境中（即实验室环境）更好地观察自然行为至关重要。更重要的是，尽管此协议在 9 - 12 个月大时评估嵌套一次，但我们强调嵌套应在几个年龄进行。该协议的简单性允许它进行多次，理想情况下在伴随神经退化的赤字出现之前。重复测量提供了记录神经退化在筑巢能力下降中可能起的因果关系的机会。
天然巢建筑已被证明不同背景菌株的小鼠之间不同，因此，巢的整体质量和形状可能不同，原因可能不是感兴趣的转基因，而是背景菌株。例如，C57BL/6小鼠的祖先被认为是"孔"巢者，而BALB/C小鼠的祖先被认为是"表面"筑巢者35。C3H背景上的小鼠或与这种菌株交叉的小鼠，如在Graybeal等人中使用的E4混合C3H/He-C57BL/6也被认为是较差的巢穴;因此，研究人员应该强烈考虑使用与转基因小鼠处于相同背景的对照小鼠，这将全面改善转基因的直接、致病作用，而不是背景，在神经退化和随后的巢穴中出现缺陷。构建行为。
一些实验通常利用单个评分器来定性地判断巢的复杂性;然而，我们提出的论点，包括更多的得分手，更重要的是，得分手对实验条件视而不见。通过这种方法，我们利用三个独立的盲人得分手和一个班内相关性来评估记分员之间的协议，这些记分器通过基础训练，产生了较高的类内相关性，这表明评分者之间的可靠性很高和关于巢质量的强烈一致。此外，由碎纸和棉方块组成的几十个巢穴具有最高的类内相关性，这表明评分者之间具有更强的一致性和更强的一致性。强烈的协议也为将多个分数平均在一起提供了理由，这是行为研究中随意实施的策略。尽管此策略需要更多个人，并且大概需要更多时间来评分嵌套，但它有效地减少了诸如嵌套等定性评估中的偏见。
除软粘垫外，本次测定中使用的嵌套材料价格大致相等。对于一些实验者来说，用于筑巢的商业床上用品可能具有经济上的足智多谋;然而，Martin等人15指出，与其他材料如皱褶纸相比，棉方块是可购买的最昂贵的材料之一。这可能是由于易于获得、储存和管理，但其他研究人员可能会选择同样有效和可靠的材料，特别是当受到设施中大量动物的挑战时，筑巢试验的数量、时间限制得分巢，和高笼子成本。因此，切碎的纸张可能是一个更可行和适当的选择。此外，我们的方法的数据捕获可以立即进行（即亲自打分），尽管照片应该被高度考虑，以便记录、保存和重新量化嵌套，如果需要，以便评估内部和内部评分者可靠性。如上所述，我们强烈强调，要纳入多个评分员进行"测试、重新测试"的做法，以评估一致，因为这些方法上合理的程序往往被忽视。
最后，我们认为，这种测定的方法和统计考虑因素（即类内相关性）对于评估小鼠生活质量、一般福祉和日常生活活动的实验可能具有意义。

鸟巢建设是许多动物如鸟类、鱼类、啮齿动物和大型类人猿的固有行为，它因其在研究神经系统疾病和疾病方面的潜在效用而引起更多关注，其特征是幸福感下降和受损。日常生活活动1。老鼠，包括雄性还是雌性，为生殖、热保护和庇护建造同样大小的巢穴;更重要的是，即使在实验室环境中提出，它们也会继续这样做。赫斯、彼得罗维奇和古德温3认为，生物适宜的刺激对诱导适合生物的行为至关重要，如筑巢;然而，各种天然和人工材料，如干草，麻，棉线，纸条，棉牙球，和压棉方块，已经被用来评估巢建造行为2。这些嵌套行为的变化（即，未能从提供的材料中创建巢）通常表示健康或福利的变化。在大多数情况下，缺乏筑巢是由于几个对福祉产生负面影响的因素造成的。这些例子都有效地降低了小鼠筑巢的质量，包括极端温度;痛苦的刺激;诱发疾病和感染;基因突变;和脑病变在中视区，隔膜，和海马体4，5，6。
阿尔茨海默氏病是一种渐进性神经退行性疾病，其特征是脑组织丧失、细胞外淀粉样蛋白-β斑块的积累以及细胞内神经纤维缠结，由超磷酸化微管相关蛋白质，tau7。此外，阿尔茨海默氏病的特点是，最显著的是，学习缺陷和记忆和日常生活活动障碍。在小鼠中，日常生活活动通常通过昼夜轮运行8、9、10、11进行检查，尽管新的替代品，如筑巢，正在越来越受欢迎。巢穴已被证明对被确定为阿尔茨海默病危险因素和/或原因的操作（如基因突变、环境压力因素）敏感。因此，在模拟阿尔茨海默氏病特征的许多小鼠菌株中，嵌套可用作附加或补充的测定。例如，Deacon 和同事12测量了 Tg2576 小鼠的巢形构建，这些小鼠具有瑞典淀粉样蛋白前体蛋白 （APPswe） 和预塞尼林 1 （PS1） 基因突变。在3个月和12个月大时，由群居Tg2576小鼠建造的巢穴质量明显低于野生型对照组。根据这些发现，Filali等人13报告说，单独安置的APPswe/PS1雄性小鼠，给两块5 x 5厘米的棉花建造明显较差的巢，等级为1-5（1 = 窝不碰，5 = 近乎完美的巢）。与野生型小鼠相比，转基因小鼠在6个月、9个月和12个月大时一直筑巢，在某些情况下，Appwe/PS1小鼠完全未能在提供的棉花中筑巢。
我们实验室先前的研究表明，野生型C57BL/6J小鼠在棉方块中筑巢效果明显好于CRND8和CRND8/E4小鼠9。然而，大多数使用压棉方块的实验似乎是可变的，与预计的转基因小鼠相比，野生型小鼠没有表现出预期的高分，而转基因小鼠在筑巢2中的得分非常低，这在一定程度上可能导致估计参数（即均值差异）和统计显著性差异不足。缺乏差异可能部分是由于小鼠老化不足或为筑巢分配的时间。或者，嵌套材料可能是一个额外的挑战，由于研究人员在材料的数量和类型上的方法偏好，这种偏好会更多地变化，甚至可能与小鼠应变相互作用。例如，Robinson-Junker 及其同事14向 C3H/HeNCrl 小鼠和 BALB/cAnCrl 小鼠提供了不同尺寸（即小片或大片）的经过加工或未加工的床上用品材料，这些小鼠通常分别被视为差度和强度巢建设者。当提供未经加工的床上用品时，C3H小鼠的构建不太复杂，但与BALB/c小鼠相比，其优质巢穴相似。 同样，Martin和他的同事15比较了给鹿鼠不同筑巢材料的巢穴复杂性，鹿鼠是肌肉物种的远亲，具有明显的进化差异（即，更有可能在树上挖洞和在圈养中，毛刷和更活跃），但接受类似的饲养护理，作为常见的实验鼠和建立巢出任何可用的软，纤维材料16，17，18。 雌性动物和饲养在家庭笼子里饲养的饲养员比雄性动物建造更复杂的巢穴，作者认为，这些行为差异可能是由于鹿鼠体内黄体酮浓度的相关变化造成的。更重要的是，老鼠建造了更复杂的巢穴，由棕色纸组成，然后是棉方块和棉缸，最不复杂的巢穴用白纸和分散的迷你棉方块建造。
尽管嵌套越来越受欢迎，但很少讨论有关科学有效、具有成本效益和时间敏感做法的考虑。鉴于上述方法和经济方面的挑战，该协议研究了不同嵌套材料（棉方块、纸张扭曲、碎纸和加工床上用品）在筑巢行为中的效用。具体来说，我们为年龄老化的C57BL/6J野生型对照组和阿尔茨海默氏病APOE e4小鼠提供所有筑巢材料，以便通过筑巢质量中的物质相互作用来研究任何潜在的基因型。此外，该实验还试图评估由不同材料建造的巢穴的评审者可靠性。总之，该协议证明了本样品中一种嵌套材料（切碎的纸张）在嵌套质量和评分协议方面的优越性，旨在提高嵌套检测的有效性和可靠性。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:811px;" width="811">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Corncob bedding</td>
			<td style="width:127px;">Envigo</td>
			<td style="width:119px;">7092</td>
			<td style="width:349px;">1/8 in bedding for cotton squares, shredded paper, and paper twist trials</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Cotton Squares</td>
			<td style="width:127px;">Envigo</td>
			<td style="width:119px;">Iso-Blox</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Diamond Twists</td>
			<td style="width:127px;">Envigo</td>
			<td style="width:119px;">7979C.CS</td>
			<td style="width:349px;">Paper twists used in protocol</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Mouse - APOE4 e4</td>
			<td style="width:127px;">Jackson Laboratories</td>
			<td style="width:119px;">#012307</td>
			<td style="width:349px;">Homozygous APEO4 e4 mouse bred with hemizyous J20 mouse</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Mouse - C57BL/6J</td>
			<td style="width:127px;">Jackson Laboratories</td>
			<td style="width:119px;">#000664</td>
			<td style="width:349px;">Wildtype mouse for controls</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Mouse - J20</td>
			<td style="width:127px;">Jackson Laboratories</td>
			<td style="width:119px;">#006293</td>
			<td style="width:349px;">Hemizygous mouse bred with the homozygous APOE e4 mouse to generate cross</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Rstudio</td>
			<td style="width:127px;">R Core Team</td>
			<td style="width:119px;">V1.1.463</td>
			<td style="width:349px;">Run with R version 3.5.3 (2019-03-11) -- &#34;Great Truth&#34;. Note: additional R Packages are included in provided code and can be installed from CRAN</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Soft Cob</td>
			<td style="width:127px;">Envigo</td>
			<td style="width:119px;">7087C</td>
			<td style="width:349px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

nest building behavior as an early indicator of behavioral deficits in mice

鸟巢建筑是雄性与雌性啮齿动物的固有行为，即使在实验室环境中饲养也是如此。因此，许多研究人员提供啮齿动物合成和/或天然材料（如线、组织、棉花、纸张和干草）作为衡量它们整体福祉的指标，并作为辅助评估来预测认知可能的下降。通常，嵌套行为的更改（如无法创建嵌套）表示运行状况或福利的更改。此外，筑巢行为对许多环境和生理挑战以及许多遗传突变的病理疾病状态很敏感。以下协议描述了一个嵌套行为范例，该范例探索了四种类型的嵌套材料的用法。此外，该协议利用类内相关性来证明，与其他常见的嵌套材料（如棉方块、纸扭曲和软粘物）相比，用碎纸构建巢穴时，当巢间的可靠性更高床上用品。为这种测定所选择的方法和统计考虑因素（即类内相关性）对于进行评估小鼠生活质量的实验的人可能有兴趣。

提供给野生型和APOE e4小鼠的四种不同筑巢材料的结果如下。根据现有标准，国际商会表示，所有三种编码器对所有四种嵌套材料都达成了强烈的一致意见（碎纸ICC = 0.94;方ICC =0.91;床上用品ICC=0.87;扭曲ICC=0.87）; 因此，三个分数一起平均，为所提供的每个材料创建一个分数。2 x 4 混合方差分析产生了基因型的显著主要作用，F（1， 19） = 31.30，p < 0.01，μp2 = 0.62。 在所有四种提供的材料中，野生型小鼠的巢质量（3.18 ± 0.20）得分高于 APOE e4 小鼠（1.98 ± 0.16）。此外，混合方差分析产生了材料的主要作用，F（3， 57） = 57.48，p < 0.01，μp2 = 0.75。 与 Bonferroni 校正的成对比较表明，碎纸 （4.11 ± 0.20）的质量比正方形 （1.95 ± 0.21）、床上用品 （2.21 ± 0.21） 或扭曲 （1.944 ± 0.20） 材料（无在方形、床上用品和扭曲材料之间看到的差异（所有p > 0.99）。基因型和物质之间没有显著的相互作用。数据显示在图3中。
我们实验室的其他实验在阿尔茨海默氏病的早期发病模型中也取得了类似的结果。例如，如图4所示，5.5个月大的P301L rTg4510（htau）小鼠用碎纸建造的巢穴比年龄匹配的野生型小鼠31明显差。同样，双J20（hAPP）/htau和单htau小鼠用碎纸建造了更差的巢穴，而它们的野生型和CAMKIIa促进器只有对应物，在3.5个月和7个月32岁（数据未显示）。
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60139/60139fig3v2.jpg"> 图3：由不同材料制成的巢穴的额定质量提供给野生型和APOE e4小鼠。基因型（_p < 0.01）的主要效果表明，与APOE e4小鼠相比，野生型小鼠始终以切碎的纸张、压棉方块、纸扭曲和软粘布床上用品制成更好的巢穴。材料的主要效果（_p < 0.01）还表明，与其他三种材料相比，用碎纸建造的巢穴在质量上得到了更高的评价。根据ICC的评估，切碎的纸张具有最高的评审者可靠性衡量标准。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60139/60139fig3v2large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图的较大版本。</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60139/60139fig4.jpg"> 图4：由野生型和htau小鼠在锌水中或从锌水中或关闭建造的碎纸巢。 （A）代表巢由5.5个月大的野生型和htau小鼠建造，在控制（自来水）水或水上补充10个部分锌（一种与阿尔茨海默病有关的生物金属）。使用指定标准在 1 - 5 个等级上对巢进行评分。从左到右：野生型 +锌水（4.54±0.52）;野生型 = 控制水 （4.15±0.80）;htau = 控制水 （3.08 ± 0.64）;htau = 锌水 （2.46±0.97）。（B） 基因型-水相互作用表明，在锌水中的htau小鼠比其他组构建的巢穴明显差（*）;此外，简单效果显示，htau小鼠在锌水中的巢穴比控制水中的htau小鼠筑巢情况差。野生型小鼠控制水和锌水建造的巢，与htau同行相比，其质量更高，质量相似。转载自阿尔茨海默氏病杂志， Vol 64， 克雷文， KM， 科琴WR， 埃尔南德斯CM， 弗林JM， 锌恶化Tau病理学在Tau小鼠模型， 671-630， 版权所有 （2018）， 与IOS出版社31许可 .该出版物可通过 IOS 出版社通过http://dx.doi.org/10.3233/JAD-180151获得。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60139/60139fig4large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图的较大版本。</a>
<img alt="Supplementary File 1" src="/files/ftp_upload/60139/60139supfig1.jpg"> 补充文件1：补充编码文件 + 嵌套。R<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60139/suppfile1.R" target="_blank">请点击此处下载此文件。</a>
<img alt="Supplementary File 2" src="/files/ftp_upload/60139/60139supfig2.jpg"> 补充文件2：AD 研究嵌套分数.csv<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60139/suppfile2.csv" target="_blank">请点击这里下载此文件。</a>

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Nest Building Behavior as an Early Indicator of Behavioral Deficits in Mice

在这里，我们提出了一个协议，以量化在小鼠的巢建设行为，这是已知在几种神经系统疾病和疾病受损。该协议考察了四种材料的效用，并提供了量化评分评分评分协议的机会，提高了测定的有效性和可靠性。

巢穴建筑行为作为小鼠行为缺陷的早期指标

Nest building is an innate behavior in male and female rodents, even when raised in laboratory settings. As such, many researchers provide rodents ...

筑巢行为是评估野生型和转基因小鼠日常生活活动的有用方法。它特别有用，用于记录整个生命周期神经退化的认知衰退。这种技术是一个经济简单和优雅的评估，在小鼠的日常生活活动。也可以在短时间内完成，培训最少。在我们的实验室中，我们建议用碎纸，因为纸张会产生更一致的结果。但是，可以进行试点研究，以确定哪些材料最适合您的目标和预算。在单独的测试室中，设置环境条件，使它们在试验中保持一致，与住房室相同，并提供食物和水到笼子加水器。为每个鼠标分配一个随机标识号或字母。并在菌落记录中记录原始动物证和其他必要身份，以确保助理和畜牧工作人员对条件视而不见。随机在试验室放置笼子，使野生型小鼠和转基因小鼠不会不当分离。并覆盖每个笼子的底部与100克干重的玉米棒床上用品的方形，扭曲，和切碎的纸试验。和 100 克软鳕子床上用品的软 cob 试验。然后，在将鼠标引入笼子之前，将单个压棉方形、单纸扭曲、没有额外材料添加到软胶袋床上用品，或将 2.5 克干净切碎的白色打印机纸切成五到七厘米的条。在一天中，在光循环的开始，把装有老鼠的家笼带进测试室。将每只鼠标转移到其分配的嵌套笼中，将材料放入笼中。当所有老鼠都放置后，将家里的笼子回到住房室，让老鼠在不受干扰地完成24小时的试验。在试验结束时，小心地取下每个笼子的盖子。当每只鼠标移离巢时，拍摄每个巢捕捉照片中分配的 ID，并最大限度地减少笼子外任何材料的外观。当每个巢被拍摄时，轻轻地将每只老鼠转移到单独的临时保持架中。并护送床上用品和任何筑巢材料从每个笼子。然后，更换床上用品，按顺序提供下一个嵌套材料。将鼠标返回到筑巢笼。当所有的试验都完成，把老鼠回到他们的家笼，观察老鼠是否有潜在的攻击行为。为了保持关联器之间的可靠性，为至少两个对研究视而不见的个人提供每个嵌套材料的基线图像。并提供一系列样品巢，使记分员熟悉每种材料类型。给巢打分时，当碎纸或小方块仍然散落在笼子上，或者棉质方块或扭曲保持不变时，应分配一个分数。当某些材料构造成巢时，将分配 2 的分数，但超过 50% 的材料尚未用于嵌套构造。在构造一个明显嵌套时分配分数为 3，但仍分散了几块。当几乎所有材料都用于嵌套，但几件材料仍然散开或位于嵌套附近时，将分配四分。当几乎所有材料都用于创建无法识别的嵌套时，将分配 5 的分数。让得分手休息一下，重新访问基线照片，以避免疲劳和偏见在评分过程中，必要时。当所有保持架都得分后，输入分数并格式化为长格式的数据文件，以便动物分数在单独的列中。在这项对所有四种材料进行代表性分析时，野生型小鼠的巢质量得分高于APOE e4小鼠。碎纸的质量比方形、床上用品或扭曲材料的等级要高得多。广场、床上用品和扭曲材料之间没有差异。此外，在Htau小鼠的实验中，5.5个月大的突变动物用碎纸筑巢，这些巢比那些按年龄建造的老鼠要差得多。分数应该对实验条件保持盲目，并审查评分标准。由于结论是健全和有效的，还应评估评价者之间的信赖性。挖洞和循环轮运行是评估日常生活活动的另外两种常见方法。它们可能有助于赞美筑巢行为。筑巢可以作为辅助评估，预测认知的可能下降，扩大行为评估的气息与莫里斯水迷宫和昼夜轮运行。

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