Name: a blood-free diet to rear anopheline mosquitoes
Uploaded: 2020-01-31T13:00:00
Duration: 8 min 40 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Blood-Free Diet to Rear Anopheline Mosquitoes at JoVE.com

Мы хотели бы поблагодарить Динору Лопес (IHMT-NOVA Animal Facility) за техническую поддержку, Джоану Гомес и Ана Катарину Алвес (IHMT-NOVA Insectary Facility) за поддержание колоний комаров Anopheles. Финансируется Фондом Билла и Мелинды Гейтс (OPP1138841), Funda'o para a Ci'ncia e Tecnologia (UID/04413/201, UID/Multi/04326/2013, SFRH/BPD/89811/2012, CEECIND/000/2000).

Мыши были получены из дома животных IHMT. Эксперименты на животных проводились в строгом соответствии с португальским законодательством и руководящими принципами использования лабораторных животных. Диреньо-Гераль-де-Ветеринария, Министерио да Сельское хозяйство ду Десенвольвименто Сельские электронной дас Пескас, Португалия утвердила все протоколы исследования (id утверждений: 023351 и 023355).
ПРИМЕЧАНИЕ: Выполните все кормления анализы на 26 градусов по Цельсию.
1. Комары
<ol><li>Поддерживать Anopheles coluzzii (бывший Anopheles gambiae M форме) Яунде штамм комаров при 26 градусах Цельсия, 75% влажности под 12 ч:12 ч свет: темный цикл. Домашние комары, использующие стандартные насекомые условия, гарантирующие спаривание.</li>
	<li>Соберите кускару комаров в небольшой контейнер для воды. Поместите контейнер в клетку для комаров, чтобы взрослые комары появляются и спариваются. Обеспечить 10% раствор для кормления глюкозы. Через три дня после появления собирают необходимое количество комаров из запасной клетки с помощью аспиратора.</li>
	<li>За день до кормления, удалить 10% раствор глюкозы кормления. ПРИМЕЧАНИЕ: 3 дневных комаров были использованы в ходе экспериментов.</li>
</ol>2. Кормление комаров
<ol><li>Приготовление искусственных жидких диет<ol>
<li>Приготовьте искусственные жидкие диеты в стерильных условиях в ламинарном шкафу. Подготовьте богатую жидкую диету (r-liq_diet), добавив следующее в начальную жидкую диету (i-liq_diet; Модифицированная среда Орла «высокая глюкоза с L-глютамином» см. таблицу 1):0,55 г/Л АТП, 1 г/л холестерина и 200 г/л сыворотки для крупного рогатого скота (BSA). Тщательно смешайте все ингредиенты и процедите с помощью микрофильтра мощностью 0,45 мкм. ПРИМЕЧАНИЕ: Не храните диеты; подготовить диеты только что из фондовых решений для каждого эксперимента, как они теряют качество при хранении. Компоненты диет описаны в таблице 1.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Сбор крови мыши<ol>
<li>Анестезия 6-8 недельных самок мышей CD1(Mus musculus)с кетамин (120 мг/кг) и ксилазин (16 мг/кг) с использованием интраперитонеального маршрута.</li>
		<li>Выполните сердечный прокол(рисунок 1), когда мышь не отображает мышечной реакции в ответ на различные физические стимулы (например, нос и хвостщицы).</li>
		<li>Сбор крови с помощью стерильного шприца 1 мл с 27 G х 1'2 "(0,4 х 12 мм2)иглы, которая содержит 100 л 1 мг/мл гепарина (соли натрия), чтобы предотвратить образование тромбов. Поддерживайте кровь при 37 градусах Цельсия с помощью водяной ванны.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Искусственное кормление<ol>
<li>Соберите около 30 самок комаров из клетки с помощью аспиратора.</li>
		<li>Перенесите самок комаров на бумажные стаканчики 500 мл и накройте тонкой сеткой для комаров, чтобы они не могли сбежать. Нанесите стеклянную фидер, подключенную к пластиковым трубам, чтобы поддерживать постоянный поток воды в верхней части каждой чашки(рисунок 2). Обеспечить постоянный поток воды в цилиндрические трубки и кормушки, так что температура внутри держится на уровне примерно 37,5 градусов по Цельсию. ПРИМЕЧАНИЕ: Стандартный стеклянный колокол искусственного кормления аппарат16 был использован для поставки сформулированы диеты для самок комаров.</li>
		<li>Растянуть парафин пленочный мембраны через рот стеклянной подачи, чтобы содержать еду.</li>
		<li>Предварительно разогреть i-liq_diet и р-liq_diet при 37 градусах Цельсия с помощью водяной ванны. Нанесите 1 мл в стеклянную подачу. Кормите комаров в течение 60 минут в темноте либо i-liq_diet, r-liq_diet или свежей кровью мыши. Выполните ассы при 26 градусах Цельсия.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Оценка скорости кормления.<ol>
<li>После искусственного кормления, холодно-анестезируют комаров при -20 градусах по Цельсию в течение 30 с. Поместите комаров в охлажденное блюдо Петри.</li>
		<li>Запись числа полностью engorged(Рисунок 3) самок комаров. ПРИМЕЧАНИЕ: Процент кормовых комаров используется в качестве прокси для успеха кормления.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. Традиции истории жизни
<ol><li>Производство и плодородие яиц<ol>
<li>Перенесите полностью зажженных самок, используя кисть, в отдельные клетки (20 см х 20 см х 20 см).</li>
		<li>Держите комаров на 26 и 1 кв С, 75% влажности и 12 ч:12 ч свет: темный цикл с 10% глюкозы ad libitum.</li>
		<li>Сорок восемь ч после кормления, добавить увлажненную фильтровальную бумагу в нижней части для откладки яиц(рисунок 4). Подсчитайте яйца на 48 ч и 72 ч после добавления яйцекладка бумаги с помощью портативного увеличительного стекла. Наводнение фильтровальной бумаги с дистиллированной водой для сбора яиц.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Смертность от лишней<ol>
<li>Соберите яйца в лотки (23 см х 15 см х 6 см) заполнены дистиллированной водой(рис. 5). Поддержание уровня воды в лотках постоянно во время экспериментов.</li>
		<li>Кормите личинок ежедневно примерно 13 мг молотой рыбной пищи на лоток. Применить аналогичный режим кормления для всех репликации лотки.</li>
		<li>Удалите мертвых кусков и личинок ежедневно. Завершайте эксперименты, когда все куколки превратились во взрослых и подсчитывают количество взрослых самцов и самок.</li>
		<li>Зарегистрируйте даты вылупления и смерти и вычислите показатели смертности.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Долголетия<ol>
<li>Соберите 15 взрослых мужчин и 15 взрослых женщин из поколения F1 каждой группы диеты. Держите самцов и самок в одной клетке.</li>
		<li>Кормите взрослых 10% раствором глюкозы ad libitum. Удалите мертвых взрослых ежедневно.</li>
		<li>Поддерживайте комаров при той же температуре, влажности, условиях светового цикла и режиме кормления сахара, как описано выше.</li>
		<li>Зарегистрируйте даты смерти и вычислите долголетие.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Измерение длины крыла<ol>
<li>Холодный анестетит пятидневный F1 взрослых комаров (мужчины и женщины) из каждой группы диеты при -20 градусов по Цельсию на 90 с.</li>
		<li>Под стереоскопом аккуратно схватить грудную клетку каждого комара с помощью щипц и поместить их вентральную сторону вверх.</li>
		<li>Соберите оба крыла с помощью скальпеля и поместите их на чистый слайд микроскопа, содержащий высушенную каплю монтажной среды. С помощью 20 G иглы добавить дополнительные монтажные средства массовой информации к границам coverslip и медленно опустите coverslip на крылья.</li>
		<li>Измерьте длину крыла(рисунок 6)со стереоскопом с помощью микрометра.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>WHO. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> World Malaria Report. , (2016).</li><li>Hansen, I. A., Attardo, G. M., Rodriguez, S. D., Drake, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Four-way+regulation+of+mosquito+yolk+protein+precursor+genes+by+juvenile+hormone-,+ecdysone-,+nutrient-,+and+insulin-like+peptide+signaling+pathways.">Four-way regulation of mosquito yolk protein precursor genes by juvenile hormone-, ecdysone-, nutrient-, and insulin-like peptide signaling pathways.</a> Frontiers in Physiology. 5, 103 (2014).</li><li>Catteruccia, F., Crisanti, A., Wimmer, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+technologies+to+induce+sterility.">Transgenic technologies to induce sterility.</a> Malaria Journal. 8, 7 (2009).</li><li>Dame, D. A., Curtis, C. F., Benedict, M. Q., Robinson, A. S., Knols, B. G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Historical+applications+of+induced+sterilisation+in+field+populations+of+mosquitoes.">Historical applications of induced sterilisation in field populations of mosquitoes.</a> Malaria Journal. 8, 2 (2009).</li><li>Lacroix, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Open+Field+Release+of+Genetically+Engineered+Sterile+Male+Aedes+aegypti+in+Malaysia.">Open Field Release of Genetically Engineered Sterile Male Aedes aegypti in Malaysia.</a> PLoS One. 7, 42771 (2012).</li><li>Lea, A. O., Knierim, J. A., Dimond, J. B., Delong, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Preliminary+Note+on+Egg+Production+from+Milk-Fed+Mosquitoes.">A Preliminary Note on Egg Production from Milk-Fed Mosquitoes.</a> The Ohio Journal of Science. 55, 1-21 (1955).</li><li>Kogan, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Substitute+blood+meal+for+investigating+and+maintaining+Aedes+aegypti+(Diptera:+Culicidae).">Substitute blood meal for investigating and maintaining Aedes aegypti (Diptera: Culicidae).</a> Journal of Medical Entomology. 27, 709-712 (1990).</li><li>Griffith, J. S., Turner, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culturing+Culex+quinquefasciatus+mosquitoes+with+a+blood+substitute+diet+for+the+females.">Culturing Culex quinquefasciatus mosquitoes with a blood substitute diet for the females.</a> Medical and Veterinary Entomology. 10, 265-268 (1996).</li><li>Jason Pitts, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+blood-free+protein+meal+supporting+oogenesis+in+the+Asian+tiger+mosquito,+Aedes+albopictus+(Skuse).">A blood-free protein meal supporting oogenesis in the Asian tiger mosquito, Aedes albopictus (Skuse).</a> Journal of Insect Physiology. 64, 1-6 (2014).</li><li>Gonzales, K. K., Tsujimoto, H., Hansen, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+serum+and+BSA,+but+neither+red+blood+cells+nor+hemoglobin+can+support+vitellogenesis+and+egg+production+in+the+dengue+vector+Aedes+aegypti.">Blood serum and BSA, but neither red blood cells nor hemoglobin can support vitellogenesis and egg production in the dengue vector Aedes aegypti.</a> PeerJ. 3, 938 (2015).</li><li>Gonzales, K. K., Hansen, I. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artificial+Diets+for+Mosquitoes.">Artificial Diets for Mosquitoes.</a> International Journal of Environmental Research and Public Health. 13 (12), 1267 (2016).</li><li>Cosgrove, J. B., Wood, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+variations+in+a+formulated+protein+meal+on+the+fecundity+and+fertility+of+female+mosquitoes.">Effects of variations in a formulated protein meal on the fecundity and fertility of female mosquitoes.</a> Medical and Veterinary Entomology. 10, 260-264 (1996).</li><li>Attardo, G. M., Hansen, I. A., Shiao, S. -. H., Raikhel, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+two+cationic+amino+acid+transporters+required+for+nutritional+signalling+during+mosquito+reproduction.">Identification of two cationic amino acid transporters required for nutritional signalling during mosquito reproduction.</a> Journal of Experimental Biology. 209, 3071-3078 (2006).</li><li>Clements, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The biology of mosquitoes: Development, nutrition, and reproduction. , (1992).</li><li>Talyuli, O. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+a+chemically+defined+artificial+diet+as+a+tool+to+study+Aedes+aegypti+physiology.">The use of a chemically defined artificial diet as a tool to study Aedes aegypti physiology.</a> Journal of Insect Physiology. 83, 1-7 (2015).</li><li>Lopes, L. F., Abrantes, P., Silva, A. P., Dorosario, V. E., Silveira, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmodium+yoelii:+The+effect+of+second+blood+meal+and+anti-sporozoite+antibodies+on+development+and+gene+expression+in+the+mosquito+vector,+Anopheles+stephensi.">Plasmodium yoelii: The effect of second blood meal and anti-sporozoite antibodies on development and gene expression in the mosquito vector, Anopheles stephensi.</a> Experimental Parasitology. 115, 259-269 (2007).</li><li>Phasomkusolsil, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+mosquito+vectors:+effects+of+blood+source+on+feeding,+survival,+fecundity,+and+egg+hatching+rates.">Maintenance of mosquito vectors: effects of blood source on feeding, survival, fecundity, and egg hatching rates.</a> Journal of Vector Ecology. 38, 38-45 (2013).</li><li>Gillies, M. T., De Meillon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Anophelinae+of+Africa+South+of+the+Sahara+(Ethiopian+zoogeographical+region).">The Anophelinae of Africa South of the Sahara (Ethiopian zoogeographical region).</a> Publications of the South African Institute for Medical Research. 54, 1 (1968).</li><li>Canavoso, L. E., Jouni, Z. E., Karnas, K. J., Pennington, J. E., Wells, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fat+metabolism+in+insects.">Fat metabolism in insects.</a> Annual Review of Nutrition. 21, 23-46 (2001).</li><li>Clifton, M. E., Noriega, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fate+of+follicles+after+a+blood+meal+is+dependent+on+previtellogenic+nutrition+and+juvenile+hormone+in+Aedes+aegypti.">The fate of follicles after a blood meal is dependent on previtellogenic nutrition and juvenile hormone in Aedes aegypti.</a> Journal of Insect Physiology. 58, 1007-1019 (2012).</li><li>Gonzales, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effect+of+SkitoSnack,+an+Artificial+Blood+Meal+Replacement+on+Aedes+aegypti+Life+History+Traits+and+Gut+Microbiota.">The Effect of SkitoSnack, an Artificial Blood Meal Replacement on Aedes aegypti Life History Traits and Gut Microbiota.</a> Scientific Reports. 8, 11023 (2018).</li><li>Vodovotz, Y., Zamora, R., Lieber, M. J., Luckhart, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-talk+between+nitric+oxide+and+transforming+growth+factor-beta1+in+malaria.">Cross-talk between nitric oxide and transforming growth factor-beta1 in malaria.</a> Current Molecular Medicine. 4, 787-797 (2004).</li><li>Sumba, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Daily+oviposition+patterns+of+the+African+malaria+mosquito+Anopheles+gambiae+Giles+(Diptera:+Culicidae)+on+different+types+of+aqueous+substrates.">Daily oviposition patterns of the African malaria mosquito Anopheles gambiae Giles (Diptera: Culicidae) on different types of aqueous substrates.</a> Journal of Circadian Rhythms. 2, 6 (2004).</li><li>Baughman, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+highly+stable+blood+meal+alternative+for+rearing+Aedes+and+Anopheles+mosquitoes.">A highly stable blood meal alternative for rearing Aedes and Anopheles mosquitoes.</a> PLoS Neglected Tropical Diseases. 11, 0006142 (2017).</li></ol>

Авторам нечего раскрывать.

Успех нашей разработанной диеты без крови, вероятно, является результатом синергетического физиологического эффекта всех компонентов, добавленных в i-liq_diet (богатые сахаром, аминокислотами, витаминами и микроэлементами): BSA (источник белка), АТФ (фагостимулулянт) и холестерин (источник липидов). Дополнение r-liq_diet только к отдельным компонентам не было эффективным в стимулировании производства яиц (данные не показаны). Одним из недостатков протокола может быть стоимость некоторых компонентов, таких как холестерин. Несмотря на это, его присутствие является фундаментальным, как насекомые не в состоянии синтезировать его19, и эта молекула является предшественником экдистероидных гормонов, которые регулируют синтез желтка и созревания яйцеклеток в членистоногих20. Снижение количества холестерина должно быть проверено для того, чтобы оптимизировать количество, необходимое с целью снижения затрат и увеличения преимуществ искусственного питания.
Еще одно ограничение метода заключается в том, что искусственная диета должна быть свежеприготовлена из биржевых растворов, так как после приготовления в окончательной жидкой форме она теряет качество после хранения. В будущем наша сформулированная диета может быть подготовлена как высушенная сила, похожая на SkitoSnackt, искусственную замену пищи крови для комаров Aedes aegypti 21.
Помимо поставки необходимых питательных веществ, искусственная еда должна привлекать и стимулировать самок комаров кормить так же, как когда они питаются позвоночных свежей крови. Искусственная диета без крови, описанная в этом описанном месте, привела к увеличению на 20% полностью зажженных самок комаров по сравнению с группой позвоночных. Эта непрямая мера притяжения может быть дополнительно уточнена с помощью олфактометров, чтобы подтвердить, что искусственная диета является более привлекательным и более привлекательным для комаров, чем свежая кровь.
Наибольшее влияние рациона на смертность от личинок наблюдалось для личинок, полученных от комаров, питающихся кровью, что свидетельствует о том, что искусственная диета стабильного состава может способствовать снижению смертности и улучшению успеха в размножении комаров по сравнению со свежей кровью. Менее предсказуемый исход крови может возникнуть из-за вариаций состава17 и присутствия в крови молекул, которые могут помешать физиологии комаров22. Предыдущие факты подчеркивают преимущества высококачественного выращивания комаров в свежекрове.
В целом среднее количество яиц, отложенных в нашем исследовании, было низким по сравнению с теми, которые были зарегистрированы в некоторых инсектицидах, но среднее количество яйцеклеток было сопоставимо с лабораторным штаммом A. gambiae, питаемым человеческой кровью (22,6 и 5,5 яйца/женщины)23. Никаких значительных статистических различий не наблюдалось между нашими экспериментальными группами, питающимися либо свежей кровью, либо искусственными блюдами(таблица 2),что свидетельствует о том, что внедрение искусственных мембранных систем кормления с нашей сформулировать диету достаточно для поддержания и распространения колоний комаров Anopheles в неволе.
Искусственное питание без крови может поддерживать Aedes колоний22, но при применении к комарам Anopheles они имеют ограниченный или не успех11. Недавно было описано 24-кратное искусственное питание на плазме для комаров Anopheles, однако показатели кормления и репродуктивный потенциал были низкими. Наши результаты представляют собой значительный прогресс в состоянии современных (рассмотрены Гонсалес и Хансен11), как наши сформулированы r-liq_diet имели аналогичную или лучшую производительность, чем стандартные позвоночных крови еды. Дальнейшие улучшения стабильности и стоимости хранилища должны расширить сферу его применения.

Болезни, передаваемые через переносчики, затрагивают несколько миллионов людей во всем мире и ежегодно приводят к миллионам случаев смерти. Они передаются насекомыми, инфицированными болезнетведческих микроорганизмами (простейшие, вирусы), приобретенными при питании крови инфицированного хозяина. Впоследствии инфицированный вектор будет передавать возбудителя новому хозяину во время следующего приема пищи в крови. Малярия является самым смертоносным трансмиссивным заболеванием, которое передается несколькими различными видами комаров Anopheles и затрагивает 40% населения мира1. Малярийный паразит-протист ежегодно является причиной более 400 000 случаев смерти, большинство из которых составляют дети в возрасте до 5 лет (Всемирная организация здравоохранения). Самка комара Anopheles передает малярийного паразита рода Plasmodium между людьми и другими животными, когда он питается позвоночной крови, необходимый шаг для производства яйцеклеток и развития2.
Текущие стратегии искоренения малярии и других новых смертельных комаров переносчиков болезней опираются на разработку инновационных стратегий борьбы с комарами3,4,5,которые включают высвобождение в дикой природе большого числа комаров, выведенных в инсектурых. Однако важнейшим ограничивающим фактором является зависимость от запасов свежей крови для эффективного выращивания и размножения комаров. Переменный состав крови позвоночных может негативно влиять на плодородие комаров и пригодность потомства и может ограничить надежность и устойчивость колоний размножения в неволе. Программы по высвобождению и борьбе с комарами требуют крупномасштабных систем производства комаров и регулярного снабжения большим количеством крови позвоночных. Это является основным препятствием для производства комаров и поднимает ряд этических вопросов, связанных с использованием живых животных и материально-технических ограничений, вызванных связанными с этим требовательных правил безопасности. Это делает высокие расходы на содержание и безопасность колоний комаров и ставит под угрозу устойчивость нынешней практики разведения комаров, особенно в странах с низким уровнем дохода, где угроза малярии гораздо выше.
В последнее время исследования были сосредоточены на развитии заменителей крови, которые имитируют позвоночных пищи крови, но до сих пор, только ограниченный успех был достигнут6,7,8,9. Успешная искусственная диета должна (1) спровоцировать полный женский комаров engorgement, (2) вызвать производство vitellogenin, (3) производить большие партии жизнеспособных яиц, и (4) генерировать хитрость потомство10. Кроме того, искусственные диеты имеют стандартный состав и, таким образом, являются более надежными для производства комаров в исследовательских и контрольных целях. Успешные диеты без крови были разработаны для комаров Aedes (рассмотрены Гонсалес и Хансен11), но не для Anopheles spp. Существующие искусственные диеты содержат фагостимулулянт (например, ATP10), источник белка для созревания яйцеклеток6,12, углеводы в качестве источника энергии, и аминокислоты (аа)13, которые являются основополагающими для производства яиц и являются основным фактором для плодородия комаров14. Искусственная диета без крови также должна обеспечить холестерин15, который улучшает производство яиц. Здесь мы описываем искусственную свободную диету для самок комаров Anopheles и демонстрируем, что она имеет последовательную и эквивалентную производительность высококачественной позвоночной пищи крови.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adenosine 5&#39;-triphosphate (ATP) disodium salt hydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A2383</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA-Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A790G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>199342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified Eagle&#39;s medium (high glucose with L-glutamine)</td>
			<td>Lonza Bioscience</td>
			<td>BE12-604F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Entellan mounting medium</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1079610100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glassfeeder</td>
			<td>Local glazier</td>
			<td>by design</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Salt</td>
			<td>Pan Reac AppliChem</td>
			<td>A3004,0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imalg&#232;ne 1000</td>
			<td>Merial, Portugal</td>
			<td>01MER122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle 20 G x 1&#34; 0.9 x 25 mm needle</td>
			<td>Terumo Europe</td>
			<td>NN-2025R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6543-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rompun</td>
			<td>Bayer, Portugal</td>
			<td>7427831</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterilization Millex-HV 0,45</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLHVR25KS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 1ml, 27 G x &#189;&#34; 0.4 x 12 mm needle</td>
			<td>Terumo Europe</td>
			<td>BS-NIN2713</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teich Mix Astra Pond</td>
			<td>Astra</td>
			<td>4030733100957</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetra Goldfish Flakes</td>
			<td>Tetra</td>
			<td>4004218742642</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a blood-free diet to rear anopheline mosquitoes

Исследование малярии требует крупномасштабного размножения и условий производства комаров(Anopheles spp.) в неволе. Устойчивое и надежное производство комаров в настоящее время тормозится поставками свежей позвоночной крови. Альтернативы крови необходимы для содействия эффективным стратегиям борьбы с малярией и другими переносимыми болезнями, которые передаются насекомыми, питающимися кровью. Имея это в виду, искусственные жидкие диеты были сформулированы в качестве заменителей свежей крови позвоночных. Здесь мы сообщаем о бескровной искусственной жидкой диете, которая обеспечивает скорость кормления, похожую на кровь, и имитирует физиологические эффекты свежей позвоночной пищи в крови. Диета индуцирует созревание яичников и яйцеклеток комаров Anopheles, а также производит хорошую выживаемость личинок и развитие функциональных взрослых. Сформулированная безкровная жидкая диета является важным шагом вперед в направлении устойчивого размножения комаров в неволе и позволит сократить расходы на содержание колоний комаров и устранить необходимость в свежей крови позвоночных.

Приведенные ниже результаты сравнивают производительность самок комаров Anopheles, питаемых с сформулированной богатой искусственной едой (р-liq_diet) и комарами, питаемыми на первоначальной жидкой диете (i-liq_diet) или свежей кровяной мукой. Диета была протестирована в соответствии с схематическим протоколом, изображенным на рисунке 7. R-liq_diet описанная в настоящем номере является частью патента (PCT/IB2019/052967).
Процент полностью затяненных самок
Количество ангажированных самок комаров, которых кормят liq_diet (89%) значительно выше, чем количество выращенных самок, питающихся кровью (56%) (Рисунок 8).
Плодородность и плодородность
Для оценки качества питания i-liq_diet и r-liq_diet использовалась женская плодовитость и плодовитость в первом гонотрофном цикле. В среднем 24 и 11 яиц были отложены самками, питаемыми свежей позвоночной кровью, в то время как самки питались р-liq_diet откладывали в среднем 25 и 5 яиц(таблица 2). Откладка яйцеклеток не наблюдалась у самок, питавшихся i-liq_diet.
Смертность в F1
Пригодность комаров F1 оценивалась между колониями, питаемыми позвоночной кровью, или р-liq_diet. Были зарегистрированы личинки, куски и взрослая смертность. Вариабельность (стандартная погрешность среднего «SEM») была выше у кровопроитых комаров(рисунок 9 и таблица 2)по отношению к комарам, питаемым р-liq_diet. Поколение комаров F1, питаемых либо кровью, либо liq_diet имели сопоставимые показатели смертности и выживаемости.
Ожидаемая продолжительность жизни F1
По оценкам Центра по контролю и профилактике заболеваний, дикие взрослые самки комаров живут до месяца, но, вероятно, не выживают более 1–2 недель и что самцы живут около недели и питаются исключительно нектаром и другими источниками сахара. Отмечается, что различия в родительском питании могут повлиять на выживание потомства комаров17. В нашем эксперименте, взрослые женщины и мужчины в крови (женщины 24,5 и 6,8; мужчины 18,5 и 6,9) и r-liq_diet (женщины: 22,5 и 8,1; мужчины: 11,9 и 6,9) группы имели аналогичные средние продолжительности жизни(таблица 3) и женщины показали увеличение продолжительности жизни по сравнению с мужчинами.
Размер кузова F1
Длина крыла использовалась в качестве индикатора размера тела взрослого человека. По сравнению с другими видами, Anopheles взрослых малых и средних комаров с длиной крыла от 2,8 до 4,4 мм длиной крыла18. Взрослый размер тела комаров F1 Anopheles кормили r-liq_diet был в пределах ожидаемого диапазона и был похож на кровоточенных насекомых комаров(рисунок 10).
Статистический анализ
Представленные данные представляют собой среднее, по крайней мере, трех независимых экспериментов (если не указано иное). Бары ошибок представляют SEM. Когда данные следовали за гауссианским распределением, независимые группы сравнивались с помощью теста Студента, в противном случае тест Манн-Уитни был применен. Различия между искусственными группами, питаемыми диетой, были проанализированы с помощью точного теста Фишера и были признаны значительными на уровне P 0.05.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60144/60144fig1a.jpg"> Рисунок 1: сбор крови мыши CD1 путем внутрисердечного прокола. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60144/60144fig01large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60144/60144fig2a.jpg"> Рисунок 2: Стандартный аппарат искусственного кормления. Стеклянная фидер содержит р-liq_diet, которая подается самкам комаров Anopheles. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60144/60144fig02large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60144/60144fig03v3.jpg"> Рисунок 3: Комары Anopheles после искусственного кормления. Слева направо: полностью engorged женщина, которая была предложена r-liq_diet, не-engorged женщина, которая была предложена r-liq_diet, мужчина, и полностью engorged женщина, которая была предложена мышь крови. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60144/60144fig03largev3.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60144/60144fig04.jpg"> Рисунок 4: Яйца Анофелеса отложили 48 ч после кормления самок с р-liq_diet. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60144/60144fig4alarge.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60144/60144fig05.jpg"> Рисунок 5: Личинки L2 этапы, которые развивались из яиц и были собраны на фильтровальной бумаге и помещены в лотки, содержащие дистиллированную воду. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60144/60144fig05large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60144/60144fig06.jpg"> Рисунок 6: Правое крыло из поколения F1 самок комаров Anopheles coluzzii. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60144/60144fig06large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60144/60144fig07v3.jpg"> Рисунок 7: Схематический протокол искусственного тестирования диеты. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60144/60144fig07largev3.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60144/60144fig08v3.jpg"> Рисунок 8: Показатели кормления самок комаров питаются либо искусственными диетами, либо кровью. Звездочки указывают на значительные различия между комарами, питаемыми диетами r-жидкости и i-жидкости, и группой контроля, питаемых кровью. Точный тест двустороннего Фишера:«P» 0.0001 (относительный риск: 0.4828, 95% уверенный уровень »CL»: 0.3776 до 0.6194) для r-жидкой диеты против крови,P 0.0335 (относительный риск: 1.379, 95% CL: 1.044 до 8.6. Синий: некормленный; красный: кормили. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60144/60144fig08largev3.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 9" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60144/60144fig09v3.jpg"> Рисунок 9: Влияние сформулированного бескровного приема пищи на смертность и соотношение мужчин и женщин комаров F1 Anopheles coluzzii. Было проведено три независимых эксперимента, каждый из которых использует 30 комаров на диету. Неспаренный т-тест не показал существенных различий между группой, накормленной кровью, и группой р-liq_diet (значенияP варьировались от 0,5047 до 0,8491). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60144/60144fig09largev3.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<img alt="Figure 10" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60144/60144fig10v3.jpg"> Рисунок 10: Длина крыла. Расстояние от осевого разреза до вены R4'5, за исключением бахромы seta был использован для определения длины крыла. Размер был оценен для 5 женщин и 5 мужчин из каждой диетической группы (средний И SEM). Значения представлены в качестве среднего значения - SEM. Лосось: r-liq_diet; красный: позвоночных крови. Непарный t-тест; женское левое крыло: т 1.300, дф No 8, П - 0,2298; мужское левое крыло: т 2.400, дф No 8, П 0.0432; женское правое крыло: т 1.300, дф No 8, П 0.2298; мужское правое крыло: т 2.277, дф No 7, П 0,0569. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60144/60144fig10largev3.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Компоненты</td>
			<td>г/л</td>
		</tr>
<tr>
<td>«Аденозин трифосфат</td>
			<td>0.55</td>
		</tr>
<tr>
<td>«Бовинский сывороточный альбомин</td>
			<td>200</td>
		</tr>
<tr>
<td>(Холестерин)</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>Анисхорид кальция</td>
			<td>0.2</td>
		</tr>
<tr>
<td>Хлорид холина</td>
			<td>0.004</td>
		</tr>
<tr>
<td>D-кальций пантотенат (витамин В5)</td>
			<td>0.004</td>
		</tr>
<tr>
<td>D-глюкоза ангидроус</td>
			<td>4.5</td>
		</tr>
<tr>
<td>Феррик нитрат неагидрат</td>
			<td>0.0001</td>
		</tr>
<tr>
<td>Фолиевая кислота</td>
			<td>0.004</td>
		</tr>
<tr>
<td>Глицин</td>
			<td>0.03</td>
		</tr>
<tr>
<td>I-инозитол</td>
			<td>0.007</td>
		</tr>
<tr>
<td>L-аргинин моногидрохлорид</td>
			<td>0.084</td>
		</tr>
<tr>
<td>L-цистин дигидрохлорид</td>
			<td>0.063</td>
		</tr>
<tr>
<td>L-глутамин</td>
			<td>0.584</td>
		</tr>
<tr>
<td>L-гистидин моногидрохлорид моногидрат</td>
			<td>0.042</td>
		</tr>
<tr>
<td>L-изолеуцин</td>
			<td>0.105</td>
		</tr>
<tr>
<td>L-лейцин</td>
			<td>0.105</td>
		</tr>
<tr>
<td>L-лизин моногидрохлорид</td>
			<td>0.146</td>
		</tr>
<tr>
<td>L-метионин</td>
			<td>0.03</td>
		</tr>
<tr>
<td>L-фенилаланин</td>
			<td>0.066</td>
		</tr>
<tr>
<td>L-серин</td>
			<td>0.042</td>
		</tr>
<tr>
<td>L-трионин</td>
			<td>0.095</td>
		</tr>
<tr>
<td>L-триптофан</td>
			<td>0.016</td>
		</tr>
<tr>
<td>L-тирозин динатрия дигидрат соли</td>
			<td>0.104</td>
		</tr>
<tr>
<td>L-валин</td>
			<td>0.094</td>
		</tr>
<tr>
<td>Сульфат магния ангидроус</td>
			<td>0.098</td>
		</tr>
<tr>
<td>Ниацинамид (никотинамид)</td>
			<td>0.004</td>
		</tr>
<tr>
<td>Фенол красный</td>
			<td>0.015</td>
		</tr>
<tr>
<td>Хлорид калия</td>
			<td>0.4</td>
		</tr>
<tr>
<td>Пиридоксин Моногидрохлорид</td>
			<td>0.004</td>
		</tr>
<tr>
<td>Пирувичная кислотная соль натрия</td>
			<td>0.011</td>
		</tr>
<tr>
<td>Рибофлавин (витамин В2)</td>
			<td>0.0004</td>
		</tr>
<tr>
<td>Бикарбонат натрия</td>
			<td>3.7</td>
		</tr>
<tr>
<td>Хлорид натрия</td>
			<td>6.4</td>
		</tr>
<tr>
<td>Монобасичный ангидроус фосфат натрия</td>
			<td>0.109</td>
		</tr>
<tr>
<td>Тиамин амоногидрохлорид (витамин В1)</td>
			<td>0.004</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">«Только в r-liq_diet</td>
		</tr>
</tbody></table>Таблица 1: Состав i-жидкой диеты и r-жидкой диеты.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>Общее количество яиц (- SEM)</td>
			<td>Яйца/женщины (СЭМ)</td>
		</tr>
<tr>
<td>Крови</td>
			<td>733 х 330</td>
			<td>24 и 11</td>
		</tr>
<tr>
<td>r-liq_diet</td>
			<td>763 х 164</td>
			<td>25 х 5</td>
		</tr>
<tr>
<td>i-liq_diet</td>
			<td>0</td>
			<td>0</td>
		</tr>
</tbody></table>Таблица 2: Партии яиц производства самок Anopheles coluzzii. Для каждой экспериментальной диеты было проведено три независимых эксперимента с использованием 30 самок комаров в каждом из них.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>Самки (дни и SEM)</td>
			<td>Самцы (дни и SEM)</td>
		</tr>
<tr>
<td>Крови</td>
			<td>24,5 и 6,8</td>
			<td>18,5 и 6,9</td>
		</tr>
<tr>
<td>r-liq_diet</td>
			<td>22,5 и 8,1</td>
			<td>11,9 и 6,9</td>
		</tr>
</tbody></table>Таблица 3: Ожидаемая продолжительность жизни комаров F1 Anopheles. Долговечность комаров F1 от искусственно кормили F0 была оценена путем записи даты рождения и смерти каждого комара из той же диетической группы (15 женщин и 15 мужчин последовали). Результаты представлены как средняя продолжительность жизни комаров в группе диеты.

Watch this Scientific Journal Video about A Blood-Free Diet to Rear Anopheline Mosquitoes at JoVE.com

A Blood-Free Diet to Rear Anopheline Mosquitoes

Представлен протокол для разработки бескровной искусственной диеты для кормления комаров Anopheles в неволе. Эта диета имеет аналогичную производительность позвоночных крови и вызывает oogenesis и созревания яйцеклеток и производит жизнеспособного потомства взрослых.

Кровь-бесплатная диета для задних комаров анофелин

Malaria research requires large-scale breeding and production conditions for mosquitoes (Anopheles spp.) in captivity. The sustainable and reliable ...

Малярийные паразиты, такие как комары, которые играют важную роль в распространении болезни. До сих пор невозможно было вырастить малярийных комаров без крови. И чтобы преодолеть это ограничение, наш протокол описывает заменитель крови диеты, которая способна поддерживать размножение комаров в насекомых.Использование без крови диеты является весьма выгодным по сравнению с кровью. Диета без крови не имеет этических ограничений, как использование человеческой крови, или экспериментальных животных. Замена животных на эксперименты является частью нашей трех R политики.Заменить, уменьшить, уточнить. Не использование крови снижает затраты, а логистика связана со сбором, хранением и обслуживанием красной крови. Использование искусственных диет может облегчить тестирование молекул антиплазмодия.До сих пор мы тестировали нашу диету с использованием различных видов анофелей. Во всех из них, диета была хорошо engorged самок и позволило производство яиц и укладки. Мы считаем, что эта диета имеет потенциальное использование для выращивания других видов комаров.На самом деле, сейчас мы тестируем его на эды, переносчик многих заболеваний, таких как лихорадка денге, вирус Зика или желтая лихорадка. Поддержание anopheles coluzzii yaonde штамм комаров в комнате при 26 градусов по Цельсию, 75% влажности, и под 12 часов до 12 часов светло-темный цикл. Дом комаров, использующих стандартные условия насекомых в одной клетке, чтобы гарантировать спаривание.Используйте пластиковую пипетку для сбора куколок комаров в небольшой контейнер для воды. Поместите контейнер в клетку комаров, чтобы взрослые комары выйти и спариваться. Обеспечить 10%-глюкозный кормовой раствор в клетке.Через три дня после появления используйте аспиратор, чтобы собрать необходимое количество самок из клетки в бумажный стакан. Чтобы отличить, самки больше и мужчины имеют более широкий и пернатый хоботок. За день до кормления тропы, удалить 10%глюкозы кормления раствор.На следующий день, подготовить искусственные жидкие диеты в стерильных условиях в шкафу ламинарного потока в соответствии с рукописью. Добавьте все ингредиенты в пластиковую трубку. Смешайте все ингредиенты тщательно и фильтр с помощью микрофильтра 0,45 микрофильтра.Заполните стерильный 1 миллилитр шприц оснащен 27 калибровочных поудых иглы со 100 микролитров один миллиграмм на миллилитр гепарина. Затем, анестезировать шесть-восемь недель CD одной самки мышей с кетамином и ксилазином, используя внутри перитонеальный маршрут. Оцените, отображает ли мышь какую-либо мышечную реакцию и реакцию на различные физические раздражители.Выполните сердечный прокол. Затем соберите кровь из мыши в микротрубку и поддерживать кровь при 37 градусах по Цельсию в водяной бане. Затем соберите около 30 самок комаров из клетки с помощью аспиратора.Перенесите самок комаров на 500 миллилитров бумажных стаканчиков и накройте тонкой сеткой москитной сетки, чтобы они не могли избежать. Растянуть парафильм мембраны через рот стеклянной подачи, чтобы содержать еду. Нанесите стеклянный колокол искусственного кормления аппарат подключен к пластиковым трубам в верхней части каждой чашки.Обеспечить постоянный поток воды в цилиндрические трубки и кормушки, чтобы температура внутри хранится на приблизительно 37,5 градусов по Цельсию. Нанесите один миллилитр довоенной жидкой диеты при 37 градусах по Цельсию или свежую кровь мыши в стеклянную кормушки. Кормите комаров в течение 60 минут в темноте при 26 градусах по Цельсию.После искусственного кормления, холодный обезболить комаров при 20 градусах по Цельсию в течение 30 секунд. Затем поместите комаров в рефрижераторную чашку Петри. Запись числа полностью engorged самки комаров.Отдельные 30 полностью закосинули самок и посадили их в новую клетку. Теперь поместите увлажненной фильтровальной бумаги в нижней части каждой клетки. Держите комаров на 26 градусов по Цельсию, 75% влажности, и под 12 часов до 12 часов светло-темный цикл с 10%глюкозы ad libitum.В 96 часов и 120 часов после кормления, подсчитайте яйца с помощью портативного увеличительного стекла. Затопите фильтровальную бумагу дистиллированной водой, чтобы собрать яйца в лотки, наполненные дистиллированной водой. Кормите личинок ежедневно примерно 13 миллиграммами молотой рыбной пищи на поднос.Удалите мертвых куколок и личинок с пластиковой пипеткой ежедневно. Когда все куколки превратились во взрослых, подсчитайте количество взрослых самцов и самок, зарегистрируйте даты вылупления и смерти и рассчитайте показатели смертности. Чтобы проверить на долговечность, собрать 15 взрослых мужчин и 15 взрослых женщин из поколения F1 каждой группы диеты в бумажный стакан.Кормите взрослых 10%-глюкозный раствор ad libitum. Используйте пинцет или кисть, чтобы удалить мертвых взрослых ежедневно. Поддерживайте комаров при одинаковой температуре, влажности, условиях светового цикла и режиме кормления сахаром.Зарегистрируйте даты смерти и рассчитайте продолжительность жизни. Для измерения длины крыла, холодный обезболить пятидневный F1 мужчин и женщин взрослых комаров из каждой группы диеты на 20 градусов по Цельсию в течение 90 секунд. Под стереоскопом аккуратно схватите грудную клетку каждого комара типсами и поместите их вентральную сторону вверх.Соберите оба крыла с помощью скальпеля, и поместите их на чистый слайд микроскопа, содержащий высушенную каплю монтажной среды для дальнейшего измерения с помощью градуированных окуляр. Измерьте длину крыла с помощью стереоскопа с помощью микрометра. В этом исследовании, производительность самки комаров anopheles кормили на сформулированы богатые искусственной еды и комаров кормили на первоначальной жидкой диеты, или свежие муки крови был сравнен.Число инфицированных самок комаров, питаемых богатой искусственной едой, на 89% было значительно выше, чем число женщин, питахся кровью, на 56%Поколение комаров F1, питались либо кровью, либо богатой искусственной едой, имели сопоставимую смертность и выживаемость. Вариативность была выше в крови кормили комаров по сравнению с комарами кормили с богатой искусственной еды. С точки зрения размера тела взрослого человека комары F1 anopheles, питаемые богатой искусственной едой, были в пределах ожидаемого диапазона и были похожи на комаров, питаемых кровью насекомых.На мой взгляд, очень важно правильно собрать фидееры с парафильмом, чтобы избежать его разрыва. Если мембрана не очень хорошо прикреплена к стеклянной кормушки, вы можете потерять еду и, вероятно, потерять некоторые из комаров, поскольку они могут быть покрыты едой и умереть. Мы хотели бы выполнить двойной выбор притяжения анализа, например, с помощью олфактометра, чтобы мы могли на самом деле оценить, если наши женщины больше привлекают к искусственной диете или крови.Кроме того, мы сейчас лиофилизации искусственной диеты и изучения его стабильности среди различных температур в течение длительного времени. Помимо очевидных улучшений стабильности и хранения, что мы работаем, долгосрочное использование диеты на комаров фитнес и физиологии должны быть исследованы. Я считаю, что производство анофелей без крови будет способствовать чрезвычайно векторных исследований и внедрения средств контроля, которые зависят от большого числа комаров.

Research

JoVE Journal

Biology

Injection of An. stephensi Embryos to Generate Malaria-resistant Mosquitoes

Введение. stephensi Эмбрионы для генерации устойчивых к малярии комаров

The introduction of exogenous genes into the genomes of mosquitoes requires microinjection techniques tailored to the specific species of interest. This ...

Microinjection of A. aegypti Embryos to Obtain Transgenic Mosquitoes

Микроинъекция А. Эмбрионы aegypti получить Трансгенные комары

In this video, Nijole Jasinskiene demonstrates the methodology employed to generate transgenic Aedes aegypti mosquitoes, which are vectors for dengue ...

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes (A. aegypti) and Infection Phenotype Determination

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes A. aegypti and Infection Phenotype Determination

Протокол денге инфекций в Комары (A. aegypti) и определение инфекции Фенотип

The purpose of this procedure is to infect the Aedes mosquito with dengue virus in a laboratory condition and examine the infection level and dynamic of ...

Dissection of Midgut and Salivary Glands from Ae. aegypti Mosquitoes

Препарирование Средняя кишка и слюнных желез от Ae. aegypti комаров

The mosquito midgut and salivary glands are key entry and exit points for pathogens such as Plasmodium parasites and Dengue viruses. This video protocol ...

Protocol for RNAi Assays in Adult Mosquitoes (A. gambiae)

Protocol for RNAi Assays in Adult Mosquitoes A. gambiae

Протокол Анализы RNAi у взрослых комаров (А. gambiae)

Reverse genetic approaches have proven extremely useful for determining  which genes underly resistance to vector pathogens in mosquitoes.  This video ...

Preventing the Spread of Malaria and Dengue Fever Using Genetically Modified Mosquitoes

Предотвращение распространения малярии и лихорадки денге с использованием генетически модифицированных комаров

In this candid interview, Anthony A. James explains how mosquito genetics can be exploited to control malaria and dengue transmission.   Population ...

A Multi-detection Assay for Malaria Transmitting Mosquitoes

Анализ Multi-обнаружения малярии комарами

The Anopheles gambiae species complex includes the major malaria transmitting mosquitoes in Africa. Because these species are of such medical importance, ...

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Maintaining Aedes aegypti Mosquitoes Infected with Wolbachia

Поддержание инфицированных комаров Aedes aegypti с Wolbachia

Aedes aegypti mosquitoes experimentally infected with Wolbachia are being utilized in programs to control the spread of arboviruses such as dengue, ...

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented (CDE) Diet Model of Chronic Liver Injury

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented CDE Diet Model of Chronic Liver Injury

Мышиных холин недостаточным, дополнены Ethionine (CDE) модель хронической травмы печени диета

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual ...

Protocols for Testing the Toxicity of Novel Insecticidal Chemistries to Mosquitoes

Протоколы для испытания на токсичность новых инсектицидных химия комаров

New classes of insecticides with novel modes of action are needed to control insecticide resistant populations of mosquitoes that transmit diseases such ...