Name: isolation of specific neuron populations from roundworm caenorhabditis elegans
Uploaded: 2019-08-06T15:00:00
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我们感谢詹妮弗·福克斯博士和哈利蒙丘克实验室的成员有见地的评论。我们感谢国家卫生研究院(R01 GM108975 至 O.K. 和 T32 GM107001-01A1 到 E.M.G.)的支持。

1. 准备和收集用于细胞分离的老化蠕虫
注:下面解释的是从明尼苏达大学Caenorhabdis遗传学中心(CGC)菌株库获得的胆碱能神经元从转基因unc-17::GFP菌株(OH13083)分离。当务之急是保持无菌条件,以防止真菌或细菌的污染。
<ol><li>通过T.Stiernagle16所述的漂白方法制备和同步蠕虫。对于老化实验,板蠕虫对线虫生长介质(NGM)板含有25μM氟氧尿素(FuDR)水溶液,以?...

<ol>
	<li>Sulston, J. E., Schierenberg, E., White, J. G., Thomson, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+embryonic+cell+lineage+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">The embryonic cell lineage of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Developmental Biology. 100, 64-119 (1983).</li><li>White, J. G., Southgate, E., Thomson, J. N., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+nervous+system+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">The structure of the nervous system of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B. 314, 1-340 (1986).</li><li>Zeng, H., Sanes, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+cell-type+classification:+challenges,+opportunities+and+the+path+forward.">Neuronal cell-type classification: challenges, opportunities and the path forward.</a> Nature Reviews in Neuroscience. 18, 530-546 (2017).</li><li>Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+biology+of+protein+misfolding:+The+examples+of+Alzheimer&#8217;s+and+Parkinson&#8217;s+disease.">Cell biology of protein misfolding: The examples of Alzheimer&#8217;s and Parkinson&#8217;s disease.</a> Nature Cell Biology. 6, 1054-1061 (2004).</li><li>Choi, M. L., Gandhi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crucial+role+of+protein+oligomerization+in+the+pathogenesis+of+Alzheimer&#8217;s+and+Parkinson&#8217;s+disease.">Crucial role of protein oligomerization in the pathogenesis of Alzheimer&#8217;s and Parkinson&#8217;s disease.</a> FEBS Journal. 285, 3631-3644 (2018).</li><li>Burman, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+fission+facilitates+the+selective+mitophagy+of+protein+aggregates.">Mitochondrial fission facilitates the selective mitophagy of protein aggregates.</a> Journal of Cell Biology. 210, 3231-3247 (2017).</li><li>Shpilka, T., Haynes, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mitochondrial+UPR:+mechanisms,+physiological+functions+and+implications.">The mitochondrial UPR: mechanisms, physiological functions and implications.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 19, 109-120 (2018).</li><li>Haynes, C. M., Petrova, K., Benedetti, C., Yang, Y., Ron, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ClpP+mediates+activation+of+a+mitochondrial+unfolded+protein+response+in+C.+elegans.">ClpP mediates activation of a mitochondrial unfolded protein response in C. elegans.</a> Developmental Cell. 13, 467-480 (2007).</li><li>Walter, P., Ron, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+unfolded+protein+response:+from+stress+pathway+to+homeostatic+regulation.">The unfolded protein response: from stress pathway to homeostatic regulation.</a> Science. 334, 1081-1086 (2011).</li><li>Chen, C., Chen, Y., Jiang, H., Chen, C., Pan, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuron+aging:+learning+from+C.+elegans.">Neuron aging: learning from C. elegans.</a> Journal of Molecular Signal. 8 (14), 1-10 (2013).</li><li>Germany, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+AAA-ATPase+Afg1+preserves+mitochondrial+fidelity+and+cellular+health+by+maintaining+mitochondrial+matrix+proteostasis.">The AAA-ATPase Afg1 preserves mitochondrial fidelity and cellular health by maintaining mitochondrial matrix proteostasis.</a> Journal of Cell Science. 131, jcs219956 (2018).</li><li>Zhang, S., Banerjee, D., Kuhn, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+culture+of+larval+cells+from+C.+elegans.">Isolation and culture of larval cells from C. elegans.</a> PLOS One. 6 (4), e19505 (2011).</li><li>Morley, J. F., Morimoto, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+longevity+in+Caenorhabditis+elegans+by+heat+shock+factor+and+molecular+chaperones.">Regulation of longevity in Caenorhabditis elegans by heat shock factor and molecular chaperones.</a> Molecular Biology of the Cell. 15, 657-664 (2004).</li><li>Pereira, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cellular+regulatory+map+of+the+cholinergic+nervous+system+of+C.+elegans.">A cellular regulatory map of the cholinergic nervous system of C. elegans.</a> eLife. 4, e12432 (2015).</li></ol>

圆虫C.elegans是研究神经元健康和疾病2的成熟和强大的模型。随着足够的基因工具来操纵这些动物和可管理的数量精确映射的各种神经元类型,大量的数据可以收集与相对较少的材料量。在这里,我们概述了一个优化的方法,从整个动物分离不同的神经元。通过破坏蠕虫的外角质蛋白,可以分离出各种细胞类型的浆料,包括神经元和肌肉细胞5。这些分离的细胞可...

在过去的几十年里,元动物模型生物Caenorhabdiselegans在研究神经元、神经元回路及其在生理和行为反应中的作用以及衰老相关的神经退行性方面一直是一个巨大的财富。疾病。C.elegans的一个独特特征是动物是透明的,允许绘制所有成年体细胞的谱系。C. elegans也含有可管理的神经元数量,导致神经系统的形态和连接性被很好地理解2。不变的细胞谱系、短寿命和丰富的高通量遗传工具可用于C.elegans,使其成为研究不同神经元种群中衰老的理想模型生物体。
神经元老化和神经退行性障碍是复杂的,每种疾病都有与之相关的独特的病理特征。然而,对于许多这些疾病,如帕金森氏症和阿尔茨海默氏症,一个常见的特征是错误折叠的蛋白质3,4,5的逐渐加载。在这两种疾病中,蛋白质在细胞内失折叠和聚集引起毒性,最终导致细胞死亡4,5。对于神经元的适当老化,线粒体的平衡,更具体地说,蛋白质平衡,是重要的,因为扰动和失地症可能导致神经退化6,7,8。细胞具有维持蛋白质平衡的各种机制,一种是展开的蛋白质反应(UPR)——一种经典途径,其中来自内质神经质(ER)的信号激活细胞内信号级联,导致转录响应9.与这个普世自来的ER类似,元群对线粒体蛋白平衡的丧失表现出类似的反应,即所谓的线粒体UPR(UPR mt)7、8。C. elegans似乎是最基础的有机体,有一个确认和明确定义的普天并乐通路7。
由于特定神经元群的内在连通性和复杂性3,因此很难评估较大网络中特定神经元群体的功能/功能。然而,由于细胞类型特异性疾病与复杂的病理,如那些与细胞蛋白质平衡受损相关的疾病,通常需要研究不同的神经元群体。在C.elegans中,特定的神经元群体可以进行基因操纵,从而在体内进行简单的观察。C. elegans的神经系统主要由神经元组成,其中胶质细胞的一小部分。在成年的赫马普罗狄特蠕虫中,大约有302个神经元,细分为100多个不同的类2,10。神经元,如胆碱能神经元在神经肌肉结中占主导地位,而多巴胺能神经元主要参与感觉10,11。随着运动活动和感觉能力随着年龄的增长而下降,详细阐述这些个体神经元缺陷的机械性见解非常重要。因此,需要一种简单而可靠的方法来分离感兴趣的完整细胞,以便进行后续的活体研究。
在这里,我们描述了一种优化的有效方法,用于快速分离表达绿色荧光蛋白(GFP)的特定神经元细胞。这种隔离方法可以对幼虫、幼虫或成年蠕虫执行。从幼虫中分离细胞之前,张等人曾发表于13,这里不讨论。这里很重要的一点就是,所有的蠕虫都需要处于同一生命阶段,以防止动物过度消化或受到不同生命阶段动物的污染。通过酶和机械破坏线虫角质层,外骨骼高胶原蛋白和其他结构蛋白质,各种各样的细胞可以分离13,14。然后,细胞可以通过流式细胞测定或抗体标记磁珠进行分离。通常,RNA通过苯酚和瓜尼丁等子黄酸酯法分离,以确保所需细胞群15的富集。非常小心,这些孤立的细胞可以保存在培养瓶或多井盘中。该方法代表了研究特定神经元的独特而强大的工具,具有分离活细胞和功能细胞的能力,以便进一步培养。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>6-well plate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-556-004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar, Molecular Biology Grade</td>
			<td>VWR</td>
			<td>A0930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>496189</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Contess Automated Cell Counter</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Z359629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DTT</td>
			<td>USBiological</td>
			<td>D8070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>2701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Omega Scientific</td>
			<td>FB-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorodeoxyuridine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F0503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH1133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>O395</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>USBiological</td>
			<td>P5110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>Kimberly-Clark Professionals</td>
			<td>7552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leibovitz&#39;s L-15 Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21083027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>USBiological</td>
			<td>M2090</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4&#183;7H2O</td>
			<td>USBiological</td>
			<td>S5199</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>VWR</td>
			<td>X190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOCl (Bleach)</td>
			<td>Clorox</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>O583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomicen</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptone Y</td>
			<td>USBiological</td>
			<td>P3306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pronase E</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7433</td>
			<td>protease mixture from Streptomyces griseus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>O227</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMT1-FLQC fluorescence stereomicroscope</td>
			<td>Tritech Research</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>USBiological</td>
			<td>S8010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperScript IV One-Step synthesis kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12594025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIzol</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15596026</td>
			<td>phenol and guanidine isothiocyanate solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Stain</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>T10Z82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-GFP magnetic beads</td>
			<td>MBL</td>
			<td>D153-11</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of specific neuron populations from roundworm caenorhabditis elegans

在衰老过程中,许多细胞积累高水平的损伤,导致细胞功能障碍,这是许多老年病和病理状况的基础。后线神经元代表受老化影响的主要细胞类型。虽然神经元老化的多种哺乳动物模型存在,但它们具有挑战性,而且建立成本高昂。类虫Caenorhabdiselegans是研究神经元老化的有力模型,因为这些动物的寿命短,有一个健壮的基因工具箱,并且有良好的目录神经系统。本文介绍的方法允许根据转基因绿色荧光蛋白(GFP)的表达对特定细胞进行无缝分离。在独特的细胞类型特异性启动子下表达GFP的转基因动物系被消化,以去除外角质,并轻轻机械地中断,产生含有各种细胞类型的浆料。然后,通过荧光激活细胞分类或抗GFP耦合磁珠将感兴趣的细胞从非目标细胞中分离出来。然后,分离的细胞可以在有限的时间内培养,或立即用于细胞特异性的体外分析,如实时定量PCR的转录分析。因此,该协议允许快速和可靠的分析细胞特异性反应在不同的神经元群体在C.elegans。

此处描述的协议允许将unc-17::GFP 阳性胆碱能神经元与圆虫C. elegans进行特定分离,以便后续的体外研究,如细胞类型特定的基因表达分析,以及最终贴片夹电生理学测量的短期培养。
图1显示非c-17::GFP阳性胆碱能神经元在其正常设置。unc-17基因在整个C.elegans体内表达,并编码为?...

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Isolation of Specific Neuron Populations from Roundworm Caenorhabditis elegans

特定神经元种群与圆虫卡埃纳哈布迪炎的分离

在这里,我们提出了一个方案,用于简单分离特定组活神经元细胞表达绿色荧光蛋白从转基因开诺哈布迪炎叶兰根线。这种方法使各种外体研究侧重于特定的神经元,并有能力分离细胞,以进一步的短期培养。

During the aging process, many cells accumulate high levels of damage leading to cellular dysfunction, which underlies many geriatric and pathological ...

该协议允许无缝隔离，培养和询问从C.elegans的特定细胞系的转录反应。该协议的主要优点是高度适应蠕虫的不同生命阶段或要分离的特定细胞类型。演示这个程序的将是我自己和娜塔莉亚扎海科，一个技术员从我们的实验室。收集动物后，在1600次g下离心5分钟。取出所有上一液，并在一毫升M9介质中重新暂停蠕虫。将悬浮液转移到 1.5 毫升微离心管。在 1600 次 g 下离心 5 分钟，以对蠕虫进行颗粒。然后加入200微升SDS-DTT缓冲液，在室温下孵育5分钟。如果用光学显微镜观察，蠕虫现在应该看起来会沿着身体起皱。接下来，加入800微升的冰冷隔离缓冲液，轻轻轻拂管子混合。在13，000倍的g和4摄氏度的离心机一分钟，以颗粒蠕虫。取出上流液，用一毫升隔离缓冲液清洗。重复离心和洗涤过程共五次，确保每次小心地取出隔离缓冲液。在此之后，加入100微升的蛋白酶混合物从链球菌，溶解在隔离缓冲液，到颗粒。在室温下孵育10至15分钟，确保通过用200微升微管尖端对管底部进行60至70次上下移液，进行机械干扰。要确定消化阶段，请取出一至五微升的消化混合物，将其滴到玻璃滑梯上，并使用组织培养显微镜进行检查。五到七分钟后，蠕虫碎片的角质层应该明显减少，细胞的泥浆很容易看到。通过添加900微升的市售莱博维茨的L-15介质，辅以10%FBS和青霉素链霉素，停止反应。在10，000倍g和4摄氏度下离心5分钟，以颗粒分离的碎片和细胞。每次洗涤使用一毫升介质用冷L-15补充介质再清洗两次颗粒细胞。将颗粒细胞重新在一毫升L-15补充介质中，在冰上离开30分钟。然后采取顶层，这是大约700至800微升，并转移到微离心管。使用自动细胞计数器或血度计测量10至25微升的分离细胞的细胞密度。分离细胞悬浮液中的离心细胞在10，000倍g和4摄氏度下悬浮5分钟。丢弃上流液，重新在L-15补充介质中重新增殖颗粒细胞，其细胞密度不超过每毫升600万个细胞，以避免流式细胞计过载。然后，使用能够对样品进行排序的流动细胞计，使用 GFP 阳性表达式对细胞进行排序。GFP 阴性细胞可用作非细胞类型特定分析的控件。之后，将分离的细胞板放入无菌六孔板的孔中，将板放入塑料容器中，加入湿巾或软纸巾，为细胞添加水分，并在20摄氏度下孵育。分离细胞悬浮液中的离心细胞在1.5毫升无RNase微离心管中，温度为10，000倍g，在4摄氏度下5分钟。使用微移子，去除上一杯，并添加100微升的M9介质，洗去L-15补充介质。接下来，将细胞在10000倍g和4摄氏度下离心5分钟，取出上光。重复此洗涤和离心过程三次，以确保所有介质都已移除，确保每次小心地去除上经。然后，在细胞中加入一毫升酚和瓜尼丁同位素解，并小心地将悬浮液上下移液。在室温下孵育混合物五分钟。在此之后，加入250微升氯仿，轻轻反转管15至20次。在室温下孵育五分钟。在10，000倍g和25摄氏度的离心机5分钟。使用微管小心地去除尽可能多的顶部水层，确保不打扰底部有机层。将底层转移到新的 1.5 毫升无 RNase 微离心管。到新管，加入500微升异丙醇，通过倒置管混合。在室温下孵育此溶液五分钟。然后在14，000次g和25摄氏度下将管离心20分钟。将样品放在冰上，并使用微管去除尽可能多的异丙醇。将无 RNase 双蒸馏水中一毫升 70% 乙醇轻轻加入管中，将其涂抹到管的一侧。在10，000倍g和25摄氏度的离心机5分钟。取出大部分乙醇，让管子在冰上风干三到五分钟。在此之后，加入15至20微升无RNase双蒸馏水。使用 260 纳米的分光光度计测量 RNA 浓度和纯度。在这项研究中，未-17：GFP阳性胆碱性神经元被提取，并从圆虫C.elegans中提取和分离，以便随后进行体外研究。unc-17基因在C.elegans体内表达，并编码为车辆乙酰胆碱跨膜运输器。这种基因的表达可以在头部、中半身和尾部神经元以及神经元投影中观察到。此处显示了分离后uns-17：GFP阳性神经元的代表性荧光微图，以及未修改的N2野生类动物的各负控制。当与莱博维茨的L-15介质和10%FBS补充时，分离的细胞可以存活长达三天。此处显示了来自 GFP 表达胆碱性神经元以及 GFP 表达肌肉细胞的 qPCR 代表性数据。成功分选细胞后，通过苯酚和瓜尼丁同位素方法分离RNA，然后使用合成试剂盒生产cDNA。胆碱神经元特异性基因，tph-1，色氨酸羟基酶，和snb-1，突触囊泡运输器，在uns-17：GFP分离细胞中升高。但是，此表达式并不存在于 myo-3：GFP 分离细胞中。与肌-2的肌肉特异性肌素重链记录表达相反，因为这种基因的表达仅限于孤立的肌肉细胞，而不是分离的胆碱细胞。充分孵化蠕虫非常重要。然而，蠕虫角质层的延长孵育可能导致蠕虫死亡或给动物额外的压力。分离后，细胞可以培养一段时间，也可以用于RNA分离和qRT-PCR分析。培养神经元可以通过贴片夹电泳测量进一步分析。这种技术可能有助于对特定细胞群进行体外分析，从而有助于我们更好地了解多细胞生物在其生命周期不同阶段的细胞特异性反应。由于本实验使用 SDS 和 DTT 等化学品，因此在制造和使用缓冲液时应遵循一般实验室安全程序。

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation of Specific Neuron Populations from Roundworm Caenorhabditis elegans

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

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生殖系化学毒性的利用线虫综合评估<em&gt;秀丽隐杆线虫</em

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科研

发育生物学

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