Name: isolation of specific neuron populations from roundworm caenorhabditis elegans
Uploaded: 2019-08-06T15:00:00
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Wir danken Dr. Jennifer Fox und den Mitgliedern des Khalimonchuk-Labors für aufschlussreiche Kommentare. Wir würdigen die Unterstützung der National Institutes of Health (R01 GM108975 an O.K. und T32 GM107001-01A1 an E.M.G.).

1. Vorbereitung und Sammlung von gealterten Würmern zur Zellisolierung
HINWEIS: Im Folgenden wird die Isolierung von cholinergen Neuronen aus dem transgenen Unc-17::GFP-Stamm (OH13083) aus dem Caenorhabditis Genetics Center (CGC) Stammlager der University of Minnesota erklärt. Es ist zwingend notwendig, sterile Bedingungen aufrechtzuerhalten, um eine Kontamination durch Pilze oder Bakterien zu verhindern.
<ol><li>Vorbereiten und Synchronisieren von Würmern über die Blei...

<ol>
	<li>Sulston, J. E., Schierenberg, E., White, J. G., Thomson, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+embryonic+cell+lineage+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">The embryonic cell lineage of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Developmental Biology. 100, 64-119 (1983).</li><li>White, J. G., Southgate, E., Thomson, J. N., Brenner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+nervous+system+of+the+nematode+Caenorhabditis+elegans.">The structure of the nervous system of the nematode Caenorhabditis elegans.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B. 314, 1-340 (1986).</li><li>Zeng, H., Sanes, J. 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Der Rundwurm C. elegans ist ein etabliertes und leistungsfähiges Modell zur Untersuchung der neuronalen Gesundheit und Krankheit2. Mit reichlich genetischen Werkzeugen, um diese Tiere zu manipulieren und einer überschaubaren Menge genau kartierter verschiedener Neuronentypen können mit einer relativ geringen Menge Material viele Daten gesammelt werden. Hier skizzieren wir eine optimierte Methode, um verschiedene Neuronen von ganzen Tieren zu isolieren. Durch die Störung der äußeren ...

In den letzten Jahrzehnten war der metazoische Modellorganismus Caenorhabditis elegans ein enormer Vorteil bei der Untersuchung von Neuronen, neuronalen Schaltkreisen und seiner Rolle bei physiologischen und Verhaltensreaktionen sowie alterungsassoziierten neurodegenerativen Krankheiten. Ein einzigartiges Merkmal von C. elegans ist, dass die Tiere transparent sind, so dass die Abstammung aller erwachsenen somatischen Zellen abgebildet werden kann1. C. elegans beherbergt auch überschaubare Menge an Neuronen, was dazu führt, dass die Morphologie und Konnektivität des Nervensystems gut verstanden wird2. Die invariante Zellabstammung, die kurze Lebensdauer und die Fülle der genetischen Werkzeuge mit hohem Durchsatz, die für C. elegans zur Verfügung stehen, machen es zu einem idealen Modellorganismus für die Untersuchung des Alterns in verschiedenen neuronalen Populationen.
Alterung von Neuronen und neurodegenerative Störungen sind komplex, und jede Störung hat einzigartige pathologische Signaturen damit verbunden. Jedoch, für viele dieser Erkrankungen, wie Parkinson und Alzheimer-Krankheit, ein gemeinsames Merkmal ist die fortschreitende Last von falsch gefalteten Proteinen3,4,5. Bei beiden Krankheiten verrenken sich Proteine und aggregieren innerhalb der Zelle, um Toxizität zu verursachen, was letztlich zum Zelltod4,5führt. Für die richtige Alterung der Neuronen ist die Homöostase der Mitochondrien, genauer gesagt Proteinhomöostase, wichtig, da Störungen und Dyshomöostase zu Neurodegeneration6,7,8führen können. Die Zellen sind mit verschiedenen Mechanismen zur Aufrechterhaltung der Proteinhomöostase ausgestattet, wobei einer die entfaltete Proteinantwort (UPR) ist – ein klassischer Signalweg, bei dem Signale von endoplasmatischem Retikulum (ER) intrazelluläre Signalkaskaden aktivieren, was zu einer transkriptionellen Antwort9. Ähnlich wie dieser UPRERzeigen Metazoen eine ähnliche Reaktion auf den Verlust der mitochondrialen Proteinhomöostase, der sogenannten mitochondrialen UPR (UPRmt)7,8. C. elegans scheint der basalste Organismus zu sein, der einen bestätigten und genau definierten UPR mt-Signalweghat 7.
Die Funktion/Dysfunktion bestimmter neuronaler Populationen innerhalb eines größeren Netzwerks kann aufgrund ihrer intrinsischen Konnektivität und Komplexität schwierig zu beurteilen sein3. Jedoch, Es besteht oft die Notwendigkeit, verschiedene neuronale Populationen aufgrund von Zelltyp-spezifischen Erkrankungen mit komplexen Pathologien zu studieren, wie diejenigen, die mit beeinträchtigten zellulären Protein Homöostase verbunden. In C. eleganskönnen spezifische neuronale Populationen genetisch manipuliert werden, was eine einfache Beobachtung in vivo ermöglicht. Das Nervensystem von C. elegans besteht in erster Linie aus Neuronen, mit einem kleinen Prozentsatz von Gliazellen. Bei erwachsenen Hermaphroditwürmern gibt es etwa 302 Neuronen, unterteiltin über 100 verschiedene Klassen 2,10. Neuronen wie cholinerge Neuronen überwiegen in neuromuskulären Knoten, während dopaminerge Neuronen sind in erster Linie in Sensationbeteiligt 10,11. Da sowohl die motorische Aktivität als auch die sensorischen Fähigkeiten mit dem Alter abnehmen, ist es wichtig, mechanistische Erkenntnisse über Defekte in diesen einzelnen Neuronen11,12zu beschreiben. Daher ist eine einfache und robuste Methode erforderlich, um intakte Zellen von Interesse für nachfolgende Ex-vivo-Studien zu isolieren.
Hier beschreiben wir eine optimierte effektive Methode zur schnellen Isolierung bestimmter neuronaler Zellen, die grünes fluoreszierendes Protein (GFP) aus C. elegans exdrücken. Diese Isolationsmethode kann bei Larven-, Jung- oder Erwachsenenwürmern durchgeführt werden. Die Isolierung von Zellen aus Larvenwürmern wurde zuvor von Zhang et al.13 veröffentlicht und wird hier nicht diskutiert. Ein wichtiger Hinweis hier ist, dass alle Würmer im gleichen Lebensstadium sein müssen, um eine Überverdauung des Tieres oder eine Kontamination durch Tiere in verschiedenen Lebensstadien zu verhindern. Durch enzymatische und mechanische Störung der Nematodenhaut, eines kollagenreichen Exoskeletts und anderer struktureller Proteine kann eine Vielzahl von Zellen isoliert werden13,14. Zellen können dann über Durchflusszytometrie oder Antikörper mit magnetischen Perlen isoliert werden. Typischerweise wird RNA über eine Phenol- und Guanidin-Isothiocyanat-Methode isoliert, um die Anreicherung der gewünschten Zellpopulation15zu gewährleisten. Mit viel Sorgfalt können diese isolierten Zellen in einem Kulturkolben oder Multi-Well-Gericht gepflegt werden. Diese Methode stellt ein einzigartiges und leistungsfähiges Werkzeug bei der Untersuchung bestimmter Neuronen dar und hat die Fähigkeit, lebende und funktionelle Zellen für die weitere Kultivierung zu isolieren.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>6-well plate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-556-004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar, Molecular Biology Grade</td>
			<td>VWR</td>
			<td>A0930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>496189</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Contess Automated Cell Counter</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Z359629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DTT</td>
			<td>USBiological</td>
			<td>D8070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Decon Labs</td>
			<td>2701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS</td>
			<td>Omega Scientific</td>
			<td>FB-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorodeoxyuridine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F0503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3375</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH1133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>O395</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>USBiological</td>
			<td>P5110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes</td>
			<td>Kimberly-Clark Professionals</td>
			<td>7552</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leibovitz&#39;s L-15 Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>21083027</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M8266</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>USBiological</td>
			<td>M2090</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4&#183;7H2O</td>
			<td>USBiological</td>
			<td>S5199</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>VWR</td>
			<td>X190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOCl (Bleach)</td>
			<td>Clorox</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>O583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomicen</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peptone Y</td>
			<td>USBiological</td>
			<td>P3306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pronase E</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>7433</td>
			<td>protease mixture from Streptomyces griseus</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SDS</td>
			<td>Amresco</td>
			<td>O227</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SMT1-FLQC fluorescence stereomicroscope</td>
			<td>Tritech Research</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>USBiological</td>
			<td>S8010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperScript IV One-Step synthesis kit</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>12594025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIzol</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15596026</td>
			<td>phenol and guanidine isothiocyanate solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Stain</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>T10Z82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#945;-GFP magnetic beads</td>
			<td>MBL</td>
			<td>D153-11</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of specific neuron populations from roundworm caenorhabditis elegans

Während des Alterungsprozesses akkumulieren viele Zellen hohe Schadensraten, die zu zellulärer Dysfunktion führen, die vielen geriatrischen und pathologischen Bedingungen zugrunde liegt. Postmitotische Neuronen stellen einen großen Zelltyp dar, der vom Altern betroffen ist. Obwohl mehrere Säugetiermodelle der neuronalen Alterung existieren, sind sie anspruchsvoll und teuer zu etablieren. Der Rundwurm Caenorhabditis elegans ist ein leistungsfähiges Modell zur Untersuchung der neuronalen Alterung, da diese Tiere eine kurze Lebensdauer, eine verfügbare robuste genetische Werkzeugkiste und ein gut katalogisiertes Nervensystem haben. Die hier vorgestellte Methode ermöglicht eine nahtlose Isolierung bestimmter Zellen auf der Grundlage der Expression eines transgenen grünen Fluoreszenzproteins (GFP). Transgene Tierlinien, die GFP unter unterschiedlichen, zelltypspezifischen Promotoren exzessiieren, werden verdaut, um die äußere Nagelhaut zu entfernen, und sanft mechanisch gestört, um Gülle zu produzieren, die verschiedene Zelltypen enthält. Die von Interesse geprägten Zellen werden dann durch fluoreszenzaktivierte Zellsortierung oder durch anti-GFP-gekoppelte magnetische Perlen von Nicht-Zielzellen getrennt. Die isolierten Zellen können dann für eine begrenzte Zeit kultiviert oder sofort für zellspezifische Ex-vivo-Analysen wie Transkriptionsanalysen durch quantitative PCR in Echtzeit verwendet werden. Somit ermöglicht dieses Protokoll eine schnelle und robuste Analyse zellspezifischer Reaktionen innerhalb verschiedener neuronaler Populationen in C. elegans.

Das hier beschriebene Protokoll ermöglicht eine spezifische Isolierung von unc-17::GFP-positive cholinerge Neuronen aus dem Rundwurm C. elegans für nachfolgende Ex-vivo-Studien wie zelltypspezifischeS Genexpressionsprofiling und kurzfristige Kultivierung für Patch-Clamp-Elektrophysiologiemessungen.
Abbildung 1 zeigt unc-17::GFP-positive cholinerge Neuronen in ihrer norm...

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Isolation of Specific Neuron Populations from Roundworm Caenorhabditis elegans

Isolierung spezifischer Neuronenpopulationen von Roundworm Caenorhabditis elegans

Hier stellen wir ein Protokoll zur einfachen Isolierung bestimmter Gruppen lebender neuronaler Zellen vor, die grünes fluoreszierendes Protein aus transgenen Caenorhabditis elegans-Linien exdrücken. Diese Methode ermöglicht eine Vielzahl von Ex-vivo-Studien, die sich auf bestimmte Neuronen konzentrieren und hat die Fähigkeit, Zellen für eine weitere kurzfristige Kultivierung zu isolieren.

During the aging process, many cells accumulate high levels of damage leading to cellular dysfunction, which underlies many geriatric and pathological ...

Dieses Protokoll ermöglicht die nahtlose Isolierung, Kultivierung und Abfrage von Transkriptionsreaktionen in einer bestimmten Zelllinie von C.elegans. Der Hauptvorteil dieses Protokolls ist die hohe Anpassungsfähigkeit an verschiedene Lebensstadien von Würmern oder bestimmten zellspezifischen Zu isolierten Zelltypen. Demonstrieren das Verfahren werden ich und Nataliya Zahayko, eine Technikerin aus unserem Labor.Nach dem Sammeln der Tiere zentrieren Sie sie fünf Minuten lang bei 1600 mal g. Entfernen Sie alle Überstand und setzen Sie die Würmer in einem Milliliter M9-Medien wieder aus. Übertragen Sie die Suspension in ein 1,5-Milliliter-Mikrozentrifugenrohr.Zentrifuge bei 1600 mal g für fünf Minuten, um die Würmer zu pellet. Dann 200 Mikroliter SDS-DTT-Puffer hinzufügen und bei Raumtemperatur fünf Minuten brüten. Die Würmer sollten nun am Körper gefaltet erscheinen, wenn sie unter einem Lichtmikroskop betrachtet werden.Als nächstes fügen Sie 800 Mikroliter eiskalten Isolationspuffer hinzu und mischen Sie, indem Sie das Rohr sanft flicken. Zentrifuge bei 13.000 mal g und bei vier Grad Celsius für eine Minute, um die Würmer zu pellet. Entfernen Sie den Überstand und waschen Sie ihn mit einem Milliliter Isolationspuffer.Wiederholen Sie den Zentrifugations- und Waschvorgang insgesamt fünfmal, und stellen Sie sicher, dass Der Isolationspuffer jedes Mal sorgfältig entfernt wird. Danach 100 Mikroliter Protease-Mischung aus Streptomyces griseus, gelöst im Isolationspuffer, in das Pellet geben. Bei Raumtemperatur 10 bis 15 Minuten inkubieren, um mechanische Störungen anzuwenden, indem Sie 60 bis 70 Mal mit einer 200-Mikroliter-Mikropipette-Spitze gegen den Boden des Rohres auf und ab pfeifen.Um das Stadium der Verdauung zu bestimmen, entfernen Sie ein bis fünf Mikroliter der Verdauungsmischung, lassen Sie es auf eine Glasrutsche fallen und inspizieren Sie es mit einem Gewebekulturmikroskop. Nach fünf bis sieben Minuten sollten Wurmfragmente eine sichtbar reduzierte Nagelhaut haben und eine Gülle von Zellen wird leicht sichtbar sein. Halten Sie die Reaktion durch Zugabe von 900 Mikroliter n. B. des handelsüblichen Leibovitz-Mediums L-15, ergänzt durch 10%FBS und Penicillin-Streptomycin.Zentrifugieren Bei 10.000 mal g und bei vier Grad Celsius für fünf Minuten, um isolierte Fragmente und Zellen zu pellet. Waschen Sie die pelletierten Zellen zweimal mit kalten L-15 ergänzten Medien mit einem Milliliter Medien pro Wäsche. Setzen Sie die pelletierten Zellen in einem Milliliter L-15 ergänztMedien, und lassen Sie auf Eis für 30 Minuten.Nehmen Sie dann die oberste Schicht, die etwa 700 bis 800 Mikroliter beträgt, und übertragen Sie sie in ein Mikrozentrifugenrohr. Verwenden Sie einen automatisierten Zellzähler oder Einmagmactometer, um die Zelldichte von 10 bis 25 Mikroliter isolierter Zellen zu messen. Zentrifugenzellen aus der isolierten Zellsuspension bei 10 000 mal g und bei vier Grad Celsius für fünf Minuten.Entsorgen Sie den Überstand und setzen Sie die pelletierten Zellen in L-15 auf eine Zelldichte von nicht mehr als sechs Millionen Zellen pro Milliliter auf, um eine Überlastung des Durchflusszytometers zu vermeiden. Sortieren Sie dann Zellen nach GFP-positiver Expression mithilfe eines Durchflusszytometers, das Proben sortieren kann. GFP-negative Zellen können als Steuerelement für nicht zelltypspezifische Analysen verwendet werden.Danach die isolierten Zellen in die Brunnen einer sterilen Sechs-Brunnen-Platte geben, die Platte in einen Kunststoffbehälter geben, ein feuchtes Wisch- oder Weichteilpapier hinzufügen, um den Zellen Feuchtigkeit zu verleihen, und bei 20 Grad Celsius brüten. Zentrifugenzellen aus der isolierten Zellsuspension in einem 1,5-Milliliter-RNase-freien Mikrozentrifugenrohr bei 10 000 mal g und bei vier Grad Celsius für fünf Minuten. Mit einer Mikropipette, entfernen Sie den Überstand und fügen Sie 100 Mikroliter M9 Medium, um das L-15 ergänztmedium zu waschen.Als nächstes zentrifugieren Sie die Zellen bei 10.000 mal g und bei vier Grad Celsius für fünf Minuten und entfernen Sie den Überstand. Wiederholen Sie diesen Wasch- und Zentrifugationsprozess dreimal insgesamt, um sicherzustellen, dass alle Medien entfernt werden, und stellen Sie sicher, dass Sie den Überstand jedes Mal sorgfältig entfernen. Dann fügen Sie einen Milliliter Phenol und Guanidin Isothiocyanat Lösung zu den Zellen und Pipette die Suspension auf und ab sorgfältig.Inkubieren Sie die Mischung bei Raumtemperatur für fünf Minuten. Danach 250 Mikroliter Chloroform hinzufügen und das Rohr 15 bis 20 Mal sanft invertieren. Bei Raumtemperatur fünf Minuten inkubieren.Zentrifuge bei 10.000 mal g und bei 25 Grad Celsius für fünf Minuten. Verwenden Sie eine Mikropipette, um so viel wie möglich von der oberen wässrigen Schicht sorgfältig zu entfernen, um sicherzustellen, dass die unteren organischen Schichten nicht stören. Übertragen Sie die untere Schicht in ein neues 1,5 Milliliter RNase-freies Mikrozentrifugenrohr.Zum neuen Rohr 500 Mikroliter Isopropanol hinzufügen und durch Invertieren des Rohres mischen. Inkubieren Sie diese Lösung bei Raumtemperatur für fünf Minuten. Dann zentrifugieren Sie das Rohr bei 14.000 mal g und bei 25 Grad Celsius für 20 Minuten.Legen Sie die Proben auf Eis und verwenden Sie eine Mikropipette, um so viel Isopropanol wie möglich zu entfernen. Fügen Sie dem Rohr vorsichtig einen Milliliter 70% Ethanol in RNase-freies doppeldestilliertes Wasser in das Rohr, indem Sie es auf die Seite des Rohres auftragen. Zentrifuge bei 10.000 mal g und bei 25 Grad Celsius für fünf Minuten.Entfernen Sie den größten Teil des Ethanols und lassen Sie die Röhre drei bis fünf Minuten auf Eis trocknen. Danach 15 bis 20 Mikroliter RNase-freies doppeldestilliertes Wasser hinzufügen. Verwenden Sie ein Spektralphotometer mit 260 Nanometern, um die RNA-Konzentration und -Reinheit zu messen.In dieser Studie werden unc-17:GFP-positive cholinerge Neuronen extrahiert und aus dem Rundwurm C.elegans für nachfolgende Ex-vivo-Studien isoliert. Das Unc-17-Gen wird im gesamten C.elegans-Körper exprimiert und kodiert für einen vesikulären Acetylcholin-Transmembrantransporter. Die Expression dieses Gens kann in Kopf-, Mittelkörper- und Schwanzneuronen und Neuronen-Projektionen beobachtet werden.Repräsentative Fluoreszenzmikroskopie-Mikroskope von unc-17:GFP-positiven Neuronen nach Isolation sowie eine entsprechende Negativkontrolle von unveränderten N2-Wildtieren werden hier gezeigt. Isolierte Zellen können bis zu drei Tage am Leben bleiben, wenn sie mit Leibovitz' L-15 Medium und 10% FBS ergänzt werden. Repräsentative Daten von qPCR aus GFP-exezisenden cholinergen Neuronen sowie GFP-exemitten Muskelzellen werden hier gezeigt.Nach erfolgreicher Sortierung von Zellen wird die RNA über eine Phenol- und Guanidin-Isothiocyanat-Methode isoliert, nach der cDNA mit einem Synthesekit hergestellt wurde. Die Expression cholinergen neuronspezifischer Gene, tph-1, einer Tryptophan-Hydroxylase und snb-1, einem synaptischen Vesikeltransporter, ist in unc-17:GFP-isolierten Zellen erhöht. Dieser Ausdruck ist jedoch in myo-3:GFP isolierten Zellen nicht vorhanden.Das Gegenteil gilt für die Expression der muskelspezifischen myosinlastigen Kettentranskripts von Myo-2, da die Expression dieses Gens auf isolierte Muskelzellen beschränkt ist, nicht aber auf die isolierten cholinergen Zellen. Es ist wichtig, die Würmer vollständig zu bebrüten. Eine längere Inkubation der Wurmhaut kann jedoch zum Wurmtod oder zu zusätzlichem Stress für das Tier führen.Nach der Isolierung können die Zellen entweder für einen bestimmten Zeitraum kultiviert oder für die RNA-Isolation und qRT-PCR-Analyse verwendet werden. Kultivierte Neuronen können durch Patchclamp-Elektrophoresemessungen weiter analysiert werden. Diese Technik könnte die Ex-vivo-Analyse bestimmter Zellgruppen erleichtern und so dazu beitragen, unser Verständnis zellspezifischer Reaktionen im Kontext multizellulärer Organismen in verschiedenen Phasen ihres Lebenszyklus zu verbessern.Da bei diesem Experiment Chemikalien wie SDS und DTT verwendet werden, sollten allgemeine Laborsicherheitsverfahren bei der Herstellung und Verwendung von Puffern befolgt werden.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation of Specific Neuron Populations from Roundworm Caenorhabditis elegans

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

Comprehensive Assessment of Germline Chemical Toxicity Using the Nematode Caenorhabditis elegans

Umfassende Beurteilung der Keimbahn Chemical Toxicity Mit der Nematode<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Identifying the reproductive toxicity of the thousands of chemicals present in our environment has been one of the most tantalizing challenges in the ...

Forschung

Entwicklungsbiologie

Isolation and Characterization of Single Cells from Zebrafish Embryos

Isolierung und Charakterisierung von Einzelzellen aus Zebrafischembryonen

The zebrafish (Danio rerio) is a powerful model organism to study vertebrate development. Though many aspects of zebrafish embryonic development have been ...

Isolation of Perivascular Multipotent Precursor Cell Populations from Human Cardiac Tissue

Isolierung von Perivaskuläre multipotenten Vorläuferzellpopulationen aus menschlichem Herzgewebe

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Effective Isolation of Functional Islets from Neonatal Mouse Pancreas

Effektive Isolation von funktionellen Inselchen von Neonatal Maus Pancreas

Perfusion-based islet-isolation protocols from large mammalian pancreata are well established. Such protocols are readily conducted in many laboratories ...

Immobilization of Caenorhabditis elegans to Analyze Intracellular Transport in Neurons

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Immobilisierung von Caenorhabditis Elegans analysieren intrazellulären Transport in Neuronen

Axonal transport and intraflagellar transport (IFT) are essential for axon and cilia morphogenesis and function. Kinesin superfamily proteins and dynein ...

Assessing Lysosomal Alkalinization in the Intestine of Live Caenorhabditis elegans

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Beurteilung der lysosomalen Alkalisierung in den Darm von Leben Caenorhabditis elegans

The nematode Caenorhabditis elegans (C. elegans) is a model system that is widely used to study longevity and developmental pathways. Such studies are ...

Computational Analysis of the Caenorhabditis elegans Germline to Study the Distribution of Nuclei, Proteins, and the Cytoskeleton

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Computergestützte Analyse der Keimbahn Caenorhabditis Elegans , die Verteilung der Kerne, Proteine und das Zytoskelett zu studieren

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Studying Oxidative Stress Caused by the Mitis Group Streptococci in Caenorhabditis elegans

Studying Oxidative Stress Caused by the Mitis Group Streptococci in Caenorhabditis elegans

Studium der oxidativen Stress verursachten Mitis Gruppe Streptokokken in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans (C. elegans), a free-living nematode, has emerged as an attractive model to study host-pathogen interactions. The presented ...

Isotropic Light-Sheet Microscopy and Automated Cell Lineage Analyses to Catalogue Caenorhabditis elegans Embryogenesis with Subcellular Resolution

Isotrope Licht-Sheet-Mikroskopie und automatisierte Zelllineage-Analysen zu Katalog-Caenorhabditis elegans Embryogenese mit subzellulärer Auflösung

Caenorhabditis elegans (C. elegans) stands out as the only organism in which the challenge of understanding the cellular origins of an entire nervous ...

Measuring Sperm Guidance and Motility within the Caenorhabditis elegans Hermaphrodite Reproductive Tract

Measuring Sperm Guidance and Motility within the Caenorhabditis elegans Hermaphrodite Reproductive Tract

Messung der Spermienführung und-beweglichkeit innerhalb der Caenorhabditis elegans Hermaphrodite Reproductive Tract

Successful fertilization is fundamental to sexual reproduction, yet little is known about the mechanisms that guide sperm to oocytes within the female ...