Name: measurement of chitinase activity in biological samples
Uploaded: 2019-08-22T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Chitinase Activity in Biological Samples at JoVE.com

Denne forskningen ble støttet av American Lung Association og amerikanske bryst Society Awards til LS. Forfattere oppriktig ønsker å takke Dr. Jack Elias og Dr. Chun Geun Lee for å gi transgene mus stammer.

Alle dyr prosedyrer ble utført under en IACUC-godkjent protokoll ved Yale University School of Medicine.
1. eksempel samling for mus
<ol><li>
Bedøvelsen
	<ol>
<li>Bedøve mus som bruker ketamin og xylazine (100 mg/kg ketamin og 10 mg/kg xylazine).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Innsamling av blodprøver
	<ol>
<li>Bekreft dybden av anestesi ved ikke-respons til en tå knipe.</li>
		<li>Kirurgisk åpne brystet hulrom for å avdekke hjertet.</li>
		<li>Sett inn en 2...

<ol>
	<li>Hamid, R., Khan, M. A., Ahmad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chitinases:+An+update.">Chitinases: An update.</a> Journal of Pharmacy and Bioallied Sciences. 5 (1), 21-29 (2013).</li><li>Sharma, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+and+Role+of+Chitotriosidase+during+Lung+Infection+with+Klebsiella+pneumoniae.">Regulation and Role of Chitotriosidase during Lung Infection with Klebsiella pneumoniae.</a> Journal of Immunology. 201 (2), 615-626 (2018).</li><li>Kanneganti, M., Kamba, A., Mizoguchi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+chitotriosidase+(chitinase+1)+under+normal+and+disease+conditions.">Role of chitotriosidase (chitinase 1) under normal and disease conditions.</a> Journal of Epithelial Biology &#38; Pharmacology. 5, 1-9 (2012).</li><li>Lee, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Chitin+and+Chitinase/Chitinase-Like+Proteins+in+Inflammation,+Tissue+Remodeling,+and+Injury.">Role of Chitin and Chitinase/Chitinase-Like Proteins in Inflammation, Tissue Remodeling, and Injury.</a> Annual Review of Physiology. (73), 479-501 (2011).</li><li>Jeuniaux, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chitinase:+An+Addition+to+the+List+of+Hydrolases+in+the+Digestive+Tract+of+Vertebrates.">Chitinase: An Addition to the List of Hydrolases in the Digestive Tract of Vertebrates.</a> Nature. 192 (4798), 135-136 (1961).</li><li>Boot, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+Novel+Acidic+Mammalian+Chitinase+Distinct+from+Chitotriosidase.">Identification of a Novel Acidic Mammalian Chitinase Distinct from Chitotriosidase.</a> Journal of Biological Chemistry. 276 (9), 6770-6778 (2000).</li><li>Arndt, S., Hobbs, A., Sinclaire, I., Lane, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chitotriosidase+Deficiency:+A+Mutation+Update+in+an+African+Population.">Chitotriosidase Deficiency: A Mutation Update in an African Population.</a> JIMD Reports. 10, 11-16 (2013).</li><li>Di Rosa, M., Malaguarnera, G., De Gregorio, C., Drago, F., Malaguarnera, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+CHI3L-1+and+CHIT-1+Expression+in+Differentiated+and+Polarized+Macrophages.">Evaluation of CHI3L-1 and CHIT-1 Expression in Differentiated and Polarized Macrophages.</a> Inflammation. 36 (2), 482-492 (2013).</li><li>Wiesner, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chitin+Recognition+via+Chitotriosidase+Promotes+Pathologic+Type-2+Helper+T+Cell+Responses+to+Cryptococcal+Infection.">Chitin Recognition via Chitotriosidase Promotes Pathologic Type-2 Helper T Cell Responses to Cryptococcal Infection.</a> PLOS Pathogens. 11 (3), e1004701 (2015).</li><li>Elmonem, M. A., vanden Heuvel, L. P., Levtchenko, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunomodulatory+Effects+of+Chitotriosidase+Enzyme.">Immunomodulatory Effects of Chitotriosidase Enzyme.</a> Enzyme Research. 2016, 1-9 (2016).</li><li>Ferrari, A. R., Gaber, Y., Fraaije, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fast,+sensitive+and+easy+colorimetric+assay+for+chitinase+and+cellulase+activity+detection.">A fast, sensitive and easy colorimetric assay for chitinase and cellulase activity detection.</a> Biotechnol Biofuels. 7 (37), 1-8 (2014).</li><li>Schales, O., Schales, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+method+for+the+determination+of+glucose+in+blood.">Simple method for the determination of glucose in blood.</a> Proc Am Fed Clin Res. 2, 78 (1945).</li><li>Zarei, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Chitinase+with+Antifungal+Activity+from+a+Native+Serratia+Marcescens+B4A.">Characterization of Chitinase with Antifungal Activity from a Native Serratia Marcescens B4A.</a> Brazilian Journal of Microbiology. 42 (297), 1017-1029 (2011).</li><li>Zhu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acidic+Mammalian+Chitinase+in+Asthmatic+Th2+Inflammation+and+IL-13+Pathway+Activation.">Acidic Mammalian Chitinase in Asthmatic Th2 Inflammation and IL-13 Pathway Activation.</a> Science. 304 (5677), 1678-1682 (2004).</li><li>Hollak, C. E., van Weely, S., van Oers, M. H., Aerts, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marked+elevation+of+plasma+chitotriosidase+activity.+A+novel+hallmark+of+Gaucher+disease.">Marked elevation of plasma chitotriosidase activity. A novel hallmark of Gaucher disease.</a> Journal of Clinical Investigation. 93 (3), 1288-1292 (1994).</li><li>Musumeci, M., Malaguarnera, L., Simpore, J., Barone, R., Whalen, M., Musumeci, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chitotriosidase+activity+in+colostrum+from+African+and+Caucasian+women.">Chitotriosidase activity in colostrum from African and Caucasian women.</a> Clinical Chemistry and Laboratory. 43 (2), 198-201 (2005).</li><li>Maddens, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chitinase-like+Proteins+are+Candidate+Biomarkers+for+Sepsis-induced+Acute+Kidney+Injury.">Chitinase-like Proteins are Candidate Biomarkers for Sepsis-induced Acute Kidney Injury.</a> Mol Cell Proteomics. 11, 1-13 (2012).</li><li>Hector, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chitinase+activation+in+patients+with+fungus-associated+cystic+fibrosis+lung+disease.">Chitinase activation in patients with fungus-associated cystic fibrosis lung disease.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 138 (4), 1183-1189 (2016).</li><li>Hall, A. J., Morroll, S., Tighe, P., G&#246;tz, F., Falcone, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+chitotriosidase+is+expressed+in+the+eye+and+lacrimal+gland+and+has+an+antimicrobial+spectrum+different+from+lysozyme.">Human chitotriosidase is expressed in the eye and lacrimal gland and has an antimicrobial spectrum different from lysozyme.</a> Microbes and Infection. 10 (1), 69-78 (2008).</li><li>Kim, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AMCase+is+a+crucial+regulator+of+type+2+immune+responses+to+inhaled+house+dust+mites.">AMCase is a crucial regulator of type 2 immune responses to inhaled house dust mites.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (22), e2891-e2899 (2015).</li><li>Olkhovych, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chitotriosidase+activity+as+additional+biomarker+in+the+diagnosis+of+lysosomal+storage+diseases.">Chitotriosidase activity as additional biomarker in the diagnosis of lysosomal storage diseases.</a> Ukrainian Biochemical Journal. 88 (1), 69-78 (2016).</li><li>Bouayadi, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disease:+An+Underdiagnosed+Pathology+in+the+Eastern+Moroccan+Population.">Disease: An Underdiagnosed Pathology in the Eastern Moroccan Population.</a> eJIFCC. 30 (1), 82-87 (2019).</li><li>Tasci, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+serum+chitotriosidase+activity+in+early+treatment+of+patients+with+active+tuberculosis+and+a+negative+sputum+smear.">Efficacy of serum chitotriosidase activity in early treatment of patients with active tuberculosis and a negative sputum smear.</a> Therapeutics and Clinical Risk Management. 8, 369-372 (2012).</li><li>Barone, R., Simpor&#233;, J., Malaguarnera, L., Pignatelli, S., Musumeci, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+chitotriosidase+activity+in+acute+Plasmodium+falciparum+malaria.">Plasma chitotriosidase activity in acute Plasmodium falciparum malaria.</a> Clinica Chimica Acta. 331 (1-2), 79-85 (2003).</li><li>Kitamoto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chitinase+inhibition+promotes+atherosclerosis+in+hyperlipidemic+mice.">Chitinase inhibition promotes atherosclerosis in hyperlipidemic mice.</a> American Journal of Pathology. 183 (1), 313-325 (2013).</li><li>Kzhyshkowska, J., Gratchev, A., Goerdt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Chitinases+and+Chitinase-Like+Proteins+as+Indicators+for+Infl+Ammation+and+Cancer.">Human Chitinases and Chitinase-Like Proteins as Indicators for Infl Ammation and Cancer.</a> Biomark Insights. 2, 128-146 (2007).</li></ol>

Chitinase aktivitet har dukket opp som en viktig biomarkør for å forutsi sykdoms alvorlighetsgrad, sykdomsprogresjon, terapeutisk effektivitet og tilstedeværelsen av bestemte patogener18. Selv om mange av de lange postulert teoriene om rollen til chitinases ikke har blitt eksperimentelt bevist19, har nye studier gitt viktig innsikt i rollen som chitinases og chitinase som proteiner i ulike sykdommer2, 9,</s...

Kitin er den nest mest tallrike polysakkarid på jorden etter cellulose, som tjener som en viktig strukturell komponent i en rekke organismer, inkludert Exoskeleton av insekter, sopp, gjær og alger; noen virveldyr har også kitin1. Chitinases er en familie av enzymer som er i stand til å bryte ned kitin og er svært bevart gjennom utviklingen i arter som spenner fra bakterier til pattedyr2,3. I tillegg til chitinases, pattedyr har også chitinase-lignende proteiner som ligner chitinases i deres evne til å binde kitin men varierer i at de mangler enzymatisk evne til å holde fast i kitin4.
Selv om kitin og chitinases har lenge vært studert-med undersøkelser dateres tilbake til tidlig på 1900-tallet-hovedfokuset har vært på sin rolle i insekter og andre virvelløse dyr. Faktisk var det ikke før på 1960-tallet da virveldyr ble funnet å ha chitinases i det hele tatt. Ved hjelp av en chitobiase-basert analyse, ble chitinases vist å være funnet i fordøyelseskanalen av en rekke virveldyr inkludert øgler og blackbirds-en observasjon hypotetisk gjennomsnitt å være på grunn av inntak av kitin-inneholdende organismer som insekter5 .
Pattedyr har to enzymatisk aktive former for chitinase: Sure pattedyr chitinase (AMCase; også kjent som CHIT2 og CHIA) og chitotriosidase (CHIT1)4. Begge disse proteinene er i stand til hydroloserende kitin. Imidlertid, CHIT1 er flere enzymatisk aktiv inne human, der hvor nært alle av chitinase aktivitet er avledet fra CHIT1. 4 i mus, både Chit1 og AMCase nesten like bidra til den samlede chitinase aktivitet6. På den annen side, chitinase-lignende proteiner mangler chitinase aktivitet.
Chit1 utskilles hovedsakelig av makrofager og blir ofte betraktet som immunrespons på kitin patogener7. Enzymet har også vist seg å være involvert i modning av monocytter i både M1 og m2 macrophage under typer, selv uten tilstedeværelsen av underlaget kitin8. Videre kan det også være involvert i modning av andre immunceller inkludert T hjelper type 2 (Th2) celler og eosinofile-som ble vist å være tilfelle i kryptokokkmeningitt lungeinfeksjon9. Disse studiene peker på en kompleks rolle chitinases i immunsystemet.
I de senere årene, Chit1 nivåer har blitt funnet å tjene som en viktig biomarkør av progresjon for over 40 forskjellige menneskelige sykdommer, inkludert lysosomal lagring sykdommer, smittsomme sykdommer, luftveissykdommer, endocrinological sykdommer, kardiovaskulær sykdommer, nevrologiske sykdommer, og andre (anmeldt10). I mange av disse sykdommene, nivåene av Chit1 er en sterk indikasjon på sykdom alvorlighetsgrad og terapeutisk effektivitet10.
Som chitinases har fått et rykte som en biomarkør for en rekke medisinske tilstander, inkludert Gaucher sykdom, har verktøy og analyser blitt utviklet for å lette testingen for chitinase tilstedeværelse. Eldre metoder inkluderer Schales ' prosedyre, en protokoll tilpasset fra en blod glukose test, og 3, 5 dinitrosalicylic acid (DNS) metoden. Men disse metodene er ofte tid følsomme og teknisk vanskelig11. Fremgangsmåten for begge disse testene krever reduksjon av uorganiske oksidanter, ferricyanide i tilfelle av Schales ' prosedyre for eksempel, produsere en fargeendring som bare kan måles spektrofotometrisk. I tillegg er begge testene innebære en oppvarming eller kokende trinn som er både tidkrevende og nødvendig for fargen å utvikle12,13.
Beskrevet her er en rask og enkel fluorimetric analysen for å bestemme chitinase nivåer i pattedyr prøver14,15. To av prøvene som brukes her, inkluderer serum og lunges (BAL); chitinase aktivitet har også blitt målt i morsmelk og urinprøver, og teknikken kan utføres i disse type prøver så vel som i alle andre biologiske væske16,17.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-methylumbelliferone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M1381</td>
			<td>Standard: commonly used in flourimetric assays for determination of enzyme activity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4MU-GlcNAc2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M9763</td>
			<td>fluorescent chitinase substrate for use in mouse samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4MU-GlcNAc3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M5639</td>
			<td>fluorescent chitinase substrate for use in human samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric Acid-monohydrate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for use in McIlvain Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for use in Stop Buffer at a concentration of 0.3 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4xH2O</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for use in McIlvain Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for use in Stop Buffer at a concentration of 12 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vision Plate: Non-sterile, untreated black 96 well plate</td>
			<td>4titude</td>
			<td>4ti-0224</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measurement of chitinase activity in biological samples

Chitinases er enzymer som Cleave kitin. Selv i fravær av kitin, mammalians har betydelige mengder chitinases tilstede i kroppen, inkludert ved Baseline. Den presise rolle chitinase er ikke kjent, men det ble antatt å spille viktig rolle i fordøyelsen og vert forsvar mot kitin-inneholdende mat og patogener, henholdsvis. Nyere arbeid, inkludert vår, har vist en viktig rolle i chitinase og chitinase proteiner i verts immunitet og allergiske sykdommer. Viktigere, chitinase aktiviteter tjene som viktig biomarkører av sykdom alvorlighetsgrad i en rekke sykdommer, inkludert type 2 inflammatoriske sykdommer som astma og pulmonal fibrose. Tilsvarende pasienter med genetiske lidelser som Gaucher sykdom har betydelig forhøyet chitinase nivåer, som ikke bare samsvarer med sykdoms alvorlighetsgrad, men også tjene som en pålitelig biomarkør for terapeutisk effektivitet. Protokollen skissert her beskriver en enkel, rask og grei måte å måle chitinase aktivitet i BAL eller serumprøver av mus og kan være allment tilpasset menneskelige og andre modell organismer på grunn av den svært bevarte natur enzymer.

Resultatene som vises her er fra en studie som måler chitinase aktivitet i serum og BAL prøver av vill type (C57BL/6) og Chit1 transgene mus (på C57BL/6 bakgrunn) som overekspresjon Chit1 genet på en Doxycycline promoter. Våre data viser at både serum og BAL prøver har synlig chitinase aktivitet ved Baseline 698,2 ± 189,9 nmol/mL · h og 485,7 ± 114 nmol/ml · h, henholdsvis. Overuttrykte av Chit1 genet bruker Doxycycline i drikkevann i 4 uker resulterte i heving av chitinase aktivitet som ble observert i både ...

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Chitinase Activity in Biological Samples at JoVE.com

Measurement of Chitinase Activity in Biological Samples

Presentert her er en enkel metode for å måle chitinase aktivitet i biologiske væsker som lunges tømming eller serum.

Måling av Chitinase aktivitet i biologiske prøver

Chitinases are the enzymes that cleave chitin. Even in the absence of chitin, mammalians have significant amounts of chitinases present in the body ...

Denne metoden gjør det mulig å kvantifisere chitinase aktivitet i biologiske prøver. Chitinase aktivitet har vist seg å tjene som en god markør for diagnose og terapeutisk effekt i mange forhold og sykdommer. Tidligere metoder for måling av chitinase aktivitet var ofte tidkrevende og vanskelig å utføre, begge problemene som har blitt løst av analysen vist her.Denne teknikken vil bidra til å oppfylle de potensielle chitinases har som en diagnostisk og terapeutisk markør ved å gjøre det lettere å måle chitinase aktivitet;for eksempel kan den brukes til å overvåke behandlingen av Gaucher sykdom fordi chitinase aktivitet har vist seg å avta under effektiv behandling. Begynn med å forberede underlag, standarder og løsninger for analysen. Forbered 1x McIlvain buffer i henhold til manuskriptet retninger og bruke den til å fortynne chitin substrater til 500 mikromos hver.Oppløs 4-methylumbelliferone, standarden, til en konsentrasjon på 0,1 millimolar i stoppbuffer for å skape en standard kurvelagerløsning. For hver 10 prøve, bland 2,17 milliliter 1x McIlvain buffer med 100 mikroliter av chitin-substratet for å skape en arbeidsløsning, og deretter pipette 95 mikroliter av arbeidsløsningen i hver brønn av en 96-brønns plate. Tilsett fem mikroliter av testprøven til hver brønn og bland den inn i arbeidsløsningen.Dekk platen og rist den i fem sekunder, og inkuber deretter platen ved 37 grader Celsius i 15 minutter for å la den enzymatiske reaksjonen finne sted. I mellomtiden fortynner lagerløsningen av 4-methylumbelliferone for å lage en fem mikromolar arbeidsstandardløsning og skape en standardkurve ved å forberede en rekke fortynninger i henhold til manuskriptet. Start med den fem mikromolarkonsentrasjonen og bland hver fortynning godt.Etter inkubasjonen legger du til 200 mikroliter stoppbuffer til hver brønn for å stoppe reaksjonen. Tilsett 300 mikroliter duplikater av hver standard til samme plate, og les deretter platen ved en eksitasjon på 360 nanometer og et utslipp på 455 nanometer. Denne protokollen ble vellykket brukt til å måle chitinase aktivitet i bronkoalveolærskylling og serumvæske av vill type og chitotriosidase over-uttrykke transgene mus.Analysen bekrefter at overuttrykk av CHIT-1-genet hos mus resulterer i økt chitinaseaktivitet. En standardkurve ble brukt til å bestemme chitinase basert på fluorescens av prøvene. Det viktigste å huske når du først prøver protokollen er å legge til prøvene så raskt og effektivt som mulig mens du fortsatt blander grundig.Når du starter, kan det være nyttig å gjøre færre prøver per kjøring for å sikre nøyaktighet i målinger, på grunn av en kortere inkubasjonsperiode.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

Måling av cytosoliske Ca 2 + I isolerte kontraktile lymfesystem

Lymphatic vessels comprise a multifunctional transport system that maintains fluid homeostasis, delivers lipids to the central circulation, and acts as a ...

Measurement of &#947;HV68 Infection in Mice

Measurement of ÃƒÅ½Ã‚Â³HV68 Infection in Mice

Måling av γHV68 Infeksjon i Mus

&gamma;-Herpesviruses (&gamma;-HVs) are notable for their ability to establish latent infections of lymphoid cells1. The narrow host range of human ...

Determining the Phagocytic Activity of Clinical Antibody Samples

Bestemme phagocytic Activity of Clinical antistoff prøver

Antibody-driven phagocytosis is induced via the engagement of Fc receptors on professional phagocytes, and can contribute to both clearance as well as ...

Measurement of Factor V Activity in Human Plasma Using a Microplate Coagulation Assay

Måling av Faktor V aktivitet i Human Plasma Ved hjelp av en Microplate koagulasjon Assay

 In response to injury, blood coagulation is activated and results in generation of the clotting protease, thrombin. Thrombin cleaves fibrinogen to fibrin ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Spytt, spyttkjertel, og Hemolymph Collection fra Ixodes Scapularis Flått

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Activation and Measurement of NLRP3 Inflammasome Activity Using IL-1&#946; in Human Monocyte-derived Dendritic Cells

Activation and Measurement of NLRP3 Inflammasome Activity Using IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² in Human Monocyte-derived Dendritic Cells

Aktivisering og måling av NLRP3 Inflammasome aktivitet Bruke IL-1β i Human Monocyte-avledet dendrittiske celler

Inflammatory processes resulting from the secretion of Interleukin (IL)-1 family cytokines by immune cells lead to local or systemic inflammation, tissue ...

A Rapid Strategy for the Isolation of New Faustoviruses from Environmental Samples Using Vermamoeba vermiformis

A Rapid Strategy for the Isolation of New Faustoviruses from Environmental Samples Using Vermamoeba vermiformis

En rask strategi for isolering av nye Faustoviruses fra miljøprøver ved hjelp<em&gt; Vermamoeba vermiformis</em

The isolation of giant viruses is of great interest in this new era of virology, especially since these giant viruses are related to protists. Giant ...

Fast and Specific Assessment of the Halogenating Peroxidase Activity in Leukocyte-enriched Blood Samples

Rask og konkret vurdering av halogene peroxydaseaktivitet i Leukocytt-anriket blodprøver

In this paper a protocol for the quick and standardized enrichment of leukocytes from small whole blood samples is described. This procedure is based on ...

Measurement of In Vitro Integration Activity of HIV-1 Preintegration Complexes

Measurement of In Vitro Integration Activity of HIV-1 Preintegration Complexes

måling av<em&gt; In Vitro</em&gt; Integrering Aktivitet av HIV-1 Preintegration Komplekser

HIV-1 envelope proteins engage cognate receptors on the target cell surface, which leads to viral-cell membrane fusion followed by the release of the ...