Name: measurement of chitinase activity in biological samples
Uploaded: 2019-08-22T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Chitinase Activity in Biological Samples at JoVE.com

Denna forskning stöddes av American lung Association och American Thoracic Society Awards till LS. Författarna vill uppriktigt tacka Dr Jack Elias och Dr Chun Geun Lee för att ge transgena mus stammar.

Alla djurförsök utfördes enligt ett IACUC-godkänt protokoll vid Yale University School of Medicine.
1. mus provsamling
<ol><li>
Anesthetization
	<ol>
<li>Anesthetize möss med ketamin och xylazin (100 mg/kg ketamin och 10 mg/kg xylazin).</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Blodprov samling
	<ol>
<li>Bekräfta djupet av anestesi genom bristande respons på en tå nypa.</li>
		<li>Kirurgiskt öppna brösthålan för att exponera hjärtat.</li>
		<li>Sätt i en 26,5 G ...

<ol>
	<li>Hamid, R., Khan, M. A., Ahmad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chitinases:+An+update.">Chitinases: An update.</a> Journal of Pharmacy and Bioallied Sciences. 5 (1), 21-29 (2013).</li><li>Sharma, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+and+Role+of+Chitotriosidase+during+Lung+Infection+with+Klebsiella+pneumoniae.">Regulation and Role of Chitotriosidase during Lung Infection with Klebsiella pneumoniae.</a> Journal of Immunology. 201 (2), 615-626 (2018).</li><li>Kanneganti, M., Kamba, A., Mizoguchi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+chitotriosidase+(chitinase+1)+under+normal+and+disease+conditions.">Role of chitotriosidase (chitinase 1) under normal and disease conditions.</a> Journal of Epithelial Biology &#38; Pharmacology. 5, 1-9 (2012).</li><li>Lee, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Chitin+and+Chitinase/Chitinase-Like+Proteins+in+Inflammation,+Tissue+Remodeling,+and+Injury.">Role of Chitin and Chitinase/Chitinase-Like Proteins in Inflammation, Tissue Remodeling, and Injury.</a> Annual Review of Physiology. (73), 479-501 (2011).</li><li>Jeuniaux, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chitinase:+An+Addition+to+the+List+of+Hydrolases+in+the+Digestive+Tract+of+Vertebrates.">Chitinase: An Addition to the List of Hydrolases in the Digestive Tract of Vertebrates.</a> Nature. 192 (4798), 135-136 (1961).</li><li>Boot, R. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+Novel+Acidic+Mammalian+Chitinase+Distinct+from+Chitotriosidase.">Identification of a Novel Acidic Mammalian Chitinase Distinct from Chitotriosidase.</a> Journal of Biological Chemistry. 276 (9), 6770-6778 (2000).</li><li>Arndt, S., Hobbs, A., Sinclaire, I., Lane, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chitotriosidase+Deficiency:+A+Mutation+Update+in+an+African+Population.">Chitotriosidase Deficiency: A Mutation Update in an African Population.</a> JIMD Reports. 10, 11-16 (2013).</li><li>Di Rosa, M., Malaguarnera, G., De Gregorio, C., Drago, F., Malaguarnera, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+CHI3L-1+and+CHIT-1+Expression+in+Differentiated+and+Polarized+Macrophages.">Evaluation of CHI3L-1 and CHIT-1 Expression in Differentiated and Polarized Macrophages.</a> Inflammation. 36 (2), 482-492 (2013).</li><li>Wiesner, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chitin+Recognition+via+Chitotriosidase+Promotes+Pathologic+Type-2+Helper+T+Cell+Responses+to+Cryptococcal+Infection.">Chitin Recognition via Chitotriosidase Promotes Pathologic Type-2 Helper T Cell Responses to Cryptococcal Infection.</a> PLOS Pathogens. 11 (3), e1004701 (2015).</li><li>Elmonem, M. A., vanden Heuvel, L. P., Levtchenko, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunomodulatory+Effects+of+Chitotriosidase+Enzyme.">Immunomodulatory Effects of Chitotriosidase Enzyme.</a> Enzyme Research. 2016, 1-9 (2016).</li><li>Ferrari, A. R., Gaber, Y., Fraaije, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fast,+sensitive+and+easy+colorimetric+assay+for+chitinase+and+cellulase+activity+detection.">A fast, sensitive and easy colorimetric assay for chitinase and cellulase activity detection.</a> Biotechnol Biofuels. 7 (37), 1-8 (2014).</li><li>Schales, O., Schales, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+method+for+the+determination+of+glucose+in+blood.">Simple method for the determination of glucose in blood.</a> Proc Am Fed Clin Res. 2, 78 (1945).</li><li>Zarei, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+Chitinase+with+Antifungal+Activity+from+a+Native+Serratia+Marcescens+B4A.">Characterization of Chitinase with Antifungal Activity from a Native Serratia Marcescens B4A.</a> Brazilian Journal of Microbiology. 42 (297), 1017-1029 (2011).</li><li>Zhu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acidic+Mammalian+Chitinase+in+Asthmatic+Th2+Inflammation+and+IL-13+Pathway+Activation.">Acidic Mammalian Chitinase in Asthmatic Th2 Inflammation and IL-13 Pathway Activation.</a> Science. 304 (5677), 1678-1682 (2004).</li><li>Hollak, C. E., van Weely, S., van Oers, M. H., Aerts, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Marked+elevation+of+plasma+chitotriosidase+activity.+A+novel+hallmark+of+Gaucher+disease.">Marked elevation of plasma chitotriosidase activity. A novel hallmark of Gaucher disease.</a> Journal of Clinical Investigation. 93 (3), 1288-1292 (1994).</li><li>Musumeci, M., Malaguarnera, L., Simpore, J., Barone, R., Whalen, M., Musumeci, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chitotriosidase+activity+in+colostrum+from+African+and+Caucasian+women.">Chitotriosidase activity in colostrum from African and Caucasian women.</a> Clinical Chemistry and Laboratory. 43 (2), 198-201 (2005).</li><li>Maddens, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chitinase-like+Proteins+are+Candidate+Biomarkers+for+Sepsis-induced+Acute+Kidney+Injury.">Chitinase-like Proteins are Candidate Biomarkers for Sepsis-induced Acute Kidney Injury.</a> Mol Cell Proteomics. 11, 1-13 (2012).</li><li>Hector, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chitinase+activation+in+patients+with+fungus-associated+cystic+fibrosis+lung+disease.">Chitinase activation in patients with fungus-associated cystic fibrosis lung disease.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 138 (4), 1183-1189 (2016).</li><li>Hall, A. J., Morroll, S., Tighe, P., G&#246;tz, F., Falcone, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+chitotriosidase+is+expressed+in+the+eye+and+lacrimal+gland+and+has+an+antimicrobial+spectrum+different+from+lysozyme.">Human chitotriosidase is expressed in the eye and lacrimal gland and has an antimicrobial spectrum different from lysozyme.</a> Microbes and Infection. 10 (1), 69-78 (2008).</li><li>Kim, L. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AMCase+is+a+crucial+regulator+of+type+2+immune+responses+to+inhaled+house+dust+mites.">AMCase is a crucial regulator of type 2 immune responses to inhaled house dust mites.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (22), e2891-e2899 (2015).</li><li>Olkhovych, N. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chitotriosidase+activity+as+additional+biomarker+in+the+diagnosis+of+lysosomal+storage+diseases.">Chitotriosidase activity as additional biomarker in the diagnosis of lysosomal storage diseases.</a> Ukrainian Biochemical Journal. 88 (1), 69-78 (2016).</li><li>Bouayadi, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disease:+An+Underdiagnosed+Pathology+in+the+Eastern+Moroccan+Population.">Disease: An Underdiagnosed Pathology in the Eastern Moroccan Population.</a> eJIFCC. 30 (1), 82-87 (2019).</li><li>Tasci, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+serum+chitotriosidase+activity+in+early+treatment+of+patients+with+active+tuberculosis+and+a+negative+sputum+smear.">Efficacy of serum chitotriosidase activity in early treatment of patients with active tuberculosis and a negative sputum smear.</a> Therapeutics and Clinical Risk Management. 8, 369-372 (2012).</li><li>Barone, R., Simpor&#233;, J., Malaguarnera, L., Pignatelli, S., Musumeci, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+chitotriosidase+activity+in+acute+Plasmodium+falciparum+malaria.">Plasma chitotriosidase activity in acute Plasmodium falciparum malaria.</a> Clinica Chimica Acta. 331 (1-2), 79-85 (2003).</li><li>Kitamoto, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chitinase+inhibition+promotes+atherosclerosis+in+hyperlipidemic+mice.">Chitinase inhibition promotes atherosclerosis in hyperlipidemic mice.</a> American Journal of Pathology. 183 (1), 313-325 (2013).</li><li>Kzhyshkowska, J., Gratchev, A., Goerdt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Chitinases+and+Chitinase-Like+Proteins+as+Indicators+for+Infl+Ammation+and+Cancer.">Human Chitinases and Chitinase-Like Proteins as Indicators for Infl Ammation and Cancer.</a> Biomark Insights. 2, 128-146 (2007).</li></ol>

Chitinase aktivitet har vuxit fram som en viktig biomarkör för att förutsäga sjukdomens svårighetsgrad, sjukdomsprogression, terapeutisk effektivitet och förekomst av specifika patogener18. Även om många av de långpostulerade teorier om rollen som chitinases inte har experimentellt bevisat19, nya studier har gett viktiga insikter i rollen som chitinases och Chitinase som proteiner i olika sjukdomar2, 9<sup...

Chitin är den näst vanligast förekommande polysackarid på jorden efter cellulosa, som fungerar som en viktig strukturell komponent i en mängd olika organismer, inklusive exoskelett av insekter, svampar, jäst, och alger; vissa ryggradsdjur har också Chitinen1. Chitinases är en familj av enzymer som kan bryta ner Chitinen och är mycket bevaras under hela evolutionen i arter som sträcker sig från bakterier till däggdjur2,3. Förutom chitinases, däggdjur har också Chitinase-liknande proteiner som liknar chitinases i sin förmåga att binda Chitinen men skiljer sig i att de saknar enzymatisk förmåga att klyva den Chitinen4.
Även om Chitinen och chitinases har länge studerats-med utredningar som går tillbaka till början av 1900-talet-har huvudfokus legat på deras roll i insekter och andra ryggradslösa djur. I själva verket var det inte förrän på 1960-talet när ryggradsdjur konstaterades ha chitinases alls. Med hjälp av en chitobiase-baserad analys, chitinases visades finnas i mag-tarmkanalen hos ett antal ryggradsdjur inklusive ödlor och koltrastar-en observation hypotes att bero på konsumtion av Chitin-innehållande organismer såsom insekter5 .
Däggdjur har två enzymatiskt aktiv bildar av Chitinase: surt däggdjur Chitinase (AMCase; också bekant som CHIT2 och CHIA) och chitotriosidas (CHIT1)4. Båda dessa proteiner kan hydrolysera kitin. Emellertid, CHIT1 är mer enzymatiskt aktiv hos människor, där nästan alla Chitinase aktivitet härleds från CHIT1. 4 i möss, både Chit1 och amcase nästan lika bidra till den totala Chitinase aktivitet6. Å andra sidan, Chitinase-liknande proteiner saknar Chitinase aktivitet.
Chit1 utsöndras huvudsakligen av makrofager och anses ofta vara ett immunsvar mot Chitin-innehållande patogener7. Enzymet har också visat sig vara inblandade i mogningen av monocyter i både M1 och m2 makrofage subtyper, även utan närvaro av substratet Chitinen8. Dessutom, det kan också vara inblandade i mogningen av andra immunceller inklusive T Helper typ 2 (TH2) celler och eosinofiler — som visades vara fallet i kryptokockmeningit lunginfektion9. Dessa studier pekar på en komplex roll av chitinases i immunförsvaret.
Under de senaste åren har Chit1 nivåer visat sig fungera som en viktig biomarkör för progression för över 40 olika mänskliga sjukdomar inklusive lysosomala lagrings sjukdomar, infektionssjukdomar, luftvägssjukdomar, endokrinologiska sjukdomar, kardiovaskulära sjukdomar, neurologiska sjukdomar och andra (Recenserad10). I många av dessa sjukdomar, nivåerna av Chit1 är en stark prediktor för sjukdomens svårighetsgrad och terapeutisk effektivitet10.
Som chitinases har fått ett rykte som en biomarkör för många sjukdomstillstånd inklusive Gauchers sjukdom, verktyg och analyser har utvecklats för att underlätta testning för Chitinase närvaro. Äldre metoder inkluderar Schales förfarande, ett protokoll som anpassats från ett blodglukos test, och den 3, 5 dinitrosalicylsyra (DNS) metod. Dessa metoder är dock ofta tidskänsliga och tekniskt svåra11. Förfarandet för båda dessa tester kräver reduktion av oorganiska oxidanter, ferricyanid i fallet med Schales ' förfarande till exempel, som producerar en färgförändring som endast kan mätas spektrofotometriskt. Dessutom, båda testerna innebär ett värme-eller Kok steg som är både tidskrävande och nödvändigt för att färgen ska utveckla12,13.
Beskrivs här är en snabb och enkel fluorimetrisk analys för att bestämma Chitinase nivåer i däggdjurs prov14,15. Två av de prover som används här inkluderar serum och bronalveolär sköljning vätskor (BAL); chitinas aktivitet har också mätts i bröstmjölk och urinprov, och tekniken kan utföras i dessa typer av prover samt i någon annan biologisk vätska16,17.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>4-methylumbelliferone</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M1381</td>
			<td>Standard: commonly used in flourimetric assays for determination of enzyme activity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4MU-GlcNAc2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M9763</td>
			<td>fluorescent chitinase substrate for use in mouse samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4MU-GlcNAc3</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M5639</td>
			<td>fluorescent chitinase substrate for use in human samples</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric Acid-monohydrate</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for use in McIlvain Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for use in Stop Buffer at a concentration of 0.3 M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4xH2O</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for use in McIlvain Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaOH</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>for use in Stop Buffer at a concentration of 12 g/L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vision Plate: Non-sterile, untreated black 96 well plate</td>
			<td>4titude</td>
			<td>4ti-0224</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measurement of chitinase activity in biological samples

Chitinases är de enzymer som klyva kitin. Även i avsaknad av Chitin, mammalianer har betydande mängder chitinases närvarande i kroppen, inklusive vid baseline. Den exakta roll Chitinase är inte känt, men det ansågs att spela viktig roll i matsmältningen och värd försvar mot Chitin-innehållande mat och patogener, respektive. Nyligen arbete, inklusive vår, har visat en viktig roll för Chitinase och Chitinase-liknande proteiner i Host immunitet och allergiska sjukdomar. Viktigare, Chitinase verksamhet fungera som viktiga biomarkörer för sjukdomens svårighetsgrad i ett brett spektrum av sjukdomar inklusive typ 2 inflammatoriska sjukdomar såsom astma och lungfibros. På samma sätt, patienter med genetiska sjukdomar som Gauchers sjukdom har signifikant förhöjda Chitinase nivåer, som inte bara korrelerar med sjukdoms svårighetsgrad utan också fungera som en pålitlig biomarkör för terapeutisk effektivitet. Det protokoll som beskrivs här beskriver ett enkelt, snabbt och enkelt sätt att mäta Chitinase aktivitet i BAL eller serum prover av möss och kan vara allmänt anpassade till människor och andra modellorganismer på grund av den mycket bevarade karaktären av enzymerna.

Resultaten som visas här är från en studie som mäter Chitinase aktivitet i serum och BAL prover av vildtyp (C57BL/6) och Chit1 transgena möss (på C57BL/6 bakgrund) som överuttrycker Chit1 genen på en doxycyklin promotor. Våra data visar att både serum och BAL prover har detekterbar Chitinase aktivitet vid baseline 698,2 ± 189,9 nmol/mL · h och 485,7 ± 114 nmol/ml · h, respektive. Överuttryck av Chit1 genen med doxycyklin i dricksvatten i 4 veckor resulterade i förhöjning av Chitinase aktivitet som observ...

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Chitinase Activity in Biological Samples at JoVE.com

Measurement of Chitinase Activity in Biological Samples

Presenteras här är en enkel metod för att mäta Chitinase aktivitet i biologiska vätskor såsom bronalveolärt pumpning eller serum.

Mätning av Chitinas aktivitet i biologiska prover

Chitinases are the enzymes that cleave chitin. Even in the absence of chitin, mammalians have significant amounts of chitinases present in the body ...

Denna metod möjliggör ett mer effektivt sätt att kvantifiera chitinase aktivitet i biologiska prover. Chitinase verksamhet har visat sig fungera som en bra markör för diagnos och terapeutisk effekt i många villkor och sjukdomar. Tidigare metoder för mätning av chitinase aktivitet var ofta tidskrävande och svåra att utföra, både problem som har lösts av analysen visas här.Denna teknik kommer att bidra till att uppfylla de potentiella chitinases har som en diagnostisk och terapeutisk markör genom att göra det lättare att mäta chitinase aktivitet;till exempel, det kan användas för att övervaka behandling av Gauchers sjukdom eftersom chitinase aktivitet har visat sig minska under effektiv behandling. Börja med att förbereda substrat, standarder och lösningar för analysen. Förbered 1x McIlvain buffert enligt manuskriptet riktningar och använda den för att späda chitin substrat till 500 mikromolar vardera.Lös 4-metylumbelliferon, standarden, till en koncentration på 0,1 millimolar i stoppbuffert för att skapa en vanlig kurva stamlösning. För varje 10 prover, blanda 2,17 milliliter av 1x McIlvain buffert med 100 mikroliter av chitin substrat för att skapa en fungerande lösning, sedan pipetter 95 mikroliter av arbetslösningen i varje brunn av en 96-brunnsplatta. Tillsätt fem mikroliter av testprovet till varje brunn och blanda in det i arbetslösningen.Täck plattan och skaka den i fem sekunder, sedan inkubera plattan på 37 grader Celsius i 15 minuter så att den enzymatiska reaktionen att äga rum. Under tiden späd stamlösningen av 4-metyllumbelliferon för att göra en fem-mikromolar arbetsstandardlösning och skapa en standardkurva genom att förbereda en serie utspädningar enligt manuskriptet. Börja med fem-mikromolarkoncentrationen och blanda varje utspädningskälla.Efter inkubationen, tillsätt 200 mikroliter stoppbuffert till varje brunn för att stoppa reaktionen. Tillsätt 300-mikroliter dubbletter av varje standard till samma platta, sedan läsa plattan vid en excitation av 360 nanometer och ett utsläpp av 455 nanometer. Detta protokoll användes framgångsrikt för att mäta chitinase verksamhet i bronchoalveolar lavage och serum vätska av vilda typ och chitotriosidase över-uttrycker transgena möss.Analysen bekräftar att överuttryck av CHIT-1-genen hos möss resulterar i ökad chitinaseaktivitet. En standardkurva användes för att bestämma chitinase baserat på fluorescens av proverna. Det viktigaste att komma ihåg när första försöket protokollet är att lägga till proverna så snabbt och effektivt som möjligt medan fortfarande blanda grundligt.När du först börjar ut kan det vara fördelaktigt att göra färre prover per körning för att säkerställa noggrannhet i mätningar, på grund av en kortare inkubationstid.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

Measurement of Cytosolic Ca2+ in Isolated Contractile Lymphatics

Mätning av cytosoliska Ca 2 + I enstaka kontraktila lymphatics

Lymphatic vessels comprise a multifunctional transport system that maintains fluid homeostasis, delivers lipids to the central circulation, and acts as a ...

Measurement of &#947;HV68 Infection in Mice

Measurement of ÃƒÅ½Ã‚Â³HV68 Infection in Mice

Mätning av γHV68 infektion hos möss

&gamma;-Herpesviruses (&gamma;-HVs) are notable for their ability to establish latent infections of lymphoid cells1. The narrow host range of human ...

Determining the Phagocytic Activity of Clinical Antibody Samples

Fastställande av fagocyterande förmåga för klinisk Antibody prover

Antibody-driven phagocytosis is induced via the engagement of Fc receptors on professional phagocytes, and can contribute to both clearance as well as ...

Measurement of Factor V Activity in Human Plasma Using a Microplate Coagulation Assay

Mätning av Faktor V aktivitet i human plasma Med hjälp av en analys Microplate Koagulation

 In response to injury, blood coagulation is activated and results in generation of the clotting protease, thrombin. Thrombin cleaves fibrinogen to fibrin ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliv, spottkörtel och hemolymfa Collection från Ixodes scapularis fästingar

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Activation and Measurement of NLRP3 Inflammasome Activity Using IL-1&#946; in Human Monocyte-derived Dendritic Cells

Activation and Measurement of NLRP3 Inflammasome Activity Using IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² in Human Monocyte-derived Dendritic Cells

Aktivering och Mätning av NLRP3 inflamma aktivitet med användning av IL-1β i human monocyt-härledda dendritiska celler

Inflammatory processes resulting from the secretion of Interleukin (IL)-1 family cytokines by immune cells lead to local or systemic inflammation, tissue ...

A Rapid Strategy for the Isolation of New Faustoviruses from Environmental Samples Using Vermamoeba vermiformis

A Rapid Strategy for the Isolation of New Faustoviruses from Environmental Samples Using Vermamoeba vermiformis

En snabb strategi för isolering av nya Faustoviruses från miljöprover Använda<em&gt; Vermamoeba vermiformis</em

The isolation of giant viruses is of great interest in this new era of virology, especially since these giant viruses are related to protists. Giant ...

Fast and Specific Assessment of the Halogenating Peroxidase Activity in Leukocyte-enriched Blood Samples

Snabb och särskild bedömning av halogene peroxidasaktiviteten i Leukocyte berikad blodprover

In this paper a protocol for the quick and standardized enrichment of leukocytes from small whole blood samples is described. This procedure is based on ...

Measurement of In Vitro Integration Activity of HIV-1 Preintegration Complexes

Measurement of In Vitro Integration Activity of HIV-1 Preintegration Complexes

mätning av<em&gt; In Vitro</em&gt; Integration Aktivitet av HIV-1 Preintegration Anläggningar

HIV-1 envelope proteins engage cognate receptors on the target cell surface, which leads to viral-cell membrane fusion followed by the release of the ...