Name: an ectopic chemokine expression model for testing macrophage recruitment in vivo
Uploaded: 2019-09-25T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Ectopic Chemokine Expression Model for Testing Macrophage Recruitment In Vivo at JoVE.com

Vi takker Dr. Jingrong Peng for deling af TG (fabp10a: DsRed) transgene line; Dr. Zilong Wen for deling af TG (MPEG1: GFP) transgene linjer; Dr. Koichi Kawakami for at levere den pTol2 vektor. Dette arbejde blev støttet af National Natural Science Foundation i Kina (31771594), Guangdong videnskab og teknologi plan projekter (2019A030317001) og de grundlæggende forskningsmidler til de centrale universiteter (D2191450).

Bemærk: Alle prøverne blev behandlet med phenylthiourea (PTU) ægge vand for at hæmme pigment.
1. generation af TG (fabp10a: il34) transgene konstruktioner og fisk injektion
<ol><li>Klon 2,8 KB fabp10a Promoter8 og Il-34 kodning regioner (ensdart 00000126460.3) af Zebra i pTol2 vektor til at generere fabp10a-il34 konstruere. Indsprøjte konstrukterne i en-celle Stage TG (MPEG1: gfp) og WT fiskeembryoner ...

<ol>
	<li>Howe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+reference+genome+sequence+and+its+relationship+to+the+human+genome.">The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome.</a> Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-34+is+a+tissue-restricted+ligand+of+CSF1R+required+for+the+development+of+Langerhans+cells+and+microglia.">IL-34 is a tissue-restricted ligand of CSF1R required for the development of Langerhans cells and microglia.</a> Nature Immunology. 13 (8), 753-760 (2012).</li><li>Lin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery+of+a+cytokine+and+its+receptor+by+functional+screening+of+the+extracellular+proteome.">Discovery of a cytokine and its receptor by functional screening of the extracellular proteome.</a> Science. 320 (5877), 807-811 (2008).</li><li>Wei, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+overlap+but+differential+expression+of+CSF-1+and+IL-34+in+their+CSF-1+receptor-mediated+regulation+of+myeloid+cells.">Functional overlap but differential expression of CSF-1 and IL-34 in their CSF-1 receptor-mediated regulation of myeloid cells.</a> Journal of leukocyte biology. 88 (3), 495-505 (2010).</li><li>Etienne, D., Foucher, S. B. L. P., Norbert Ifrah, P. G. Y. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-34+Induces+the+Differentiation+of+Human+Monocytes+into+Immunosuppressive+Macrophages.+Antagonistic+Effects+of+GM-CSF+and+IFNc.">IL-34 Induces the Differentiation of Human Monocytes into Immunosuppressive Macrophages. Antagonistic Effects of GM-CSF and IFNc.</a> PLoS One. 8 (2), e56045 (2013).</li><li>Segaliny, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Syndecan-1+regulates+the+biological+activities+of+interleukin-34.">Syndecan-1 regulates the biological activities of interleukin-34.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1853 (5), 1010-1021 (2015).</li><li>Zhou, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-28-5p-IL-34-macrophage+feedback+loop+modulates+hepatocellular+carcinoma+metastasis.">miR-28-5p-IL-34-macrophage feedback loop modulates hepatocellular carcinoma metastasis.</a> Hepatology. 63 (5), 1560-1575 (2016).</li><li>Gordon, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+specific+expression+and+developmental+regulation+of+two+genes+coding+for+rat+fatty+acid+binding+proteins.">Tissue specific expression and developmental regulation of two genes coding for rat fatty acid binding proteins.</a> Journal of Biological Chemistry. 260 (4), 1995-1998 (1985).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book: A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>N&#252;sslein-Volhard, C., Dahm, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Zebrafish: a practical approach. , (2002).</li><li>Jiang, Y., Chen, J., Yen, K., Xu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ectopically+Expressed+IL-34+Can+Efficiently+Induce+Macrophage+Migration+to+the+Liver+in+Zebrafish.">Ectopically Expressed IL-34 Can Efficiently Induce Macrophage Migration to the Liver in Zebrafish.</a> Zebrafish. 16 (2), 165-170 (2019).</li></ol>

Den protokol, der er beskrevet her, giver os mulighed for at undersøge funktionen af en chemokine på opførsel af macrophagein vivo og proceduren kræver nogle tekniske ekspertise. Sammenfattende er der flere kritiske skridt for at undgå komplikationer i protokollen: 1) Vælg en egnet transgene linje, der viser specifikke og stærke transgene signal til at mærke cellen af interesse; 2) Vælg et passende væv, der er tilgængeligt for billeddannelse og transgene gen overekspression; 3) lav en følsom og specifik RNA-s...

Zebrafish er en lille tropisk hård knogler ferskvandsfisk stammer fra Indien. Med hensyn til genbevaring, zebra har en lighed på 87% til den menneskelige1. Det kan give os indsigt i beslægtede emner af mennesker ved at studere gen regulering, protein funktion og celle adfærd såsom migration, proliferation et.al i zebrafish. Zebrafish embryo kan bruges til at observere udviklingen af tidlige embryoner på forskellige stadier efter inhibe ring af pigment. I mellemtiden, det tager kun tre måneder for Zebra at udvikle sig til seksuel modenhed, så Zebra kan producere hundredvis af æg hver 4 dage. Mini-størrelse, simpel avl, stærk reproduktionsevne, disse fordele gør Zebra kultur meget pladsbesparende, befordrende for storstilet kultur. Den traditionelle pattedyr model mus har en højere vedligeholdelsesomkostninger end zebrafish, derfor begrænser omfanget af musen hæve. I det aspekt af tidlig embryo udvikling, mus embryo er vanskeligt at observere i levende tilstand på grund af de særlige kendetegn ved mus embryo udvikling i moder livmoderen. Tværtimod udvikler Zebra embryoner eksternt og er gennemsigtige, og derfor er de lette at observere under et mikroskop. Desuden er Zebra meget let at konstruere en række transgene linjer til relateret gen funktion forskning. I øjeblikket er forskellige Zebra transgene linjer tilgængelige til at mærke forskellige typer af celler. Det er meget bekvemt nu at konstruere transgene linjer til overekspressen kemokiner i bestemte steder og studere kemokiner funktion på celle adfærd i zebrafish.
Her leverede vi en arbejdsgang til at bruge Zebra transgene line til at undersøge funktionen af Il-34 på makrofag adfærd i vivo2,3,4,5,6,7. For det første byggede vi en lever-specifik overekspression plasmid af genet il34 og injicerede plasmid i en-celle Stage TG (MPEG1: gfp) fiskeembryoner, som specifikt mærkede makrofager ved fluorescerende protein gfp. Derefter brugte vi hele Mount fluorescerende in situ hybridisering og immun farvning til at detektere mønsteret af il34 udtryk og antallet eller placeringen af makrofager. De injicerede WT embryoner blev opvokset for at generere en stabil transgene linje. I disse trin etablerede og validerede vi den cytokinproducerende linje og vurderede visuelt de virkninger, der kan ses på makrofag distributionen. Endelig, for at undersøge makrofag adfærd som reaktion på cytokin, vi brugte konfokale Live imaging til direkte observere makrofag migration for at bekræfte funktionen af il34 på makrofag migration in vivo.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antibody</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 488-Anti-Goat antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Digoxigenin-HRP&#160;</td>
			<td>perkinelmer</td>
			<td>NEF832001EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat-Anti-GFP antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab6658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2&#183; 2H2O</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>21097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanine 3 Plus Amplification Reagent</td>
			<td>perkinelmer</td>
			<td>NEL745001KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E2 solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>15 mM&#160; NaCl +0.5 mM KCl +1.0 mM MgSO4+150 &#181;M&#160; KH2PO4 + 50 &#181;M&#160; Na2HPO4 +1.0 mM CaCl2 + 0.7 mM NaHCO3&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum(FBS)</td>
			<td>Life</td>
			<td>10099-133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>formamide</td>
			<td>Diamond</td>
			<td>A100314</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glycerol&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>V900860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heparin sodium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hybridization buffer(HB)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>50% formamide+ 5&#215;SSC+9 mM sodium citrate+50 &#956;g/ml heparin sodium+ 500 &#956;g/ml tRNA+ 0.1% Tween20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>low melting agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methanol</td>
			<td>GHTECH</td>
			<td>1.17112.023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methylene blue&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M9140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M2643</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde(PFA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>158127</td>
			<td>Suspend 16 g of PFA in 400 ml of 1x PBS, heat at 60 &#176;C&#160; to dissolve about 30 min. This solution can be prepared in advance and stored at -4 &#176;C. Caution. Manipulate with mask.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10&#215;PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>14.2 g Na2HPO4+80 g NaCl+2 g KCl+ 2.4 g KH2PO4 in 1L ddH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenylthiourea(PTU)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1&#215;Plus Amplification Diluent</td>
			<td>perkinelmer</td>
			<td>NEL745001KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K&#160;</td>
			<td>Fermentas</td>
			<td>E00492</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20&#215;Saline sodium citrate(SSC)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>175.3 g NaCl+ 88.2 g sodium citrate in 1 L ddH2O, PH 7.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium citrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tricaine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E10521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tRNA&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R6625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween20</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pBLK-fabp10a-il34-sv40</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Tg (fab10a:il34) transgenic line generation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pBSK-il34</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For il34 probe preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fish</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tg (mpeg1: GFP)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Label macrophages with GFP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tg (fabp10a: DsRed)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Label liver cells with DsRed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tg (fab10a:il34)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Over-expression IL-34 in liver cells</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an ectopic chemokine expression model for testing macrophage recruitment in vivo

Zebrafish anvendes i vid udstrækning i grundforskning og biomedicin. Mange Zebra transgene linjer er i øjeblikket tilgængelige til at mærke forskellige typer af celler. På grund af den gennemsigtige embryonale krop af zebrafish, er det bekvemt for os at studere effekten af en chemokine på opførsel af en bestemt type celler in vivo. Her leverede vi en arbejdsgang til at undersøge funktionen af en chemokine på makrofag migration in vivo. Vi konstruerede en vævs specifik overekspression plasmid til at over ekspor IL-34 og injicerede plasmid i en-celle fase transgene fiskeembryoner, hvis makrofager var specifikt mærket af et fluorescerende protein. Vi brugte derefter hele Mount fluorescerende in situ hybridisering og immun farvning til at detektere mønsteret af chemokine ekspression og antallet eller placeringen af makrofager. De injicerede WT embryoner blev opvokset for at generere en stabil transgene linje. Endelig brugte vi konfokale Live imaging til direkte at observere makrofagopførsel i den stabile transgene fisk for at studere funktionen af Il-34 på makrofager in vivo.

De skridt, der er involveret i protokollen af Zebra er illustreret i figur 2. For det første genererede vi pBLK-fabp10a-il34-SV40-konstruktionen, hvor il34 blev drevet af fabp10a promotoren (figur 2). Konstruktionen blev mikroinjiceres i en-celle Stage TG (MPEG1: gfp) Zebra embryoner, som kan mærke makrofager med gfp og WT embryoner, som blev hævet til voksne til at generere transgene stabil...

Watch this Scientific Journal Video about An Ectopic Chemokine Expression Model for Testing Macrophage Recruitment In Vivo at JoVE.com

An Ectopic Chemokine Expression Model for Testing Macrophage Recruitment In Vivo

For at afprøve virkningen af en kemokin på makrofag rekruttering in vivo, blev hele Mount in situ hybridisering anvendt til at detektere ektopisk ekspression af chemokin, og immun farvning blev brugt til at mærke makrofager. Live imaging blev brugt til realtids observation af makrofag migration.

En Ectopic chemokine udtryks model til afprøvning af makrofag rekruttering in vivo

Zebrafish are widely used in basic and biomedical research. Many zebrafish transgenic lines are currently available to label various types of cells. Owing ...

Den protokol, der er beskrevet her giver os mulighed for at undersøge funktionen af en chemokine og adfærd makrofag in vivo. De fleste af de eksisterende eksperimentelle modeller af celle chemotaxis er baseret på in vitro celle eksperimenter. Men in vitro eksperimenter nogle gange er for enkle til at modellere det komplekse miljø in vivo.Også, de kan ikke repræsentere kemoattraction evne in vivo. Disse metoder udnytter den specifikke fordel ved zebra fisk til direkte celle adfærd observation, hvilket er vanskeligt for mus. Start med at generere TGFABP-10A interleukin-34 transgene konstruktioner.Injicer FABP-10A interleukin-34 konstruktioner i en celle fase Tg (mpeg1:GFP) transgene og en vild-type fisk embryoner sammen med transposase MRNA. Hæv og opsaml embryonerne i henhold til manuskriptinstruktioner. Derefter, fastsætte dem med 4% paraformaldehyd natten ved 4 grader Celsius eller i to timer ved stuetemperatur.Efter fikseringen vaskes embryonerne med PBST tre gange i fem minutter pr. vask. Dehydrer embryonerne separat med 50 % methanol i PBST, efterfulgt af 100 % methanol, skift derefter til frisk 100% methanol, og opbevar dem ved negative 20 grader Celsius i mindst 2 timer. Når embryonerne er klar til sondehydning, skal embryonerne rehydreres separat i 50 % methanol i PBST.Vask dem derefter med PBST tre gange i fem minutter pr. vask. Fordøje embryoner med proteinase K i PBST ved stuetemperatur. Derefter kasseres fordøjelsesopløsningen, og du skal gentage fikseringen med 4% paraformaldehyd i 20 minutter ved stuetemperatur.Efter fikseringen vaskes embryonerne to gange med PBST i 10 minutter pr. vask. Udfør prehybridization med opvarmet hybridisering buffer ved 65 grader Celsius i mindst en time. Derefter forvarm interleukin-34 sonden til 65 grader Celsius i 10 minutter.Genbrug hybridiseringsbufferen i det oprindelige rør, og udfør hybridisering med den forvarmede sonde ved 65 grader Celsius natten over. På den næste dag, vaske embryoner med 50% formamid og 2X SSCT efterfulgt af 2X SSCT og derefter 0,2X SSCT ved 65 grader Celsius. Gentag hver vask tre gange med 20 minutter pr vask.Derefter vaskes embryonerne tre gange med PBST i fem minutter pr. vask. Prøven blokeres med 600 milliliter blokerebuffer i en time ved stuetemperatur. Derefter tilsættes 400 mikroliter anti-digoxigenin HRP antistofopløsning og inkubere embryonerne ved fire grader Celsius natten over.Den næste dag fjernes antistoffet, og embryonerne vaskes seks gange med PBST i 20 minutter pr. vask. Efter den sidste vask skylles hver prøve med 30 mikroliter 1X plus forstærkningsfortyndingstudynding i fem minutter. Inkuber prøverne i fluoroforetrolabearbejdningsopløsningen i fem til 15 minutter i mørke.Udvidelse af inkubationstiden til 30 minutter, hvis signalerne er svage. Derefter vaskes embryonerne med PBST tre gange i 10 minutter pr. vask. Og inkubere dem med det primære antistof ved fire grader Celsius natten over.Den næste dag vaskes embryonerne fem gange med PBST i 30 minutter pr. vask, og inkuber dem med de sekundære antistoffer ved fire grader Celsius natten over. Den næste dag vaskes embryonerne tre gange i PBST i 10 minutter pr. vask, og opbevar dem i 70% glycerol i mørke ved fire grader Celsius eller negative 20 grader Celsius i længere tid. Før billeddannelse, skal du bruge et fluorescensmikroskop til at vælge DS rød og GFP dobbelt positive embryoner.For at montere fisken, skal du bruge et metalbad til at opvarme en milliliter 1% lav smeltende agarose til over 90 grader Celsius. Derefter afkøles det til kropstemperatur og bland i 50 mikroliter på 0,2% tricain. Overfør de bedøvede embryoner til en lille skål monteret med et dæksel dias på bunden.Fjern det omgivende vand og langsomt slippe den lave smeltende agarose på embryoner. Sæt forsigtigt fiskens position, før agarose er størknet, så leverområdet er tæt på dækslet. Når agarose har størknet, omhyggeligt dække det med et andet lag af agarose at styrke det.Placer skålen på konfokale mikroskop luftfartsselskab bordet, dække fisk med E2 løsning med tricain, og begynde billeddannelse. For at betjene konfokale mikroskop, åbne Zen Black 2,3 software og klik finde, derefter inkubation, og derefter indstille temperaturen til 29 grader Celsius. Klik på anskaffelsesmenuen, og vælg den nødvendige scanningstilstand og lasere i den smarte opsætningsmenu.Vælg derefter Z-stak og position. Klik på den eksperimentelle designer menuen og vælg aktivere multi blok eksperiment i den første blok for at finde prøven under lav forstørrelse. Skift derefter til den høje forstørrelse, og lad det observerede område i midten af synsfeltet.Angiv oplysninger om position og Z-stack. Vælg derefter den relevante laserintensitet, scanningslag og billedhastighed. Når alle blokke er konfigureret, skal du indstille det rette antal løkker og begynde at optage.Denne protokol blev brugt til at injicere en leverspecifik interleukin-34 over udtrykket plasmid i transgene fiskeembryoner, som er makrofager blev mærket med GFP. Fuld mount fluorescens in situ hybridisering og immunostaining blev brugt til at analysere udtrykket af interleukin-34 og GFP mærket makrofager. Makrofagcellenumre blev kvantitativt analyseret i ikke-injected og konstruere injicerede embryoer'liver og tail region.Levende billeddannelse blev brugt til direkte at observere makrofager, mærket grøn, forbi leveren af en kontrol fisk og migrerer ind i leveren af en interleukin-34 over udtrykke fisk. De vigtige trin i denne protokol omfatter valg af en passende transgen linje til at mærke den celle af interesse. Og passende væv til billeddannelse dit udtryk for transgene gen samt en passende observation tid vindue.Denne teknik kan anvendes til at studere funktionen af andre chemokines på adfærd af andre celler, såsom T-celler og neutrofiler in vivo.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

Live-Imaging af medfødte immunsystem og præneoplastiske celleinteraktioner Brug en inducerbar Gal4 / UAS Expression System i Larve Zebrafisk Skin

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

An Optogenetic Approach for Assessing Formation of Neuronal Connections in a Co-culture System

En optogenetic fremgangsmåde for vurdering af Dannelse af neuronal forbindelser i en co-kultur System

Here we describe a protocol to generate a co-culture consisting of 2 different neuronal populations. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are ...

Development of an Ethanol-induced Fibrotic Liver Model in Zebrafish to Study Progenitor Cell-mediated Hepatocyte Regeneration

Udvikling af en Ethanol-induceret Fibrotiske Lever Model i Zebrafisk at studere progenitorcelle-medieret hepatocyt Regeneration

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading ...

Drug Treatment and In Vivo Imaging of Osteoblast-Osteoclast Interactions in a Medaka Fish Osteoporosis Model

Drug Treatment and In Vivo Imaging of Osteoblast-Osteoclast Interactions in a Medaka Fish Osteoporosis Model

Drug behandling og<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging af Osteoblast-osteoklaster Interaktioner i en Medaka Fish Osteoporose Model

Bone-forming osteoblasts interact with bone-resorbing osteoclasts to coordinate the turnover of bone matrix and to control skeletal homeostasis. Medaka ...

An Ex Vivo Method for Time-Lapse Imaging of Cultured Rat Mesenteric Microvascular Networks

An Ex Vivo Method for Time-Lapse Imaging of Cultured Rat Mesenteric Microvascular Networks

en<em&gt; Ex vivo</em&gt; Metode til Time-Lapse Imaging af dyrkede Rat Mesenteriske Mikrovaskulære Networks

Angiogenesis, defined as the growth of new blood vessels from pre-existing vessels, involves endothelial cells, pericytes, smooth muscle cells, immune ...

In Vivo Imaging of Transgenic Gene Expression in Individual Retinal Progenitors in Chimeric Zebrafish Embryos to Study Cell Nonautonomous Influences

In Vivo Imaging of Transgenic Gene Expression in Individual Retinal Progenitors in Chimeric Zebrafish Embryos to Study Cell Nonautonomous Influences

In Vivo Imaging af transgene genekspression i Individuel Retinal progenitorer i kimære zebrafisk embryoner til Studieinformationen Cell Nonautonomous påvirkninger

The genetic and technical strengths have made the zebrafish vertebrate a key model organism in which the consequences of gene manipulations can be traced ...

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Etablering af larve zebrafisk som en dyr Model til at undersøge Trypanosoma cruzi motilitet In Vivo

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Anvendelse af RNAi og Heat-shock-induceret transskription faktor udtryk til at omprogrammere kønsceller til neuroner i C. elegans

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Culturing of Retinal Pigment Epithelial Cells on an Ex Vivo Model of Aged Human Bruch's Membrane

Culturing of Retinal Pigment Epithelial Cells on an Ex Vivo Model of Aged Human Bruch's Membrane

Dyrkning af retinale Pigment epitel celler på en Ex Vivo Model af alderen menneskelige Bruchs membran

Aside from vitamins and antioxidants recommended by the Age-Related Eye Disease Study, there is no effective therapy for &#34;dry,&#34;&#160;or atrophic ...

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

En In Vitro Model af en Parallel-plade Perfusion System at studere bakteriel tilslutning til at pode væv

Various valved conduits and stent-mounted valves are used for right ventricular outflow tract (RVOT) valve replacement in patients with congenital heart ...