Name: an ectopic chemokine expression model for testing macrophage recruitment in vivo
Uploaded: 2019-09-25T14:30:00
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Nous remercions le Dr Jingrong Peng d'avoir partagé la ligne transgénique Tg (fabp10a: DsRed); Dr. Zilong Wen pour le partage des lignes transgéniques Tg (mpeg1: GFP); Dr. Koichi Kawakami pour fournir le vecteur pTol2. Ces travaux ont été soutenus par la National Natural Science Foundation of China (31771594), les projets du Guangdong Science and Technology Plan (2019A030317001) et les Fonds de recherche fondamentale pour les universités centrales (D2191450).

REMARQUE: Tous les échantillons ont été traités par l'eau d'oeuf de phénylthiourea (PTU) pour inhiber le pigment.
1. Génération de Tg (fabp10a:il34) Transgenic Constructs and Fish Injection
<ol><li>Clonez le promoteur 2.8 kb fabp10a 8 et les régions de codage IL-34 (ENSDART00000126460.3) de poissons zèbres dans le vecteur pTol2 pour générer la construction fabp10a-il34. Injecter les constructions dans un stade à ...

<ol>
	<li>Howe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+reference+genome+sequence+and+its+relationship+to+the+human+genome.">The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome.</a> Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-34+is+a+tissue-restricted+ligand+of+CSF1R+required+for+the+development+of+Langerhans+cells+and+microglia.">IL-34 is a tissue-restricted ligand of CSF1R required for the development of Langerhans cells and microglia.</a> Nature Immunology. 13 (8), 753-760 (2012).</li><li>Lin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery+of+a+cytokine+and+its+receptor+by+functional+screening+of+the+extracellular+proteome.">Discovery of a cytokine and its receptor by functional screening of the extracellular proteome.</a> Science. 320 (5877), 807-811 (2008).</li><li>Wei, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+overlap+but+differential+expression+of+CSF-1+and+IL-34+in+their+CSF-1+receptor-mediated+regulation+of+myeloid+cells.">Functional overlap but differential expression of CSF-1 and IL-34 in their CSF-1 receptor-mediated regulation of myeloid cells.</a> Journal of leukocyte biology. 88 (3), 495-505 (2010).</li><li>Etienne, D., Foucher, S. B. L. P., Norbert Ifrah, P. G. Y. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-34+Induces+the+Differentiation+of+Human+Monocytes+into+Immunosuppressive+Macrophages.+Antagonistic+Effects+of+GM-CSF+and+IFNc.">IL-34 Induces the Differentiation of Human Monocytes into Immunosuppressive Macrophages. Antagonistic Effects of GM-CSF and IFNc.</a> PLoS One. 8 (2), e56045 (2013).</li><li>Segaliny, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Syndecan-1+regulates+the+biological+activities+of+interleukin-34.">Syndecan-1 regulates the biological activities of interleukin-34.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1853 (5), 1010-1021 (2015).</li><li>Zhou, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-28-5p-IL-34-macrophage+feedback+loop+modulates+hepatocellular+carcinoma+metastasis.">miR-28-5p-IL-34-macrophage feedback loop modulates hepatocellular carcinoma metastasis.</a> Hepatology. 63 (5), 1560-1575 (2016).</li><li>Gordon, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+specific+expression+and+developmental+regulation+of+two+genes+coding+for+rat+fatty+acid+binding+proteins.">Tissue specific expression and developmental regulation of two genes coding for rat fatty acid binding proteins.</a> Journal of Biological Chemistry. 260 (4), 1995-1998 (1985).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book: A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>N&#252;sslein-Volhard, C., Dahm, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Zebrafish: a practical approach. , (2002).</li><li>Jiang, Y., Chen, J., Yen, K., Xu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ectopically+Expressed+IL-34+Can+Efficiently+Induce+Macrophage+Migration+to+the+Liver+in+Zebrafish.">Ectopically Expressed IL-34 Can Efficiently Induce Macrophage Migration to the Liver in Zebrafish.</a> Zebrafish. 16 (2), 165-170 (2019).</li></ol>

Le protocole décrit ici nous permet d'étudier la fonction d'une chimiokine sur le comportement de la macrophagein vivo et la procédure nécessite une certaine expertise technique. En résumé, il y a plusieurs étapes critiques pour éviter des complications dans le protocole : 1) sélectionnez une ligne transgénique appropriée qui montre le signal transgénique spécifique et fort pour étiqueter la cellule d'intérêt ; 2) sélectionner un tissu approprié qui est accessible pour l'imagerie et la surexpression des...

Le poisson zèbre est un petit poisson d'eau douce tropical à os durs originaire de l'Inde. En ce qui concerne la conservation des gènes, le poisson zèbre ont une similitude de 87% à l'homme1. Il peut nous fournir des informations sur des sujets connexes de l'homme en étudiant la régulation des gènes, la fonction des protéines et le comportement cellulaire tels que la migration, la prolifération et.al chez le poisson zèbre. L'embryon de poisson zèbre peut être utilisé pour observer le développement des embryons précoces à différents stades après avoir inhibé le pigment. Pendant ce temps, il ne faut que trois mois pour que le poisson zèbre se développe en maturité sexuelle, puis le poisson zèbre peut produire des centaines d'œufs tous les 4 jours. Mini-taille, reproduction simple, forte capacité de reproduction, ces avantages rendent la culture du poisson zèbre très économe en espace, propice à la culture à grande échelle. La souris modèle mammifère traditionnelle a des coûts d'entretien plus élevés que le poisson zèbre, limitant ainsi l'échelle de l'élevage de souris. Dans l'aspect du développement précoce de l'embryon, l'embryon de souris est difficile à observer en état vivant en raison des caractéristiques du développement de l'embryon de souris dans l'utérus de la mère. Au contraire, les embryons de poissons zèbres se développent à l'extérieur et sont transparents, donc ils sont faciles à observer au microscope. En outre, le poisson zèbre est très facile de construire une variété de lignes transgéniques pour la recherche sur la fonction génique connexe. Actuellement, diverses lignées transgéniques de poisson zèbre sont disponibles pour étiqueter différents types de cellules. Il est très pratique maintenant de construire des lignes transgéniques pour surexprimer les chimiolines dans des endroits spécifiques et d'étudier la fonction de chemokines sur le comportement cellulaire chez le poisson zèbre.
Ici, nous avons fourni un flux de travail pour utiliser la ligne transgénique de poisson zèbre pour étudier la fonction de l'IL-34 sur le comportement de macrophage in vivo2,3,4,5,6,7. Tout d'abord, nous avons construit un plasmide de surexpression spécifique au foie du gène il34 et injecté le plasmide dans un stade à cellule Tg (mpeg1: GFP) embryons de poissons qui ont spécifiquement étiqueté les macrophages par la protéine fluorescente GFP. Ensuite, nous avons utilisé l'hybridation in situ fluorescente de montage entier et l'immunostaining pour détecter le modèle de l'expression il34 et le nombre ou l'emplacement des macrophages. Les embryons WT injectés ont été élevés pour générer une lignée transgénique stable. Dans ces étapes, nous avons établi et validé la ligne de cytokine-productrice et avons évalué visuellement les effets qui peuvent être vus sur la distribution de macrophage. Enfin, pour étudier le comportement de macrophage en réponse à la cytokine, nous avons employé la formation image vivante confocale pour observer directement la migration de macrophage pour confirmer la fonction d'il34 sur la migration de macrophage in vivo.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antibody</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 488-Anti-Goat antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Digoxigenin-HRP&#160;</td>
			<td>perkinelmer</td>
			<td>NEF832001EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat-Anti-GFP antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab6658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2&#183; 2H2O</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>21097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanine 3 Plus Amplification Reagent</td>
			<td>perkinelmer</td>
			<td>NEL745001KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E2 solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>15 mM&#160; NaCl +0.5 mM KCl +1.0 mM MgSO4+150 &#181;M&#160; KH2PO4 + 50 &#181;M&#160; Na2HPO4 +1.0 mM CaCl2 + 0.7 mM NaHCO3&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum(FBS)</td>
			<td>Life</td>
			<td>10099-133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>formamide</td>
			<td>Diamond</td>
			<td>A100314</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glycerol&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>V900860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heparin sodium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hybridization buffer(HB)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>50% formamide+ 5&#215;SSC+9 mM sodium citrate+50 &#956;g/ml heparin sodium+ 500 &#956;g/ml tRNA+ 0.1% Tween20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>low melting agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methanol</td>
			<td>GHTECH</td>
			<td>1.17112.023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methylene blue&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M9140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M2643</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde(PFA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>158127</td>
			<td>Suspend 16 g of PFA in 400 ml of 1x PBS, heat at 60 &#176;C&#160; to dissolve about 30 min. This solution can be prepared in advance and stored at -4 &#176;C. Caution. Manipulate with mask.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10&#215;PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>14.2 g Na2HPO4+80 g NaCl+2 g KCl+ 2.4 g KH2PO4 in 1L ddH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenylthiourea(PTU)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1&#215;Plus Amplification Diluent</td>
			<td>perkinelmer</td>
			<td>NEL745001KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K&#160;</td>
			<td>Fermentas</td>
			<td>E00492</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20&#215;Saline sodium citrate(SSC)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>175.3 g NaCl+ 88.2 g sodium citrate in 1 L ddH2O, PH 7.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium citrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tricaine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E10521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tRNA&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R6625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween20</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pBLK-fabp10a-il34-sv40</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Tg (fab10a:il34) transgenic line generation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pBSK-il34</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For il34 probe preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fish</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tg (mpeg1: GFP)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Label macrophages with GFP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tg (fabp10a: DsRed)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Label liver cells with DsRed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tg (fab10a:il34)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Over-expression IL-34 in liver cells</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an ectopic chemokine expression model for testing macrophage recruitment in vivo

Le poisson zèbre est largement utilisé dans la recherche fondamentale et biomédicale. De nombreuses lignées transgéniques de poissons zèbres sont actuellement disponibles pour étiqueter divers types de cellules. En raison du corps embryonnaire transparent du poisson zèbre, il est commode pour nous d'étudier l'effet d'une chimiokine sur le comportement d'un certain type de cellules in vivo. Ici nous avons fourni un workflow pour étudier la fonction d'une chimiokine sur la migration de macrophage in vivo. Nous avons construit un plasmide de surexpression spécifique aux tissus pour surexprimer l'IL-34 et injecté le plasmide dans des embryons de poissons transgéniques à un stade cellulaire dont les macrophages ont été spécifiquement étiquetés par une protéine fluorescente. Nous avons ensuite utilisé l'hybridation in situ fluorescente de montage entier et l'immunostaining pour détecter le modèle de l'expression de chemokine et le nombre ou l'emplacement des macrophages. Les embryons WT injectés ont été élevés pour générer une lignée transgénique stable. Enfin, nous avons utilisé la formation image vivante confocale pour observer directement le comportement de macrophage dans le poisson transgénique stable pour étudier la fonction de l'IL-34 sur des macrophages in vivo.

Les étapes du protocole du poisson zèbre sont illustrées à la figure 2. Tout d'abord, nous avons généré la construction pBLK-fabp10a-il34-sv40 dans laquelle il34 a été conduit par le promoteur fabp10a (Figure 2). La construction a été micro-injectée dans un stade à cellule Tg (mpeg1 : GFP) embryons de poissons zèbres qui peuvent étiqueter les macrophages avec des embryons de GFP ...

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An Ectopic Chemokine Expression Model for Testing Macrophage Recruitment In Vivo

Pour tester l'effet d'une chimiokine sur le recrutement de macrophages in vivo, l'hybridation in situ de montage entière a été employée pour détecter l'expression ectopique de la chimiokine, et l'immunostaining a été employée pour étiqueter des macrophages. L'imagerie en direct a été utilisée pour l'observation en temps réel de la migration des macrophages.

Un modèle d'expression ectopique de chemokine pour tester le recrutement de macrophage in Vivo

Zebrafish are widely used in basic and biomedical research. Many zebrafish transgenic lines are currently available to label various types of cells. Owing ...

Le protocole décrit ici nous permet d’étudier la fonction d’une chimiokine et le comportement du macrophage in vivo. La plupart des modèles expérimentaux existants de chimiotaxis cellulaires sont basés sur des expériences de cellules in vitro. Mais les expériences in vitro sont parfois trop simples pour modéliser l’environnement complexe in vivo.En outre, ils peuvent ne pas représenter la capacité de chimioattraction in vivo. Ces méthodes utilisent l’avantage spécifique des poissons zèbres pour l’observation directe du comportement cellulaire, ce qui est difficile pour les souris. Commencez par générer des constructions transgéniques TGFABP-10A interleukin-34.Injectez les constructions FABP-10A interleukin-34 en un seul stade cellulaire Tg (mpeg1:GFP) transgénique et un embryon de poisson de type sauvage avec la transposase MRNA. Élever et recueillir les embryons selon les instructions manuscrites. Ensuite, fixez-les avec 4% de paraformaldéhyde pendant la nuit à 4 degrés Celsius ou pendant deux heures à température ambiante.Après fixation, laver les embryons avec PBST trois fois pendant cinq minutes par lavage. Déshydratez les embryons séparément avec 50% de méthanol en PBST, suivi de 100% de méthanol, puis changez en méthanol frais à 100%, et stockez-les à 20 degrés Celsius négatifs pendant au moins 2 heures. Lorsqu’ils sont prêts pour l’hybridation de la sonde, réhydrater les embryons séparément dans 50% de méthanol dans PBST.Ensuite, lavez-les avec PBST trois fois pendant cinq minutes par lavage. Digérer les embryons avec la proteinase K dans PBST à température ambiante. Ensuite, jetez la solution de digestion, et répétez la fixation avec 4% de paraformaldéhyde pendant 20 minutes à température ambiante.Après la fixation, laver les embryons deux fois avec le PBST pendant 10 minutes par lavage. Effectuez la préhybridisation avec tampon d’hybridation chauffé à 65 degrés Celsius pendant au moins une heure. Ensuite, préchauffer la sonde interleukine-34 à 65 degrés Celsius pendant 10 minutes.Recyclez le tampon d’hybridation dans le tube d’origine et effectuez l’hybridation avec la sonde préchauffée à 65 degrés Celsius pendant la nuit. Le lendemain, laver les embryons avec 50% de formamide et 2X SSCT suivi de 2X SSCT, puis 0,2X SSCT à 65 degrés Celsius. Répéter chaque lavage trois fois avec 20 minutes par lavage.Ensuite, lavez les embryons trois fois avec le PBST pendant cinq minutes par lavage. Bloquez les échantillons avec 600 millilitres de tampon bloquant pendant une heure à température ambiante. Ensuite, ajoutez 400 microlitres de solution anticorps anti-digoxigenin HRP et incubez les embryons à quatre degrés Celsius pendant la nuit.Le lendemain, retirer l’anticorps et laver les embryons six fois avec le PBST pendant 20 minutes par lavage. Après le dernier lavage, rincer chaque échantillon avec 30 microlitres de 1X plus diluant d’amplification pendant cinq minutes. Incuber les échantillons dans la solution de travail de la tyramine fluorophore pendant cinq à 15 minutes dans l’obscurité.Prolonger le temps d’incubation à 30 minutes si les signaux sont faibles. Ensuite, lavez les embryons avec PBST trois fois pendant 10 minutes par lavage. Et les incuber avec l’anticorps primaire à quatre degrés Celsius pendant la nuit.Le lendemain, lavez les embryons cinq fois avec le PBST pendant 30 minutes par lavage, et incubez-les avec les anticorps secondaires à quatre degrés Celsius pendant la nuit. Le lendemain, lavez les embryons trois fois en PBST pendant 10 minutes par lavage, et conservez-les dans 70% de glycérol dans l’obscurité à quatre degrés Celsius ou négatifs 20 degrés Celsius plus longtemps. Avant l’imagerie, utilisez un microscope à fluorescence pour sélectionner les embryons rouges DS et GFP double positifs.Pour monter le poisson, utilisez un bain en métal pour chauffer un millilitre de 1% de faible fondant agarose à plus de 90 degrés Celsius. Ensuite, refroidissez-le à la température corporelle et mélangez-le en 50 microlitres de 0,2% de tricaine. Transférer les embryons anesthésiés dans un petit plat monté avec une toboggan sur le fond.Enlevez l’eau environnante et déposez lentement la faible fonte sur les embryons. Réglez soigneusement la position du poisson avant que l’agarose ne se soit solidifiée, en gardant la zone hépatique près de la glissière de couverture. Une fois que l’agarose s’est solidifiée, couvrez-la soigneusement d’une autre couche d’agarose pour la renforcer.Placez le plat sur la table confocale du porte-microscope, couvrez le poisson de la solution E2 avec de la tricaine et commencez l’imagerie. Pour faire fonctionner le microscope confocal, ouvrez le logiciel Zen Black 2.3 et cliquez sur localiser, puis l’incubation, puis réglez la température à 29 degrés Celsius. Cliquez sur le menu d’acquisition et sélectionnez le mode de numérisation et les lasers requis dans le menu d’installation intelligent.Sélectionnez ensuite Z-stack et position. Cliquez sur le menu du concepteur expérimental et sélectionnez activer l’expérience multibloc dans le premier bloc pour trouver l’échantillon sous faible grossissement. Ensuite, passez au grossissement élevé et laissez la zone observée au centre du champ visuel.Définissez la position et les informations Z-stack. Sélectionnez ensuite l’intensité laser appropriée, les couches de balayage et la vitesse d’imagerie. Une fois que tous les blocs sont configurés, définissez le nombre approprié de boucles et commencez à enregistrer.Ce protocole a été employé pour injecter un interleukin-34 foie-spécifique au-dessus du plasmide d’expression dans les embryons transgéniques de poissons, qui les macrophages de s ont été étiquetés avec GFP. L’hybridation et l’immunostaining in situ de fluorescence de montage complet ont été employés pour analyser l’expression de l’interleukin-34 et des macrophages étiquetés de GFP. Les nombres de cellules de macrophage ont été quantitativement analysés dans la région non injectée et construisent le foie et la queue des embryons injectés.L’imagerie vivante a été utilisée pour observer directement les macrophages, étiquetés verts, en passant par le foie d’un poisson de contrôle et en migrant dans le foie d’un interleukine-34 sur l’expression des poissons. Les étapes importantes de ce protocole comprennent le choix d’une ligne transgénique appropriée pour étiqueter la cellule d’intérêt. Et des tissus appropriés pour l’imagerie de votre expression du gène transgénique ainsi que d’une fenêtre de temps d’observation appropriée.Cette technique pourrait être appliquée pour étudier la fonction d’autres chimiokines sur le comportement d’autres cellules, telles que les T-cells et les neutrophiles in vivo.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

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Traitement de la toxicomanie et<em&gt; In Vivo</em&gt; Imagerie des ostéoblastes-ostéoclastes Interactions dans un modèle Medaka poisson Ostéoporose

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