Name: an ectopic chemokine expression model for testing macrophage recruitment in vivo
Uploaded: 2019-09-25T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Ectopic Chemokine Expression Model for Testing Macrophage Recruitment In Vivo at JoVE.com

Vi takker Dr. Jingrong Peng for deling av TG (fabp10a: DsRed) transgene line; Dr. Zilong Wen for deling av TG (MPEG1: GFP) transgene Lines; Dr. Koichi Kawakami for å gi pTol2 vektor. Dette arbeidet ble støttet av National Natural Science Foundation i Kina (31771594), Guangdong Science and Technology plan prosjekter (2019A030317001) og grunnleggende Research Funds for Central universiteter (D2191450).

Merk: Alle prøvene ble behandlet av phenylthiourea (PTU) egg vann for å hemme pigment.
1. generering av TG (fabp10a: Il34) transgene konstruerer og Fish Injection
<ol><li>Klon det 2,8 KB fabp10a promoter8 og det Il-34 kodingen områder (ensdart 00000126460.3) av sebrafisk inn i pTol2 vektor å utvikle det fabp10a-il34 konstruere. Injiser konstruerer i en-celle scene TG (MPEG1: GFP) og WT fisk embryo samme...

<ol>
	<li>Howe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+reference+genome+sequence+and+its+relationship+to+the+human+genome.">The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome.</a> Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-34+is+a+tissue-restricted+ligand+of+CSF1R+required+for+the+development+of+Langerhans+cells+and+microglia.">IL-34 is a tissue-restricted ligand of CSF1R required for the development of Langerhans cells and microglia.</a> Nature Immunology. 13 (8), 753-760 (2012).</li><li>Lin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery+of+a+cytokine+and+its+receptor+by+functional+screening+of+the+extracellular+proteome.">Discovery of a cytokine and its receptor by functional screening of the extracellular proteome.</a> Science. 320 (5877), 807-811 (2008).</li><li>Wei, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+overlap+but+differential+expression+of+CSF-1+and+IL-34+in+their+CSF-1+receptor-mediated+regulation+of+myeloid+cells.">Functional overlap but differential expression of CSF-1 and IL-34 in their CSF-1 receptor-mediated regulation of myeloid cells.</a> Journal of leukocyte biology. 88 (3), 495-505 (2010).</li><li>Etienne, D., Foucher, S. B. L. P., Norbert Ifrah, P. G. Y. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-34+Induces+the+Differentiation+of+Human+Monocytes+into+Immunosuppressive+Macrophages.+Antagonistic+Effects+of+GM-CSF+and+IFNc.">IL-34 Induces the Differentiation of Human Monocytes into Immunosuppressive Macrophages. Antagonistic Effects of GM-CSF and IFNc.</a> PLoS One. 8 (2), e56045 (2013).</li><li>Segaliny, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Syndecan-1+regulates+the+biological+activities+of+interleukin-34.">Syndecan-1 regulates the biological activities of interleukin-34.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1853 (5), 1010-1021 (2015).</li><li>Zhou, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-28-5p-IL-34-macrophage+feedback+loop+modulates+hepatocellular+carcinoma+metastasis.">miR-28-5p-IL-34-macrophage feedback loop modulates hepatocellular carcinoma metastasis.</a> Hepatology. 63 (5), 1560-1575 (2016).</li><li>Gordon, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+specific+expression+and+developmental+regulation+of+two+genes+coding+for+rat+fatty+acid+binding+proteins.">Tissue specific expression and developmental regulation of two genes coding for rat fatty acid binding proteins.</a> Journal of Biological Chemistry. 260 (4), 1995-1998 (1985).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book: A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>N&#252;sslein-Volhard, C., Dahm, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Zebrafish: a practical approach. , (2002).</li><li>Jiang, Y., Chen, J., Yen, K., Xu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ectopically+Expressed+IL-34+Can+Efficiently+Induce+Macrophage+Migration+to+the+Liver+in+Zebrafish.">Ectopically Expressed IL-34 Can Efficiently Induce Macrophage Migration to the Liver in Zebrafish.</a> Zebrafish. 16 (2), 165-170 (2019).</li></ol>

Protokollen er beskrevet her tillater oss å undersøke funksjonen av en chemokine på atferden til macrophagein vivo og prosedyren krever noen teknisk ekspertise. Oppsummert er det flere viktige skritt for å unngå komplikasjoner i protokollen: 1) Velg en passende transgene linje som viser spesifikt og sterkt transgene signal for å merke cellen av interesse; 2) Velg et passende vev som er tilgjengelig for bildebehandling og transgene gen overuttrykte; 3) lage en sensitiv og spesifikk RNA-sonde; 4) Velg et passende obs...

Sebrafisk er en liten tropisk hard-Bones ferskvannsfisk oppsto i India. Når det gjelder gen bevaring, sebrafisk har en likhet med 87% til den menneskelige1. Det kan gi oss innsikt i beslektede emner av menneskelig ved å studere gen regulering, protein funksjon og celle atferd som migrasjon, spredning et.al i sebrafisk. Sebrafisk embryo kan brukes til å observere utviklingen av tidlig embryo på ulike stadier etter hemme pigment. I mellomtiden tar det bare tre måneder for sebrafisk å utvikle seg til seksuell modenhet, så sebrafisk kan produsere hundrevis av egg hver 4 dager. Mini-størrelse, enkel avl, sterk reproduktiv kapasitet, disse fordelene gjør sebrafisk kultur svært plassbesparende, bidrar til stor skala kultur. Den tradisjonelle pattedyr modellen musen har en høyere vedlikeholdskostnader enn sebrafisk, derfor begrenser omfanget av musen øke. I det aspektet av tidlig embryoutvikling, mus embryo er vanskelig å observere i live tilstand på grunn av egenskapene til musen embryoutvikling i mors liv. Tvert imot, sebrafisk embryo utvikles eksternt og er gjennomsiktige, derfor er de enkle å observere under et mikroskop. Videre er sebrafisk veldig lett å konstruere en rekke transgene linjer for relatert gen funksjon forskning. For tiden er ulike sebrafisk transgene Lines tilgjengelige for å merke ulike typer celler. Det er veldig praktisk nå å konstruere transgene Lines å overekspresjon chemokiner på bestemte steder og studere chemokiner funksjon på celle atferd i sebrafisk.
Her ga vi en arbeidsflyt for å bruke sebrafisk transgene line for å undersøke funksjonen til Il-34 om macrophage adferd i vivo2,3,4,5,6,7. For det første konstruerte vi en lever spesifikk overuttrykte plasmider av genet il34 og injisert plasmider i en-celle scene TG (MPEG1: GFP) fiske embryo som spesielt merket makrofager av fluorescerende protein GFP. Deretter brukte vi hele Mount fluorescerende in situ hybridisering og immunostaining å oppdage mønsteret av il34 uttrykk og antall eller plassering av makrofager. Den injisert WT embryo ble hevet for å generere en stabil transgene linje. I disse trinnene etablerte og validerte vi den cytokin linjen og vurderte effekten visuelt som kan ses på macrophage fordeling. Til slutt, for å undersøke macrophage adferd som svar på cytokin, brukte vi konfokalmikroskopi Live Imaging til direkte å observere macrophage migrasjon for å bekrefte funksjonen til il34 på macrophage migrasjon in vivo.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antibody</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 488-Anti-Goat antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Digoxigenin-HRP&#160;</td>
			<td>perkinelmer</td>
			<td>NEF832001EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat-Anti-GFP antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab6658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2&#183; 2H2O</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>21097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanine 3 Plus Amplification Reagent</td>
			<td>perkinelmer</td>
			<td>NEL745001KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E2 solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>15 mM&#160; NaCl +0.5 mM KCl +1.0 mM MgSO4+150 &#181;M&#160; KH2PO4 + 50 &#181;M&#160; Na2HPO4 +1.0 mM CaCl2 + 0.7 mM NaHCO3&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum(FBS)</td>
			<td>Life</td>
			<td>10099-133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>formamide</td>
			<td>Diamond</td>
			<td>A100314</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glycerol&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>V900860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heparin sodium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hybridization buffer(HB)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>50% formamide+ 5&#215;SSC+9 mM sodium citrate+50 &#956;g/ml heparin sodium+ 500 &#956;g/ml tRNA+ 0.1% Tween20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>low melting agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methanol</td>
			<td>GHTECH</td>
			<td>1.17112.023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methylene blue&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M9140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M2643</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde(PFA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>158127</td>
			<td>Suspend 16 g of PFA in 400 ml of 1x PBS, heat at 60 &#176;C&#160; to dissolve about 30 min. This solution can be prepared in advance and stored at -4 &#176;C. Caution. Manipulate with mask.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10&#215;PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>14.2 g Na2HPO4+80 g NaCl+2 g KCl+ 2.4 g KH2PO4 in 1L ddH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenylthiourea(PTU)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1&#215;Plus Amplification Diluent</td>
			<td>perkinelmer</td>
			<td>NEL745001KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K&#160;</td>
			<td>Fermentas</td>
			<td>E00492</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20&#215;Saline sodium citrate(SSC)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>175.3 g NaCl+ 88.2 g sodium citrate in 1 L ddH2O, PH 7.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium citrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tricaine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E10521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tRNA&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R6625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween20</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pBLK-fabp10a-il34-sv40</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Tg (fab10a:il34) transgenic line generation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pBSK-il34</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For il34 probe preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fish</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tg (mpeg1: GFP)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Label macrophages with GFP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tg (fabp10a: DsRed)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Label liver cells with DsRed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tg (fab10a:il34)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Over-expression IL-34 in liver cells</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an ectopic chemokine expression model for testing macrophage recruitment in vivo

Sebrafisk er mye brukt i grunnleggende og biomedisinsk forskning. Mange sebrafisk transgene-linjer er for tiden tilgjengelige for å merke ulike typer celler. På grunn av den gjennomsiktige embryonale kroppen av sebrafisk, er det praktisk for oss å studere effekten av en chemokine på atferden til en bestemt type celler in vivo. Her har vi gitt en arbeidsflyt for å undersøke funksjonen til en chemokine på macrophage migrasjon in vivo. Vi konstruerte en vev-spesifikk overuttrykte plasmider til overekspresjon IL-34 og injisert plasmider i en celle scene transgene fisk embryo hvis makrofager var spesielt merket med et fluorescerende protein. Vi brukte deretter hele Mount fluorescerende in situ hybridisering og immunostaining å oppdage mønsteret av chemokine uttrykk og antall eller plassering av makrofager. Den injisert WT embryo ble hevet for å generere en stabil transgene linje. Til slutt brukte vi konfokalmikroskopi Live Imaging å direkte observere macrophage atferd i stallen transgene fisk å studere funksjonen til IL-34 på makrofager in vivo.

Trinnene som er involvert i protokollen for sebrafisk er illustrert i figur 2. Først genererte vi den pBLK-fabp10a-il34-SV40 konstruere der il34 ble drevet av Fabp10a arrangøren (figur 2). Konstruksjonen ble microinjected i en-celle scene TG (MPEG1: GFP) sebrafisk embryo som kan merke makrofager med GFP og WT embryo som ble reist til voksne for å generere transgene stabil linje (<strong clas...

Watch this Scientific Journal Video about An Ectopic Chemokine Expression Model for Testing Macrophage Recruitment In Vivo at JoVE.com

An Ectopic Chemokine Expression Model for Testing Macrophage Recruitment In Vivo

For å teste effekten av en chemokine på macrophage rekruttering i Vivo, ble hele Mount in situ hybridisering brukt til å påvise chemokine, og immunostaining ble brukt til å merke makrofager. Live Imaging ble brukt for sanntids observasjon av macrophage migrasjon.

Et svangerskap utenfor livmoren chemokine Expression modell for testing macrophage rekruttering in vivo

Zebrafish are widely used in basic and biomedical research. Many zebrafish transgenic lines are currently available to label various types of cells. Owing ...

Protokollen som er beskrevet her tillater oss å undersøke funksjonen til en chemokin og oppførselen til makrofag in vivo. De fleste av eksisterende eksperimentelle modeller av celle chemotaxis er basert på in vitro celle eksperimenter. Men in vitro eksperimenter noen ganger er for enkle til å modellere det komplekse miljøet in vivo.De kan heller ikke representere kjemoattraksjonsevnen in vivo. Disse metodene benytter den spesifikke fordelen med sebrafisk for direkte celleatferdsobservasjon, noe som er vanskelig for mus. Start med å generere TGFABP-10A interleukin-34 transgene konstruksjoner.Injiser FABP-10A interleukin-34 konstruksjoner i ett celle stadium Tg (mpeg1: GFP) transgen og en vill-type fisk embryoer sammen med transposase MRNA. Hev og samle embryoene i henhold til manuskriptinstruksjoner. Deretter fikser du dem med 4% paraformaldehyd over natten ved 4 grader Celsius eller i to timer ved romtemperatur.Etter fiksering, vask embryoene med PBST tre ganger i fem minutter per vask. Dehydrere embryoene separat med 50% metanol i PBST, etterfulgt av 100% metanol, deretter bytte til frisk 100% metanol, og lagre dem på negative 20 grader Celsius i minst 2 timer. Når du er klar for sondehybridisering, rehydrere embryoene separat i 50% metanol i PBST.Vask dem deretter med PBST tre ganger i fem minutter per vask. Fordøy embryoene med proteinase K i PBST ved romtemperatur. Kast deretter fordøyelsesløsningen, og gjenta fiksering med 4% paraformaldehyd i 20 minutter ved romtemperatur.Etter fiksering, vask embryoene to ganger med PBST i 10 minutter per vask. Utfør prehybridisering med oppvarmet hybridiseringsbuffer ved 65 grader Celsius i minst en time. Deretter forvarm interleukin-34 sonden til 65 grader Celsius i 10 minutter.Resirkuler hybridiseringsbufferen i det opprinnelige røret og utfør hybridisering med den forvarmede sonden ved 65 grader Celsius over natten. På neste dag vask embryoene med 50% formamid og 2X SSCT etterfulgt av 2X SSCT og deretter 0,2X SSCT ved 65 grader Celsius. Gjenta hver vask tre ganger med 20 minutter per vask.Vask deretter embryoene tre ganger med PBST i fem minutter per vask. Blokker prøvene med 600 milliliter blokkerer buffer i en time ved romtemperatur. Deretter legger du til 400 mikroliter anti-digoksigenin HRP antistoffløsning og inkuber embryoene ved fire grader Celsius over natten.På neste dag fjerner du antistoffet og vask embryoene seks ganger med PBST i 20 minutter per vask. Etter siste vask, skyll hver prøve med 30 mikroliter på 1X pluss forsterkningsdiluent i fem minutter. Inkuber prøvene i fluorofortyraminarbeidsløsningen i fem til 15 minutter i mørket.Forlenge inkubasjonstiden til 30 minutter hvis signalene er svake. Vask deretter embryoene med PBST tre ganger i 10 minutter per vask. Og inkuber dem med det primære antistoffet ved fire grader Celsius over natten.På neste dag vask embryoene fem ganger med PBST i 30 minutter per vask, og inkuber dem med sekundære antistoffer ved fire grader Celsius over natten. På neste dag vask embryoene tre ganger i PBST i 10 minutter per vask, og lagre dem i 70% glyserol i mørket ved fire grader Celsius eller negative 20 grader Celsius lenger. Før avbildning, bruk et fluorescensmikroskop for å velge DS rød og GFP doble positive embryoer.For å montere fisken, bruk et metallbad for å varme en milliliter med 1% lav smeltende agarose til over 90 grader Celsius. Deretter avkjøles den til kroppstemperatur og bland i 50 mikroliter på 0,2% trikain. Overfør bedøvede embryoer til en liten tallerken montert med et deksel lysbilde på bunnen.Fjern det omkringliggende vannet og slipp sakte den lave smeltende agarose på embryoene. Still forsiktig inn fiskens posisjon før agarose har størknet, og holder leverområdet nær dekselet lysbildet. Når agarose har størknet, dekk den forsiktig med et annet lag med agarose for å forsterke den.Plasser fatet på det konokale mikroskopbærerbordet, dekk fisken med E2-løsningen med trikain, og begynn å avbilde. For å betjene det konokale mikroskopet, åpne Zen Black 2.3-programvaren og klikk Finn, deretter inkubasjon, og sett deretter temperaturen til 29 grader Celsius. Klikk på anskaffelsesmenyen og velg ønsket skannemodus og lasere i smartoppsettmenyen.Velg deretter Z-stakk og posisjon. Klikk på eksperimentell designermenyen og velg aktiver multiblokkeksperiment i den første blokken for å finne eksemplet under lav forstørrelse. Bytt deretter til den høye forstørrelsen og lar det observerte området i midten av det visuelle feltet.Angi posisjons- og Z-stakkinformasjonen. Velg deretter riktig laserintensitet, skannelag og bildehastighet. Når alle blokkene er konfigurert, angir du riktig antall løkker og starter opptaket.Denne protokollen ble brukt til å injisere en leverspesifikk interleukin-34 over uttrykk plasmid i transgene fiskeembryoer, som makrofager ble merket med GFP. Full mount fluorescens in situ hybridisering og immunstaining ble brukt til å analysere uttrykket av interleukin-34 og GFP merkede makrofager. Makrofagcellenumre ble kvantitativt analysert i uinjisert og konstruere injisert embryoer lever og hale regionen.Levende bildebehandling ble brukt til å observere makrofager, merket grønt, forbi leveren av en kontrollfisk og migrere inn i leveren til en interleukin-34 over å uttrykke fisk. De viktige trinnene i denne protokollen inkluderer valg av en passende transgen linje for å merke cellen av interesse. Og passende vev for å forestille seg uttrykket ditt av transgent gen, samt et passende observasjonstidsvindu.Denne teknikken kan brukes til å studere funksjonen til andre chemokines på oppførselen til andre celler, for eksempel T-celler og nøytrofiler in vivo.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

Live-Imaging av medfødte immun og preneoplastiske Cell Interaksjoner Bruke en induserbar Gal4 / UAS Expression System i Larvesebrafisk Skin

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

An Optogenetic Approach for Assessing Formation of Neuronal Connections in a Co-culture System

En optogenetic Approach for Assessing Dannelse av nevronkoblinger i en Co-kultur System

Here we describe a protocol to generate a co-culture consisting of 2 different neuronal populations. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are ...

Development of an Ethanol-induced Fibrotic Liver Model in Zebrafish to Study Progenitor Cell-mediated Hepatocyte Regeneration

Utvikling av en etanol-indusert Fibrotiske Liver Modell i Sebrafisk å studere stamceller-mediert hepatocytter Regeneration

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading ...

Drug Treatment and In Vivo Imaging of Osteoblast-Osteoclast Interactions in a Medaka Fish Osteoporosis Model

Drug Treatment and In Vivo Imaging of Osteoblast-Osteoclast Interactions in a Medaka Fish Osteoporosis Model

Drug Treatment og<em&gt; I Vivo</em&gt; Imaging av osteoblast antiosteoklast Interactions i en Medaka Fish Osteoporose Model

Bone-forming osteoblasts interact with bone-resorbing osteoclasts to coordinate the turnover of bone matrix and to control skeletal homeostasis. Medaka ...

An Ex Vivo Method for Time-Lapse Imaging of Cultured Rat Mesenteric Microvascular Networks

An Ex Vivo Method for Time-Lapse Imaging of Cultured Rat Mesenteric Microvascular Networks

en<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Metode for Time-Lapse Imaging av Dyrkede Rat mesenteric mikrovaskulære nettverk

Angiogenesis, defined as the growth of new blood vessels from pre-existing vessels, involves endothelial cells, pericytes, smooth muscle cells, immune ...

In Vivo Imaging of Transgenic Gene Expression in Individual Retinal Progenitors in Chimeric Zebrafish Embryos to Study Cell Nonautonomous Influences

In Vivo Imaging of Transgenic Gene Expression in Individual Retinal Progenitors in Chimeric Zebrafish Embryos to Study Cell Nonautonomous Influences

In vivo avbildning av transgene genuttrykk i Individuell Netthinnestamfedre i kimære Sebrafisk embryoer å studere Cell Nonautonomous Influences

The genetic and technical strengths have made the zebrafish vertebrate a key model organism in which the consequences of gene manipulations can be traced ...

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Etablering av larver sebrafisk som et dyr-modellen for å undersøke Trypanosoma cruzi motilitet I Vivo

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Bruk av RNAi og varme-sjokk-indusert transkripsjon faktor uttrykk å omprogrammere bakterie celler til nerveceller i C. elegans

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Culturing of Retinal Pigment Epithelial Cells on an Ex Vivo Model of Aged Human Bruch's Membrane

Culturing of Retinal Pigment Epithelial Cells on an Ex Vivo Model of Aged Human Bruch's Membrane

Dyrking av netthinnens Pigment epitelceller på en Ex Vivo modell av alderen menneskelige Bruchs membran

Aside from vitamins and antioxidants recommended by the Age-Related Eye Disease Study, there is no effective therapy for &#34;dry,&#34;&#160;or atrophic ...

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

En In Vitro -modell av en parallell-Plate perfusjon System å studere bakteriell tilslutning å pode vev

Various valved conduits and stent-mounted valves are used for right ventricular outflow tract (RVOT) valve replacement in patients with congenital heart ...