Name: an ectopic chemokine expression model for testing macrophage recruitment in vivo
Uploaded: 2019-09-25T14:30:00
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Agradecemos al Dr. Jingrong Peng por compartir la línea transgénica Tg (fabp10a: DsRed); Dr. Zilong Wen por compartir las líneas transgénicas Tg (mpeg1: GFP); Dr. Koichi Kawakami por proporcionar el vector pTol2. Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (31771594), los proyectos del Plan de Ciencia y Tecnología de Guangdong (2019A030317001) y los Fondos Fundamentales de Investigación para las Universidades Centrales (D2191450).

NOTA: Todas las muestras fueron tratadas con agua de huevo de feniltiourea (PTU) para inhibir el pigmento.
1. Generación de Tg (fabp10a:il34) Construcciones transgénicas e inyección de pescado
<ol><li>Clonar el promotor fabp10a 8 de 2,8 kb y las regiones de codificación IL-34 (ENSDART00000126460.3) del pez cebra en el vector pTol2 para generar la construcción fabp10a-il34. Inyectar las construcciones en la etapa de una ...

<ol>
	<li>Howe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+reference+genome+sequence+and+its+relationship+to+the+human+genome.">The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome.</a> Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-34+is+a+tissue-restricted+ligand+of+CSF1R+required+for+the+development+of+Langerhans+cells+and+microglia.">IL-34 is a tissue-restricted ligand of CSF1R required for the development of Langerhans cells and microglia.</a> Nature Immunology. 13 (8), 753-760 (2012).</li><li>Lin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery+of+a+cytokine+and+its+receptor+by+functional+screening+of+the+extracellular+proteome.">Discovery of a cytokine and its receptor by functional screening of the extracellular proteome.</a> Science. 320 (5877), 807-811 (2008).</li><li>Wei, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+overlap+but+differential+expression+of+CSF-1+and+IL-34+in+their+CSF-1+receptor-mediated+regulation+of+myeloid+cells.">Functional overlap but differential expression of CSF-1 and IL-34 in their CSF-1 receptor-mediated regulation of myeloid cells.</a> Journal of leukocyte biology. 88 (3), 495-505 (2010).</li><li>Etienne, D., Foucher, S. B. L. P., Norbert Ifrah, P. G. Y. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-34+Induces+the+Differentiation+of+Human+Monocytes+into+Immunosuppressive+Macrophages.+Antagonistic+Effects+of+GM-CSF+and+IFNc.">IL-34 Induces the Differentiation of Human Monocytes into Immunosuppressive Macrophages. Antagonistic Effects of GM-CSF and IFNc.</a> PLoS One. 8 (2), e56045 (2013).</li><li>Segaliny, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Syndecan-1+regulates+the+biological+activities+of+interleukin-34.">Syndecan-1 regulates the biological activities of interleukin-34.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1853 (5), 1010-1021 (2015).</li><li>Zhou, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-28-5p-IL-34-macrophage+feedback+loop+modulates+hepatocellular+carcinoma+metastasis.">miR-28-5p-IL-34-macrophage feedback loop modulates hepatocellular carcinoma metastasis.</a> Hepatology. 63 (5), 1560-1575 (2016).</li><li>Gordon, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+specific+expression+and+developmental+regulation+of+two+genes+coding+for+rat+fatty+acid+binding+proteins.">Tissue specific expression and developmental regulation of two genes coding for rat fatty acid binding proteins.</a> Journal of Biological Chemistry. 260 (4), 1995-1998 (1985).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book: A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>N&#252;sslein-Volhard, C., Dahm, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Zebrafish: a practical approach. , (2002).</li><li>Jiang, Y., Chen, J., Yen, K., Xu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ectopically+Expressed+IL-34+Can+Efficiently+Induce+Macrophage+Migration+to+the+Liver+in+Zebrafish.">Ectopically Expressed IL-34 Can Efficiently Induce Macrophage Migration to the Liver in Zebrafish.</a> Zebrafish. 16 (2), 165-170 (2019).</li></ol>

El protocolo descrito aquí nos permite investigar la función de una quimiocina sobre el comportamiento de los macrofagoin vivo y el procedimiento requiere cierta experiencia técnica. En resumen, hay varios pasos críticos para evitar complicaciones en el protocolo: 1) seleccionar una línea transgénica adecuada que muestre una señal transgénica específica y fuerte para etiquetar la célula de interés; 2) seleccionar un tejido apropiado al que se pueda acceder a imágenes y sobreexpresión de genes transgénicos; ...

Zebrafish es un pequeño pez tropical de agua dulce de huesos duros originario de la India. En cuanto a la conservación del gen, el pez cebra tiene una similitud del 87% con el humano1. Puede proporcionarnos información sobre temas relacionados con el ser humano mediante el estudio de la regulación genética, la función proteica y el comportamiento celular, como la migración, la proliferación et.al en el pez cebra. El embrión zebrafish se puede utilizar para observar el desarrollo de embriones tempranos en diferentes etapas después de inhibir el pigmento. Mientras tanto, el pez cebra tarda sólo tres meses en convertirse en madurez sexual, entonces el pez cebra puede producir cientos de huevos cada 4 días. Mini-tamaño, simple cría, fuerte capacidad reproductiva, estas ventajas hacen que el cultivo de peces cebra muy ahorro de espacio, propicio para el cultivo a gran escala. El ratón modelo de mamífero tradicional tiene costos de mantenimiento más altos que el pez cebra, lo que limita la escala de la elevación del ratón. En el aspecto del desarrollo temprano del embrión, el embrión de ratón es difícil de observar en estado vivo debido a las características del desarrollo del embrión de ratón en el útero materno. Por el contrario, los embriones de pez cebra se desarrollan externamente y son transparentes, por lo que son fáciles de observar bajo un microscopio. Además, el pez cebra es muy fácil de construir una variedad de líneas transgénicas para la investigación de la función génica relacionada. Actualmente, varias líneas transgénicas de pez cebra están disponibles para etiquetar diferentes tipos de células. Es muy conveniente ahora construir líneas transgénicas para sobreexpresar quimiolinas en lugares específicos y estudiar la función de las quimiolinas en el comportamiento celular en el pez cebra.
Aquí, proporcionamos un flujo de trabajo para utilizar la línea transgénica de pez cebra para investigar la función de IL-34 sobre el comportamiento de los macrófagos in vivo2,3,4,5,6,7. En primer lugar, construimos un plásmido de sobreexpresión específico del hígado del gen il34 e inyectamos el plásmido en embriones de peces Tg (mpeg1: GFP) de una célula que etiquetaron específicamente los macrófagos por proteína fluorescente GFP. Luego, utilizamos hibridación fluorescente in situ de montaje completo e inmunomancha para detectar el patrón de la expresión il34 y el número o ubicación de los macrófagos. Los embriones WT inyectados fueron levantados para generar una línea transgénica estable. En estos pasos, establecimos y validamos la línea productora de citoquinas y evaluamos visualmente los efectos que se pueden ver en la distribución de los macrófagos. Por último, para investigar el comportamiento de los macrófagos en respuesta a la citoquina, utilizamos imágenes en vivo confocales para observar directamente la migración de macrófagos para confirmar la función de il34 en la migración de macrófagos in vivo.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antibody</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 488-Anti-Goat antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Digoxigenin-HRP&#160;</td>
			<td>perkinelmer</td>
			<td>NEF832001EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat-Anti-GFP antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab6658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2&#183; 2H2O</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>21097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanine 3 Plus Amplification Reagent</td>
			<td>perkinelmer</td>
			<td>NEL745001KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E2 solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>15 mM&#160; NaCl +0.5 mM KCl +1.0 mM MgSO4+150 &#181;M&#160; KH2PO4 + 50 &#181;M&#160; Na2HPO4 +1.0 mM CaCl2 + 0.7 mM NaHCO3&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum(FBS)</td>
			<td>Life</td>
			<td>10099-133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>formamide</td>
			<td>Diamond</td>
			<td>A100314</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glycerol&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>V900860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heparin sodium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hybridization buffer(HB)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>50% formamide+ 5&#215;SSC+9 mM sodium citrate+50 &#956;g/ml heparin sodium+ 500 &#956;g/ml tRNA+ 0.1% Tween20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>low melting agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methanol</td>
			<td>GHTECH</td>
			<td>1.17112.023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methylene blue&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M9140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M2643</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde(PFA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>158127</td>
			<td>Suspend 16 g of PFA in 400 ml of 1x PBS, heat at 60 &#176;C&#160; to dissolve about 30 min. This solution can be prepared in advance and stored at -4 &#176;C. Caution. Manipulate with mask.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10&#215;PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>14.2 g Na2HPO4+80 g NaCl+2 g KCl+ 2.4 g KH2PO4 in 1L ddH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenylthiourea(PTU)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1&#215;Plus Amplification Diluent</td>
			<td>perkinelmer</td>
			<td>NEL745001KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K&#160;</td>
			<td>Fermentas</td>
			<td>E00492</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20&#215;Saline sodium citrate(SSC)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>175.3 g NaCl+ 88.2 g sodium citrate in 1 L ddH2O, PH 7.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium citrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tricaine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E10521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tRNA&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R6625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween20</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pBLK-fabp10a-il34-sv40</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Tg (fab10a:il34) transgenic line generation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pBSK-il34</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For il34 probe preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fish</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tg (mpeg1: GFP)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Label macrophages with GFP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tg (fabp10a: DsRed)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Label liver cells with DsRed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tg (fab10a:il34)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Over-expression IL-34 in liver cells</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an ectopic chemokine expression model for testing macrophage recruitment in vivo

Los peces cebra son ampliamente utilizados en la investigación básica y biomédica. Muchas líneas transgénicas de pez cebra están actualmente disponibles para etiquetar varios tipos de células. Debido al cuerpo embrionario transparente del pez cebra, es conveniente para nosotros estudiar el efecto de una quimiocina en el comportamiento de un cierto tipo de células in vivo. Aquí proporcionamos un flujo de trabajo para investigar la función de una quimiocina en la migración de macrófagos in vivo. Construimos un plásmido de sobreexpresión específico del tejido para sobreexpresar IL-34 e inyectamos el plásmido en embriones de peces transgénicos de una célula cuyos macrófagos fueron etiquetados específicamente por una proteína fluorescente. A continuación, utilizamos hibridación fluorescente in situ de montaje completo e inmunomancha para detectar el patrón de la expresión de quimiocina y el número o ubicación de los macrófagos. Los embriones WT inyectados fueron levantados para generar una línea transgénica estable. Finalmente, utilizamos imágenes en vivo confocales para observar directamente el comportamiento de los macrófagos en los peces transgénicos estables para estudiar la función de IL-34 en los macrófagos in vivo.

Los pasos involucrados en el protocolo de pez cebra se ilustran en la Figura 2. En primer lugar, generamos la construcción pBLK-fabp10a-il34-sv40 en la que il34 fue impulsado por el promotor fabp10a (Figura 2). La construcción fue microinyectada en la etapa unicelular Tg (mpeg1: GFP) embriones de pez cebra que pueden etiquetar macrófagos con embriones GFP y WT que fueron elevados a adultos p...

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An Ectopic Chemokine Expression Model for Testing Macrophage Recruitment In Vivo

Para probar el efecto de una quimiocina en el reclutamiento in vivo de macrófagos, se utilizó toda la hibridación in situ del monte para detectar la expresión ectópica de la quimiocina, y se utilizó inmunomanchado para etiquetar los macrófagos. Las imágenes en vivo se utilizaron para la observación en tiempo real de la migración de macrófagos.

Un modelo de expresión de chemocina ectópico para probar el reclutamiento de macrófagos in Vivo

Zebrafish are widely used in basic and biomedical research. Many zebrafish transgenic lines are currently available to label various types of cells. Owing ...

El protocolo descrito aquí nos permite investigar la función de una quimiocina y el comportamiento de los macrófagos in vivo. La mayoría de los modelos experimentales existentes de quimiotaxis celular se basan en experimentos de células in vitro. Pero los experimentos in vitro a veces son demasiado simples para modelar el complejo entorno in vivo.Además, es posible que no representen la capacidad de quimioatracción in vivo. Estos métodos utilizan la ventaja específica de los peces cebra para la observación directa del comportamiento celular, que es difícil para los ratones. Comience generando construcciones transgénicas TGFABP-10A interleucina-34.Inyectar las construcciones de interleucina-34 FABP-10A en una etapa celular Tg(mpeg1:GFP)transgénica y un son embrión de peces de tipo salvaje junto con la MRNA transposasa. Levante y recoja los embriones de acuerdo con las instrucciones del manuscrito. Luego, fíjelos con 4%paraformaldehído durante la noche a 4 grados centígrados o durante dos horas a temperatura ambiente.Después de la fijación, lave los embriones con PBST tres veces durante cinco minutos por lavado. Deshidratar los embriones por separado con 50%metanol en PBST, seguido de 100%metanol, luego cambiar a fresco 100%metanol, y almacenarlos en 20 grados Celsius negativos durante al menos 2 horas. Cuando esté listo para la hibridación de la sonda, rehidrate los embriones por separado en 50%metanol en PBST.Luego, lávelos con PBST tres veces durante cinco minutos por lavado. Digerir los embriones con proteinasa K en PBST a temperatura ambiente. A continuación, deseche la solución de digestión y repita la fijación con un 4%de paraformaldehído durante 20 minutos a temperatura ambiente.Después de la fijación, lave los embriones dos veces con PBST durante 10 minutos por lavado. Realice la prehibridación con búfer de hibridación calentada a 65 grados centígrados durante al menos una hora. Luego, precalienta la sonda de interleucina-34 a 65 grados Celsius durante 10 minutos.Recicle el búfer de hibridación en el tubo original y realice la hibridación con la sonda precalentada a 65 grados centígrados durante la noche. Al día siguiente, lave los embriones con 50% de formamida y 2X SSCT seguido de 2X SSCT y luego 0.2X SSCT a 65 grados Celsius. Repita cada lavado tres veces con 20 minutos por lavado.Luego, lave los embriones tres veces con PBST durante cinco minutos por lavado. Bloquee las muestras con 600 mililitros de tampón de bloqueo durante una hora a temperatura ambiente. A continuación, añada 400 microlitros de solución de anticuerpos anti-digoxigenina HRP e incubar los embriones a cuatro grados centígrados durante la noche.Al día siguiente, retire el anticuerpo y lave los embriones seis veces con PBST durante 20 minutos por lavado. Después del último lavado, enjuague cada muestra con 30 microlitros de 1X más diluyente de amplificación durante cinco minutos. Incubar las muestras en la solución de trabajo de tiramina fluorófora durante cinco a 15 minutos en la oscuridad.Extender el tiempo de incubación a 30 minutos si las señales son débiles. Luego, lave los embriones con PBST tres veces durante 10 minutos por lavado. Y incubarlos con el anticuerpo primario a cuatro grados centígrados durante la noche.Al día siguiente, lave los embriones cinco veces con PBST durante 30 minutos por lavado, e incubarlos con los anticuerpos secundarios a cuatro grados centígrados durante la noche. Al día siguiente, lave los embriones tres veces en PBST durante 10 minutos por lavado, y guárdelos en 70% de glicerol en la oscuridad a cuatro grados Celsius o 20 grados Celsius negativos durante más tiempo. Antes de la toma de imágenes, utilice un microscopio de fluorescencia para seleccionar los embriones DS rojos y GFP doble positivos.Para montar el pescado, utilice un baño de metal para calentar un mililitro de 1% de agarosa de fusión baja por encima de 90 grados centígrados. Luego, enfríe a temperatura corporal y mezcle en 50 microlitros de 0.2%tricaine. Transfiera los embriones anestesiados a un pequeño plato montado con un portaobjetos en la parte inferior.Retire el agua circundante y deje caer lentamente la baja agarosa de fusión en los embriones. Ajuste cuidadosamente la posición del pez antes de que la agarosa se haya solidificado, manteniendo el área del hígado cerca del portaobjetos. Una vez que la agarosa se haya solidificado, cúbrala cuidadosamente con otra capa de agarosa para reforzarla.Coloque el plato en la mesa portadora del microscopio confocal, cubra el pescado con la solución E2 con tricaína y comience a tomar imágenes. Para operar el microscopio confocal, abra el software Zen Black 2.3 y haga clic en localizar, luego incubación y, a continuación, ajuste la temperatura a 29 grados centígrados. Haga clic en el menú de adquisición y seleccione el modo de escaneo y los láseres necesarios en el menú de configuración inteligente.A continuación, seleccione Z-stack y posición. Haga clic en el menú del diseñador experimental y seleccione habilitar el experimento de varios bloques en el primer bloque para encontrar la muestra en la ampliación baja. A continuación, cambie a la ampliación alta y deje que el área observada en el centro del campo visual.Establezca la posición y la información de la pila Z. A continuación, seleccione la intensidad del láser adecuada, las capas de escaneo y la velocidad de imagen. Una vez que todos los bloques están configurados, establezca el número adecuado de bucles y comience a grabar.Este protocolo se utilizó para inyectar una interleucina-34 específica del hígado sobre el plásmido de expresión en embriones de peces transgénicos, que sus macrófagos fueron etiquetados con GFP. La hibridación in situ de fluorescencia de montaje completo y la inmunostaining se utilizaron para analizar la expresión de la interleucina-34 y los macrófagos etiquetados por la GFP. Los números de células de macrófagos se analizaron cuantitativamente en embriones no inyectados y construyeron embriones inyectados en la región hepática y de cola.Las imágenes vivas se utilizaron para observar directamente los macrófagos, etiquetados de forma verde, pasando por el hígado de un pez de control y migrando al hígado de una interleucina-34 sobre la expresión de peces. Los pasos importantes de este protocolo incluyen la selección de una línea transgénica adecuada para etiquetar la célula de interés. Y el tejido adecuado para tomar imágenes de su expresión de gen transgénico, así como una ventana de tiempo de observación adecuada.Esta técnica podría aplicarse para estudiar la función de otras quimioquinas en el comportamiento de otras células, como las células T y los neutrófilos in vivo.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

Imágenes en vivo de inmune innata y preneoplásicas Interacciones de celda que utilizan un sistema de expresión / UAS Inducible Gal4 en larvas de pez cebra de la piel

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

Investigación

Biología del Desarrollo

An Optogenetic Approach for Assessing Formation of Neuronal Connections in a Co-culture System

Un enfoque optogenética para Evaluar formación de conexiones neuronales en un sistema de co-cultura

Here we describe a protocol to generate a co-culture consisting of 2 different neuronal populations. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are ...

Development of an Ethanol-induced Fibrotic Liver Model in Zebrafish to Study Progenitor Cell-mediated Hepatocyte Regeneration

Desarrollo de un Modelo de hígado fibrótico inducida por etanol en el pez cebra para el Estudio de células progenitoras mediada por la regeneración de hepatocitos

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Drug Treatment and In Vivo Imaging of Osteoblast-Osteoclast Interactions in a Medaka Fish Osteoporosis Model

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El tratamiento de drogas y<em&gt; En Vivo</em&gt; Imagen de osteoblasto-osteoclastos Interacciones en un modelo Medaka pescado osteoporosis

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An Ex Vivo Method for Time-Lapse Imaging of Cultured Rat Mesenteric Microvascular Networks

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Un<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Método para time-lapse de rata cultivadas mesentéricas microvasculares Redes

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En vivo de imágenes de transgénicos de la Expresión Génica en el Estimado de retina progenitores en embriones de pez cebra quiméricos para estudiar celulares Influencias no autónomos

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Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

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Establecimiento de pez cebra Larval como modelo Animal para investigar Trypanosoma cruzi motilidad En Vivo

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Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

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Culturing of Retinal Pigment Epithelial Cells on an Ex Vivo Model of Aged Human Bruch's Membrane

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Cultivo de células epiteliales del pigmento retiniano en un modelo Ex Vivo de la membrana de Bruch humano envejecido

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An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

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