Name: an ectopic chemokine expression model for testing macrophage recruitment in vivo
Uploaded: 2019-09-25T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about An Ectopic Chemokine Expression Model for Testing Macrophage Recruitment In Vivo at JoVE.com

Vi tackar Dr Jingrong peng för att dela TG (fabp10a: DsRed) transgena linje; Dr. Zilong Wen för att dela TG (MPEG1: GFP) transgena linjer; Dr Koichi Kawakami för att tillhandahålla pTol2 Vector. Detta arbete stöddes av National Natural Science Foundation i Kina (31771594), Guangdong vetenskap och teknik plan projekt (2019A030317001) och de grundläggande forskningsfonderna för de centrala universiteten (D2191450).

Anmärkning: Alla prover behandlades med fenylthiourea (PTU) ägg vatten för att hämma pigment.
1. generering av TG (fabp10a: il34) transgena konstruktioner och fisk injektion
<ol><li>Klona 2,8 KB fabp10a promotor8 och Il-34 kodning regioner (ensdart 00000126460.3) av zebrafiskar i pTol2 vektor för att generera fabp10a-il34 konstruera. Injicera konstrukterna i encellsstadiet TG (MPEG1: GFP) och WT-fiskem...

<ol>
	<li>Howe, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+reference+genome+sequence+and+its+relationship+to+the+human+genome.">The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome.</a> Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-34+is+a+tissue-restricted+ligand+of+CSF1R+required+for+the+development+of+Langerhans+cells+and+microglia.">IL-34 is a tissue-restricted ligand of CSF1R required for the development of Langerhans cells and microglia.</a> Nature Immunology. 13 (8), 753-760 (2012).</li><li>Lin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery+of+a+cytokine+and+its+receptor+by+functional+screening+of+the+extracellular+proteome.">Discovery of a cytokine and its receptor by functional screening of the extracellular proteome.</a> Science. 320 (5877), 807-811 (2008).</li><li>Wei, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+overlap+but+differential+expression+of+CSF-1+and+IL-34+in+their+CSF-1+receptor-mediated+regulation+of+myeloid+cells.">Functional overlap but differential expression of CSF-1 and IL-34 in their CSF-1 receptor-mediated regulation of myeloid cells.</a> Journal of leukocyte biology. 88 (3), 495-505 (2010).</li><li>Etienne, D., Foucher, S. B. L. P., Norbert Ifrah, P. G. Y. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-34+Induces+the+Differentiation+of+Human+Monocytes+into+Immunosuppressive+Macrophages.+Antagonistic+Effects+of+GM-CSF+and+IFNc.">IL-34 Induces the Differentiation of Human Monocytes into Immunosuppressive Macrophages. Antagonistic Effects of GM-CSF and IFNc.</a> PLoS One. 8 (2), e56045 (2013).</li><li>Segaliny, A. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Syndecan-1+regulates+the+biological+activities+of+interleukin-34.">Syndecan-1 regulates the biological activities of interleukin-34.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1853 (5), 1010-1021 (2015).</li><li>Zhou, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-28-5p-IL-34-macrophage+feedback+loop+modulates+hepatocellular+carcinoma+metastasis.">miR-28-5p-IL-34-macrophage feedback loop modulates hepatocellular carcinoma metastasis.</a> Hepatology. 63 (5), 1560-1575 (2016).</li><li>Gordon, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+specific+expression+and+developmental+regulation+of+two+genes+coding+for+rat+fatty+acid+binding+proteins.">Tissue specific expression and developmental regulation of two genes coding for rat fatty acid binding proteins.</a> Journal of Biological Chemistry. 260 (4), 1995-1998 (1985).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Zebrafish Book: A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>N&#252;sslein-Volhard, C., Dahm, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Zebrafish: a practical approach. , (2002).</li><li>Jiang, Y., Chen, J., Yen, K., Xu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ectopically+Expressed+IL-34+Can+Efficiently+Induce+Macrophage+Migration+to+the+Liver+in+Zebrafish.">Ectopically Expressed IL-34 Can Efficiently Induce Macrophage Migration to the Liver in Zebrafish.</a> Zebrafish. 16 (2), 165-170 (2019).</li></ol>

Protokollet som beskrivs här tillåter oss att undersöka funktionen hos en Chemokine på beteendet hos macrophagein vivo och förfarandet kräver viss teknisk expertis. Sammanfattnings, det finns flera kritiska steg för att undvika komplikationer i protokollet: 1) Välj en lämplig transgena linje som visar specifika och starka transgena signalen att märka cellen av intresse; 2) Välj en lämplig vävnad som är tillgänglig för avbildning och transgena genöveruttryck. 3) gör en känslig och specifik RNA-sond; 4) ...

Zebrafish är en liten tropisk hårda ben sötvattenfisk har sitt ursprung i Indien. Angående gen beskydd har zebrafiskar en likhet av 87% till människan1. Det kan ge oss insikter om relaterade ämnen av människan genom att studera genreglering, proteinfunktion och cell beteende såsom migration, proliferation et.al i zebrafisk. Zebrafish embryo kan användas för att observera utvecklingen av tidiga embryon i olika stadier efter att hämma pigment. Under tiden tar det bara tre månader för zebrafiskar att utvecklas till sexuell mognad, då zebrafisken kan producera hundratals ägg var 4 dagar. Mini-storlek, enkel avel, stark fortplantningsförmåga, dessa fördelar gör zebrafiskar kultur mycket utrymmesbesparande, bidrar till storskalig kultur. Den traditionella däggdjurs modellen mus har en högre underhållskostnader än Zebrafish, därför begränsa omfattningen av mus höjning. I aspekten av tidig embryonal utveckling, mus embryo är svårt att Observera i levande tillstånd på grund av egenskaperna hos mus embryots utveckling i moderlivmodern. Tvärtom, zebrafiskar embryon utvecklas externt och är transparenta, därför är de lätta att observera under ett mikroskop. Dessutom är zebrafiskar mycket lätt att konstruera en mängd transgena linjer för relaterad genfunktion forskning. För närvarande, olika zebrafiskar transgena linjer är tillgängliga för att märka olika typer av celler. Det är mycket bekvämt nu att konstruera transgena linjer för att överuttrycka chemokines på specifika platser och studera chemokines funktion på cell beteende i zebrafisk.
Här, vi tillhandahöll ett arbetsflöde för att använda zebrafiskar transgena linje för att undersöka funktionen av Il-34 på makrofage beteende in vivo2,3,4,5,6,7. För det första konstruerade vi en leverspecifik överuttryck plasmid av genen il34 och injiceras plasmiden i en-cells skede TG (MPEG1: GFP) fisk embryon som specifikt märkt makrofager av fluorescerande protein GFP. Sedan använde vi hela montera fluorescerande in situ hybridisering och immunofärgning att upptäcka mönstret av il34 uttrycket och antalet eller lokalisering av makrofager. De injicerade WT-embryona höjdes för att generera en stabil transgen linje. I dessa steg, vi etablerade och validerade cytokin-producerande linje och visuellt bedömas de effekter som kan ses på makrofagdistribution. Slutligen, för att undersöka makrofagbeteende som svar på cytokin, vi använde konfokalmikroskopi Live Imaging att direkt observera makrofagmigrering för att bekräfta funktionen av il34 på makrofagmigrering in vivo.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Antibody</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa 488-Anti-Goat antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A11055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Digoxigenin-HRP&#160;</td>
			<td>perkinelmer</td>
			<td>NEF832001EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat-Anti-GFP antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab6658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2&#183; 2H2O</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>21097</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanine 3 Plus Amplification Reagent</td>
			<td>perkinelmer</td>
			<td>NEL745001KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E2 solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>15 mM&#160; NaCl +0.5 mM KCl +1.0 mM MgSO4+150 &#181;M&#160; KH2PO4 + 50 &#181;M&#160; Na2HPO4 +1.0 mM CaCl2 + 0.7 mM NaHCO3&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum(FBS)</td>
			<td>Life</td>
			<td>10099-133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>formamide</td>
			<td>Diamond</td>
			<td>A100314</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>glycerol&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>V900860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>heparin sodium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3149</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hybridization buffer(HB)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>50% formamide+ 5&#215;SSC+9 mM sodium citrate+50 &#956;g/ml heparin sodium+ 500 &#956;g/ml tRNA+ 0.1% Tween20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5405</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P5655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>low melting agarose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9414</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methanol</td>
			<td>GHTECH</td>
			<td>1.17112.023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methylene blue&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M9140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M2643</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Na2HPO4</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S5761</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paraformaldehyde(PFA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>158127</td>
			<td>Suspend 16 g of PFA in 400 ml of 1x PBS, heat at 60 &#176;C&#160; to dissolve about 30 min. This solution can be prepared in advance and stored at -4 &#176;C. Caution. Manipulate with mask.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10&#215;PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>14.2 g Na2HPO4+80 g NaCl+2 g KCl+ 2.4 g KH2PO4 in 1L ddH2O</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenylthiourea(PTU)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P7629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1&#215;Plus Amplification Diluent</td>
			<td>perkinelmer</td>
			<td>NEL745001KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K&#160;</td>
			<td>Fermentas</td>
			<td>E00492</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20&#215;Saline sodium citrate(SSC)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>175.3 g NaCl+ 88.2 g sodium citrate in 1 L ddH2O, PH 7.0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium citrate</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A5040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tricaine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E10521</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tRNA&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R6625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween20</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P2287</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmid</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pBLK-fabp10a-il34-sv40</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For Tg (fab10a:il34) transgenic line generation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pBSK-il34</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>For il34 probe preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fish</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tg (mpeg1: GFP)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Label macrophages with GFP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tg (fabp10a: DsRed)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Label liver cells with DsRed</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tg (fab10a:il34)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Over-expression IL-34 in liver cells</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an ectopic chemokine expression model for testing macrophage recruitment in vivo

Zebrafish används ofta i grundläggande och biomedicinsk forskning. Många zebrafiskar transgena linjer är för närvarande tillgängliga för att märka olika typer av celler. På grund av den genomskinliga embryonala kroppen av zebrafisk, det är bekvämt för oss att studera effekten av en Chemokine på beteendet hos en viss typ av celler in vivo. Här har vi tillhandahållit ett arbetsflöde för att undersöka funktionen hos en Chemokine på makrofagmigrering in vivo. Vi konstruerade en vävnad-specifika överuttryck plasmid att överuttrycka Il-34 och injiceras plasmiden i en cell skede transgena fisk embryon vars makrofager var särskilt märkta med ett fluorescerande protein. Vi använde sedan hela montera fluorescerande in situ hybridisering och immunofärgning att upptäcka mönstret av Chemokine uttryck och antalet eller lokalisering av makrofager. De injicerade WT-embryona höjdes för att generera en stabil transgen linje. Slutligen använde vi konfokalmikroskopi Live Imaging att direkt observera makrofag beteende i den stabila transgena fisken att studera funktionen av Il-34 på makrofager in vivo.

De steg som ingår i zebrafiskar-protokollet illustreras i figur 2. Först genererade vi pBLK-fabp10a-il34-sv40-konstruktionen där il34 drevs av den fabp10a promotorn (figur 2). Konstruktionen var mikroinjicerad i encellig fas TG (MPEG1: GFP) zebrafiskar embryon som kan märka makrofager med GFP och WT embryon som höjdes till vuxna för att generera transgena stabil linje (<strong class="xfig...

Watch this Scientific Journal Video about An Ectopic Chemokine Expression Model for Testing Macrophage Recruitment In Vivo at JoVE.com

An Ectopic Chemokine Expression Model for Testing Macrophage Recruitment In Vivo

För att testa effekten av en Chemokine på makrofag rekrytering in vivo, var hela Mount in situ hybridisering används för att upptäcka ektopisk uttryck för Chemokine, och immunofärgning användes för att märka makrofager. Live Imaging användes för realtids observation av makrofagmigrering.

En ektopisk Chemokine uttrycks modell för att testa macrophage rekrytering in vivo

Zebrafish are widely used in basic and biomedical research. Many zebrafish transgenic lines are currently available to label various types of cells. Owing ...

Protokollet som beskrivs här tillåter oss att undersöka funktionen av en chemokine och beteendet hos makrofag in vivo. De flesta av befintliga experimentella modeller av cellgiftsbehandling är baserade på in vitro-cellexperiment. Men in vitro-experiment ibland är för enkla att modellera den komplexa miljön in vivo.Dessutom kan de inte representera den kemoattraktion förmåga i vivo. Dessa metoder utnyttjar den specifika fördelen med zebrafisk för direkt cellbeteende observation, vilket är svårt för möss. Börja med att generera TGFABP-10A interleukin-34 transgena konstruktioner.Injicera FABP-10A interleukin-34 konstruktioner i en cellsteg Tg(mpeg1:GFP)transgena och en fiskembryon av vildtyp tillsammans med transposasen MRNA. Höj och samla in embryona enligt manuskriptinstruktioner. Sedan, fixa dem med 4%paraformaldehyd över natten vid 4 grader Celsius eller i två timmar vid rumstemperatur.Efter fixering, tvätta embryona med PBST tre gånger i fem minuter per tvätt. Torka embryona separat med 50%metanol i PBST, följt av 100%metanol, sedan byta till färska 100%metanol, och lagra dem på negativa 20 grader Celsius i minst 2 timmar. När du är klar för sondhybritisering, rehydrera embryona separat i 50%metanol i PBST.Tvätta dem sedan med PBST tre gånger i fem minuter per tvätt. Smält embryona med proteinas K i PBST vid rumstemperatur. Sedan, kasta digestionslösningen, och upprepa fixering med 4%paraformaldehyd i 20 minuter vid rumstemperatur.Efter fixering, tvätta embryona två gånger med PBST i 10 minuter per tvätt. Utför prehybridisering med uppvärmd hybridiseringsbuffert vid 65 grader Celsius i minst en timme. Värm sedan interleukin-34 sonden till 65 grader Celsius i 10 minuter.Återvinn hybridiseringsbufferten i det ursprungliga röret och utför hybridisering med den förvärmda sonden vid 65 grader Celsius över natten. Nästa dag tvätta embryona med 50%formamid och 2X SSCT följt av 2X SSCT och sedan 0,2X SSCT vid 65 grader Celsius. Upprepa varje tvätt tre gånger med 20 minuter per tvätt.Sedan tvätta embryon tre gånger med PBST i fem minuter per tvätt. Blockera proverna med 600 milliliter blockeringsbuffert under en timme i rumstemperatur. Tillsätt sedan 400 mikroliter av anti-digoxigenin HRP-antikroppslösning och inkubera embryona i fyra grader Celsius över natten.Nästa dag tar du bort antikroppen och tvättar embryona sex gånger med PBST i 20 minuter per tvätt. Efter den sista tvätten, skölj varje prov med 30 mikroliter av 1X plus förstärkning spädningsmedel i fem minuter. Inkubera proverna i fluorofore tyramin arbetslösningen i fem till 15 minuter i mörkret.Förlängning av inkubationstiden till 30 minuter om signalerna är svaga. Sedan tvätta embryon med PBST tre gånger i 10 minuter per tvätt. Och inkubera dem med den primära antikroppen vid fyra grader Celsius över natten.Nästa dag tvätta embryona fem gånger med PBST i 30 minuter per tvätt, och inkubera dem med de sekundära antikropparna vid fyra grader Celsius över natten. På nästa dag, tvätta embryon tre gånger i PBST i 10 minuter per tvätt, och förvara dem i 70%glycerol i mörker vid fyra grader Celsius eller negativa 20 grader Celsius längre. Före avbildning, använd ett fluorescensmikroskop för att välja DS-röda och GFP-dubbla positiva embryon.För att montera fisken, använd ett metallbad för att värma en milliliter på 1%låg smältning uppstod till över 90 grader Celsius. Sedan, kyl den till kroppstemperatur och blanda i 50 mikroliter av 0,2%trikain. Överför de sövda embryona till en liten skål monterad med en täckrutschbana på undersidan.Ta bort det omgivande vattnet och släpp långsamt den låga smältande agaros på embryona. Ställ försiktigt in fiskens läge innan agarosen har stelnat, hålla leverområdet nära täckglaset. När agarose har stelnat, noga täcka den med ett annat lager av agaros att förstärka den.Placera skålen på konfokalmikroskop bärare bord, täck fisken med E2-lösning med trikain, och starta bildbehandling. För att använda konfokalmikroskopet, öppna Programvaran Zen Black 2.3 och klicka på locate, sedan inkubation, och ställ sedan in temperaturen till 29 grader Celsius. Klicka på förvärvsmenyn och välj det nödvändiga skanningsläget och lasrar i menyn för smart inställning.Välj sedan Z-stack och position. Klicka på den experimentella designermenyn och välj aktivera multi block experiment i det första blocket för att hitta provet under låg förstoring. Därefter växlar du till den höga förstoringen och låter det observerade området i mitten av synfältet.Ställ in informationen om position och Z-stack. Välj sedan lämplig laserintensitet, skanningslager och bildhastighet. När alla block är setup, ställa in lämpligt antal slingor och börja inspelningen.Detta protokoll användes för att injicera en lever-specifika interleukin-34 över uttryck plasmid i transgena fisk embryon, som makrofager var märkta med GFP. Full montera fluorescens i situ hybridisering och immunfärgning användes för att analysera uttrycket av interleukin-34 och de GFP märkta makrofager. Macrophage cell nummer var kvantitativt analyseras i uninjected och konstruera injicerade embryon'lever och svans regionen.Live imaging användes för att direkt observera makrofager, märkt grön, passerar levern av en kontroll fisk och migrerar in i levern av en interleukin-34 över uttrycka fisk. De viktiga stegen i detta protokoll inkluderar valet av en lämplig transgen linje för att märka den cell av intresse. Och lämplig vävnad för imaging ditt uttryck av transgena gen samt en lämplig observationstidsfönster.Denna teknik skulle kunna tillämpas för att studera funktionen av andra kemokiner på beteendet hos andra celler, såsom T-celler och neutrofiler in vivo.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Live Imaging of Innate Immune and Preneoplastic Cell Interactions Using an Inducible Gal4/UAS Expression System in Larval Zebrafish Skin

Live avbildning av medfödda immun och preneoplastiska Cell interaktioner Använda en Inducerbar Gal4 / UAS Expression System i Larvzebrafish Skin

Here we describe a method to conditionally induce epithelial cell transformation by the use of the 4-Hydroxytamoxifen (4-OHT) inducible KalTA4-ERT2/UAS ...

An Optogenetic Approach for Assessing Formation of Neuronal Connections in a Co-culture System

En optogenetic tillvägagångssätt för att bedöma Bildande av neurala anslutningar i en samodlingssystemet

Here we describe a protocol to generate a co-culture consisting of 2 different neuronal populations. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are ...

Development of an Ethanol-induced Fibrotic Liver Model in Zebrafish to Study Progenitor Cell-mediated Hepatocyte Regeneration

Utveckling av en etanol-inducerad Fibrotisk Lever modell i Zebrafish att studera stamceller-medierad Hepatocyte Regeneration

Sustained liver fibrosis with continuation of extracellular matrix (ECM) protein build-up results in the loss of cellular competency of the liver, leading ...

Drug Treatment and In Vivo Imaging of Osteoblast-Osteoclast Interactions in a Medaka Fish Osteoporosis Model

Drug Treatment and In Vivo Imaging of Osteoblast-Osteoclast Interactions in a Medaka Fish Osteoporosis Model

Läkemedelsbehandling och<em&gt; In Vivo</em&gt; Avbildning av Osteoblast-osteoklaster interaktioner i en Medaka Fish Osteoporos Modell

Bone-forming osteoblasts interact with bone-resorbing osteoclasts to coordinate the turnover of bone matrix and to control skeletal homeostasis. Medaka ...

An Ex Vivo Method for Time-Lapse Imaging of Cultured Rat Mesenteric Microvascular Networks

An Ex Vivo Method for Time-Lapse Imaging of Cultured Rat Mesenteric Microvascular Networks

En<em&gt; Ex vivo</em&gt; Metod för time-lapse avbildning av odlade Rat Mesenteric Mikrovaskulära Networks

Angiogenesis, defined as the growth of new blood vessels from pre-existing vessels, involves endothelial cells, pericytes, smooth muscle cells, immune ...

In Vivo Imaging of Transgenic Gene Expression in Individual Retinal Progenitors in Chimeric Zebrafish Embryos to Study Cell Nonautonomous Influences

In Vivo Imaging of Transgenic Gene Expression in Individual Retinal Progenitors in Chimeric Zebrafish Embryos to Study Cell Nonautonomous Influences

In vivo avbildning av Transgena genuttryck i Individuell Retinal stamceller i chimär Zebrafish embryon att studera Cell Nonautonomous Influenser

The genetic and technical strengths have made the zebrafish vertebrate a key model organism in which the consequences of gene manipulations can be traced ...

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Establishment of Larval Zebrafish as an Animal Model to Investigate Trypanosoma cruzi Motility In Vivo

Etablering av Larval zebrafiskar som ett djur-modell för att undersöka Trypanosoma cruzi motilitet I Vivo

Chagas disease is a parasitic infection caused by Trypanosoma cruzi, whose motility is not only important for localization, but also for cellular binding ...

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Application of RNAi and Heat-shock-induced Transcription Factor Expression to Reprogram Germ Cells to Neurons in C. elegans

Tillämpningen av RNAi och värme-chock-inducerad transkription faktorn uttryck att omprogrammera könsceller att nervceller i C. elegans

Studying the cell biological processes during converting the identities of specific cell types provides important insights into mechanism that maintain ...

Culturing of Retinal Pigment Epithelial Cells on an Ex Vivo Model of Aged Human Bruch's Membrane

Culturing of Retinal Pigment Epithelial Cells on an Ex Vivo Model of Aged Human Bruch's Membrane

Odling av Retinal Pigment epitelial celler på en Ex Vivo modell av äldre människors Bruchs membran

Aside from vitamins and antioxidants recommended by the Age-Related Eye Disease Study, there is no effective therapy for &#34;dry,&#34;&#160;or atrophic ...

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

An In Vitro Model of a Parallel-Plate Perfusion System to Study Bacterial Adherence to Graft Tissues

En In Vitro -modell av ett parallell-plattan Perfusion System att studera bakteriell vidhäftning för att ympa vävnader

Various valved conduits and stent-mounted valves are used for right ventricular outflow tract (RVOT) valve replacement in patients with congenital heart ...