Name: encapsulated cell technology for the delivery of biologics to the mouse eye
Uploaded: 2020-03-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Encapsulated Cell Technology for the Delivery of Biologics to the Mouse Eye at JoVE.com

تم دعم الدراسة جزئيًا من خلال المنح المقدمة إلى B. R. من قبل المعاهد الوطنية للصحة (R01EY019320) ووزارة شؤون المحاربين القدامى (RX000444 و BX003050) ومؤسسة ولاية كارولينا الجنوبية الذكية.

أجريت جميع التجارب وفقًا لبيان ARVO لاستخدام الحيوانات في أبحاث العيون والرؤية وتمت الموافقة عليها من قبل اللجنة الطبية لرعاية الحيوانات واستخدامها في ولاية كارولينا الجنوبية بموجب بروتوكول ID 00399.
1. ثقافة الخلية
<ol><li>توليد خلايا الظهارية صبغية الشبكية البشرية (ARPE-19) خط الخل...

<ol>
	<li>Allen, T. M., Cullis, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+delivery+systems:+entering+the+mainstream.">Drug delivery systems: entering the mainstream.</a> Science. 303 (5665), 1818-1822 (2004).</li><li>Tonnesen, H. H., Karlsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alginate+in+drug+delivery+systems.">Alginate in drug delivery systems.</a> Drug Development and Industrial Pharmacy. 28 (6), 621-630 (2002).</li><li>Vilos, C., Velasquez, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+strategies+based+on+polymeric+microparticles.">Therapeutic strategies based on polymeric microparticles.</a> Journal of Biomedical Biotechnology. 672760, (2012).</li><li>Gasperini, L., Mano, J. F., Reis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+polymers+for+the+microencapsulation+of+cells.">Natural polymers for the microencapsulation of cells.</a> Journal of the Royal Society Interface. 11 (100), 20140817 (2014).</li><li>Gasper, D. P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Novel strategy to produce a drug delivery system for skin regeneration. Uma nova estrat&#233;gia para produzir um dispositivo para entrega de f&#225;rmacos que ser&#225; usado na regenera&#231;&#227;o da pele. , (2012).</li><li>Huang, S., Fu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naturally+derived+materials-based+cell+and+drug+delivery+systems+in+skin+regeneration.">Naturally derived materials-based cell and drug delivery systems in skin regeneration.</a> Journal of Controlled Release. 142 (2), 149-159 (2010).</li><li>Nograles, N., Abdullah, S., Shamsudin, M. N., Billa, N., Rosli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+and+characterization+of+pDNA-loaded+alginate+microspheres+for+oral+administration+in+mice.">Formation and characterization of pDNA-loaded alginate microspheres for oral administration in mice.</a> Journal of Bioscience and Bioengineering. 113 (2), 133-140 (2012).</li><li>Moore, K., Amos, J., Davis, J., Gourdie, R., Potts, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+polymeric+microcapsules+containing+a+low+molecular+weight+peptide+for+controlled+release.">Characterization of polymeric microcapsules containing a low molecular weight peptide for controlled release.</a> Microscopy and Microanalysis. 19 (1), 213-226 (2013).</li><li>Xu, Y., Skotak, M., Hanna, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrospray+encapsulation+of+water-soluble+protein+with+polylactide.+I.+Effects+of+formulations+and+process+on+morphology+and+particle+size.">Electrospray encapsulation of water-soluble protein with polylactide. I. Effects of formulations and process on morphology and particle size.</a> Journal of Microencapsulation. 23 (1), 69-78 (2006).</li><li>Gryshkov, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Process+engineering+of+high+voltage+alginate+encapsulation+of+mesenchymal+stem+cells.">Process engineering of high voltage alginate encapsulation of mesenchymal stem cells.</a> Materials Science and Engineering: C. 36, 77-83 (2014).</li><li>Thanos, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+secretion+of+ciliary+neurotrophic+factor+to+the+vitreous,+using+the+encapsulated+cell+therapy-based+NT-501+intraocular+device.">Sustained secretion of ciliary neurotrophic factor to the vitreous, using the encapsulated cell therapy-based NT-501 intraocular device.</a> Tissue Engineering. (11-12), 1617-1622 (2004).</li><li>Kauper, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-year+intraocular+delivery+of+ciliary+neurotrophic+factor+by+encapsulated+cell+technology+implants+in+patients+with+chronic+retinal+degenerative+diseases.">Two-year intraocular delivery of ciliary neurotrophic factor by encapsulated cell technology implants in patients with chronic retinal degenerative diseases.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53 (12), 7484-7491 (2012).</li><li>Kauper, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+term,+sustained+intraocular+delivery+of+a+VEGF+antagonist+using+encapsulated+cell+technology+implant+for+the+treatment+of+choroidal+neovascular+diseases.">Long term, sustained intraocular delivery of a VEGF antagonist using encapsulated cell technology implant for the treatment of choroidal neovascular diseases.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53, 455 (2012).</li><li>Annamalai, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Encapsulated+Cell+Technology-Based+Delivery+of+a+Complement+Inhibitor+Reduces+Choroidal+Neovascularization+in+a+Mouse+Model.">Encapsulated Cell Technology-Based Delivery of a Complement Inhibitor Reduces Choroidal Neovascularization in a Mouse Model.</a> Translational Visual Science Technology. 7 (2), 3 (2018).</li><li>Alge, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+Pigment+Epithelium+Is+Protected+Against+Apoptosis+by+&#945;B-Crystallin.">Retinal Pigment Epithelium Is Protected Against Apoptosis by &#945;B-Crystallin.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 43 (11), 3575-3582 (2002).</li><li>Chiu, K., Chang, R. C., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravitreous+injection+for+establishing+ocular+diseases+model.">Intravitreous injection for establishing ocular diseases model.</a> Journal of Visualized Experiments. (8), 313 (2007).</li><li>Jove Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lab+Animal+Research.+Anesthesia+Induction+and+Maintenance.">Lab Animal Research. Anesthesia Induction and Maintenance.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2019).</li><li>Holz, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+and+Safety+of+Lampalizumab+for+Geographic+Atrophy+Due+to+Age-Related+Macular+Degeneration:+Chroma+and+Spectri+Phase+3+Randomized+Clinical+Trials.">Efficacy and Safety of Lampalizumab for Geographic Atrophy Due to Age-Related Macular Degeneration: Chroma and Spectri Phase 3 Randomized Clinical Trials.</a> JAMA Ophthalmology. 136 (6), 666-677 (2018).</li><li>Kassa, E., Ciulla, T. A., Hussain, R. M., Dugel, P. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complement+inhibition+as+a+therapeutic+strategy+in+retinal+disorders.">Complement inhibition as a therapeutic strategy in retinal disorders.</a> Expert Opinion in Biological Therapy. 19 (4), 335-342 (2019).</li><li>Cashman, S. M., Ramo, K., Kumar-Singh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Non+Membrane-Targeted+Human+Soluble+CD59+Attenuates+Choroidal+Neovascularization+in+a+Model+of+Age+Related+Macular+Degeneration.">A Non Membrane-Targeted Human Soluble CD59 Attenuates Choroidal Neovascularization in a Model of Age Related Macular Degeneration.</a> PLoS ONE. 6 (4), e19078 (2011).</li><li>Vincent, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+combination+PDGF+/+VEGF-antagonist+ECT+devices.">Generation of combination PDGF / VEGF-antagonist ECT devices.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 54, 3290 (2013).</li><li>Zhang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+neurotrophic+factor+delivered+by+encapsulated+cell+intraocular+implants+for+treatment+of+geographic+atrophy+in+age-related+macular+degeneration.">Ciliary neurotrophic factor delivered by encapsulated cell intraocular implants for treatment of geographic atrophy in age-related macular degeneration.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 108 (15), 6241-6245 (2011).</li><li>Chew, E. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+neurotrophic+factor+for+macular+telangiectasia+type+2:+results+from+a+phase+1+safety+trial.">Ciliary neurotrophic factor for macular telangiectasia type 2: results from a phase 1 safety trial.</a> American Journal of Ophthalmology. 159 (4), 659-666 (2015).</li><li>Birch, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Randomized+trial+of+ciliary+neurotrophic+factor+delivered+by+encapsulated+cell+intraocular+implants+for+retinitis+pigmentosa.">Randomized trial of ciliary neurotrophic factor delivered by encapsulated cell intraocular implants for retinitis pigmentosa.</a> American Journal of Ophthalmology. 156 (2), 283-292 (2013).</li></ol>

هذه تقنية تغليف الخلية سريعة نسبيا وسهلة الأداء. ومع ذلك، يجب أن يوضع في الاعتبار بعض النقاط للحصول على نتائج دقيقة في المصب. وينبغي الحفاظ على الخلايا في الثقافة في طبق بيتري قبل التغليف وعقد في التقاء السليم. يجب إجراء التغليف في غطاء التهوية المناسب مع تدفق الهواء المنظم ، إذا كان ذلك مم...

تمثل العلاجات القائمة على الخلايا التقنيات البيولوجية الثورية التي تم تطبيقها على نطاق واسع في الطب. في الآونة الأخيرة، تم تطبيقها بنجاح في علاج الأمراض العصبية، وأمراض العيون، والسرطان. تغطي علاجات الخلايا مجموعة واسعة من الحقول من استبدال الخلايا إلى تسليم الدواء ، ويركز هذا البروتوكول على هذا الأخير. وقد أظهرت كبسولات الذبحة القابلة للتحلل (MC) فعالية كنظام تسليم، وأنها أصبحت تستخدم على نطاق واسع في مجال الطب الحيوي. وقد استخدمت Alginate في microencapsulation بسبب عملية هلام بسيطة، التحلل البيولوجي، والتوافق البيولوجي ممتازة، والاستقرار تحت في ظروف الجسم الحي1،,2،,3،,4.
وقد استخدمت طريقة البخاخة الكهربائية، كتقنية microencapsulation، بنجاح لتغليف الببتيدات والبروتينات باستخدام alginate (البوليمر الأساسي) وبولي ل-ornithine (البوليمر طلاء الثانوية). تم العثور على كل من البوليمرات بشكل طبيعي واستخدامها لتوافقها البيولوجي5،6،7. ومع ذلك ، فإن التحدي الرئيسي في العلاجات القائمة على الخلايا هو قمع الجهاز المناعي المضيف لتجنب الآثار الجانبية الناجمة عن الأدوية المثبطة للمناعة. تعتبر نفاذية كبسولات الجينات الدقيقة خاصية مناسبة لتغليف الخلايا ، مما يسمح بنشر المواد الغذائية والنفايات والعوامل العلاجية داخل الخلايا والخروج منها أثناء إخفاءها من الاستجابة المناعيةالمضيفة8،9،10.
في العين ، تم استخدام الخلايا المغلفة في التجارب السريرية للتسليم المستمر للبيولوجية (أي عوامل النمو11،12 وخصم عامل النمو13)لعلاج التهاب الشبكية الصباغي أو الضمور البقعي المرتبط بالعمر. ويجري حاليا ً استكشاف أهداف أخرى مثل مثبطاتالمكملات 14 في البيئات قبل السريرية.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>3 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309656</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G 1&#34; Blunt needle</td>
			<td>SAI Infusion technology</td>
			<td>B30-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alginic acid sodium salt, from brown algae</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A0682</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine Sulfate Ophthalmolic solution (1%)</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC 17478-215-15</td>
			<td>for pupil dilation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 1 mL Syringe 26 G x 3/8 (0.45 mm x 10 mm)</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>DG518105 500029609 REF 309625</td>
			<td>to generate the guide hole</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride, Anhydrous, granular</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C1016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenTeal Tears</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>NDC 0078-0429-47</td>
			<td>to lubricate the eyes during anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goniotaire: Hypromellose (2.5%) Ophthalmolic Demulcent Solution (Sterile)</td>
			<td>Altaire Pharmaceuticals Inc.</td>
			<td>NDC 59390-182-13</td>
			<td>to lubricate the eyes during anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton Needle/syringe Tip: 27 Gauge, Small Hub RN NDL, custum length (12mm), point style 3, 6/PK</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7803-01</td>
			<td>for intravitreal delivery of capsules</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton Syringe: 2.5 &#181;L, Model 62 RN SYR, NDL Sold Separately</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7632-01</td>
			<td>for intravitreal delivery of capsules</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES buffer, 1M</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP299100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High voltage generator</td>
			<td>ESD EMC Technology</td>
			<td>ES813-D20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity Kit</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>L3224</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ornithine hydrochloride, 99%</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>A12111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neomycin and Polymyxin B Sulfates and Dexamethasone Ophthalmolic Ointment</td>
			<td>SANDOZ</td>
			<td>NDC 61314-631-36</td>
			<td>antibiotic to prevent infection after intravitreal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenolephrine Hydrochloride Ophthalmolic Solution (2.5%)</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC 17478-201-15</td>
			<td>for pupil dilation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S-5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile syringe filters, 0.2 um</td>
			<td>VWR</td>
			<td>28143-312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe pump</td>
			<td>GRASEBY</td>
			<td>MS16A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

encapsulated cell technology for the delivery of biologics to the mouse eye

العديد من العلاجات الحالية قيد التطوير لأمراض القطب الخلفي للعين هي البيولوجية. هذه الأدوية تحتاج إلى أن تدار في كثير من الأحيان، وعادة عن طريق الحقن داخل الفيتيريال. وأصبحت الخلايا المغلفة التي تعبر عن المنطق البيولوجي المفضل أداة لإنتاج البروتين المحلي وإطلاقه (على سبيل المثال، عن طريق تسليم الأدوية على المدى الطويل). بالإضافة إلى ذلك، تستخدم أنظمة التغليف مواد نفاذية تسمح بنشر المواد الغذائية والنفايات والعوامل العلاجية من وإلى الخلايا. يحدث هذا أثناء إخفاء الخلايا من الاستجابة المناعية المضيفة ، وتجنب الحاجة إلى قمع الجهاز المناعي المضيف. يصف هذا البروتوكول استخدام alginate كبوليمر في الميكروينكابسوليشن إلى جانب طريقة الرذاذ الكهربائي كتقنية microencapsulation. وقد استخدمت خلايا ARPE-19، وهو خط الخلية RPE الإنسان الناشئة تلقائيا، في تجارب العلاج بالخلايا على المدى الطويل بسبب وظائفها مدى الحياة، ويستخدم هنا لتغليف وتسليم الكبسولات إلى عيون الماوس. تلخص المخطوطة خطوات microencapsulation الخلية، ومراقبة الجودة، وتسليم العين.

خلايا ARPE-19 هي خط خلية RPE بشرية خالدة تلقائيًا ثبت أنها قابلة للتغليف والبقاء على قيد الحياة على المدى الطويل عند زرع كبسولات في العين. وترد أدوات تغليف الذبحة الصدرية في الشكل 1. في هذه الدراسة ، ثبت أنه عند التغليف في الذبحة الصدرية ، تم تأكيد الخلايا الموجودة في كبسولات الذ...

Watch this Scientific Journal Video about Encapsulated Cell Technology for the Delivery of Biologics to the Mouse Eye at JoVE.com

Encapsulated Cell Technology for the Delivery of Biologics to the Mouse Eye

عرض هنا هو بروتوكول لاستخدام alginate كبوليمر في microencapsulation من الخلايا الخلد لتسليم على المدى الطويل من البيولوجية إلى عيون القوارض.

تكنولوجيا الخلية المغلفة لتسليم البيولوجيا إلى العين الماوس

Many current therapeutics under development for diseases of the posterior pole of the eye are biologics. These drugs need to be administered frequently, ...

هذه التقنية هي طريقة يمكن الاعتماد عليها لتقديم أي محتوى مثل الأدوية أو البروتينات أو الخلايا إلى مواقع محددة في الأنسجة أو الحيوانات. يمكنك تتبع التسليم وضبط الإفراج عن محتويات لتتناسب مع التجربة التي تريدها. ويمكن استخدامه لعلاج العديد من الأمراض من التئام الجروح إلى أمراض العين والقلب.والميزة الرئيسية لهذه الطريقة هي القدرة على تقديم الخلايا العلاجية باستخدام الكبسولات الدقيقة الجينات إلى المواقع المستهدفة دون التسبب في أي ردود فعل مناعية والحفاظ على استمرار تسليم علاجات جديدة سرية لفترة أطول من الزمن. تبدأ باستزراع خلايا شبكية العين الظهارية وفقا لاتجاهات المخطوطات. مرور الخلايا عندما تصل إلى 70 إلى 80٪ التقاء باستخدام إجراءات زراعة الأنسجة القياسية.لتغليف الخلايا، خلط الصوديوم alginate مع المياه ديونيد لتركيز النهائي من 2٪ الوزن لحجم وتنقية الخليط عن طريق الترشيح مع 0.2 ميكرومتر معقم حقنة فلتر. Trypsinize، الطرد المركزي، وغسل الخلايا مع 10 ملليمتر HEPES محلول ملحي المخزنة. استخدم مقياس الدم لحساب الخلايا وضبط تركيز الخلايا النهائي إلى مليون لكل ملليلتر من محلول ألجينات.قم بتحميل 300 ميكرولتر ألتقتبس من خليط ألجينات وخلايا في حقنة من ثلاثة ملليلتر وإرفاقها بمضخة حقنة. إعداد حمام التبلور وفقا لاتجاهات المخطوطة ووضعها في منبر عقيم 50 ملليلتر تحت طرف الحقنة في إبرة سبعة ملليمترات لحمام الرش مسافة. ضبط الجهد إلى ثمانية كيلوفولت ومعدل التدفق إلى 30 ملليمترا في الساعة لإنتاج microcapsules التي هي حوالي 150 ميكرومتر في الحجم.توصيل مقطع الأرض الأسود إلى السلك النحاسي الذي هو في منتصف الطريق مغمورة في حمام الغيلينغ وربط مقطع من سلك الأنود الأحمر إلى الإبرة. يستغرق حوالي 30 دقيقة لإعداد الخلايا المغلفة من كل دفعة ملليلتر واحدة من خليط alginate وخلايا. عندما شكلت، وغسل microcapsules مع محلول الغسيل مرتين واحتضان لهم مع 10٪ FBS تكمل وسائل الاعلام DMEM في حاضنة مرطبة في 37 درجة مئوية و 5٪ CO2.بعد حضانة لمدة 24 ساعة، قم بإعداد عينة 500 ميكرولتر من الكبسولات الدقيقة للتلوين عن طريق غسلها مرتين في محلول الغسيل. استخدام مجموعة من مواد فحص حية / الميت لطخة لهم لقابلية البقاء. لضمان أن الحجم الدقيق مناسب الحجم، وتمييع لهم في وسائل الإعلام خالية من المصل.pirate بعناية لهم مع 2.5 حقنة هاملتون ميكروليتر. إخراج ببطء قطرات ميكرولتر واحد على شريحة المجهر وتحديد سلامة microcapsules باستخدام مجهر برايتفيلد تستقيم. في الماوس تخدير مناسب، وتطبيق مواد التشحيم العين للحفاظ على رطوبة العين واستخدام 26 قياس 3/8 بوصة إبرة حقنة مشطوفة لإنشاء ثقب العين الأولية فقط تحت limbus.تأكد من الاقتراب من العين من اتجاه الأنف بزاوية 45 درجة مع الحفاظ على رأس مشط للأعلى لتجنب ثقب العدسة. بعد ذلك، تأكد من إدخال طرف الإبرة بأكملها في العين لتوليد ثقب الدليل، ولكن يجب الحرص على عدم السفر بعيدا جدا وثقب الشبكية الصدغية. بمجرد اكتمال هذا، تراجع ببطء الإبرة.داخل micromanipulator، ضع 27 تلميح 27 حادة قياس 2.5 حقنة هاملتون ميكرولترر التي تم شغلها مع حل كبسولة وخط الإبرة مع ثقب دليل الأولية. عقد رأس الحيوان في وضع مستقر والمناورة عمدا الإبرة نحو العين. لضمان وضع إبرة صحيحة داخل الزجاجي، أدخل الحقنة حتى يمكن تصور طرف الإبرة خلف العدسة.ثم حقن حل كبسولة ببطء على مدى 25 إلى 30 ثانية. وبمجرد الانتهاء، تراجع تدريجيا حقنة تلميح حادة من أجل تقليل الإصابة في العين. إذا لزم الأمر، قم بضبط حجم الكبسولة عن طريق ضبط معدل الجهد والتدفق وفقًا لاتجاهات المخطوطة.تم تأكيد تغليف الخلايا في alginate مع التصوير برايتفيلد ومجايسة حية / DEAD أظهرت أن 90٪ من الخلايا كانت قابلة للحياة بعد التغليف. تم ضمان صلاحية الخلايا على المدى الطويل عن طريق حل الكبسولات في سترات الصوديوم وإعادة الطلاء. تم إجراء الحقن داخل الجسم تحت الفحص البصري الذي سمح للتصور من كبسولات في الزجاجي.عند محاولة هذا الإجراء، لا تستخدم برنامج تلفزيوني لأي خطوات الغسيل لأن برنامج تلفزيوني يذوب شكلت الكبسولات الدقيقة alginate. بعد تطويره، يستخدم مختبرنا كنظام توصيل لعلاج أشكال قصور القلب وارتفاع ضغط الدم. وتعتبر هذه التقنية أداة واعدة لعلاج أمراض القلب والأوعية الدموية والعصبية المختلفة في المستقبل.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Constructing a Collagen Hydrogel for the Delivery of Stem Cell-loaded Chitosan Microspheres

بناء هيدروجيل الكولاجين لتسليم الشيتوزان الجذعية المجهرية الخلية محملة

Multipotent stem cells have been shown to be extremely useful in the field of regenerative medicine1-3. However, in order to use these cells effectively ...

Cell Squeezing as a Robust, Microfluidic Intracellular Delivery Platform

الضغط خلية باعتبارها قوية، ميكروفلويديك بين الخلايا توصيل منصة

Rapid mechanical deformation of cells has emerged as a promising, vector-free method for intracellular delivery of macromolecules and nanomaterials. This ...

Microscale Vortex-assisted Electroporator for Sequential Molecular Delivery

الميكروسكيل Electroporator لتوصيل متسلسل الجزيئية بمساعدة دوامة

Electroporation has received increasing attention in the past years, because it is a very powerful technique for physically introducing non-permeant ...

Culturing Mouse Cardiac Valves in the Miniature Tissue Culture System

زراعة ماوس القلب صمامات في مصغرة نظام زراعة الأنسجة

Heart valve disease is a major burden in the Western world and no effective treatment is available. This is mainly due to a lack of knowledge of the ...

Targeted Plasma Membrane Delivery of a Hydrophobic Cargo Encapsulated in a Liquid Crystal Nanoparticle Carrier

استهدفت البلازما غشاء تسليم ومسعور الشحن مغلف في الكريستال السائل الجسيمات النانوية الناقل

The controlled delivery of drug/imaging agents to cells is critical for the development of therapeutics and for the study of cellular signaling processes. ...

Intraductal Delivery to the Rabbit Mammary Gland

تسليم ينترادوكتال إلى الأرنب الغدة الثديية

Localized intraductal treatments for breast cancer offer potential advantages, including efficient delivery to the tumor and reduced systemic toxicity and ...

Fabrication of Extracellular Matrix-derived Foams and Microcarriers as Tissue-specific Cell Culture and Delivery Platforms

تصنيع كسوات وناقل دقيق مستمد مصفوفة خارج الخلية حيث الثقافة خلية الأنسجة محددة ومنصات التوصيل

Cell function is mediated by interactions with the extracellular matrix (ECM), which has complex tissue-specific composition and architecture. The focus ...

Preparing Protein Producing Synthetic Cells using Cell Free Bacterial Extracts, Liposomes and Emulsion Transfer

إعداد البروتين إنتاج الخلايا الاصطناعية باستخدام مقتطفات البكتيريا الحرة الخلية، Liposomes ونقل المستحلب

The bottom-up assembly approach for construction of synthetic cells is an effective tool for isolating and investigating cellular processes in a cell ...

Segmenting Growth of Endothelial Cells in 6-Well Plates on an Orbital Shaker for Mechanobiological Studies

تجزئة نمو الخلايا البطانية في لوحات 6-Well على شاكر المداري للدراسات الميكانيكية الحيوية

Shear stress imposed on the arterial wall by the flow of blood affects endothelial cell morphology and function. Low magnitude, oscillatory and ...

Formulating and Characterizing Lipid Nanoparticles for Gene Delivery using a Microfluidic Mixing Platform

صياغة وتميز الجسيمات النانوية الدهنية لتسليم الجينات باستخدام منصة خلط Microfluidic

Lipid-based drug carriers have been used for clinically and commercially available delivery systems due to their small size, biocompatibility, and high ...