Name: encapsulated cell technology for the delivery of biologics to the mouse eye
Uploaded: 2020-03-30T13:00:00
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이 연구는 국립 보건원 (R01EY019320), 재향 군인 업무부 (RX000444 및 BX003050), 사우스 캐롤라이나 스마트 스테이트 인다우먼트에 의해 B. R. 수여 보조금에 의해 부분적으로 지원되었습니다.

모든 실험은 안과 및 시력 연구에서 동물 사용에 대한 ARVO 성명서에 따라 수행되었으며 프로토콜 ID 00399에 따라 사우스 캐롤라이나 동물 관리 및 사용 위원회의 의과 대학에 의해 승인되었습니다.
1. 세포 배양
<ol><li>인간 망막 색소 상피 세포(ARPE-19) 세포주를 생성하여 발표된 프로토콜14,,15에따라 선택한 유전자를 안정적으로 발현...

<ol>
	<li>Allen, T. M., Cullis, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+delivery+systems:+entering+the+mainstream.">Drug delivery systems: entering the mainstream.</a> Science. 303 (5665), 1818-1822 (2004).</li><li>Tonnesen, H. H., Karlsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alginate+in+drug+delivery+systems.">Alginate in drug delivery systems.</a> Drug Development and Industrial Pharmacy. 28 (6), 621-630 (2002).</li><li>Vilos, C., Velasquez, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+strategies+based+on+polymeric+microparticles.">Therapeutic strategies based on polymeric microparticles.</a> Journal of Biomedical Biotechnology. 672760, (2012).</li><li>Gasperini, L., Mano, J. F., Reis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+polymers+for+the+microencapsulation+of+cells.">Natural polymers for the microencapsulation of cells.</a> Journal of the Royal Society Interface. 11 (100), 20140817 (2014).</li><li>Gasper, D. P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Novel strategy to produce a drug delivery system for skin regeneration. Uma nova estrat&#233;gia para produzir um dispositivo para entrega de f&#225;rmacos que ser&#225; usado na regenera&#231;&#227;o da pele. , (2012).</li><li>Huang, S., Fu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naturally+derived+materials-based+cell+and+drug+delivery+systems+in+skin+regeneration.">Naturally derived materials-based cell and drug delivery systems in skin regeneration.</a> Journal of Controlled Release. 142 (2), 149-159 (2010).</li><li>Nograles, N., Abdullah, S., Shamsudin, M. N., Billa, N., Rosli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+and+characterization+of+pDNA-loaded+alginate+microspheres+for+oral+administration+in+mice.">Formation and characterization of pDNA-loaded alginate microspheres for oral administration in mice.</a> Journal of Bioscience and Bioengineering. 113 (2), 133-140 (2012).</li><li>Moore, K., Amos, J., Davis, J., Gourdie, R., Potts, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+polymeric+microcapsules+containing+a+low+molecular+weight+peptide+for+controlled+release.">Characterization of polymeric microcapsules containing a low molecular weight peptide for controlled release.</a> Microscopy and Microanalysis. 19 (1), 213-226 (2013).</li><li>Xu, Y., Skotak, M., Hanna, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrospray+encapsulation+of+water-soluble+protein+with+polylactide.+I.+Effects+of+formulations+and+process+on+morphology+and+particle+size.">Electrospray encapsulation of water-soluble protein with polylactide. I. Effects of formulations and process on morphology and particle size.</a> Journal of Microencapsulation. 23 (1), 69-78 (2006).</li><li>Gryshkov, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Process+engineering+of+high+voltage+alginate+encapsulation+of+mesenchymal+stem+cells.">Process engineering of high voltage alginate encapsulation of mesenchymal stem cells.</a> Materials Science and Engineering: C. 36, 77-83 (2014).</li><li>Thanos, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+secretion+of+ciliary+neurotrophic+factor+to+the+vitreous,+using+the+encapsulated+cell+therapy-based+NT-501+intraocular+device.">Sustained secretion of ciliary neurotrophic factor to the vitreous, using the encapsulated cell therapy-based NT-501 intraocular device.</a> Tissue Engineering. (11-12), 1617-1622 (2004).</li><li>Kauper, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-year+intraocular+delivery+of+ciliary+neurotrophic+factor+by+encapsulated+cell+technology+implants+in+patients+with+chronic+retinal+degenerative+diseases.">Two-year intraocular delivery of ciliary neurotrophic factor by encapsulated cell technology implants in patients with chronic retinal degenerative diseases.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53 (12), 7484-7491 (2012).</li><li>Kauper, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+term,+sustained+intraocular+delivery+of+a+VEGF+antagonist+using+encapsulated+cell+technology+implant+for+the+treatment+of+choroidal+neovascular+diseases.">Long term, sustained intraocular delivery of a VEGF antagonist using encapsulated cell technology implant for the treatment of choroidal neovascular diseases.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53, 455 (2012).</li><li>Annamalai, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Encapsulated+Cell+Technology-Based+Delivery+of+a+Complement+Inhibitor+Reduces+Choroidal+Neovascularization+in+a+Mouse+Model.">Encapsulated Cell Technology-Based Delivery of a Complement Inhibitor Reduces Choroidal Neovascularization in a Mouse Model.</a> Translational Visual Science Technology. 7 (2), 3 (2018).</li><li>Alge, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+Pigment+Epithelium+Is+Protected+Against+Apoptosis+by+&#945;B-Crystallin.">Retinal Pigment Epithelium Is Protected Against Apoptosis by &#945;B-Crystallin.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 43 (11), 3575-3582 (2002).</li><li>Chiu, K., Chang, R. C., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravitreous+injection+for+establishing+ocular+diseases+model.">Intravitreous injection for establishing ocular diseases model.</a> Journal of Visualized Experiments. (8), 313 (2007).</li><li>Jove Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lab+Animal+Research.+Anesthesia+Induction+and+Maintenance.">Lab Animal Research. Anesthesia Induction and Maintenance.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2019).</li><li>Holz, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+and+Safety+of+Lampalizumab+for+Geographic+Atrophy+Due+to+Age-Related+Macular+Degeneration:+Chroma+and+Spectri+Phase+3+Randomized+Clinical+Trials.">Efficacy and Safety of Lampalizumab for Geographic Atrophy Due to Age-Related Macular Degeneration: Chroma and Spectri Phase 3 Randomized Clinical Trials.</a> JAMA Ophthalmology. 136 (6), 666-677 (2018).</li><li>Kassa, E., Ciulla, T. A., Hussain, R. M., Dugel, P. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complement+inhibition+as+a+therapeutic+strategy+in+retinal+disorders.">Complement inhibition as a therapeutic strategy in retinal disorders.</a> Expert Opinion in Biological Therapy. 19 (4), 335-342 (2019).</li><li>Cashman, S. M., Ramo, K., Kumar-Singh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Non+Membrane-Targeted+Human+Soluble+CD59+Attenuates+Choroidal+Neovascularization+in+a+Model+of+Age+Related+Macular+Degeneration.">A Non Membrane-Targeted Human Soluble CD59 Attenuates Choroidal Neovascularization in a Model of Age Related Macular Degeneration.</a> PLoS ONE. 6 (4), e19078 (2011).</li><li>Vincent, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+combination+PDGF+/+VEGF-antagonist+ECT+devices.">Generation of combination PDGF / VEGF-antagonist ECT devices.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 54, 3290 (2013).</li><li>Zhang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+neurotrophic+factor+delivered+by+encapsulated+cell+intraocular+implants+for+treatment+of+geographic+atrophy+in+age-related+macular+degeneration.">Ciliary neurotrophic factor delivered by encapsulated cell intraocular implants for treatment of geographic atrophy in age-related macular degeneration.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 108 (15), 6241-6245 (2011).</li><li>Chew, E. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+neurotrophic+factor+for+macular+telangiectasia+type+2:+results+from+a+phase+1+safety+trial.">Ciliary neurotrophic factor for macular telangiectasia type 2: results from a phase 1 safety trial.</a> American Journal of Ophthalmology. 159 (4), 659-666 (2015).</li><li>Birch, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Randomized+trial+of+ciliary+neurotrophic+factor+delivered+by+encapsulated+cell+intraocular+implants+for+retinitis+pigmentosa.">Randomized trial of ciliary neurotrophic factor delivered by encapsulated cell intraocular implants for retinitis pigmentosa.</a> American Journal of Ophthalmology. 156 (2), 283-292 (2013).</li></ol>

이 세포 캡슐화 기술은 상대적으로 빠르고 수행하기 쉽습니다. 그러나 정확한 다운스트림 결과를 얻으려면 특정 지점을 염두에 두어야 합니다. 세포는 캡슐화 하기 전에 페트리 접시에 배양에서 유지 되어야 하 고 적절 한 합류에서 개최. 캡슐화는 가능하면 조절 된 공기 흐름이있는 적절한 환기 후드에서 수행해야합니다. 공기 전류가 너무 강하면 캡슐 형성에 영향을 미칠 수 있으며, 특히 장기 ?...

세포 기반 치료법은 의학에서 널리 적용된 혁신적인 생물학적 기술을 나타냅니다. 최근에는 퇴행성 신경질환, 안구질환, 암 치료에 성공적으로 적용되고 있다. 세포 치료는 세포 보충에서 약 납품에 의하여 광범위한 필드를 커버하고, 이 프로토콜은 후자에 집중합니다. 생분해성 알긴산 마이크로캡슐(MC)은 전달 시스템으로서 효과를 보였으며, 생물의학 분야에서 널리 사용되고 있습니다. 알긴산은 간단한 겔화 공정, 생분해성, 우수한 생체 적합성 및 생체내조건 하에서 의 안정성1,2,,3,,4로인해 마이크로 캡슐화에 사용되어 왔다.
전기 분무 방법은, 마이크로 캡슐화 기술로, 알긴산 (염기 중합체) 및 폴리-l-오르니틴 (이차 코팅 폴리머)를 사용하여 펩티드와 단백질을 캡슐화하는 데 성공적으로 활용되었습니다. 두 폴리머 는 자연적으로 발견되고 생체 적합성5,,6,,7에사용됩니다. 그러나, 세포 기반 치료법의 주요 과제는 면역억제약물에 의한 부작용을 피하기 위해 숙주 면역계의 억제이다. 알긴산 마이크로캡슐의 투과성은 숙주 면역반응으로부터그들을 마스킹하는 동안 세포 내로 영양분, 폐기물 및 치료 인자를 확산시키는 세포 캡슐화에 적합한 특성으로 간주된다8,9,,10.
눈에서, 캡슐화된 세포는 망막색소변성증 또는 노화관련 황반변성의 치료를 위해 생물학적 제제(즉, 성장인자11,,12 및 성장 인자 길항제13)의지속적인 전달을 위한 임상 시험에서 사용되어 왔다. 보체 억제제 와 같은 그밖표적은 또한 전임상 조정에서 현재 탐구되고 있습니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>3 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309656</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G 1&#34; Blunt needle</td>
			<td>SAI Infusion technology</td>
			<td>B30-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alginic acid sodium salt, from brown algae</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A0682</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine Sulfate Ophthalmolic solution (1%)</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC 17478-215-15</td>
			<td>for pupil dilation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 1 mL Syringe 26 G x 3/8 (0.45 mm x 10 mm)</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>DG518105 500029609 REF 309625</td>
			<td>to generate the guide hole</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride, Anhydrous, granular</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C1016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenTeal Tears</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>NDC 0078-0429-47</td>
			<td>to lubricate the eyes during anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goniotaire: Hypromellose (2.5%) Ophthalmolic Demulcent Solution (Sterile)</td>
			<td>Altaire Pharmaceuticals Inc.</td>
			<td>NDC 59390-182-13</td>
			<td>to lubricate the eyes during anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton Needle/syringe Tip: 27 Gauge, Small Hub RN NDL, custum length (12mm), point style 3, 6/PK</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7803-01</td>
			<td>for intravitreal delivery of capsules</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton Syringe: 2.5 &#181;L, Model 62 RN SYR, NDL Sold Separately</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7632-01</td>
			<td>for intravitreal delivery of capsules</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES buffer, 1M</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP299100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High voltage generator</td>
			<td>ESD EMC Technology</td>
			<td>ES813-D20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity Kit</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>L3224</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ornithine hydrochloride, 99%</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>A12111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neomycin and Polymyxin B Sulfates and Dexamethasone Ophthalmolic Ointment</td>
			<td>SANDOZ</td>
			<td>NDC 61314-631-36</td>
			<td>antibiotic to prevent infection after intravitreal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenolephrine Hydrochloride Ophthalmolic Solution (2.5%)</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC 17478-201-15</td>
			<td>for pupil dilation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S-5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile syringe filters, 0.2 um</td>
			<td>VWR</td>
			<td>28143-312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe pump</td>
			<td>GRASEBY</td>
			<td>MS16A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

encapsulated cell technology for the delivery of biologics to the mouse eye

눈의 후방 극의 질병에 대한 개발 중인 많은 현재 치료법은 생물학적 제제입니다. 이 약은 빈번하게 관리될 필요가 있습니다, 일반적으로 intravitreal 주사를 통해. 선택의 생물학적을 발현하는 캡슐화된 세포는 국소 단백질 생산 및 방출을 위한 도구가 되고 있다(예를 들어, 장기 약물 전달을 통해). 또한 캡슐화 시스템은 세포 안팎으로 영양분, 폐기물 및 치료 요인을 확산시키는 투과성 물질을 활용합니다. 이것은 숙주 면역 반응에서 세포를 마스킹하는 동안 발생, 숙주 면역 계통의 억제에 대한 필요성을 피하고. 이 프로토콜은 마이크로 캡슐화 기술로 전기 분무 방법과 결합된 마이크로 캡슐화에서 중합체로서 알긴산의 사용을 설명합니다. ARPE-19 세포, 자발적으로 발생 하는 인간 RPE 세포 주, 그것의 수명 기능 으로 인해 장기 세포 치료 실험에 사용 되었습니다., 그리고 캡슐 화 및 마우스 눈에 캡슐전달에 대 한 여기 사용 됩니다. 원고는 세포 미세 캡슐화, 품질 관리 및 안구 전달에 대한 단계를 요약합니다.

ARPE-19 세포는 캡슐을 눈에 이식할 때 캡슐화 및 장기 생존을 가능하게 하는 것으로 나타난 자발적인 불멸의 인간 RPE 세포주입니다. 알긴산 캡슐화 도구는 그림 1에나와 있습니다. 본 연구에서, 알긴산캡슐에 캡슐화시, 알긴산 캡슐의 세포가 밝은 필드 이미징에 의해 확인되었다는 것이 입증되었다(도2A). 살아있는 죽은 세포는 캡슐 내부의 세포에서 수?...

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Encapsulated Cell Technology for the Delivery of Biologics to the Mouse Eye

여기에 제시된 것은 설치류 눈에 생물학적 제제의 장기 전달을 위한 불멸화된 세포의 미세 캡슐화에서 중합체로서 알긴산을 사용하기 위한 프로토콜이다.

마우스 아이에 생물학적 제제의 전달을 위한 캡슐화된 세포 기술

Many current therapeutics under development for diseases of the posterior pole of the eye are biologics. These drugs need to be administered frequently, ...

이 기술은 약물, 단백질 또는 세포와 같은 모든 콘텐츠를 조직이나 동물의 특정 위치에 전달하는 신뢰할 수있는 방법입니다. 당신은 배달을 추적하고 당신이 원하는 실험에 맞게 내용의 릴리스를 조정할 수 있습니다. 상처 치유에서 안구 및 심장 질환에 이르기까지 수많은 질병을 치료하는 데 사용할 수 있습니다.이 방법의 주요 장점은 면역 반응을 일으키지 않고 표적 부위에 알기네이트 마이크로 캡슐을 사용하여 치료 세포를 전달하고 장기간 신선한 분비 치료법의 지속적인 전달을 유지하는 능력입니다. 원고 의 지시에 따라 망막 상피 세포를 배양하여 시작합니다. 표준 조직 배양 절차를 사용하여 70~80%의 합류에 도달하면 세포를 통과시합니다.세포를 캡슐화하기 위해, 알기네이트 나트륨을 1제수와 혼합하여 2%의 최종 농도를 부피에 넣고 0.2 마이크로미터 멸균 주사기 필터로 여과를 통해 혼합물을 정화한다. 트립시네이드, 원심분리기, 10밀리머 HEPES 완충식식염으로 세포를 세척한다. 혈류계를 사용하여 세포를 계산하고 최종 세포 농도를 alginate 용액의 1 밀리리터당 백만으로 조정합니다.알기네이트와 세포 혼합물의 300 마이크로리터 알리쿼트를 3밀리리터 주사기에 적재하고 주사기 펌프에 부착합니다. 원고 의 방향에 따라 젤링 목욕을 준비하고 7 밀리미터 바늘의 주사기 팁 아래에 멸균 된 50 밀리리터 비커에 넣어 목욕 스프레이 거리. 전압을 8킬로볼트로 조정하고 유속량을 시간당 30밀리미터로 조정하여 약 150마이크로미터 크기의 마이크로캡슐을 생성합니다.검은 색 접지 클립을 겔링 욕조에 반쯤 잠긴 구리 와이어에 연결하고 빨간색 양극 와이어클립을 바늘에 연결합니다. 알기네이트및 세포 혼합물의 각 밀리리터 배치에서 캡슐화된 세포를 준비하는 데 약 30분이 걸립니다. 형성되면, 세척 용액으로 마이크로 캡슐을 두 번 세척하고 10 % FBS가 37섭씨 37도 및 5 %의 CO2에서 가습 인큐베이터에서 DMEM 미디어를 보충하여 배양하십시오.24 시간 인큐베이션 후, 세척 용액에 두 번 세척하여 염색을위한 마이크로 캡슐의 500 마이크로 리터 샘플을 준비합니다. 라이브/데드 분석 키트를 사용하여 생존가능성을 위해 염색하십시오. 마이크로 캡슐의 크기가 적절하게 크기가 되도록 혈청이 없는 매체에서 희석하십시오.2.5 마이크로리터 해밀턴 주사기로 조심스럽게 흡인합니다. 마이크로리터 1개를 현미경 슬라이드에 천천히 배출하고 수직 브라이트필드 현미경을 사용하여 마이크로캡슐의 무결성을 결정합니다. 적절하게 마취된 마우스에서 안구 윤활유를 바르면 안구 용액을 유지하고 26 게이지 3/8 인치 베브링 주사기 바늘을 사용하여 림푸스 바로 아래에 초기 눈 구멍을 확립하십시오.렌즈 천포를 피하기 위해 45도 각도로 비강 방향에서 눈에 접근해야 합니다. 다음으로, 전체 바늘 팁이 안내구멍 생성을 위해 눈에 삽입되어 있는지 확인하지만 너무 멀리 여행하지 말고 측두망망에 구멍을 뚫지 않도록주의하십시오. 이 작업이 완료되면 천천히 바늘을 철회하십시오.마이크로 조작기 내에서 캡슐 용액으로 채워진 27 게이지 무딘 팁 2.5 마이크로 리터 해밀턴 주사기를 배치하고 바늘을 초기 가이드 구멍으로 정렬하십시오. 동물의 머리를 안정된 자세로 잡고 의도적으로 바늘을 눈으로 움직입니다. 유리체 내에서 올바른 바늘 위치를 보장하기 위해, 바늘 끝이 렌즈 뒤에 시각화 될 때까지 주사기를 삽입.그런 다음 25~30초 동안 캡슐 용액을 천천히 주입합니다. 그리고 완료되면, 점차 눈에 부상을 최소화하기 위해 무딘 팁 주사기를 철회. 필요한 경우 원고 방향에 따라 전압및 유량을 조정하여 캡슐 크기를 조정합니다.알지네이트에 있는 세포의 캡슐화는 브라이트필드 화상 진찰및 LIVE/DEAD 분석으로 확인되었습니다 세포의 90%가 가능한 포스트 캡슐화이었다는 것을 보여주었습니다. 세포의 장기 생존가능성은 구연산 나트륨에 있는 캡슐을 용해하고 투약함으로써 보장되었다. 인트라비탈 주사는 유리체에서 캡슐의 시각화를 허용하는 육안으로 수행되었다.이 절차를 시도할 때 PBS는 형성된 알기네이트 마이크로 캡슐을 용해하기 때문에 PBS를 세척 단계에 사용하지 마십시오. 개발 후, 우리의 실험실은 심부전과 고혈압의 형태를 취급하기 위하여 전달 시스템으로 이용됩니다. 이 기술은 다른 심장 혈관 및 신경 질환의 미래 치료를위한 유망한 도구로 간주됩니다.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Constructing a Collagen Hydrogel for the Delivery of Stem Cell-loaded Chitosan Microspheres

줄기 세포 - 로드된 키토산 Microspheres의 배달을 위해 콜라겐 히드로겔을 구축

Multipotent stem cells have been shown to be extremely useful in the field of regenerative medicine1-3. However, in order to use these cells effectively ...

연구

생체공학

Cell Squeezing as a Robust, Microfluidic Intracellular Delivery Platform

강력한, 미세 유체 세포 내 전달 플랫폼으로 휴대 뒤쪽에서

Rapid mechanical deformation of cells has emerged as a promising, vector-free method for intracellular delivery of macromolecules and nanomaterials. This ...

Microscale Vortex-assisted Electroporator for Sequential Molecular Delivery

마이크로 소용돌이를 이용한 순차 분자 전달을위한 Electroporator을

Electroporation has received increasing attention in the past years, because it is a very powerful technique for physically introducing non-permeant ...

Culturing Mouse Cardiac Valves in the Miniature Tissue Culture System

소형 조직 배양 시스템에서 마우스 심장 밸브를 배양

Heart valve disease is a major burden in the Western world and no effective treatment is available. This is mainly due to a lack of knowledge of the ...

Targeted Plasma Membrane Delivery of a Hydrophobic Cargo Encapsulated in a Liquid Crystal Nanoparticle Carrier

액정 나노 입자 캐리어의 소수성화물 캡슐화의 대상 플라즈마 멤브레인 배달

The controlled delivery of drug/imaging agents to cells is critical for the development of therapeutics and for the study of cellular signaling processes. ...

Intraductal Delivery to the Rabbit Mammary Gland

토끼 유선으로 관내 배달

Localized intraductal treatments for breast cancer offer potential advantages, including efficient delivery to the tumor and reduced systemic toxicity and ...

Fabrication of Extracellular Matrix-derived Foams and Microcarriers as Tissue-specific Cell Culture and Delivery Platforms

조직 특이 적 세포 배양 및 전달 플랫폼과 같은 세포 외 기질 유래 거품과 마이크로 담체의 제조

Cell function is mediated by interactions with the extracellular matrix (ECM), which has complex tissue-specific composition and architecture. The focus ...

Preparing Protein Producing Synthetic Cells using Cell Free Bacterial Extracts, Liposomes and Emulsion Transfer

세포가 없는 세균 추출물, 리포좀 및 에멀젼 전달을 사용하여 합성 세포를 생산하는 단백질 을 준비합니다.

The bottom-up assembly approach for construction of synthetic cells is an effective tool for isolating and investigating cellular processes in a cell ...

Segmenting Growth of Endothelial Cells in 6-Well Plates on an Orbital Shaker for Mechanobiological Studies

메카노생물학적 연구를 위한 궤도 셰이커에 6웰 플레이트에서 내피 세포의 분할 성장

Shear stress imposed on the arterial wall by the flow of blood affects endothelial cell morphology and function. Low magnitude, oscillatory and ...

Formulating and Characterizing Lipid Nanoparticles for Gene Delivery using a Microfluidic Mixing Platform

미세 유체 혼합 플랫폼을 사용하여 유전자 전달을 위한 지질 나노 입자 제조 및 특성화

Lipid-based drug carriers have been used for clinically and commercially available delivery systems due to their small size, biocompatibility, and high ...